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Cintica enzimtica
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones qumicas que
son catalizadas por las enzimas. El estudio de la cintica de una enzima
permite explicar los detalles de su mecanismo cataltico, su papel en el
metabolismo, cmo es controlada su actividad en la clula y cmo puede
ser inhibida su actividad por frmacos o venenos o potenciada por otro tipo
de molculas.
Las enzimas son protenas (macromolculas) con la capacidad de manipular
otras molculas, denominadas sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al
centro cataltico de la enzima que lo reconozca y transformarse en un
producto a lo largo de una serie de pasos denominados mecanismo
enzimtico. Algunas enzimas pueden unir varios sustratos diferentes y/o
liberar diversos productos, como es el caso de las proteasas al romper una
protena en dos polipptidos. En otros casos, se produce la unin simultnea
de dos sustratos, como en el caso de la ADN polimerasa, que es capaz de
incorporar un nucletido (sustrato 1) a una hebra de ADN (sustrato 2).
Aunque todos estos mecanismos suelen seguir una compleja serie de pasos,
tambin suelen presentar una etapa limitante que determina la velocidad
final de toda la reaccin. Esta etapa limitante puede consistir en una
reaccin qumica o en un cambio conformacional de la enzima o del
sustrato.
Fundamentos
La reaccin catalizada por una enzima utiliza la misma cantidad de sustrato
y genera la misma cantidad de producto que una reaccin no catalizada. Al
igual que ocurre en otros tipos de catlisis, las enzimas no alteran en
absoluto el equilibrio de la reaccin entre sustrato y producto. Sin embargo,
al contrario que las reacciones qumicas, las enzimas se saturan. Esto
significa que a mayor cantidad de sustrato, mayor nmero de centros
catalticos estarn ocupados, lo que incrementar la eficiencia de la
reaccin, hasta el momento en que todos los sitios posibles estn ocupados.
una
Ensayos enzimticos
Un ensayo enzimtico es un procedimiento, llevado a cabo en un
laboratorio, mediante el cual se puede medir la velocidad de una reaccin
enzimtica. Como las enzimas no se consumen en la reaccin que catalizan,
los ensayos enzimticos suelen medir los cambios experimentados bien en
la concentracin de sustrato (que va decreciendo), bien en la concentracin
de producto (que va aumentando). Existen diversos mtodos para realizar
estas medidas. La espectrofotometra permite detectar cambios en la
absorbancia de luz por parte del sustrato o del producto (segn la
concentracin de estos) y la radiometra implica incorporacin o liberacin
de radiactividad para medir la cantidad de producto obtenido por tiempo.
Los ensayos espectrofotomtricos son los ms utilizados, ya que permiten
medir la velocidad de la reaccin de forma continua. Por el contrario, los
ensayos radiomtricos requieren retirar las muestras para medirlas, por lo
que
son
ensayos
discontinuos.
Sin
embargo,
estos
ensayos
son
microscopio
para
observar
los
cambios
producidos
en
enzimas
la
figura
derecha
observar
de
la
se
puede
la
tpica
comportamiento
lineal.
A medida que avanza
la
reaccin,
agotando
de
la
sustrato
se
va
cantidad
y
disminuyendo
va
la
cantidad de producto
que
se
unidad
genera
de
por
tiempo
Factores
fsico-qumicos
que
pueden
modificar
la
actividad
enzimtica
Temperatura: las enzimas son sensibles a la temperatura pudiendo verse
modificada su actividad por este factor. Los rangos de temperaturas ptimos
pueden
de
salina:
al
igual
que
en
los
casos
anteriormente
La
ecuacin
de
Michaelis-Menten7
describe
como
la
velocidad
de
la
MaudMenten
demostraron que si k2
es mucho menor que k1
(aproximacin
equilibrio)
deducir
del
se
la
puede
siguiente
ecuacin:
(Ecuacin 2)
Esta famosa ecuacin es la base de la mayora de las cinticas enzimticas
de sustrato nico.