8/10/2015

PREPARACIN DE MEDIOS
Parte 1
Paso 1:

Pesar el agua peptonada

15 g

1000 mL

1.95 gr 130 mL
Paso 2

Medir con una probeta 130 mL de agua destilada, y colocarla en un erlen

meyer de 250 mL, agregar los 1.95 gramos de agua peptonada.

Dentro del erlen meyer agregar el magneto y calentar el medio a 300C,
hasta que aparezcan burbujas, quitar el recipiente.
Parte 2

Paso 1

Pesar el bilis verde brillante (bvb).

40 gr 1000 mL
2 gr 50 mL
Paso 2

Poner 50 mL de agua destilada y los 2 gramos de bvb en un erlen meyer,

agregar el magneto y calentar a 200 C, 200 RPM.

Sacar 9 tubos de ensayo y agregarle 5 mL de bvb recin preparado a cada

tubo.
Sacar 3 tubos de ensayo ms grandes y agregar agua peptonada a
realizada en la parte 1, 9 mL a cada tubo.
Parte 3

Los 90 mL de agua peptonada sobrante y los 12 tubos de ensayo (con bvb

y agua peptonada) se van a la autoclave a 120C, a 15 libras de presin, se
esper 15 minutos y luego esta se apag.
TOMA DE MUESTRA DE ARROZ
MATERIAL Y EQUIPO
15/10/2015.

Muestra a examinar
Bolzas Ziploc
Mechero
Gradilla
Guantes
Pipeta automticas CAPP SOFTLINE
3 Tips para pipeta
Parte 1
Pesar 10g de la muestra que tomaremos para analisar en este caso arroz,
para poder determinar su calidad microbiologica
Vertir los 90ml de agua peptonada en una bolza ziploc con los 10g de arroz
y llevarlo al stomacher durante 2 minutos
Esperar durante 15 minutos para que el arroz y el agua peptonada se
homogenicen de una manera adecuada
Parte 2
Pipetiar 1ml de la muestra en un tubo de agua peptonada, hasta lograr que
se mesclen adecuadamente, dandosele el nombre de 1: 100
Se cambia el Tip y se toma 1ml del tubo anterior de agua peptonada,
mesclando hasta homogenizar, dandosele el nombre 1:1,000
Se cambia el Tip y se toma 1ml del tubo anterio de agua peptonada,
mesclando hasta homogenizar y se descarta 1ml, dandose el nombre de
1:10,000

Parte 3

Teniendo nuestros tubos de ensayo de agua peptonada vamos a repartirlo

en partes iguales en 3 tubos de Caldo Verde Bilis Brillante.

Incubar los tubos a 35-37 C por 24 horas.
Confirmar la presencia de bacterias Coliformes por la formacion de gas en
(CVBB) o la presencia de burbujas en los tubos.
15/10/2015

RESULTADOS
Tubos
1:100
Positivo
1:1000
Positivo
1:10000
Positivo
Fuente: datos experimentales del laboratorio.

Resultado
Positivo
Positivo
Positivo

Positivo
Positivo
Negativo

DISCUSIN DE RESULTADOS
De acuerdo a la tabla de resultados se puede ver que hubo presencia de
microorganismos en los tubos de 1:100 siendo todos positivos, de 1:1000 tambien
todos positivos pero en el de 1:10000 hubo presencia de microorganismos en dos

tubos y en otro dio un resultado negativo. Para los tubos que dieron positivos, se
di as debido a la capacidad del grupo microbiano en fermentar la lactosa
produciendo cido y gas al ser incubados. Se utiliza el bilis verde brillante ya que
es selectivo y solo permite el desarrollo de microorganismos capaces de tolerar las
sales biliares y el verde brillante. Los moos capaces de tolerar lo dicho son:
Coliformes totales que comprende a todos los bacilos Gram-negativos aerobios o
anaerobios facultativos, no esporulados (Enterobacter, Escherichia, Citrobacter y
Klebsiella), y Coliformes fecales, que comprende a bacterias Gram-negativas
como lo es la E.coli.
Para el que dio negativo hay razones por las que dio este resultado como: que ese
tubo no tuvo la suficiente cantidad de muestra como los otros tubos, hubo
presencia de microosganismos pero no se desarrollaron en el BVB por no ser
Coliformes totales, Coliformes fecales, E.coli o bacterias gram (-).

22/10/2015
SIEMBRA EN PLACAS DE AGAR PETRIFILM
MATERIAL Y EQUIPO

Placas de agar petrifilm

Guantes
Pipeta automticas CAPP SOFTLINE
Incubadora
Cmara de Quebeq
Muestra de moos en BVB

PROCEDIMIENTO DE SIEMBRA
1.
2.
3.
4.

Se calibra la pipeta en 200.

Con la pipeta se toma una muestra de 200 de los tubos de BVB.
Se levanta el papel de la placa de agar sin removerlo por completo.
En las placas de agar se coloca en gotitas alrededor de ella las muestras
obtenidas del BVB.
5. Se coloca de nuevo el papel encima.

6. Se hace presin en el papel para que no queden burbujas.

7. Por ltimo se deja en la incubadora por 24 hrs, en 35-37C.
8. Al da siguiente se leen las placas.
9. Las placas se colocan en la cmara de Quebeq.
10. Se observa y anota los resultados.

RESULTADOS
DILUCIN

PETRIFILM

U. F. C.

1:100

Placa con 200 ml de

No hubo presencia

1: 1000

muestra
Placa con 200 ml de

No hubo presencia

1: 10000

muestra
Placa con 200 ml de

No hubo presencia

muestra
Fuente: Datos del laboratorio

DISICUSIN DE RESULTADOS
No se observ microorganismos en las placas de Petrifilm, debido a estas posibles
razones:
1. no creci un moos en las placas de Petrifilm porque se sembr en agar que
identifica coliformes totales o fecales y puesto que luego de realizar el Gram
se observ en el microscopio salmonella thypi, por tal razn no creci en
dicho agar.
2. Tambin se sembr en placa de Petrifilm especialmente para E. coli, que
con anterioridad presentaba daos en el agar, por lo cual aunque el moo
estuviera presente no crecera porque el agar no funcionaba.
3. Posible deshidratacin en las placas de Petrifilm que afect el crecimiento.
4. No hubo presencia de zona cida (amarilla) tampoco zona con gas, estas
son las principales caractersticas que debi presentar la placa conteniendo
enterobacterias ejemplo de ello lo que se obtuvo con el NMP la salmonella
thypi ya que esta es un bacilo Gram negativo, parte de las coliformes
totales que fermenta lactosa a cido

5. Es posible que existiera alguna entrada de aire al no sellar bien las placas,
como se muestra en la figura 2 y 3, por el cual produjo falsos negativos.
6. Posibles placas de Petrifilm expiradas, ya que segn la AOAC, AFNOR,
NCIMS, la vida de anaquel de estas son de 30 das, 12 y 18 meses a partir

de la fecha de fabricacin.
Se dedujo que el recuento de coliformes y E. Coli es igual a cero.

TAMBIN PODRA SUPONERSE QUE HUBO CRECIMIENTO INCONTABLE por

tales razones:

Podra ser un recuento muy alto, ya que toda el rea de crecimiento de las
colonias estaba muy unidas, as como se muestra a las orillas del agar en la

figura 1, lo cual se reporta como un resultado incontable.

Esto se debe a que la muestra no fue diluida suficientemente, y para

obtener un recuento ms preciso se requiere diluir ms la muestra.

A la vez podemos realizar una hiptesis deduciendo que hubo presencia de
Gram negativos no coliformes los cuales no fermentaron la lactosa por lo
cual solo cambiaron el color del gel.

ANEXOS
Figura 1

Figura 2

Muestra bacteriana, 1:10000.

Muestra bacteriana, 1:1000

Figura 3

Muestra bacteriana, 1:100

REFERENCIAS

Annimo. 3MTM PetrifilmTM Placas para Recuento de Aerobios. 3MTM

PetrifilmTM. Gua de Interpretacin. Visto: 23/10/2015. Disponible en:
http://jornades.uab.cat/workshopmrama/sites/jornades.uab.cat.workshopmr

ama/files/Petrifilm_guias.pdf
Annimo. Placas PetrifilmMR. Aspectos Tcnicos Relevantes Visto:
24/10/2015.

Disponible

%20Petrifilm_Folleto.pdf

en:

http://www.proveedormedico.com/Placas

Annimo. Mtodo para la determinacin de bacterias coliformes,

coliformes fecales y Escherichia coli por la tcnica de diluciones en
tubo mltiple (nmero ms probable o NMP)
Disponible

Visto: 26/10/2015.
en:

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Analisis_Agua_NMP_22309.pdf