UNIVERSIDAD NACIONAL

AGRARIA LA MOLINA

EQUIPOS Y MATERIALES UTILIZADOS EN EL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

Alumno:
Valverde Ovalle, Eduardo
Cdigo:
20110437
Curso:
Microbiologa Pesquera
Grupo:
A
Profesora:
Nancy Martnez Ordinola

1.- INTRODUCCION

Un laboratorio de microbiologa es un lugar donde se pueda habilitar, manejar

y examinar microrganismos. Debe ser extremadamente limpio y ordenado.
Cuenta de una zona limpia para preparar los medios de cultivos y realizar los
anlisis microbiolgicos y una zona sucia donde se acondiciona el material con
el que se va a trabajar.
En un laboratorio de microbiologa encontraremos distintos tipos de materiales:
vidrio, plstico, porcelana; adems de equipos como autoclave, horno,
incubadoras, refrigeradoras, centrifugas, etc.
Cuando manejamos cualquier tipo de muestra debemos evitar que
microorganismos ajenos a nuestros cultivos y presentes en el ambiente se
introduzcan en ellos contaminndolos, o que los microorganismos de la
muestra nos contaminen a nosotros. Por ello se debe trabajar en condiciones
de estabilidad.

2.- OBJETIVOS
Conocer el ambiente del laboratorio de microbiologa, los
materiales que son necesarios para realizar las prcticas.

equipos y

Tener un conocimiento del uso adecuado de los equipos utilizados en el

laboratorio de microbiologa.

3.- REVISION BIBLIOGRAFICA

AUTOCLAVE
La autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve
para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor
de agua a alta presin y temperatura, evitando con las
altas presiones que el agua llegue a ebullir a pesar de su
alta temperatura. El vapor alcanza una presin interna de
103 kPa y una temperatura de 121C y el tiempo tpico de
esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15
minutos.
A la temperatura de 100C no se logran eliminar todas las bacterias, lo que se
busca es eliminar el clostridium botulinum ya que es mortal.
Si se desea saber si el quipo esta funcionando bien se utilizan indicadores que
son colocados a cada material y si se colorea es que no ha llegado a la
temperatura adecuada. La autoclave tambin puede ser utilizada
para
esterilizar material que ha sido usado y se ha contaminado.

HORNO U ESTERILIZADOR
Este dispositivo se utiliza especialmente para la
destruccin de los microrganismos, sean patogicos o
no, que estn sobre o dentro del material mediante el
calor seco . Se debe trabajar a una temperatura de
180C por un tiempo de 2 horas.

REFRIGERADORES
Son tiles para guardar reactivos
la mantencin de los medios de
temperatura de almacenamiento debe
algunos
presentan
regulador
temperatura.

perecederos y para
cultivos,
cuya
ser
controlado
,
electrnico digital de

ESTUFAS O INCUBADORAS
Es un dispositivo con funciones especificas que permite
controlar, segn su diseo, temperatura y humedad para
crear un ambiente adecuado apto para la reproduccin y
desarrollo de organismos vivos. Algunas de la
aplicaciones
mas
comunes
son
los
cultivos
microbiolgicos, micolgicos y virales, entre otros.
Pueden ser diseadas para aplicaciones donde se puede
controlar parmetros como temperatura, DBO o condiciones atmosfricas.
CONTADOR DE COLONIAS
Est diseado para el conteo rpido y preciso de las
colonias de bacterias y moho en placas de cultivo.
Permite el conteo de las colonias de bacterias por cada
pulsacin del contador quedando grabado en la pantalla
digital de tres (3) dgitos hasta un total de 999 colonias.
Provisto de luz blanca que ilumina directamente desde
abajo, lo cual permite una ptima visualizacin de las cajas petri con cultivos o
colonias de bacterias de colores diferentes.

CENTRIFUGA
Se utiliza para acelerar la separacin por gravedad de
partculas solidas suspendidas en liquidos. Hay centrifugas
de tamao y velocidades variables. La velocidad a la cual
se sedimentaran las partculas en un lquido depende de
varios factores.

BAO MARIA
Es un mtodo empleado para conferir temperatura
uniforme a una sustancia liquida o solida o para
calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que
la contiene en otro mayor con agua que esta en
ebullicin. Tiene salida de aire y presentan un
termostato que regula la temperatura del agua, adems de presentar un piso
para colocar los materiales.
GABINETE MIROBIOLOGICO

Equipo para manipular muestras biolgicas bajo

una atmsfera microbiolgicamente controlada.
Gabinete de seguridad biolgica con ventana
frontal deslizable y alarma que indica el nivel de
apertura de la ventana.
Flujo de aire vertical y recirculacin de aire filtrado.
De acero inoxidable. Con filtros absolutos de
eficiencia del 99.99% (HEPA) y retencin de
partculas de 0.3 micras. Con llave para toma de
oxgeno.
MECHERO
Es un tubo con un dimetro de 1.5 cm.
redonda de aproximadamente 10 cm. de
parte baja del tubo se encuentra una
butano y un anillo regulador. Por la parte
se forma la flama del mechero la cual
de seguridad al formar un
rea de
aproximadamente 15 a 25 cm. de radio.

con
una base
dimetro, que en la
entrada para el gas
superior del tubo
brinda un margen
esterilidad
de

PROBETA
La probeta o cilindro graduable es un instrumento volumtrico, que
permite medir volmenes superiores y mas rpidamente que las
pipetas, aunque con menor precisin. Esta formado por un tubo
generalmente transparente de unos centmetros de dimetro, y tiene
una serie de marcas grabadas. En la parte inferior esta cerrada y
posee una base que le sirve de apoyo y la superior esta abierta.

MATRAZ
Es un frasco transparente de forma conica con una abertura
en el extremo angosto, generalmente prolongado conun
cuello cilndrico, suele incluir algunas marcas. Por su forma
es til para realizar mezclas por agitacin y para la
evaporacin controlada de liquidos; adems, su abertura
estrecha permite utilizar tapones. El matraz enlermeyer no
se suele utilizar para la medicin de liquidos ya que sus
medidas son imprecisas.

PIPETAS

Instrumento volumtrico que permite medir alcuotas

de liquido con bastante precisin. Suelen ser de vidrio.
Formado por un tubo hueco transparente que termina
en una de sus puntas en forma cnica y tiene una
graduacin indicando distintos volmenes.
TUBOS DE PRUEBA
Consiste en un pequeo tubo de vidrio con una punta
abierta que puede tener tapa, y la otra cerrada y
redondeada, que se utiliza para contener pequeas
muestras liquidas. Se emplean como recipientes de cultivo,
deben ser de vidrio neutro, paredes gruesas y equilibradas.

JARRA DE ANAEROBIOSIS
Este aparato sirve para mantener bacterias anaerobias. Tiene
unos tubos en donde se conectan a una maquina que
succiona el aire. La tapa tiene un catalizador para facilitar
el proceso. En otros casos se coloca un reactivo que reacciona
con el oxigeno eliminndolo.

MICROSCOPIO OPTICO
El microscopio ptico es un instrumento que sirve para
aumentar el tamao de un objeto a travs de un sistema de
lentes. Puede conseguirse con este mtodo un aumento de
hasta 2000 veces. Las partes de las que se compone un
microscopio se pueden dividir en parte mecnica y en parte
ptica. Tambien se usa el microscopio electrnico para observar
la parte interna de los miroorganismos.

BALANZA DIGITAL
Instrumento de precisin para pesar los medios de cultivos y
reactivos que se preparan en un laboratorio de microbiologa.

PLACA PETRI

Son recipientes cilndricos de vidrio, plstico u otro

material constituido por dos piezas, una tapa y una base.
Se utilizan para colocar los medios de cultivos para el
cultivo y aislamiento de microrganismos. Las mas usadas
son las de 10, 15 o 20mmx100mm.

LAMINAS PORTA OBJETOS

Placa de vidrio rectangular
diferentes tipos de frotis.

que sirve para realiza

LAMINAS CUBREOBJETOS
Placa de vidrio muy delgada, de forma cuadrada o rectangular que sirve para
colocarla sobre frotis hmedos o fijos.
AGUJA DE KOLLE Y ASA DE KOLLE
Se utilizan para pescar, transportar y sembrar el material
bacteriolgico. Deben ser esterilizados al rojo vivo antes y
despus de las siembras bacteriolgicas. La Asa de Kolle se
usa para suspender un organismo que este en un medio liquido.
dotarle de calor necesario para calentar algunas soluciones qumicas.
CUESTIONARIO
1. Qu es la esterilizacin?
Es la eliminacin completa de toda forma de vida microbiana de objetos
inanimados incluyendo esporas. Puede conseguirse a travs de mtodos fsicos
qumicos o gaseosos.
Es una tcnica de saneamiento preventivo para conseguir la destruccin de
todos lo microorganismos y sus formas de resistencia que puedan existir en la
superficie o en el espesor de un objeto. Obtiene como resultado la ausencia de
todo germen vivo consiguiendo material estril.

2. Describa las principales formas de esterilizacin. Material y

equipos.

Los mtodos de esterilizacin comprenden entonces, todos los procedimientos

fsicos, mecnicos y qumicos
que se emplean para destruir grmenes
patgenos. Los ms utilizados en la actualidad son los mtodos fsicos (calor,
radiaciones, filtracin, centrifugacin) y los mtodos qumicos (agente
qumico).

Mtodos fsicos
Esterilizacin por medio de calor hmedo
La utilizacin del calor y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de
exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en
distinto grado, a la accin del calor. El calor hmedo produce desnaturalizacin
y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos
razones:
1) El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas
estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua y 2) El
vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms
elevado que el aire.
Ventajas:
Rpido calentamiento y penetracin
Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo
No deja residuos txicos
Hay un bajo deterioro del material expuesto
Econmico
Desventajas:
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua
Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

a) Ebullicin: Se requiere un recipiente con agua. Es la aplicacin del calor

mediante la ebullicin del agua a presin atmosfrica (100 C). Mediante este
mtodo se esterilizan inyectadoras, agujas e instrumentos de ciruga menor. No
es confiable en su totalidad este mtodo por cuanto quedan las esporas
b) Pasteurizacin:

La pasteurizacin implica la exposicin de lquidos a temperaturas de 55 a 75

C para eliminar todas las bacterias vegetativas importantes para las
enfermedades en humanos; este proceso no afecta las esporas. La
pasteurizacin se emplea comercialmente para hacer que la leche sea segura y
ampliar su calidad en almacenamiento. Se utiliza para alimentos y equipo
mdico frgil.
c) Vapor a presin -Autoclave
Es el mtodo ms eficaz para esterilizar medios de cultivo y debe utilizarse
para aquellos medios resistentes a las temperaturas elevadas. Tambin se
emplea para material de vidrio e instrumentos y para esterilizar cultivos y
material contaminado antes de proceder a su lavado. La temperatura del
interior de la autoclave depende de la presin del vapor.
La esterilizacin en autoclave se consigue manteniendo el material a una
temperatura de 121C durante 15-30minutos en vapor puro saturado a 1.054
kg/cm2 sobre la presin atmosfrica. El periodo de tiempo necesario, a la
temperatura deseada, depende de una serie de factores, entre los que se
encuentran los siguientes:
a) La carga microbiana del material que se esta esterilizando y la
naturaleza de los contaminantes. Los ingredientes de los medios de
cultivo y de los medios deshidratados suelen fabricarse de una forma tal
que garantizan un nivel de contaminacin muy bajo. Sin embargo en los
medios o ingredientes deshidratados pueden aparecer ciertas esporas
de bacillus spp. Muy resistentes al calor, a unos niveles tan altos que
una descontaminacin producira una importantes desnaturalizacin
trmica.
b) El tamao del envase y el espesor de su pared. Para que el calor penetre
en un recipiente de tipo plano de 500 ml lleno de medio, se necesita
doble cantidad de tiempo que para realizar la misma operacin en un
frasco del mismo tipo, con capacidad para 100 ml, y lleno del mismo
medio. Del mismo modo si tuviera paredes mas gruesas.
c) La naturaleza del contenido. En presencia de agar el tiempo necesario
para que el calor penetre suele ser aproximadamente el doble del que
necesitara si en su lugar hubiera agua.
Esterilizacin por medio de calor seco
El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txicos por niveles
elevados de electrolitos, fusin de membranas. Estos efectos se deben a la
transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en
contacto con stos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos

requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de

agua del medio es baja.
Ventajas
No es corrosivo para metales e instrumentos.
Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de
sustancias viscosas no voltiles.Desventajas:
Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo,
debido a la baja penetracin del calor.
Entre los mtodos que utilizan el calor seco como medio de esterilizacin se
destacan:
a) Flameado al rojo con el mechero Bunsen
Consiste en la exposicin directa del instrumento a una flama en forma directa
por poco tiempo con el mechero de Bunsen. Se emplea para esteriliza
alambres, asas e instrumentos metlicos que se han utilizado para sembrar y
que son resistentes al fuego.
Si se estn cultivando patgenos muy
infecciosos, es indispensable disponer de quemadores con cono protector o
esterilizadores de asas diseados a propsito para protegerse del material que
salpique.
b) Incineracin: Consiste en someter el material contaminado a altas
temperaturas en hornos especiales para reducirlo prcticamente a cenizas. Su
fin es evitar el vertido de material de alto riesgo en la basura.
c) Estufa - Horno Pasteur de aire caliente
Este horno se calienta por medio de electricidad o de gas y se controla
termostticamente. La esterilizacin se emplea generalmente para
instrumentos de vidrio, como tubos de ensayo, placas de Petri de vidrio,
matraces y pipetas. Las placas de vidrio y las pipetas se empaquetan
fcilmente en envases de cobre, aleacin o acero inoxidable preparados para
este fin. El material de vidrio debe secarse antes de introducirlo al horno. El
horno se utiliza asimismo para esterilizar materiales secos que se encuentran
dentro de envases cerrados hermticamente, como por ejemplo, cal y para los
aceites minerales que se emplean para la conservacin de cultivos
bacterianos. La esterilizacin debe durar al menos 2 horas, empezando a
contarse desde que le termmetro marque la temperatura de 160C. los
objetos no deben extraerse del horno hasta que este se haya enfriado, para
evitar que el vidrio se quebr.

Esterilizacion por Radiaciones.

La accin de las radiaciones del tipo de radiacin y el tiempo de exposicin.
a) Radiaciones ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las
bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes
esenciales para la viabilidad de los microorganismos, dando lugar a mutaciones
en los microorganismos que los incapacitan metablicamente para producir
una enzima esencial y sobreviniendo la muerte bacteriana. Las radiaciones
tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales
termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se
utilizan a escala industrial por sus costos.
b) Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la
energa atmica. Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales
termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar
antibiticos, vacunas, alimentos, etc.
c) Rayos X: Penetran bien, pero requieren mucha energa, son pocos
operativos para su empleo masivo, su uso es muy costoso, por lo tanto son
muy poco usados con fines de esterilizacin
d) Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas
microorganismos. El ADN absorbe una longitud de onda
energa ocasionado rearreglo de enlaces qumicos
penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para
quirfanos.

de DNA de los
de 2600 y libera
son escasamente
la esterilizacin en

Mtodos qumicos
a) Oxido de etileno: Es un agente alquilante que se une a compuestos con
hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos,
hidroxilos, etc. Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la
industria farmacutica. Destruye todos los microorganismos incluso virus; es
un agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria en estado
vegetativo, incluyendo al bacilo de la tuberculosis, las esporas y los virus. Sirve
para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plstico,
papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Es
muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems
cancerigeno.
b) Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas,
provocando una modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad
enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas.

c) Glutaraldehdo: Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y

sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de
10 minutos. Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico
esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma, vidrio, metal, etc.
d) Formaldehdo: Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales
pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodn, que
despus pueden ser expuesta al calor para una rpida esterilizacin (accin del
gas formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, que son
cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los
60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc. Las
pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.
e) Esterilizacin por gas-plasma de Perxido de Hidrgeno: Es proceso
de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la transmisin de
perxido de hidrgeno en fase plasma (estado entre lquido y gas), que ejerce
la accin biocida.

BIBLIOGRAFIA
Harrigan, W.F. (1979). Mtodos de laboratorio en Microbiologa de
alimentos y Productos Lcteos. . Impreso en Espaa. Editorial academia
Len.
http://highered.mcgrawhill.com/sites/dl/free/6071505545/895751/Ryan_MicrobiologiaMedica_5a_
capitulo_muestra.pdf
http://www.podologiaclinica.cl/menu/material/esterilizacion.html
http://www.dcnls.com/Productos/Laboratorio/estufas.htm
http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/39586.p
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