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INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES


PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.

NORTH AMERICAN COMMISSION FOR


ENVIRONMENTAL COOPERATION (NACEC)

DESARROLLO DE LOS PROTOCOLOS BASE


PARA EL PROGRAMA NACIONAL DE
MONITOREO Y EVALUACIN (PRONAME)
ANEXO 3 DEL REPORTE FINAL

MANUAL DE MTODOS ANALITICOS DE LOS


COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES PARA LAS
MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME

LABORATORIOS

ABC

QUMICA INVESTIGACIN Y ANLISIS S.A. DE C.V.


Revisin 3.5 Febrero 2012

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CONTENIDO

1.0

INTRODUCCIN

2.0

OBJETIVOS

3.0

MTODOS ANALTICOS

3.0.1 ESTRUCTURA DE LOS MTODOS


3.1 PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS (POCs)
3.1.1 Aplicacin y Alcances
3.1.2 Resumen
3.1.3 Procedimientos de extraccin y purificacin de muestras
3.1.3.1 Interferencias generales
3.1.3.2 Seguridad general
3.1.3.3 Matrices
3.1.3.3.1 Aire Ambiente
3.1.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterrneas)
3.1.3.3.3 Suelos
3.1.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.1.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales
3.1.3.3.5.1 Tejidos y Alimentos con Alto Contenido de Grasa
(> 2% Grasa)
3.1.3.3.5.1.1 Leche
3.1.3.3.5.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo
Deshidratado
3.1.3.3.5.1.3 Mantequilla
3.1.3.3.5.1.4 Hgado
3.1.3.3.5.1.5 Tejido graso
3.1.3.3.5.2 Alimentos con bajo contenido de grasa
3.1.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos (>75%
agua < 5% azucares)
3.1.3.3.5.2.1.1 Lechuga, etc.
3.1.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
3.1.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios
(>75% agua y 5-15% azucares)
3.1.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos (>75%
agua <15-30% azucares)
3.1.3.3.5.2.4 Alimentos Secos con Baja humedad (75
% agua)
3.1.3.3.6 Sangre Humana
3.1.3.3.7 Leche Materna
2

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3.1.4 Mtodo de identificacin y cuantificacin instrumental
3.1.4.1 Aplicacin y Alcances
3.1.4.2 Resumen
3.1.4.3 Equipos y Materiales
3.1.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.1.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
3.1.4.6 Calibracin
3.1.4.7 Procedimiento analtico
3.1.4.8 Desempeo del mtodo
3.1.4.9 Tablas y figuras
3.2 BIFENILOS POLICLORADOS (PCBs)
3.2.1 Aplicacin y Alcances
3.2.2 Resumen
3.2.3 Procedimientos de extraccin y purificacin de muestras
3.2.3.1 Interferencias generales
3.2.3.2 Seguridad general
3.2.3.3 Matrices
3.2.3.3.1 Aire Ambiente
3.2.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterrneas)
3.2.3.3.3 Suelos
3.2.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.2.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales
3.2.3.3.5.1 Tejidos y Alimentos con Alto Contenido de Grasa
(> 2% Grasa)
3.2.3.3.5.1.1 Leche
3.2.3.3.5.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo
Deshidratado
3.2.3.3.5.1.3 Mantequilla
3.2.3.3.5.1.4 Hgado
3.2.3.3.5.1.5 Tejido graso
3.2.3.3.5.2 Alimentos con bajo contenido de grasa
3.2.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos (>75%
agua < 5% azucares)
3.2.3.3.5.2.1.1 Lechuga, etc.
3.2.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
3.2.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios
(>75% agua y 5-15% azucares)
3.2.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos (>75%
agua <15-30% azucares)
3.2.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad (75
% agua)
3.2.3.3.6 Sangre Humana
3.2.3.3.7 Leche Materna

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3.2.4 Mtodo de identificacin y cuantificacin instrumental
3.2.4.1 Aplicacin y Alcances
3.2.4.2 Resumen
3.2.4.3 Equipos y Materiales
3.2.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.2.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
3.2.4.6 Calibracin
3.2.4.7 Procedimiento analtico
3.2.4.8 Desempeo del mtodo
3.2.4.9 Tablas y figuras
3.3
HIDROCARBUROS
POLIAROMTICOS
(HPAs),
CLORDECON
Y
PENTACLOROBENCENO
3.3.1 Aplicacin y Alcances
3.3.2 Resumen
3.3.3 Procedimientos de extraccin y purificacin de muestras
3.3.3.1 Interferencias generales
3.3.3.2 Seguridad general
3.3.3.3 Matrices
3.3.3.3.1Aire Ambiente
3.3.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterrneas)
3.3.3.3.3 Suelos
3.3.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.3.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales
3.3.3.3.5.1 Tejidos y Alimentos con Alto Contenido de Grasa
(> 2% Grasa)
3.3.3.3.5.1.1 Leche
3.3.3.3.5.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo
Deshidratado
3.3.3.3.5.1.3 Mantequilla
3.3.3.3.5.1.4 Hgado
3.3.3.3.5.1.5 Tejido graso
3.3.3.3.5.2 Alimentos con bajo contenido de grasa
3.3.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos (>75%
agua < 5% azucares)
3.3.3.3.5.2.1.1 Lechuga, etc.
3.3.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
3.3.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios
(>75% agua y 5-15% azucares)
3.3.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos (>75%
agua <15-30% azucares)
3.3.3.3.5.2.4 Alimentos Secos con Baja humedad (75
% agua)
3.3.3.3.6 Sangre Humana
4

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3.3.3.3.7 Leche Materna
3.3.4 Mtodo de identificacin y cuantificacin instrumental
3.3.4.1 Aplicacin y Alcances
3.3.4.2 Resumen
3.3.4.3 Equipos y Materiales
3.3.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.3.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
3.3.4.6 Calibracin
3.3.4.7 Procedimiento analtico
3.3.4.8 Desempeo del mtodo
3.3.4.9 Tablas y figuras
3.4 BIFENILOS POLIBROMADOS (PBBs) y BIFENILOS POLIBROMADOS ETER (PBDEs)
3.4.1 Aplicacin y Alcances
3.4.2 Resumen
3.4.3 Procedimientos de Extraccin y Purificacin de muestras
3.4.3.1 Interferencias generales
3.4.3.2 Seguridad general
3.4.3.3 Matrices
3.4.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterrneas)
3.4.3.3.2 Suelos
3.4.3.3.3 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.4.3.3.4 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales,
3.4.3.3.4.1 Tejidos y alimentos con grasa ( 2% Grasa)
3.4.3.3.4.1.1 Leche
3.4.3.3.4.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo
Deshidratado.
3.4.3.3.4.1.3 Mantequilla
3.4.3.3.4.1.4 Hgado
3.4.3.3.4.1.5 Tejido Graso
3.4.3.3.4.2 Alimentos con Bajo Contenido de Grasa
3.4.3.3.4.2.1 Alta humedad azucares bajos (> 75%
agua < 5% azucares)
3.4.3.3.4.2.1.1 Lechugas, etc.
3.4.3.3.4.2.1.2 Huevo entero
3.4.3.3.4.2.2 Alta humedad azucares intermedios (>75%
agua y 5-15% azucares)

3.4.3.3.4.2.3 Alta humedad azucares altos (> 75% agua <


15-30% azucares)
3.4.3.3.4.2.4 Alimentos secos con baja humedad ( 75%
agua)
3.4.4 Mtodo de Identificacin y Cuantificacin Instrumental
3.4.4.1 Aplicacin y Alcances
3.4.4.2 Resumen

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3.4.4.3 Equipos y Materiales
3.4.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.4.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
3.4.4.6 Calibracin
3.4.4.7 Procedimiento Analtico
3.5 ACIDO PERFLUOROCTANICO SULFONICO (PFOS) Y SUS SALES,
3.5.1 Aplicacin y Alcances
3.5.2 Resumen
3.5.3 Procedimientos de Extraccin y Purificacin de muestras
3.5.3.1 Interferencias generales
3.4.3.2 Seguridad general
3.5.3.3 Matrices
3.5.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterrneas)
3.5.3.3.2 Suelos y Sedimentos
3.5.3.3.3 Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos
animales
3.5.3.3.3.1 Tejido graso e hgado
3.5.3.3.3.2 Alimentos procesados y sin procesar
3.5.4 Mtodo de identificacin y cuantificacin instrumental
3.5.4.1 Aplicacin y Alcances
3.5.4.2 Resumen
3.5.4.3 Equipos y Materiales
3.5.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.5.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
3.5.4.6 Calibracin
3.5.4.7 Procedimiento Analtico
3.6 METALES Y METALOIDES (Excepto Mercurio)
3.6.1 Aplicacin y Alcances
3.6.2 Resumen
3.6.3 Procedimientos de Digestin de muestras
3.6.3.1 Interferencias generales
3.6.3.2 Seguridad general
3.6.3.3 Matrices
3.6.3.3.1Aire Ambiente
3.6.3.3.2 Aguas superficiales epicontinentales y subterrneas.
3.6.3.3.3 Aguas marinas, estaurinas y de lagunas costeras.
3.6.3.3.4 Suelos
3.6.3.3.5 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.6.3.3.6 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales.
3.6.3.3.7 Sangre Humana
3.6.3.3.8 Leche Materna
3.6.4 Mtodo de identificacin y cuantificacin instrumental
3.6.4.1 Aplicacin y Alcances
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3.6.4.2 Resumen
3.6.4.3 Equipos y Materiales
3.6.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.6.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
3.6.4.6 Calibracin
3.6.4.7 Procedimiento analtico
3.7 MERCURIO
3.7.1 Aplicacin y Alcances
3.7.2 Resumen
3.7.3 Procedimientos de extraccin y digestin de muestras
3.7.3.1 Interferencias generales
3.7.3.2 Seguridad general
3.7.3.3 Matrices
3.7.3.3.1 Aire Ambiente
3.7.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterrneas)
3.7.3.3.3 Suelos
3.7.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.7.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos
animales
3.7.3.3.6 Sangre Humana
3.7.3.3.7 Leche Materna
3.7.4 Mtodo de identificacin y cuantificacin instrumental
3.7.4.1 Aplicacin y Alcances
3.7.4.2 Resumen
3.7.4.3 Equipos y Materiales
3.7.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.7.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
3.7.4.6 Calibracin
3.7.4.7 Procedimiento analtico

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1.0 INTRODUCCIN
La problemtica de la medicin analtica de los Compuestos Orgnicos Persistentes y de los
metales y metaloides txicos en matrices complejas como son las ambientales, se incrementa
cuando se utilizan mtodos analticos no estandarizados, ya que muchos de los mtodos
publicados en la bibliografa cientfica no cuentan con los sustentos de validacin necesarios o no
los publican para que otros tcnicos o cientficos los puedan utilizar confiablemente. No solo por
que no tengan los datos de desempeo completos, sino que en muchas ocasiones tienen defectos
en su redaccin lo que los hace poco robustos.
Un mtodo estandarizado no solo consiste en que haya sido probado y validado por varios
laboratorios competentes, sino que sea entendido por todos de la misma forma, en eso consiste la
robustez de un mtodo analtico, que tenga un formato uniforme y que todos los que lo lean,
entiendan lo mismo.
Los mtodos analticos se clasifican en:
1.- Mtodos primarios: Son mtodos de la ms alta calidad metrolgica, cuya operacin
est completamente descrita y entendida en trminos de las unidades SI y cuyos resultados son
aceptados sin referencia a un patrn de la misma cantidad (Gravimetra, Volumetra,
Espectrometra de masas con dilucin isotpica, etc.).
2.- Mtodos Racionales o No Empricos: Son mtodos estandarizados perfectamente
caracterizados para una matriz especfica, expresados usualmente en masa o fraccin mol y en
principio cualquier efecto sistemtico debido al sesgo del mtodo o de la matriz debe ser corregido,
aunque es mas usual que stos sean mnimos, normalmente el resultado del mensurando no
depende del mtodo utilizado (p.ej. Contenido de Nquel en una aleacin).
3.- Mtodo Empricos: Son mtodos en los cuales el resultado del mensurando depende del
mtodo utilizado (p. ej. Grasas y Aceites en aguas residuales), normalmente son mtodos
acordados para propsitos de mediciones comparativas dentro de un particular campo de
aplicacin, donde el mensurando depende caractersticamente del mtodo utilizado. En estos
mtodos no se pueden utilizar correcciones por sesgo del mtodo o de la matriz y los resultados
del mensurando se deben referir al mtodo utilizado. En el caso de los anlisis del medio
ambiente, las variaciones del sustrato y de la matriz tienen efectos significativos y desconocidos
(p. ej. No existen 2 aguas residuales industriales o dos suelos o dos residuos peligrosos
exactamente iguales), por lo que los mtodos analticos que se utilizan, se consideran en este
rubro.
Los mtodos que se utilizan para la medicin de metales, metaloides , Plaguicidas
Organoclorados, los Hidrocarburos Poliaromticos, los Bifenilos Policlorados, los PBDEs y los
PFOS son de tipo Racional, por lo que tericamente, sin importar la tcnica que lo conforme, debe
dar resultados comparables dentro de las incertidumbres que cada mtodo tenga. Sin embargo,
existen factores intrnsecos en cada mtodo como son las columnas analticas en el caso de las
separaciones cromatogrficas, la respuesta de los detectores utilizados, los procedimientos de

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extraccin y limpieza de las muestras y los procedimientos de calibracin que hacen que los
resultados analticos puedan ser muy diferentes.
El propsito de la redaccin de los mtodos analticos de este manual es precisamente tener en un
formato uniforme los mtodos para determinar los COPs y los metales y metaloides que se desean
analizar en el PRONAME a partir de referencias estandarizadas y validadas, en todos los mtodos
que se presentan se proporcionan los datos de desempeo y validacin como gua para los
usuarios y las especificaciones de control de calidad necesarias para proporcionar resultados
analticos confiables y comparables.

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2.0 OBJETIVOS
Contar con los mtodos analticos estandarizados y con sus datos homologados de desempeo y
control de calidad para determinar las Sustancias Persistentes y Bioacumulables, dentro de los
cuales se incluyen a los Compuestos Orgnicos Persistentes en un formato uniforme para que
sean utilizados por los integrantes del PRONAME.

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3.0 MTODOS ANALTICOS


En el presente captulo se presentan los mtodos de extraccin, purificacin y determinacin
cualitativa y cuantitativa de los analitos abarcados en este proyecto.
3.0.1 ESTRUCTURA DE LOS MTODOS
Cada uno de los mtodos desarrollados en el presente manual, tiene referencias especficas de
mtodos estandarizados y validados por Instituciones extranjeras o internacionales ampliamente
reconocidas, solamente se modific el formato para hacerlos uniformes y se incluyeron datos
sobre el desempeo del mtodo, en algunos casos de otras referencias que lo han utilizado.
El formato de los mtodos es el siguiente:
3.X.1 Aplicacin y Alcances
3.X.1.1 Propsito
3.X.1.2 Analitos
3.X.1.3 Matrices
3.X.1.4 Limitaciones
3.X.2. Resumen
3.X.3 Procedimientos de extraccin y purificacin de muestras
3.X.3.1 Interferencias generales
3.X.3.2 Seguridad general
3.X.3.3 Matrices
3.X.3.3.1 Aire Ambiente
3.X.3.3.1.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.1.3 Procedimientos de Extraccin
3.X.3.3.1.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras
3.X.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales
epicontinentales y subterrneas),
3.X.3.3.2.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.2.3 Procedimientos de Extraccin
3.X.3.3.2.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras
3.X.3.3.3 Suelos
3.X.3.3.3.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.3.3 Procedimientos de Extraccin
3.X.3.3.3.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras
3.X.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.X.3.3.4.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia
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3.X.3.3.4.3 Procedimientos de Extraccin
3.X.3.3.4.4 Procedimientos de Purificacin de
3.X.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos
animales
3.X.3.3.5.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.5.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.5.3 Procedimientos de Extraccin
3.X.3.3.5.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras
3.X.3.3.6 Sangre humana
3.X.3.3.6.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.6.3 Procedimientos de Extraccin
3.X.3.3.5.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras
3.X.3.3.7 Leche Materna.
3.X.3.3.7.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.7.3 Procedimientos de Extraccin
3.X.3.3.7.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras
3.X.4.0 Mtodo de identificacin y cuantificacin instrumental
3.X.4.1 Aplicacin y Alcances
3.X.4.1.1 Matrices
3.X.4.1.2 Limitaciones
3.X.4.2 Resumen
3.X.4.3 Equipo y Materiales
3.X.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.4.5 Control de calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
3.X.4.5.1 Verificacin del Equipo
3.X.4.5.2 Verificacin de la calibracin inicial
3.X.4.5.3 Verificacin de la contaminacin de reactivos
3.X.4.5.4 Verificacin del lote analtico
3.X.4.5.5 Verificacin de las interferencias de matriz
3.X.4.5.6 Verificacin de la Estabilidad de la Curva de Calibracin
3.X.4.5.7 Verificacin de estndares surrogados
3.X.4.5.8 Verificacin de estndares internos
3.X.4.5.9 Control de Calidad Estadstico
3.X.4.5.10 Validacin de modificaciones del mtodo o de mtodos alternos
3.X.4.5.11 Composicin del lote analtico (para cada 20 muestras)
3.X.4.5.12 Criterios de aceptacin y rechazo
3.X.4.6 Calibracin
3.X.4.7 Procedimiento analtico
3.X.4.7.1 Anlisis de los extractos de las muestras
3.X.4.7.2 Identificacin de los analitos
3.X.4.7.3 Clculos
3.X.4.8 Desempeo del Mtodo
3.X.4.8.1 Lmite de Deteccin
3.X.4.8.2 Lmite Prctico de Cuantificacin
3.X.4.8.3 Rango de Trabajo
3.X.4.8.4 Precisin
3.X.4.8.5 Exactitud
3.X.4.8.6 Incertidumbre

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3.X.4.9 Tablas y Figuras

Todos los mtodos son basados en desempeo, es decir, pueden ser modificados con la condicin
de que se alcancen los mismos parmetros de desempeo, este desempeo debe ser evaluado en
matrices reales y no con muestras de control de calidad de matriz simple.
Las referencias obtenidas que se tradujeron para cada uno de los mtodos de extraccin fueron
las siguientes:

MTODOS DE PREPARACIN DE MUESTRAS A DESARROLLAR (EXTRACCIN Y PURIFICACIN DE EXTRACTOS)

MATRICES

Metales

Mercurio

Congneres de
PCBs

HPAs, Clordecon y
Pentaclorobenceno

Plaguicidas
Organoclorados

PBDEs

PFOS

Aire Ambiente

EPA IO-2.1

EPA IO-5

EPA TO-4A

EPA TO-13A

EPA TO-4A

Suelos y
Sedimentos

Aguas
Marinas
Aguas
Superficiales
epicontinental
es
Aguas
Estaurinas y
de Lagunas
Costeras
Aguas
Subterrneas

EPA 3051A

EPA 3051A

EPA 3550C
/EPA 3620C
/EPA 3660C

EPA 3550C /EPA


3630C

EPA 3550C /EPA


3620C /EPA 3660B

EPA 1614

Perfluorinated
Organic Chemical
in the European
enviroment.
Scientific Report.
Faculty of Science.
Univ. of
Amsterdam,
Holland

EPA 200.10

EPA 3015-A

EPA 3510C
/EPA 3620C

EPA 3510C / EPA


3630C

EPA 3510C /EPA


3620C

EPA 1614

ISO 25101:2009

EPA 3015A

EPA 3015A

EPA 3510C
/EPA 3620C

EPA 3510C / EPA


3630C

EPA 3510C /EPA


3620C

EPA 1614

ISO 25101:2009

EPA 200.10

EPA 3015-A

EPA 3510C
/EPA 3620C

EPA 3510C / EPA


3630C

EPA 3510C /EPA


3620C

EPA 1614

ISO 25101:2009

EPA 3015A

EPA 3015-A

EPA 3510C
/EPA 3620C

EPA 3510C / EPA


3630C

EPA 3510C /EPA


3620C

EPA 1614

ISO 25101:2009

NIOSH 8004

Ken, Sexton et al,


Polycyclic
Aromatic
Hydrocarbons
in
Maternal and Umbilical
Cord
Blood
from
Pregnant
Hispanic
Women Living in
Brownsville, Texas; Int.
J. Environ. Res. Public
Health 2011, 8, 33653379;
doi:10.3390/ijerph80833
65

Mathur, H. B, et al,
Analysis of Pesticide
Residues in Blood
Samples
from
Villages of Punjab;
India: Centre for
Science
and
Environment, 2005.

K Norn, et. al,


Methylsulfonyl
metabolites of
PCBs and DDE
in human milk
in
Sweden,19721992. Environ
Health
Perspect. 1996
vol.104(7).
P766-772.

L.
Zainieri,
et.
al,
Polyciclyc
aromatic
hydrocarbons (HPAs) in
human milk from Italian
women: Influence of
cigarette smoking and
residential
area.
Chemosphere 2007. Vol.
67(7). p1265-1274

K Norn, et. al,


Methylsulfonyl
metabolites of PCBs
and DDE in human
milk
in
Sweden,1972-1992.
Environ
Health
Perspect.
1996
vol.104(7). P766-772

Sangre
Humana

NIOSH 8005

Leche
Materna

Paulo R. et. al,


Multielement
Determination in
Small
Samples
of
Human Milk
by
Inductively
Coupled Plasma
Atomic Emission
Spectrometry.
Brasil. Biological
Trace
element
research. 1997.

Morales I, Reyes
R, Alvarado J,
Domnguez
J,
Mijares R (2007)
Diagnstico de la
Contaminacin de
Mercurio en el
Personal de una
Unidad
Odontolgica de
Caracas,
Venezuela. Acta
Odontol
Venez
45, N 3/2007
Stewart A. et. al,
Measurement of
Total Mercury in
Biological
Specimens
by
Cold
Vapor
Atomic
Fluorescente
Spectrometry.199
4
Clinical
Chemistry.
Vol
40(2). p206-210.

13

Este documento pertenece al INECC-CCA citar como:


INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES
PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.
Vol.23. p57-62.

Alimentos,
tejidos y
Organismos

Bajo
contenido de
Grasas

Higado y
Tejidos

Alto
contenido de
Grasas

FDA-EAM4,4-2010

FDA-EAM4,4-2010

FDA-EAM4,4-2010

FDA-EAM-4,5-2008

FDA-EAM-4,5-2008

FDA-EAM-4,5-2008

Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual Method 303

Food and Drug


Administration,
Pesticides
Analytical
Manual Method
304

NOAA Technical
Memorandum
NOS ORCA 130.
nacional Status
and Trenes
Prrogam for
Marine
Environmetal
Quality.
Extraction of
biological
Tissues of trace
organic analisis
Pag. 98-101. US
Department of
Commerce.
Silver Spring
Maryland. March
1998.

Food and Drug Administration,


Pesticides Analytical Manual Method
304

Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual Method 304

Survey of PFOS
and related
fluorochemicals in
food. Report
number: FD
08/04. Central
Science
Laboratory. York
UK. 2008

Extraction of
Potassium
Perfluorooctanes
ulfonate or other
anionic
fluorochemical
surfactants from
liver for analysis
using HPLCES/MS. 3M
Environmental
Laboratory.
Method FACT.1.0 1998

Extraction of
Potassium
Perfluorooctanes
ulfonate or other
anionic
fluorochemical
surfactants from
liver for analysis
using HPLCES/MS. 3M
Environmental
Laboratory.
Method FACT.1.0 1998.

A continuacin se presentan los esquemas de trabajo que se deben utilizar para el anlisis de
muestras ambientales para evitar retrabajos:
MTODOS DE ANLISIS (CUALITATIVOS Y CUANTITATIVOS)
MATRICES

Aire Ambiente

Suelo y
Sedimentos

Metales

Hg

Congneres
de PCBs

HPAs

Plaguicidas
Organoclorados

PBBEs

PFOS

EPA IO-3.4

EPA IO-5

EPA 8082A

EPA 8270D

EPA 8081B

EPA
1614/
EPA
527

Perfluorinated
Organic
Chemical in the
European
enviroment.
Scientific
Report. Faculty
of Science.
Universidad de
Amsterdam
Holland

EPA 6010C

EPA-7474A

EPA 8082A

EPA 8270D

EPA 8081B

14

Este documento pertenece al INECC-CCA citar como:


INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES
PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.
EPA
1614/
EPA
527
EPA
1614/
EPA
527
EPA
1614/
EPA
527
EPA
1614/
EPA
527

Aguas Marinas

EPA 200.10

EPA-7470A

EPA 8082A

EPA 8270D

EPA 8081B

Aguas
Superficiales
epicontinentales

EPA 6010C

EPA-7470A

EPA 8082A

EPA 8270D

EPA 8081B

Aguas
Estuarinas y de
Lagunas
Costeras

EPA 200.10
/EPA 200.13

EPA-7470A

EPA 8082A

EPA 8270D

EPA 8081B

Aguas
Subterrneas

EPA 6010C

EPA-7470A

EPA 8082A

EPA 8270D

EPA 8081B

Sangre
Humana

NIOSH 8005

Morales I, Reyes
R, Alvarado J,
Domnguez J,
Mijares R (2007)
Diagnstico de la
Contaminacin de
Mercurio en el
Personal de una
Unidad
Odontolgica de
Caracas,
Venezuela. Acta
Odontol Venez 45,
N 3/2007

NIOSH 8004

Ken,
Sexton
et
al,
Polycyclic
Aromatic
Hydrocarbons in Maternal
and Umbilical
Cord Blood from Pregnant
Hispanic Women Living in
Brownsville, Texas; Int. J.
Environ.
Res.
Public
Health 2011, 8, 33653379;
doi:10.3390/ijerph8083365

Mathur, H. B, et
al, Analysis of
Pesticide
Residues
in
Blood Samples
from Villages of
Punjab; India:
Centre
for
Science
and
Environment,
2005.
(esta
metodologa se
refiere al EPA
8081B)

Leche Materna

Paulo R. et.
al,
Multielement
Determination
in Small
Samples of
Human Milk
by Inductively
Coupled
Plasma
Atomic
Emission
Spectrometry.
Brasil.
Biological
Trace
element
research.
1997. vol.23.
p57-62

K Norn, et.
al,
Methylsulfonyl
metabolites of
PCBs
and
DDE
in
human milk in
Sweden,19721992. Environ
Health
Perspect.
1996
vol.104(7).
P766-772.

L.
Zainieri,
et.
al,
Polyciclyc
aromatic
hydrocarbons (HPAs) in
human milk from Italian
women:
Influence
of
cigarette smoking and
residential
area.
Chemosphere 2007. Vol.
67(7). p1265-1274

K Norn, et. al,


Methylsulfonyl
metabolites of
PCBs and DDE
in human milk
in
Sweden,19721992. Environ
Health
Perspect. 1996
vol.104(7).
P766-772.

EPA
1614/
EPA
527

Analysis of
Fluorochemicals
in Liver Extracts
Using HPLCElectrospray/MS
3M
Environmental
Laboratory.
Method FACT.1.0 1998.

Alimentos,
organismos y
tejidos

FDA-EAM4,4-2010

Stewart A. et. al,


Measurement of
Total Mercury in
Biological
Specimens
by
Cold Vapor Atomic
Fluorescente
Spectrometry.1994
Clinical Chemistry.
Vol 40(2). p206210.

FDA-EAM-4,52008

Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual

ISO 25101:2009

ISO 25101:2009

ISO 25101:2009

ISO 25101:2009

15

Este documento pertenece al INECC-CCA citar como:


INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES
PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.

16

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PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.

3.1 PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS (POCs)


El principio de este mtodo se basa en la extraccin, purificacin y concentracin del extracto
purificado con objeto de la medicin de los plaguicidas clorados presentes en el extracto orgnico
purificado de la muestra inyectando una alcuota de 2 L en un cromatgrafo de gases con un par
de columnas capilares y un par de detectores de captura de electrones en paralelo (canales
cuantitativo y confirmativo). La identificacin de los analitos se realiza por la comparacin de sus
tiempos de retencin y reas con las de los estndares certificados en las dos columnas diferentes
simultneamente, su cuantificacin se realiza por medio del mtodo de estndar externo.

NOTA: Este mtodo est basado en su desempeo, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeo especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parmetros que se especifiquen como NO MODIFICABLES. Los
trminos debe, puede y deber son mencionados a travs de los mtodos y estn destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del mtodo. El trmino debe es usado para indicar que los desarrolladores de este
mtodo encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.

PARMETROS NO MODIFICABLES

Cromatgrafo de Gases (Columnas Capilares).


Detector de Captura de Electrones o Selectivo de Masas siempre que se demuestre que
tengan lmites de deteccin equivalentes.
Se debe tener confirmacin de identidad en cada muestra que se detecte supuestamente uno
de los analitos, esta confirmacin puede ser realizada por el mtodo de la columna alternativa
o por espectrometra de masas si lo permite la concentracin detectada (se deben evaluar los
LDM o espectrometra de masas antes de su utilizacin confirmatoria para asegurar que sean
equivalentes a los de ECD).

3.1.1 Aplicacin y Alcances


3.1.1.1 Propsito Este es un mtodo para el anlisis de los plaguicidas clorados,
principalmente para los considerados como Compuestos Orgnicos Persistentes (COPs), esta
diseado para ser altamente sensible y especfico.
De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes mtodos de extraccin y purificacin
para obtener extractos que son analizados en las mismas condiciones instrumentales.
3.1.1.2 Analitos El mtodo es aplicable a los siguientes analitos:

Aldrin
Clordano
DDT (y metabolitos DDD y DDE)
Dieldrin
Endrin
17

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PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.

-Endosulfan
-Endosulfan
Endosulfan sulfato
Heptacloro
Heptacloro epxido
Hexaclorobenceno
Lindano ( -BCH)
-BCH
-BCH
Mirex
Toxafeno

Este mtodo puede ser aplicado a otros analitos de la misma familia de plaguicidas
organoclorados, se debe validar la aplicacin para cada uno de los analitos que quiera ser
analizado.
3.1.1.3 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de los plaguicidas
organoclorados mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aire Ambiente
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterrneas
Alimentos procesados y sin procesar, Organismos y Tejidos animales
Sangre
Leche Materna

3.1.1.4 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden
variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentracin de las muestras e
interferencias presentes en el extracto purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas expertos en el uso de
cromatografa de gases y en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.

3.1.2 Resumen
AIRE AMBIENTE
Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio
y un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo
a una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h.

18

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PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.
El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego
trasladarse al laboratorio para su anlisis. Los plaguicidas se recuperan por extraccin
Soxhlet con ter al 5% en hexano.
El volumen de los extractos se reduce con la tcnica Kuderna-Danish (K-D) y se
purifican por cromatografa en columna.
Los extractos se someten a cromatografa de gases con detector de captura de
electrones (GC/ECD) para la deteccin y cuantificacin de plaguicidas.
Generalmente se alcanzan lmites de deteccin <1 ng/m3 con un periodo de muestreo de
24 horas.
AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales (Epicontinentales
y Subterraneas)
Este mtodo esta diseado para muestras de agua sin contaminacin aparente (no
aplica para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia
orgnica, principalmente grasas y aceites).
Los analitos se extraen en 1 L de muestra a travs de una extraccin liquido-liquido. El
volumen de los extractos se reduce con la tcnica Kuderna-Danish (K-D) y se purifican
por cromatografa en columna.
Los extractos se someten a cromatografa de gases con detector de captura de
electrones (GC/ECD) para la deteccin y cuantificacin de plaguicidas.
El tiempo total del anlisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los
analitos y las condiciones analticas que se escojan.
Los lmites de deteccin del mtodo se encuentran entre 0.005 a 0.01 g/L.
SUELOS Y SEDIMENTOS
Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con ayuda un brazo ultrasnico.
Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse al extracto, dependiendo de la
naturaleza de las interferencias de la matriz coextrada y de los analitos. Despus de
la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alcuota de 2 L en el cromatgrafo
de gases.
Los lmites de deteccin con este mtodo varan de 1 a 10 g/Kg BS segn los diferentes
analitos en matrices libres de interferencias.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Una muestra de 20 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos slidos y 100 mL de
alimentos lquidos se extraen utilizando la tcnica de extraccin apropiada
dependiendo de su contenido de grasa, humedad y azcares.
Los extractos para el anlisis de plaguicidas clorados se someten a una limpieza por
cromatografa en columna.

19

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Despus de la limpieza, el extracto concentrado se analiza inyectando una alcuota


de 2 L en el sistema cromatogrfico.
SANGRE HUMANA
Una alcuota de sangre es diluida con agua destilada, se aaden una solucin
saturada de NaCl y se extrae con hexano:acetona el extracto se pasan a travs de
sulfato de sodio anhidro y se concentra a aproximadamente 1-2mL. Se realiza una
limpieza por cromatografa de columna y el extracto es analizado por GC-MS
LECHE MATERNA
Una muestra de 10mL de leche se trata con una resina comercial y acido frmico, los
analitos se extraen.
La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografa en columna.
Los compuestos organoclorados son analizados por GC-MS.

3.1.3 Procedimientos de Extraccin y Purificacin de muestras


Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una
serie de estndares de calibracin por medio del procedimiento para validar los patrones
de elusin y la ausencia de interferencias de los reactivos.
3.1.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del mtodo pueden originarse por la presencia de contaminantes
en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el
procesamiento de la muestra (contaminacin cruzada) o por la presencia de
sustancias diferentes que coeluyen en los tiempos de retencin de los analitos de
inters (gas acarreador contaminado, partes del GC sucias y la presencia de
compuestos coeluidos de la matriz de la muestra).
El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. El material de vidrio
primeramente debe ser enjuagndo con el ltimo disolvente utilizado, despus lvelo
con agua caliente y detergente; enjuguelo con agua corriente y agua desionizada.
Escrralo, squelo y enjuguelo con acetona. Despus de secarlo, selle el material
de vidrio y gurdelo en un ambiente limpio para evitar acumulacin de polvo u otros
contaminantes. Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.
El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de
interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilacin en
material de vidrio. PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan los
estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. Tambin pueden eliminarse
conservadores, reducindose su vida de anaquel.
La cromatografa de gases con la deteccin selectiva por GC/ECD disminuye el
riesgo de interferencias por compuestos orgnicos extraos. Sin embargo, ciertos

20

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plaguicidas organoclorados (p.ej., toxafeno y clordano) son mezclas complejas de
compuestos simples, lo cual puede causar dificultad en cuantificar exactamente una
formulacin particular en una muestra de componentes mltiples.
Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas
de los analitos despus de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto,
despus de una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias
veces hexano para asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente
muestra.
Pueden existir interferencias de la matriz cuando se extraen contaminantes de la
muestra. Las interferencias en la matriz varan considerablemente de fuente a fuente,
dependiendo de la muestra colectada. En la mayora de las muestras es necesario
limpiar los extractos de la muestra. En ese caso debe confirmarse una identificacin
positiva.
Es importante que las muestras y los estndares de trabajo se encuentren en el
mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estndares debe ser el mismo que
el disolvente final utilizado en la preparacin de la muestra. De no ser este el caso,
puede afectarse la comparacin cromatogrfica entre los estndares y la muestra.
Debe tenerse cuidado al determinar endrin, ya que se ha reportado que puede
degradarse en el inyector splitless. El analista debe estar preparado para esta
posible interferencia.
Cantidades variables de plaguicidas comerciales, se adhieren al material de vidrio,
por lo que debe disminuirse la manipulacin de la muestra y el contacto con
superficies de vidrio.
El aldrin se oxida rpidamente al contacto con cloro. La eliminacin de cloro con tiosulfato de
sodio al hacer la colecta retardar la oxidacin de estos compuestos.
PRECAUCIN: Un pico de tiempo de retencin variable en la ventana de retencin
de heptacloro ha sido detectado durante el anlisis de agua de pozo, corriente o
grado reactivo, al parecer est relacionado con el dibutilftalato.
La presencia de azufre elemental resultar en picos anchos que interfieren con la deteccin de
plaguicidas organoclorados de elusin larga. Se sugiere el uso del mtodo de limpieza con
cobre para remover el azufre. La recuperacin del endrin aldehdo (utilizando el procedimiento
TBA) se reduce drsticamente al utilizar este procedimiento de limpieza, este compuesto debe
determinarse antes de la limpieza del azufre.
Ceras, grasas y otros coextractables de alto peso molecular pueden removerse por el
procedimiento de limpieza de permeacin de gel, ya que producen seales de fondo que
aumentan considerablemente el LDM y ensucia el ECD.
Los Bifenilos Policlorados interfieren con la identificacin de los plaguicidas. La nica forma
de identificar la presencia de plaguicidas en presencia de PCBs es su confirmacin por
GC/MS.

21

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3.1.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los qumicos utilizados en este mtodo no han sido
determinadas con precisin; de todas maneras, cada sustancia qumica debe ser
tratada como potencial peligro a la salud. La exposicin a estas sustancias qumicas
debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice
monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto
el analista y que dichos resultados estn disponibles para los analistas.
Los siguientes plaguicidas han sido clasificados tentativamente como posibles
carcinognicos para animales y humanos: aldrin comercial, clordano, dieldrin,
heptacloro, hexaclorobenceno y toxafeno. Los materiales estndar puros y soluciones
estndares patrn de estos productos deben manipularse en una campana de
extraccin o en una caja de guantes.
PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede
hacerlo peligroso.
Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas
con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro
y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposicin y manejo seguro de
las sustancias qumicas especificadas en este mtodo. Debe tenerse un archivo de
referencias de las hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a
todo el personal involucrado en estos anlisis.

3.1.3.3 Matrices
3.1.3.3.1 Aire Ambiente
3.1.3.3.1.1 Equipo y Materiales
La mencin de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este mtodo se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propsitos ilustrativos.
Su mencin no implica ninguna aprobacin oficial. Puede obtenerse un desempeo equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este mtodo, pero la
demostracin del desempeo equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este mtodo.
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
Muestreador de altos volmenes con cartucho PUF Disponible de General Metal
Works (Modelo PS-1).
Cabeza de Muestreo para contener cartucho de vidrio con tapn PUF Disponible
de General Metal Works.
Orificio de calibracin Disponible de General Metal Works
Manmetro Para usarse con el orificio de calibracin.
22

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Sistema de extraccin Soxhlet Incluyendo extractores Soxhlet (250 y 500 mL),
canastillas de calentamiento, transformadores de voltaje variable y fuente de
enfriamiento por agua para la extraccin de los cartuchos de PUF antes y despus
del muestreo.
Horno de vaco conectado a un aspirador de agua Para secar los cartuchos de PUF
extrados.
Frceps Para manipular las muestras con filtros de fibra de cuarzo.
Dado Para cortar los tapones de PUF.
Aditamentos para la preparacin de los extractos, purificacin y anlisis.
Guantes de polister Para manipular los cartuchos PUF y los filtros.
3.1.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.
Espuma de poliuretano Stock de hojas de 3 pulgadas de ancho tipo politer
utilizado para rellenar muebles. Densidad 0.022 g/cm3.
Filtros de fibra de cuarzo Pallflex 2500 Quast, o equivalentes.
Filtro de fibra de fieltro de 4.9 mg/cm2 y 0.6 mm de ancho. Para colocar cabezas de
muestra para estudios de eficiencia de coleccin. Pre-extrados con ter etlico al
5% en hexano.
Hexano Grado pesticida o destilado en vidrio.
ter etlico preservado con 2% de etanol grado destilado en vidrio o equivalente.
Acetona Grado pesticida o destilado en vidrio.
Almina Grado de actividad IV. Tamiz 100/200.
3.1.3.3.1.3. Procedimientos de Extraccin
Preparacin de los cartuchos de muestreo (PUF).
El absorbente PUF es una espuma de poliuretano tipo politer (densidad No 3014 0.0225
g/cm3). Este tipo de espuma se usa para el relleno de muebles. Es blanca y al contacto con la
luz se torna amarillenta.
Los tapones de PUF son de 6.0 cm de dimetro, cortados cilndricos de una hoja stock de 3
pulgadas y deben ajustar, con una ligera compresin en el cartucho de vidrio, soportados por la
malla de alambre. Durante el corte el dado se gira a alta velocidad (p.ej., en una prensa para
torno) y se lubrica continuamente con agua.
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Para la limpieza inicial, el tapn de PUF se coloca en un extractor Soxhlet y se extrae con
acetona de 12-24 horas a ~4 ciclos/hora. Para reusar los cartuchos, puede utilizarse ter etlico
al 5% en hexano como disolvente de limpieza.
La pieza de PUF ya extrada se coloca en un horno de vaco conectado a un aspirador de agua y
se seca a temperatura ambiente a ~2-4 horas (hasta que ya no se detecte el olor del disolvente).
La pieza se coloca en el cartucho muestreador de vidrio usando guantes de polister. El mdulo
se empaca con papel aluminio previamente lavado con hexano, se coloca en un contenedor
etiquetado y se sella firmemente.
Para poder clasificar al lote como apto para ser utilizado, al menos uno de cada lote de
cartuchos ensamblados debe ser analizado como blanco de laboratorio. Un nivel <10 ng/tapn
para compuestos sencillos se considera aceptable. Para las mezclas de componentes el nivel del
blanco deber ser < 100 ng/tapn.
Todas las muestras deben ser extradas como mximo una semana despus de su colecta.
Los cartuchos PUF y los filtros de cuarzo se retiran del contenedor sellado usando guantes, se
retira el empaque de aluminio y se colocan los cartuchos en un Soxhlet de extraccin de 500
mL. Los cartuchos se extraen de 12 a 24 horas ~4 ciclos por hora con 5% de ter etlico en
hexano. Los cartuchos pueden ser secados y rehusados si se comprueba la ausencia de
interferencias.
Los extractos se concentran a un volumen final de 10 mL con un concentrador Kuderna-Danish
de 500 mL, con ayuda de un bao de agua caliente. Los extractos concentrados se almacenan
bajo refrigeracin en viales sellados con tapas de rosca con contratapa de tefln hasta su
anlisis o purificacin.
3.1.3.3.1.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras
Si slo se buscan plaguicidas organoclorados, se recomienda una purificacin con almina.
Antes de la purificacin el extracto se concentra cuidadosamente hasta 1 mL con una corriente
suave de nitrgeno limpio.
Se empaca una columna cromatogrfica de vidrio (2 mm de dimetro interno x 15 cm de largo)
con almina grado de actividad IV y se lava con 10 mL de n-hexano. El extracto concentrado
se coloca en la columna y se eluye con 10 mL de n-hexano a una velocidad de 0,5 mL/minuto.
El volumen eludo se ajusta a 10 mL y est listo para analizarse.

3.1.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales


epicontinentales y subterrneas)
3.1.3.3.2.1 Equipo y Materiales
La mencin de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este mtodo se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propsitos ilustrativos.
Su mencin no implica ninguna aprobacin oficial. Puede obtenerse un desempeo equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este mtodo, pero la
demostracin del desempeo equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del

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laboratorio que utilice este mtodo.
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.

Kuderna Danish con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de destilacin Snyder
y matraces de 5 10 mL Kontes

Embudos de separacin de 2 L

Columna cromatogrfica Pyrex 30 cm x 22 mm I.D. Con lana de vidrio al fondo y llave


de tefln.

Viales con tapa de rosca y septa, de 2,0 mL, Agilent o equivalentes

Bao de agua con regulacin de temperatura

3.1.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia


Los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.

Cloruro de metileno disolvente de extraccin Grado pesticida o equivalente

Hexano, disolvente de cambio Grado pesticida o equivalente

Sulfato de sodio anhidro - Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de
metileno seguido por calentamiento a 400 C por 4 horas).

Agua A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.

Florisil Grado PR 60/100 activado a 675 C. El Florisil de diferentes lotes o


fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorcin. Se recomienda el uso
del valor de cido laurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El
procedimiento de referencia determina la absorcin de la solucin de cido laurico
en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar
para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporcin y multiplicando
por 20 g.

3.1.3.3.2.3 Procedimiento de Extraccin


Todas las muestras deben ser extradas como mximo una semana despus de su colecta.
Retire las muestras del almacenamiento y permita que se establezca el equilibrio con la
temperatura ambiente.
Tomar un volumen de 1 L de la muestra en un matraz de separacin de 2 L, Se mide el pH y si
es necesario este debe ser ajustado con acido sulfrico 1:1 o con hidrxido de sodio 10 N de
modo que el pH quede dentro de un rango de 5 a 9.

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Posteriormente se adiciona la mezcla de surrogodos (Tetracloro-m-xileno y decaclorobifenilo).
Adicione al matraz 60 mL de cloruro de metileno, agite durante 1 o 2 minutos, permita que las
fases se separen en un lapso de tiempo de 10 minutos.
Drene la fase orgnica en un matraz. Re extraiga la fase acuosa con dos porciones mas de
cloruro de metileno de 60 mL y rena los extractos orgnicos con el primero.
Si la muestra presenta problemas de emulsin durante la extraccin se deber utilizar
procedimientos mecnicos de separacin como filtracin, centrifugacin, fibra de vidrio u otro
mtodo fsico para romper la emulsin.
Posteriormente el extracto se hace pasar por una columna que tenga 10 cm de sulfato de sodio
anhidro y este es transferido a un Kuderna-Danish, se aaden piedras de ebullicin y se
concentran los extractos en un bao maria a una temperatura de 60-65 C hasta que se tenga un
volumen aparente de 1 mL, permita que se enfri y posteriormente agregue 10 mL de Hexano y
contine la concentracin hasta un volumen de aproximadamente 5 mL

3.1.3.3.2.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras


Limpieza en columna de Florisil
Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de
Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4
anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de hexano, coloque un concentrador
K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato.
Transfiera el extracto de hexano a la columna y eluya con 30 mL del disolvente de
elusin al 6% (ter etlico/hexano).
Eluya con 30 mL de la disolucin de elusin al 15% (ter etlico/hexano).
Eluya con 30 mL de la disolucin de elusin al 50% (ter etlico/hexano).
Adicione una piedras de ebullicin y evapore el disolvente en bao maria, cuando se tenga un
volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a que se enfre y
terminar de evaporar el disolvente con nitrgeno a un volumen final de 1 mL.

3.1.3.3.3 Suelos
3.1.3.3.3.1 Equipo y Materiales
La mencin de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este mtodo se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propsitos ilustrativos.
Su mencin no implica ninguna aprobacin oficial. Puede obtenerse un desempeo equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este mtodo, pero la
demostracin del desempeo equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este mtodo.
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
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Equipo Kuderna-Danish (K-D) Con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de


destilacin Snyder y matraces de 5 10 mL Kontes.

Extractor ultrasnico

Columna cromatogrfica Pyrex 20 mm I.D. Con lana de vidrio al fondo y llave de


tefln.

NOTA: Los discos de vidrio poroso son difcilmente descontaminados despus de


que se han pasado extractos altamente contaminados. Las columnas sin
poros pueden ser seleccionadas. Use un pequeo tapn de lana de vidrio
Pyrex para retener el absorbente. Lave previamente el tapn de lana con 50
mL de acetona seguido de 50 mL del solvente de elusin antes del
empacamiento de columna con absorbentes.

Bao de agua Calentador, con cobertura con anillos concntricos, capaz de control la
temperatura (+ 5 C). El bao debe utilizarse en una campana.
3.1.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia

Los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.

Agua A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.

Acetona grado pesticida o equivalente

Hexano grado pesticida o equivalente

Cloruro de metileno grado pesticida o equivalente

ter etlico

Sulfato de sodio Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de metileno
seguido por calentamiento a 400 C por 4 horas).

Grnulos de cobre

Florisil Grado PR 60/100 activado a 675 C. El Florisil de diferentes lotes o


fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorcin. Se recomienda el uso
del valor de cido lurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El
procedimiento de referencia determina la absorcin de la solucin de cido lurico
en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar
para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporcin y multiplicando
por 20 g.

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3.1.3.3.3.3 Procedimientos de Extraccin
Mezcle 10 g de la muestra slida con 10 g de sulfato de sodio anhidro; o bien con la cantidad
necesaria para tener la muestra como un polvo. Adicionar los estndares surrogados y 100 mL
de la mezcla de cloruro de metileno-acetona 1:1.
Sumergir el brazo del sonicador hasta que se encuentre un centmetro dentro del disolvente y
sonique durante 3 minutos a la potencia recomendada por el fabricante.
Decante el extracto y filtre en papel Whatman No. 41.
Repita la extraccin en dos ocasiones mas con 100 mL de la mezcla cloruro de metilenoacetona 1:1 y rena los extractos.
Ensamble un concentrador Kuderna Danish (K-D) sujetando un tubo concentrador de 10 mL a
un matraz de evaporacin de 500 mL.
Seque el extracto pasndolo a travs de una columna de secado que contenga alrededor de 10
cm de sulfato de sodio anhidro. Colecte el extracto seco en un concentrador K-D. Lave el
matraz de extraccin y la columna con sulfato de sodio con 100 a 125 mL del solvente de
extraccin para completar la cantidad transferida.
Agregue una o dos perlas de ebullicin limpias al matraz de evaporacin y unir una
columna Snyder de tres bolas. Humedezca previamente la columna Snyder agregando
aproximadamente 1 mL de cloruro de metileno. Coloque el aparato K-D en un bao
Mara (60 a 65 C) de manera que el tubo concentrador est parcialmente sumergido en
el agua caliente. Ajustar la posicin vertical del aparato y la temperatura del agua
requerida para completar la concentracin en 15 20 minutos. A un rango adecuado de
destilacin las bolas de la columna estarn en constante movimiento sin que las
campanas se inunden. Cuando el volumen aparente de lquido sea de
aproximadamente 1 mL, retirar K-D y dejarlo enfriar por lo menos 10 minutos. Quitar
momentneamente la columna Snyder, agregar 50 mL de hexano y una nueva perla de
ebullicin, unir nuevamente la columna Snyder y concentrar el extracto a un volumen de
5 mL para llevar a cabo la purificacin de la muestra; tape el tubo concentrador y
almacene en refrigeracin si el procedimiento no se va a llevar a cabo inmediatamente.
Si el extracto se va almacenar por ms de dos das deber transferirse a un vial con
tapa roscada y pelcula de tefln.
3.1.3.3.3.4 Procedimiento de Purificacin de muestras
Limpieza en columna de Florisil
Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de
Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4
anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de hexano, coloque un concentrador
K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato.
Transfiera el extracto de hexano a la columna y eluya con 30 mL del disolvente de
elusin al 6% (ter etlico/hexano).
Eluya con 30 mL de la disolucin de elusin al 15% (ter etlico/hexano).

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Eluya con 30 mL de la disolucin de elusin al 50% (ter etlico/hexano).
Adicione una piedras de ebullicin y evapore el disolvente en bao maria, cuando se tenga un
volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a que se enfre y
terminar de evaporar el disolvente con nitrgeno a un volumen final de 10mL.
Limpieza con cobre
Al extracto adicionar 2 g de cobre metlico en grnulos (limpio) y agitar vigorosamente
durante 1 minuto.

3.1.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)


Ver procedimiento para suelos
3.1.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales,
Equipo y Materiales
La mencin de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este mtodo se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propsitos ilustrativos.
Su mencin no implica ninguna aprobacin oficial. Puede obtenerse un desempeo equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este mtodo, pero la
demostracin del desempeo equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este mtodo.
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
Equipo Kuderna-Danish (K-D) Con capacidad de 500 y 1000 mL con columna de
destilacin Snyder y matraces de 5 10 mL Kontes.
Trituradora de alta velocidad Trituradora waring o equivalente.
Columnas cromatogrficas Con llave de tefln y tapn de lana de vidrio; de 22mm
ID x 30mm.
Embudo de separacin Con capacidad de 2000, 1000 y 500 mililitros y llave de
tefln.
Columna Micro-Snyder 2 bolas (Kontes Glass Co. No. 621400 o equivalente).
Columna Micro-Vigreaux Kontes Glass Co. No. K-569251 o equivalente.
Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.

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NOTA: El almacenaje de las soluciones estndar (patrn, compuestas, calibracin
interna y estndares surrogados) debe ser a 4 oC en contenedores de
politetrafluoroetileno (PTFE) en la oscuridad. Cuando se prepara un lote de
estndares, se recomienda que las alcuotas del lote deben guardarse en pequeos
viales individuales. Todas las soluciones estndares patrn deben reemplazarse
despus de un ao o antes si la rutina de control de calidad indica algn problema.
Todas las otras soluciones estndares debe remplazarse despus de seis meses o
antes si la rutina de control de calidad indica algn problema.

Acetonitrilo CH3CN

ter de petrleo

ter etlico

Acetonitrilo saturado con ter de petrleo Sature CH3CN con ter de petrleo.

Metanol USP, grado reactivo o ACS.

Solucin de lcali alcohlica al 2% Disuelva 2 g KOH en metanol y diluya a 100


mL.

Solvente de elusin al 6% Diluya 60 mL de ter etlico a 1 L con ter de petrleo.

Solvente de elusin al 15% Diluya 150 mL de ter etlico a 1 L de ter de petrleo.

Solvente de elusin al 50% Diluya 500 mL de ter etlico a 1 L de ter de petrleo

Florisil Grado PR 60/100 activado a 675 C. El Florisil de diferentes lotes o


fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorcin. Se recomienda el uso
del valor de cido lurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El
procedimiento de referencia determina la absorcin de la solucin de cido lurico
en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar
para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporcin y multiplicando
por 20 g.

Sulfato de sodio anhidro - Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de
metileno seguido por calentamiento a 400 C por 4 horas).
3.1.3.3.5.1 TEJIDOS Y ALIMENTOS CON GRASA ( 2% GRASA)
3.1.3.3.5.1.1 LECHE

Extraccin de grasa
Coloque 100 mL de leche (diluya leche evaporada 1:1 con agua) en un tubo de
centrifuga de 500 mL, adicione 100 mL de metanol, aproximadamente 1 g de oxalato
de sodio o de potasio y agite fuertemente. Adicione 50 mL de ter etlico y agite
vigorosamente 1 min abriendo el tubo para liberar la presin generada y deje reposar
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3 minutos; despus adicione 50 mL de ter de petrleo y agite vigorosamente
durante 1 min abriendo el tubo para liberar la presin generada y deje reposar 3
minutos. Centrifugue aproximadamente durante 5 min a 1500 r.p.m. Retire la fase
orgnica y colquela en un embudo de separacin de 1 L que contenga de 500 a 600
mL de agua y 30 mL de solucin saturada de NaCl. Re extraiga dos veces el residuo
acuoso del tubo de centrifuga con porciones de 50 mL de la mezcla ter etlico ter
de petrleo (1:1) agitando vigorosamente, centrifugue y transfiera la fase orgnica
en el embudo de separacin despus de cada extraccin. Mezcle muy lentamente los
extractos con el agua, drene y deseche la fase acuosa. Vuelva a lavar la fase
orgnica en dos ocasiones con 100 mL de agua y deseche la fase acuosa en cada
lavado. (Si se forma emulsin adicione 5 mL de la solucin saturada de NaCl a la
fase orgnica o incluya un lavado con agua). Pase el extracto a travs de una
columna de Na2SO4 de 50 x 25 mm OD y colecte el eluato en un K-D en el cual
previamente coloc una piedra de ebullicin. Lave la columna con pequeas
porciones de ter de petrleo y evapore el disolvente a una temperatura de 40 C en
bao maria. Cuando el volumen aparente sea de 1 mL apague el bao, deje enfriar y
siga evaporando con nitrgeno hasta la obtencin de la grasa (debe registrar el peso
de la grasa obtenida).
Particin con acetonitrilo
Pese 3 g de grasa, disuelva con un poco de ter de petrleo y transvase a un
embudo de separacin de 125 mL, adicione ter de petrleo tal que el volumen total
de grasa y ter de petrleo sea de 15 mL, adicione 30 mL de CH3CN saturado con
ter de petrleo y agite vigorosamente durante 1 min. Permita la separacin de fases
y drene el CH3CN en un embudo de separacin de 1L que contenga 650 mL de agua,
40 mL de la solucin saturada de NaCl y 100 mL de ter de petrleo. El ter de
petrleo del embudo de 125 mL reextrigalo 3 veces con porciones de 30 mL de
CH3CN saturado en ter de petrleo, en cada extraccin, drene el acetonitrilo en el
embudo de 1L.
Mantenga el embudo en posicin horizontal y mezcle vigorosamente durante 30-45 s.
Permita la separacin de fases y drene la fase acuosa en un segundo embudo de 1 L;
adicione 100 mL de ter de petrleo y agite durante 15 segundos, permita la
separacin de fases. Descarte la fase acuosa y combine el ter de petrleo con el
ter de petrleo del embudo original y lave con dos porciones de 100 mL de agua.
Descarte las fases acuosas y pase el extracto de ter de petrleo a travs de una
columna de 50 x 25 mm. OD de Na2SO4 en un concentrador K-D de 500 mL.
Enjuague el embudo y despus la columna con 3 porciones de 10 mL de ter de
petrleo. Rena los extractos y concntrelos en un K-D a un volumen aproximado de
10 mL para llevar a cabo el proceso de purificacin.
Purificacin en columna de Florisil
Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de
Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4
anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de ter de petrleo, coloque un
concentrador K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato.
Transfiera el extracto de ter de petrleo a la columna y permita su paso por la
columna con un flujo de 5 mL/min, enjuague los contenedores con dos porciones de 5

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mL de ter de petrleo y hgalos pasar por la columna, enjuague las paredes de la
columna con pequeas porciones de ter de petrleo y eluya con 200 mL del
disolvente de elusin al 6% a 5 mL/min.
Eluya con 200 mL de la disolucin de elusin al 15% a 5 mL/min
Eluya con 200 mL de la disolucin de elusin al 50%
Adicione una piedras de ebullicin y evapore el disolvente en bao maria, cuando se
tenga un volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a
que se enfre y terminar de evaporar el disolvente con nitrgeno a un volumen final
de 10 mL.
3.1.3.3.5.1.2
QUESO,
DESHIDRATADO

YEMA

DE

HUEVO

HUEVO

Coloque una muestra de 25 a 100 g de queso picado o 25 a 50 g de huevo (para


obtener 3 g de grasa), 2 g de oxalato de sodio o potasio y 100 mL de MeOH en un
mezclador de alta velocidad y mezcle durante 2 o 3 min (si por experiencia con estos
productos se sabe que la emulsin no se romper durante la centrifugacin, adicione
1 mL de agua/2g de la muestra antes del mezclado). Coloque el extracto en un tubo
de centrifuga 500 mL (o divida en dos tubos de 250 mL), adicione 50 mL de ter
etlico y agite vigorosamente por 1 min dejando reposar. Posteriormente adicione 50
mL de ter etlico y contine como en 3.1.3.3.5.1.1 a partir de centrifugue a 5 min
aproximadamente a 1500 r.p.m.
3.1.3.3.5.1.3 MANTEQUILLA
Caliente a aproximadamente 50 C hasta que se funda y filtre.
Contine a partir de
3.1.3.3.5.1.1

la particin en acetonitrilo como se indica en el punto

3.1.3.3.5.1.4 HIGADO
Pese de 25 a 50 g de muestra y triture en un mezclador de alta velocidad (si el
contenido de grasa es conocido o puede estimarse, ajuste el tamao de la muestra
de tal forma que el mximo de grasa extrada sea de 3 g). Adicione 100 g de Na 2SO4
anhidro y mezcle con esptula hasta la obtencin de un polvo homogneo, retire la
muestra de las orillas del vaso de mezclado con una esptula. Adicione 150 mL de
ter de petrleo y mezcle a una alta velocidad durante 2 min. Decante el ter de
petrleo sobrenadante en un embudo Bchner de 12 cm (con papel filtro) en un
matraz kitazato de 500 mL. Reextraiga los residuos contenidos en el vaso de
mezclado con dos porciones de 100 mL de ter de petrleo y mezcle durante 2 min
en cada ocasin (mezcle 1 min pare la mezcladora, limpie las orillas del vaso con una
esptula y continu mezclando durante 1 min mas). Decante el ter de petrleo
sobrenadante de los mezclados en el embudo Bchner combinando todos los
extractos, enjuague el vaso de mezclado y el Bchner con tres porciones de 25 a 50
mL ter de petrleo. Inmediatamente despus del ltimo enjuague, presione el
residuo del embudo Bchner con el fondo de un vaso para forzar a salir el ter de
petrleo remanente. Rena los extractos y pselos a travs de una columna de 40x25

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mm OD de Na2SO4 anhidro y colecte el eluato en un concentrador K-D de 500 o 1000
mL. Lave el matraz y la columna con pequeas porciones de ter de petrleo.
Evapore la mayor parte del ter de petrleo en bao maria. Transfiera el extracto a un
vaso tarado, usando pequeas cantidades de ter de petrleo. Evapore el ter de
petrleo con nitrgeno en bao maria hasta la obtencin de la grasa. Pese y registre
el peso de la grasa extrada.
Contine desde la particin en acetonitrilo como se indica en el punto 3.1.3.3.5.1.1
3.1.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO
Seguir el procedimiento descrito en 3.1.3.3.5.1.4
3.1.3.3.5.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA
3.1.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5%
azucares)
3.1.3.3.5.2.1.1 Lechugas, Biota vegetal.
Pese 100 g de muestra cortada o triturada en un vaso de mezclado, adicione 200 mL de CH3CN y 10
g de Celite, mezcle a alta velocidad. Posteriormente filtre en un embudo Buchner (con papel filtro)
con matraz kitazato de 500 mL. Transfiera el filtrado a un matraz graduado de 250 mL y registre el
volumen (F).
Transferencia de residuos a ter de petrleo
Mida cuidadosamente 100 mL de ter de petrleo y pngalo en un embudo de separacin, aada el
filtrado obtenido anteriormente. Agite vigorosamente de 1 a 2 min, adicione 10 mL de la solucin
saturada de NaCl y 600 mL de agua. Mantenga el embudo en posicin horizontal y mezcle
vigorosamente de 30 o 45 s. Permita la separacin de fases y descarte la parte acuosa, lave la fase
orgnica con dos porciones de 100 mL de agua, descarte la fase acuosa y transfiera la fase orgnica a
una probeta de 100 mL registrando el volumen (P).
Adicione aproximadamente 15 g de Na2SO4 anhidro y agite vigorosamente (no permita que el
extracto este en contacto con el Na2SO4 mas de 1 hr o puede resultar perdidas de pesticidas
organoclorados por absorcin).
Concentre a 10 mL en bao de agua en un concentrador K-D.
Contine con la limpieza en columna de florisil como se indica en el punto
3.1.3.3.5.3.1.
3.1.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
Si se va a utilizar el cascaron, este debe molerse a una alta velocidad para reducirlo
lo mas posible; adicionar yema, clara y mezclar a una velocidad baja durante 5 min
o bien hasta que la muestra este homognea (una baja velocidad de mezclado
disminuir la formacin de grumos).
Pese 25 g de la mezcla de huevo y proceda como se indica en 3.1.3.3.5.2.1.1 a
partir de la adicin de los 200 mL de CH3CN.

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3.1.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios ( > 75% agua y 515% de azucares)
A 100 g de muestra se le adicionan 200 mL de CH3CN y 50 mL de agua y se
mezclan a alta velocidad. Se procede como en 3.1.3.3.5.2.1.1 a partir de la filtracin
en el embudo Buchner.
3.1.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30%
azucares)
A 100 g de muestra adicione 200 mL de CH3CN, 50 mL de agua y mezcle a alta
velocidad durante 2 min. Se procede como en 3.1.3.3.5.4.1.1 a partir de la filtracin
en embudo Buchner.
3.1.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad ( 75% agua)
Pesar y moler de 20 a 50 g de muestra y hacerla pasar por un tamiz de malla 20.
Colocar de 20 a 25 g de la muestra en el vaso de un mezclador de alta velocidad,
adicionar 350 mL de agua al 35% en CH3CN (puede adicionar 10g de Celite para
ayudar la filtracin) permita que la muestra se humedezca completamente y
posteriormente mezcle durante 5 min a alta velocidad y proceda como en
3.1.3.3.5.2.1.1 a partir de la filtracin en embudo Buchner.
3.1.3.3.6 Sangre humana
3.1.3.3.6.1 Equipo y Materiales
Todo el material debe ser lavado con detergente, enjuagado con agua y finalmente
enjuagado con agua destilada y despus con hexano.
Rotavapor
Kuderna Danish Con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de destilacin Snyder
y matraces de 5 10 mL Kontes
Embudos de separacin de 125 mL
Columna de secado Columna cromatogrfica Pyrex 20 cm x 12 mm I.D. Con lana de
vidrio al fondo y llave de tefln.
Viales con tapa de rosca y septa de 2.0 mL, Agilent #96-000099-00 o equivalentes
Bao de agua con regulacin de temperatura
Vasos de precipitados de 50 mL
3.1.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos deben ser grado HPLC, destilados y revisados por cualquier contaminacin de
pesticida.
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Acetona
ter etlico
Hexano
Florisil Grado PR 60/100 activado a 675 C. El Florisil de diferentes lotes o
fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorcin. Se recomienda el uso
del valor de cido lurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El
procedimiento de referencia determina la absorcin de la solucin de cido lurico
en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar
para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporcin y multiplicando
por 20 g.
Sulfato de sodio anhidro - Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de
metileno seguido por calentamiento a 400 C por 4 horas).
3.1.3.3.6.3 Procedimientos de Extraccin
5mL de sangre son diluidos con 25mL de agua destilada, se aaden 2mL de una
solucin saturada de NaCl, se transfieren a un embudo de separacin de 125mL y se
realizan 3 extracciones con hexano:acetona (1:1) (20mL) agitando el embudo
vigorosamente por 2-3 min. Los 3 extractos combinados se pasan a travs de sulfato
de sodio anhidro y se concentraron a aproximadamente 1-2mL usando un rotavapor
con vaco.
3.1.3.3.6.4 Procedimiento de Purificacin de muestras
El florisil se activa a 130C durante toda la noche y se deja enfriar en un desecador
antes de usarse. El peso de florisil que se debe usar es predeterminado por
calibracin usando cido lurico. 1g de florisil se empaca en una columna
cromatogrfica de vidrio de 20 cm de largo y 12 mm de dimetro interno, se aade
sulfato de sodio anhidro (0,5cm) sobre el florisil y la columna es pre-eluida con
hexano. Se transfiere el extracto a la columna, y se eluye con hexano (10mL), 6%
ter etlico en hexano (10mL), 15% ter etlico en hexano (10mL), 50% ter etlico en
hexano (10mL) y finalmente con ter etlico (10mL). Los extractos se combinan, se
evapora el disolvente llevando a sequedad y se reconstituyen en 2 mL de hexano.
3.1.3.3.7 Leche Materna
3.1.3.3.7.1 Equipo y Materiales
Bao ultrasnico
Lipidex 5000. Gel lipoflico utilizado para la separacin de cidos grasos y
esteres. Hidroxialcoxipropil-dextrano
3.1.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia.
Metanol grado HPLC
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Cloruro de metileno grado HPLC
Cloroformo grado HPLC
cido frmico grado analtico
Agua desionizada
Oxido de Aluminio grado II - III
3.1.3.3.7.3 Procedimiento de Extraccin
Se pesa una muestra de leche (10mL) en un matraz con tapn de tefln.
Se adiciona estndar interno y se mezcla cuidadosamente con la leche; posteriormente, se adicionan
10mL de acido frmico a la mezcla as como 5.0g de Lipidex* 5000; la mezcla se agita bajo una
temperatura de 35C durante 2.5 horas, al cabo de las cuales es transferida a una columna de vidrio
(2cm de dimetro interno), el disolvente es drenado y, de manera consecutiva, se lava con 40mL de
metanol al 30% y 40mL de metanol al 50%.
Finalmente se eluye los analitos con 75mL de acetonitrilo.
La fraccin de acetonitrilo es concentrada evaporando el disolvente mediante una ligera corriente de
nitrgeno a un volumen aparente de 10 mL.
3.1.3.3.7.4 Procedimiento de Purificacin de las muestras
Se empacan 5 g de oxido de aluminio en una columna de vidrio (1cm de dimetro interno), los cuales
son lavados con 10mL de hexano.
Se transfiere cuantitativamente a la columna los 10 mL del extracto cuando esta contiene una mnima
porcin de hexano.
Los compuestos organoclorados as como los PCBs son eludos con 10mL de hexano, mientras que el
-hexaclorociclohexano (-HCH) y el dieldrin se eluyen con una fraccin adicional de hexano
(20mL).

3.1.4 MTODO
INSTRUMENTAL

DE

IDENTIFICACIN

CUANTIFICACIN

3.1.4.1 Aplicacin y Alcances


3.1.4.1.1 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de plaguicidas
organoclorados en los extractos purificados de aguas naturales, residuales
municipales e industriales, as como suelo, residuos, sedimentos,
organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificacin depende de
la matriz analizada. Se deben seguir los procedimientos de extraccin y
purificacin adecuados para cada matriz.
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3.1.4.1.2 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en
cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de
concentracin de las muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas
expertos en el uso de cromatografa de gases y en la interpretacin de sus
resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados
aceptables con este mtodo.
3.1.4.2 Resumen
El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografa de Gases con 2
columnas (analtica y confirmativa) mediante un divisor de flujo colocado a la salida del
inyector, la muestra dividida se analiza con 2 detectores de captura de electrones
simultneamente, en caso de que se detecte algn plaguicida mediante los tiempos de retencin
(Tr) coincidentes en las 2 columnas y la equivalencia de reas de los 2 picos, se cuantifica con
las reas obtenidas del pico de la columna analtica, en caso de que no exista coincidencia entre
los Tr de las 2 columnas, o que sus reas sean muy diferentes, entonces se trata de algn pico
interferente y no se reportan los resultados de la columna analtica.
3.1.4.3 Equipos y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo analtico.
Todo el material volumtrico utilizado en ste mtodo debe ser clase A o estar verificada su
calibracin.

3.1.4.3.1 Equipo
Cromatgrafo de gases Sistema analtico completo con cromatgrafo de
gases para inyeccin split-spltless, inyector automtico, 2 detectores de
captura de electrones (ECD) para operacin simultnea, divisor de flujo 1:1
posterior al inyector, sistema de integracin digital y estacin de manejo de
datos (Agilent 7890 o equivalente).
Columna 1 (columna analtica) DB-35MS de 30 m x 0.25 mm de D.I. x 0.25
m de espesor de fase o equivalente.
Columna 2 (columna confirmativa) DB-XLB DE 30 m X 0.25 mm D.I. x 0.25
m de espesor de fase o equivalente.
3.1.4.3.2 Material
Matraces volumtricos clase A de 1, 5 y 10 mL para preparacin de
estndares y curvas de calibracin.

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Microjeringas de 10, 25, 50, 100 y 500 L.
3.1.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el mtodo deben ser grado reactivo o plaguicida y deben cumplir
con las especificaciones del Committee on Analytical Reagents of the American Chemical
Society ACS a menos que otra cosa se indique.
3.1.4.4.1 Reactivos
Todos los disolventes utilizados deben ser grado optima, plaguicida, nanogrado o
equivalente y debe probarse que estn libres de steres del cido ftlico.
3.1.4.4.1.1 Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente
3.1.4.4.1.2 Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado ptima, plaguicida o equivalente
3.1.4.4.2 Materiales de referencia
Los patrones pueden ser estndares puros o adquirirse como disoluciones certificadas
(patrones de referencia).
3.1.4.4.2.1 Disoluciones
Disoluciones patrn.- (10 mg/L) de los plaguicidas, se deben incluir el
decaclorobifenilo y el tetracloro-m-xileno como surrogados.
Disolucin Patrn de 0.05 mg/L.- A partir de la disolucin de 10 mg/L, tome
25 L con una microjeringa en un matraz aforado de 5 mL y afore a la marca
con hexano y agite para homogenizar. Guarde la disolucin en viales de 2
mL.
.
Disolucin de verificacin de degradacin de analitos (DVDA).- Prepare la
DVDA en el solvente apropiado a los niveles de concentracin listados a
continuacin. La disolucin DVDA debe prepararse cada 6 meses o antes
si sta presenta degradacin o concentracin.
Compuesto
Endrin
4,4-DDT

Concentracin (mg/L)
0.1
0.1

Disoluciones de calibracin.- Prepare 5 niveles como mnimo de diferente


concentracin de las disoluciones estndar para cada analito de inters en
matraces volumtricos.
Para cada disolucin estndar de calibracin, adicione una cantidad conocida
de los compuestos a analizar y lleve al aforo con el solvente apropiado. El
punto de concentracin ms bajo de la curva de calibracin debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarn definidas por el intervalo lineal del detector.
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Estndar de calibracin de 0.001 mg/L.En un matraz aforado de 1 mL ponga 20 L de la solucin de 0.05 mg/L y
afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolucin en viales de 2 mL y
rotule con etiqueta que contenga mtodo, fecha de preparacin,
concentracin, solvente utilizado, persona que lo prepar
Estndar de calibracin de 0.002mg/L
En un matraz de 1 mL ponga 40 L de la solucin de 0.05 mg/L y afore a la
marca con Hexano. Guarde esta disolucin en viales de 2 mL y etiquete.
Estndar de calibracin de 0.005 mg/L.
En un matraz de 1 mL ponga 100 L de la solucin de 0.05 mg/L y afore a la
marca con hexano, guarde esta disolucin en viales de 2 mL y etiquete.
Estndar de calibracin de 0.01 mg/L.
En un matraz aforado 1 mL ponga 200 L de la solucin de 0.05 mg/L y afore
a la marca con hexano y guarde esta disolucin en viales de 2 mL y etiquete.
Estndar de calibracin de 0.02 mg/L.
En un matraz aforado de 1 mL ponga 400 L de la solucin de 0.05 mg/L y
afore a la marca con hexano, guarde la disolucin en viales de 2mL y
etiquete.

Estndar de calibracin de 0.05mg/L


A partir de la disolucin de 10 mg/L, tome 25 L con una microjeringa en un
matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para
homogenizar. Guarde la disolucin en viales de 2 mL y etiquete.

3.1.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo


Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de
control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mnimos de este programa
consisten en una demostracin inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con
las especificaciones de desempeo del mtodo, adems realizar anlisis continuos
de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisin y exactitud
continuas y el anlisis de blancos. El desempeo del laboratorio debe compararse
con los criterios aqu establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los
anlisis cumplen con las especificaciones de desempeo del mtodo. El analista
debe hacer una demostracin inicial de su habilidad para generar una exactitud y
precisin aceptables por este mtodo.
Cada vez que se realice una modificacin al mtodo o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo est determinacin, el analista designado debe repetir la
validacin del mtodo, si el cambio va a afectar el lmite de deteccin del mtodo
(LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o ms
bajo que el anterior para los analitos de inters.

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No se permite el uso de tcnicas determinativas alternativas y cambios que degraden
la ejecucin del mtodo. Si se utiliza una tcnica analtica que no sea la especificada
en este mtodo, dicha tcnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las
de la tcnica descrita en este documento para los analitos de inters.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas
a este mtodo. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
La justificacin por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al
mtodo para ese analito.
Los nombres, ttulos, direcciones y nmero de telfono de los analistas que
ejecutaron los anlisis y modificaciones y el encargado de control de
calidad que presenci y verific los anlisis y sus modificaciones.
Los resultados de todas las pruebas de CC del mtodo modificado
comparadas con el mtodo original, dichos datos deben de incluir todos los
parmetros mencionados en la seccin de desempeo del mtodo.
La informacin escrita en las bitcoras tanto del equipo como del analista,
deben incluir los siguientes datos:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)

Identificacin de la muestra
Nmero del lote analtico en el cual se analiz la muestra
Fecha del anlisis
Procedimiento cronolgico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Nmero de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin
Registros de bitcoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
informacin
i) Informacin cruda reportada por los equipos o por los analistas
j) Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados del lote analtico.

3.1.4.5.1

Verificacin del equipo

El criterio de resolucin es tal que la profundidad del valle entre dos picos
adyacentes en la mezcla de verificacin de resolucin debe ser mayor o igual
a 60.0% de la altura del pico ms corto.
La verificacin del detector de ECD se realiza segn el instructivo del
fabricante.
Verificar que el flujo de los gases y condiciones cromatogrficas sean las
adecuadas, segn se menciona posteriormente.
Verificacin de blanco electrnico: Se realiza una corrida con las condiciones
cromatogrficas del mtodo, pero sin inyectar nada. Si el cromatograma
presenta picos a cualquier tiempo de retencin, se purga el sistema poniendo

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el horno a 300C durante 15 minutos y se repite el anlisis del blanco
electrnico.
La degradacin tanto del DDT como del Endrn en la DVDA debe ser menor al
15% lo cual se calcula como a continuacin se indica:

Ecuacin 1:

A B
% Degradacin DDT
x100
A BC

Donde:
A = rea del DDE
B = rea del DDD
C = rea del DDT

Ecuacin 2:

A B
% Degradacin Endrin
x100
A BC

Donde:
A = rea del Endrin aldehdo
B = rea del Endrin cetona
C = rea del Endrin
Si la degradacin del DDT o del endrin es mayor al 15%, se debe proceder a
cambiar el inserto de vidrio, limpieza del puerto de inyeccin, cambio del sello
de oro y de la precolumna que se conecta con el inyector y a las dos columnas
(30 cm).
3.1.4.5.2.Verificacin de la calibracin inicial.
La curva de la calibracin inicial deber realizarse inyectando los estndares
de calibracin preparados y se considera lineal, si el por ciento de la
desviacin estndar relativa (%RSD) de los factores de calibracin (CF) es
menor o igual al 20%, los clculos se realizan con las siguientes ecuaciones:

CF

total de rea
masa inyectada en nanogramos
SDCF
% RSD
x100
CF

Donde:
SDCF = Desviacin estndar de los factores de calibracin
CF = Promedio de los factores de calibracin
La verificacin de la calibracin inicial puede tambin efectuarse mediante la
regresin por mnimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptacin es que el
factor de correlacin "r2" sea mayor o igual a 0.997.

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Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisin del
sistema cromatogrfico y la preparacin de las disoluciones de calibracin.
Posteriormente la curva de calibracin ser vigente, si el anlisis de un punto
intermedio de la curva no presenta una variacin de la concentracin mayor al
15% y que ser calculada de la siguiente manera.

CC CT
Diferencia de concentracin % D
x100
CT
Donde:
CC = concentracin calculada
CT = concentracin terica
O si se utiliza el factor de calibracin

CFv CF
Diferencia porcentual %
x100
CF

Donde:
CFv = factor de calibracin de cada compuesto en el estndar de
verificacin.
CF = media del factor de calibracin del compuesto de la calibracin inicial.
Si el criterio de aceptacin para la diferencia porcentual es mayor al 15% se
proceder a la revisin del sistema cromatogrfico y a la preparacin de la
solucin estndar utilizada.
3.1.4.5.3 Verificacin de contaminacin de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningn tipo de contaminante al
tiempo de retencin de los plaguicidas medidos, por lo que es importante que
los reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe
localizar la fuente de contaminacin, extraer y analizar nuevamente las muestras
asociadas al blanco contaminado.
Use tambin los blancos de reactivos para verificar la contaminacin por arrastre de
muestras con altas concentraciones en anlisis secuenciales
3.1.4.5.4 Verificacin del lote analtico
Por cada lote analtico de muestras analice al menos una muestra sinttica de
control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la
misma matriz de las muestras analizadas en el lote analtico, calcule el % de
recuperacin (%R) de cada analito y surrogados de la muestra control, los
cuales debern estar dentro del rango de 80 a 120 %R. De no ser as se debe
revisar la preparacin de la muestra control y el sistema cromatogrfico.

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Realizar la correccin necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema
persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analtico.
3.1.4.5.5 Verificacin de interferencias de matriz
La verificacin de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo
mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el anlisis
de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una
muestra por cada lote analtico o preferentemente una muestra de cada tipo
de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben analizar
cuando por las caractersticas de la muestra se sospeche de interferencias de
matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un
proyecto.
El efecto de la matriz se evala en el recobro del analito en muestras
fortificadas.. Calcule el porcentaje de recobro el cual deber estar dentro del
intervalo de 80 a 120 %R.
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analtico est fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
Efecto de la matriz en la precisin del analito Precisin de la matriz
duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.

Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la duplicada


para cada analito con la siguiente ecuacin:

DPR

C1 C 2200
C1 C 2

Donde:
C1 = concentracin de la primera muestra
C2 = concentracin de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser
<20%
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
Repita el anlisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provoc
que la prueba del DPR fallara.
3.1.4.5.6 Verificacin de la estabilidad de la curva de calibracin
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En cada lote analizado, si ms de 20 muestras van a ser analizadas durante el
da, verifique la curva de calibracin analizando un estndar de concentracin
media del intervalo de trabajo al principio del lote y despus de cada 20
muestras 12 horas de anlisis continuo.
Calcule el factor de calibracin o la concentracin para cada plaguicida del
estndar de concentracin media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la
siguiente ecuacin:

FC1 FC2
Diferencia porcentual
FC1

x100

Donde:
FC1 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en la curva de
calibracin, o la concentracin nominal de del estndar de verificacin.
FC2 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en el estndar de
concentracin media, o la concentracin calculada en el estndar de
verificacin.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deber ser menor al 15%, de no
ser as verifique su vigencia, revis tambin el sistema cromatogrfico y
determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre
nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estndar de verificacin
sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras anteriores al
estndar de verificacin que fall.
3.1.4.5.7 Verificacin de estndares surrogados
Evale los datos de recobro de los surrogados de las muestras.
Calcule el % de recuperacin de los estndares surrugados en blancos,
muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras
duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuacin:

Re cuperacin % R

C1
100
C2

Donde:
C1=Concentracin calculada de surrugados en la muestra.
C2=Concentracin nominal del surrugado adicionado a la muestra.
El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperacin de no ser as
verifique la preparacin de la muestra que fallo y el sistema cromatogrfico,
determine la causa de la falla y corrija, de no encontrarla, repita la
extraccin de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango
de aceptacin llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de
matriz y los resultados obtenidos.

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Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y
corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e
inclyalas en el expediente del resultado analtico.
3.1.4.5.8 Verificacin de estndares internos
Compare el rea de el o los estndares internos de las muestras con el
rea promedio de los estndares internos obtenidos de los puntos de
calibracin, el valor obtenido en el o los estndares internos de la muestra
no deben ser menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio
obtenido en la curva de calibracin para cada estndar interno.
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del
resultado analtico.
3.1.4.5.9 Control de calidad estadstico
En esta seccin se especifica como debe realizarse el control de calidad
estadstico obligatorio para este mtodo:
3.1.4.5.9.1 Preparacin de la Muestra de Control de Calidad (MCC)
Prepare la MCC de la siguiente forma:
Se debern preparar las MCC de una fuente externa al laboratorio o ser
preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibracin.
Prepare una disolucin a una concentracin que se encuentre dentro del
rango de trabajo.

NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea


conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la
medicin

3.1.4.5.9.2 Graficas de control de Exactitud


El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las grficas de
control de exactitud para cada lote analizado a partir de la demostracin
inicial de desempeo.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deber
graficarse y deber estar dentro de los lmites de control superior e inferior ( 3s)
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, debern rechazarse todos los resultados
del lote analtico, determine las causas y corrija los errores, documente
adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deber repetirse el anlisis
del lote en cuestin.
3.1.4.5.9.3 Graficas de control de Precisin

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El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las grficas de
control de precisin para cada lote analizado a partir de la demostracin
inicial de desempeo
Determine los lmites de control de la siguiente forma:
Lmite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Lmite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisin es mayor al LSC, debern rechazarse todos los
resultados del lote analtico, determine las causas del problema y corrija
los errores, documente adecuadamente las incidencias y acciones
correctivas, deber repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.1.4.5.10
alternos

Validacin de modificaciones del mtodo o de mtodos

Para validar las modificaciones que se efecten a este mtodo o para la


utilizacin de mtodos alternos deber seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente mtodo, debern validarse.
Si se utiliza un mtodo alterno cuya fuente sea un mtodo estandarizado por
alguna Institucin de carcter internacional o reconocida internacionalmente
(e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment
Canada, etc.) tambin deber ser validado.
Si se utiliza algn mtodo no estandarizado, deber evidenciarse, adems
de los parmetros normales de la validacin parcial, los parmetros de
Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse
mediante estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeo de todo el sistema analtico utilizando
los datos recolectados de anlisis de blancos reactivos, solucin verificadora
del desempeo del laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algn analito a comparacin de los
cromatogramas del mtodo, ste deber corregirse. Los problemas de
coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna
cromatogrfica, problemas en la instalacin de la columna o mala operacin
del detector.
Verifique la precisin con rplicas del anlisis. Una pobre precisin
generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de
inyeccin. Si el sistema cromatogrfico se est comportando aparentemente
bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva

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curva o juego de factores de calibracin para verificar las respuestas bajas
antes de buscar la fuente del problema.
3.1.4.5.11 Composicin del lote analtico (para cada 25 muestras 12 horas de anlisis
continuo)
1 Blanco electrnico
2 Muestra de verificacin del Instrumento (DVDA)
3 Muestra de Verificacin de la Calibracin Continua
4 Blanco de Reactivos
5 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
6 Muestra real No. 1
7 Muestra real No. 2
8 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de anlisis continuo)
9 Muestra fortificada (si se realizo)
10 Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
11 Blanco de Reactivos
12 Muestra de Verificacin de la Calibracin Continua.
13 Siguientes 20 muestras reales
3.1.4.5.12 Criterios de Aceptacin y Rechazo
3.1.4.5.12.1 Verificacin del Equipo

Punto de verificacin

Criterio

Equipo libre de interferencias (blanco


electrnico)
Puerto de inyeccin libre de suciedad y baja
degradacin

No deber presenta picos a cualquier


tiempo de retencin
Degradacin del DDT y Endrin
menor al 15%

3.1.4.5.12.2 Verificacin de la Calibracin Inicial

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin del % Diferencia de la concentracin


de la Mezcla de Verificacin, punto intermedio de
la curva de calibracin.

Menor al 15%

3.1.4.5.12.3 Verificacin de Contaminacin de Reactivos

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Punto de verificacin

Criterio

Blanco de reactivos

No deben presentar ningn tipo de


contaminante al tiempo de retencin
de los plaguicidas medidos

3.1.4.5.12.4 Verificacin del Proceso Analtico

Punto de verificacin

Criterio

Muestra de control de calidad

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de estndares Surrogados

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de muestras adicionadas duplicadas

% DSR < 20%

3.1.4.5.12.5 Verificacin de Interferencias de Matriz

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de muestras adicionadas

% de Recuperacin 70 / 130

3.1.4.5.12.6 Estabilidad de la Curva de Calibracin

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de la Estndar de Verificacin


(Intermedio)

% de diferencia <l 15%

3.1.4.6 Calibracin
PRECAUCIN: El endrin Y el DDT se degradan fcilmente en el puerto de inyeccin si
ste o el frente de la columna estn sucios. Esto se da como resultado de la
acumulacin de residuos de alto punto de ebullicin que se inyectan con las muestras.
Verifique si hay problemas de degradacin inyectando el estndar de verificacin del
sistema. Busque los productos de degradacin (DDD, DDE, endrincetona y
endrinaldehido). Si la degradacin del DDT o del endrin excede el 15 %, tome acciones
correctivas antes de proceder con la calibracin.
Se necesitan al menos 5 estndares de calibracin. Uno debe contener analitos a una
concentracin cercana, pero superior a la del lmite prctico de cuantificacin para
cada analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado
en las muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01g/L y el LPC es de 0.05 g/L, se
espera que la muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 g/L.
Una vez establecidas las condiciones de operacin inyecte un volumen adecuado (2 L) de cada

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estndar de calibracin por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y
agrguelo a la tabla de calibracin del mtodo.
Si la DSR de cada plaguicida es 20%, entonces la respuesta del instrumento es
considerada lineal y el factor de calibracin promedio FC puede utilizarse para la
cuantificacin de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces
no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibracin.
Si se utiliza regresin lineal por mnimos cuadrados, deber obtener el factor de
correlacin r2 para cada analito, el cual deber ser mayor o igual a 0.997 si r es menor
a este valor, la curva de calibracin no es lineal y deber verificarse la preparacin de los
estndares de calibracin y el sistema cromatogrfico y repetir la calibracin.
3.1.4.6.1 Calibracin por Estndar Interno:
El analista debe seleccionar uno o ms estndares internos que sean similares en
comportamiento analtico a los compuestos de inters. El analista debe adems demostrar que
la medicin del estndar interno no es afectada por el mtodo o interferencias de la matriz.
Prepare los estndares de calibracin a un mnimo de cinco concentraciones para cada analito
de inters por adicin de volmenes. Para cada estndar de calibracin, adicione una cantidad
conocida constante de uno o ms estndares internos y afore con un solvente apropiado. Uno
de los estndares debe estar a una concentracin cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras
concentraciones deben corresponder al rango de trabajo.
Inyecte cada estndar de calibracin. Tabule la altura del pico o el rea de respuesta contra la
concentracin de cada compuesto y el estndar interno. Calcule el factor de respuesta (RF)
para cada compuesto como sigue:

RF

AsCis
AisCs

Donde:
As = Respuesta para el analito que ser medido.
Ais = Respuesta del estndar interno.
Cis = Concentracin del estndar interno, g/L.
Cs = Concentracin del analito a ser medido, g/L.
Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede usarse para
clculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una curva de
calibracin de la relacin de respuesta, As/Ais contra RF.
3.1.4.7 Procedimiento Analtico
3.1.4.7.1 Anlisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatogrficas:
Anlisis por doble columna DB-35MS y DB-XLB
Gas acarreador

Hidrgeno
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Presin en columna
Temperatura inicial
Tiempo inicial
Programa 1
Temperatura final 1
Programa 2
Temperatura final 2
Tiempo final 2
Temperatura del inyector
Temperatura del detector
Modo splitless
Flujo de split
Purga de septa

15 psi
140 C
2 min
10C/min
240C
25C/min
300C
5 min
250C
320C
0.3 min
20mL/min
4mL/min

Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estndar en el


cromatgrafo de gases. Registre el volumen final del extracto y el rea del
pico resultante.
3.1.4.7.2 Identificacin de los analitos
Identifique los plaguicidas en la muestra comparando los tiempos de retencin
de los picos en el cromatograma de muestra con los tiempos de retencin de
los picos en los cromatogramas de los estndares tanto en la columna analtica
como en la columna confirmativa, este paso se debe hacer automticamente
por el Sistema de Manejo de Datos de la Estacin de Trabajo del Sistema
Cromatogrfico, se deben seguir las instrucciones del fabricante del equipo.
En caso de que coincidan los Tr del pico sospechoso en las 2 columnas dentro
de una ventana de tiempo de 5 seg y que las reas de los picos en las 2
columnas no difiere ms del 50%, se puede asumir que el pico del plaguicida
est presente en las muestras, en caso contrario, no se trata del plaguicida
sospechoso.
Si la respuesta del pico sobrepasa el intervalo de concentracin de la curva
patrn, diluya el extracto y analice nuevamente.

3.1.4.7.3 Clculos
3.1.4.7.3.1 AIRE AMBIENTE
El volumen total de la muestra se calcula de las lecturas de flujo peridico
(Magnehelic) con la siguiente ecuacin:

Q Q2 ... Qn T
V m 1

1000
Donde:

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V (m) = volumen total de la muestra (m3).
Q1, Q2,., Qn
= flujos determinados al inicio, final y puntos intermedios durante el
tiempo muestreado (L/minuto).
n = nmero de datos promediados.
T= tiempo de muestreado (minutos).
El volumen de muestreado debe convertirse a condiciones estndar (760 mm Hg y
25C) con la siguiente ecuacin.

P A 298

V s V m

760 273 t a
Donde:
V(s)= volumen total de la muestra a 25C y 760 mm Hg (m3).
V(m)= volumen total de flujo a condiciones ambientales (m3).
P(A)= presin ambiental (mm Hg).
t(a)= temperatura ambiental (C).

La concentracin del compuesto en la muestra se calcula con la siguiente ecuacin:

C A

A * V E
V i * V s

Donde:
C(A)= concentracin del analito en la muestra (g/m3).
A = cantidad calculada de material inyectado al cromatgrafo, basada en la curva de
calibracin para estndares inyectados (nanogramos).
V(i) = volumen inyectado del extracto (L).
V(E)= volumen final del extracto (mL).
V(s)= volumen total de la muestra de aire corregido a condiciones estndar (m3).
Determine la concentracin de compuestos individuales en la muestra.
Toxafeno Los clculos cuantitativos de toxafeno son difciles, pero una
exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en
GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamao de la muestra
tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 70% en la escala completa de
desviacin (FSD); (b) inyecte un estndar de toxafeno que se estime esta
dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificacin de los 5 picos
mayores o el rea total del patrn de toxafenos.
Para medir el rea total, construya la lnea de base del estndar de toxafeno
entre sus extremos y construya la lnea de base bajo la muestra, usando la
distancia de los picos a la lnea de base en el estndar como una gua. Este
procedimiento se hace difcil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los
picos en la muestra probablemente no ser idntica a los estndares.
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Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el rea total de
los picos por comparacin con el estndar y tambin usando slo el rea de
los ltimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estndares. La
concordancia entre los resultados obtenidos por los dos mtodos justifica el
uso del ltimo mtodo para calcular el toxafeno en una muestra donde la
porcin que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra
interferencias de otras sustancias tales como DDT.
El clordano tcnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes
mayores y 30 ms componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y
gama), respectivamente, son los dos mayores componentes tcnicamente del
clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material tcnico
no est completamente definido y no es consistente de lote a lote.
El patrn de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de
aquel de la tcnica estndar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su
historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier
combinacin de: metabolitos animales y productos de degradacin causados
por la exposicin a factores ambientales tales como agua y luz solar.
Cuando los residuos de clordano no se parecen tcnicamente al clordano, pero
en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos
alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los
materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales.
Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del
clordano tcnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano
comparando el rea total del cromatograma del clordano usando los cinco
picos mayores o el rea total. Si el pico del heptacloro epxido es
relativamente pequeo, incluya esto como parte del rea del clordano total por
el clculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epxido estn muy
fuera de proporcin, calcule estos por separado y sustraiga sus reas del rea
total para dar un rea de clordano corregida.

NOTA: El octacloro epxido, un metabolito del clordano, puede ser fcilmente


confundido con el heptacloro epxido en una columna GC no polar.

Para medir el rea total del cromatograma de clordano, proceda como se


indica en la seccin de toxafeno. Inyecte una cantidad del estndar de
clordano el cual producir un cromatograma en el cual los picos mayores son
aproximadamente del mismo tamao como aquellos en el cromatograma de la
muestra.
Informe los resultados en g/m3 a condiciones STD.
Todos los datos de control de calidad obtenido debern ser informados junto con los
resultados de la muestra.

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1.1.1.
3.1.4.7.3.2 AGUA
Identifique a los plaguicidas segn el procedimiento mencionado anteriormente en la
parte cualitativa del mtodo. Identifique los compuestos en la muestra
multicomponente usando todos los picos que sean caractersticos para los compuestos
especficos de cromatogramas para estndares individuales. Elija los picos ms
sensibles y reproducibles para obtener una suma para fines de clculo.
Utilice la curva de calibracin (factor de calibracin) para calcular directamente la
concentracin no corregida (Ci) de cada analito en la muestra (por ejemplo factor de
calibracin X respuesta).
Calcule la concentracin como:

Volumen final extracto

Concentracing / L C i
Volumen de muestra

Ci = concentracin obtenida del cromatograma


Hay software en los cuales es posible introducir el factor de correccin para obtener
el resultado expresado en muestra.
Toxafeno Los clculos cuantitativos de toxafeno son difciles, pero una
exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en
GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamao de la muestra
tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 70% en la escala completa de
desviacin (FSD); (b) inyecte un estndar de toxafeno que se estime esta
dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificacin de los 5 picos
mayores o el rea total del patrn de toxafenos.
Para medir el rea total, construya la lnea de base del estndar de toxafeno
entre sus extremos y construya la lnea de base bajo la muestra, usando la
distancia de los picos a la lnea de base en el estndar como una gua. Este
procedimiento se hace difcil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los
picos en la muestra probablemente no ser idntica a los estndares.
Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el rea total de
los picos por comparacin con el estndar y tambin usando slo el rea de
los ltimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estndares. La
concordancia entre los resultados obtenidos por los dos mtodos justifica el
uso del ltimo mtodo para calcular el toxafeno en una muestra donde la
porcin que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra
interferencias de otras sustancias tales como DDT.
El clordano tcnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes
mayores y 30 ms componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y
gama), respectivamente, son los dos mayores componentes tcnicamente del

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clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material tcnico
no est completamente definido y no es consistente de lote a lote.
El patrn de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de
aquel de la tcnica estndar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su
historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier
combinacin de: metabolitos animales y productos de degradacin causados
por la exposicin a factores ambientales tales como agua y luz solar.
Cuando los residuos de clordano no se parecen tcnicamente al clordano, pero
en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos
alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los
materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales.
Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del
clordano tcnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano
comparando el rea total del cromatograma del clordano usando los cinco
picos mayores o el rea total. Si el pico del heptacloro epxido es
relativamente pequeo, incluya esto como parte del rea del clordano total por
el clculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epxido estn muy
fuera de proporcin, calcule estos por separado y sustraiga sus reas del rea
total para dar un rea de clordano corregida.

NOTA: El octacloro epxido, un metabolito del clordano, puede ser fcilmente


confundido con el heptacloro epxido en una columna GC no polar.

Para medir el rea total del cromatograma de clordano, proceda como se


indica en la seccin de toxafeno. Inyecte una cantidad del estndar de
clordano el cual producir un cromatograma en el cual los picos mayores son
aproximadamente del mismo tamao como aquellos en el cromatograma de la
muestra.
No reporte concentraciones por debajo del lmite de deteccin.
Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del
anlisis.
Los resultados deben reportarse con un nmero apropiado de cifras significativas. La
experiencia indica que tres cifras significativas pueden ser usadas para
concentraciones por arriba de 99 g/L, dos cifras significativas para concentraciones
entre 1-99 g/L y una cifra significativa para concentraciones menores a 1 g/L.
3.1.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS
Lleve a cabo los clculos como se indica a continuacin:
La concentracin se obtiene:

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Volumen final extracto

Concentracing / Kg C i

Peso
de
muestra

Ci = concentracin obtenida del cromatograma en g/L

Todos los factores de dilucin o concentracin deben ser considerados.


No reporte concentraciones por debajo del lmite de deteccin.
Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del
anlisis.
Reporte los resultados del anlisis en g/Kg con tres cifras significativas y
aclarando si son en Base Seca o Base Hmeda.

3.1.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR TEJIDOS,


ORGANISMOS.
3.1.4.7.3.4.1 Clculos para frutas y vegetales

g S*

F P
*
T 100

Donde:
g = gramos de muestra pasados por columna de florisil
S = muestra extrada (g)
P = el volumen del extracto de ter de petroleo en mL
F = volumen filtrado del extracto de acetonitrilo
100 = mL de ter de petrleo en los cuales los residuos fueron particionados.
T = volumen total (mL agua en muestra (buscar en tablas el % humedad del
alimento) + mL acetonitrilo aadido - la correccin en mL de la contraccin
del volumen)
Cuando se adicionan 50 mL de agua al acetonitrilo para la extraccin de
productos con alto contenido de azcar (3.1.3.3.5.3.1) el volumen total (T)
se incrementa en 45.
Para 25 g de huevo y 200 mL de acetonitrilo el valor del volumen total (T) es
215.
La concentracin final se obtiene:

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Volumen final extracto

Concentracing / Kg C i
Peso de muestra pasado x columna florisil

Ci = concentracin obtenida del cromatograma en g/L


3.1.4.7.3.4.2 Clculos para productos con baja humedad o secos
Calcule igual que para las frutas y vegetales, excepto T = volumen total (mL de
agua en la muestra + mL de 35% H20-CH3CN adicionado correccin en mL
del volumen de contraccin). Si el contenido de agua de la muestra es < 10%,
haga caso omiso y use el volumen de la mezcla de extraccin como T.
3.1.4.7.3.4.3 Hgado y tejido graso

Peso de grasa para purificacin


Peso de la mtra original
Peso de la mtra pasada x columna florisil

Peso
de
la
grasa
extrada

La concentracin final se obtiene:

Volumen final extracto

Concentracing / Kg C i
Peso de muestra pasado x columna florisil

Ci = concentracin obtenida del cromatograma en g


Todos los factores de dilucin o concentracin deben ser considerados.
Toxafeno Los clculos cuantitativos de toxafeno son difciles, pero una
exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en
GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamao de la muestra
tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 70% en la escala completa de
desviacin (FSD); (b) inyecte un estndar de toxafeno que se estime esta
dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificacin de los 5 picos
mayores o el rea total del patrn de toxafenos.
Para medir el rea total, construya la lnea de base del estndar de toxafeno
entre sus extremos y construya la lnea de base bajo la muestra, usando la
distancia de los picos a la lnea de base en el estndar como una gua. Este
procedimiento se hace difcil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los
picos en la muestra probablemente no ser idntica a los estndares.
Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el rea total de
los picos por comparacin con el estndar y tambin usando slo el rea de
los ltimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estndares. La
concordancia entre los resultados obtenidos por los dos mtodos justifica el
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uso del ltimo mtodo para calcular el toxafeno en una muestra donde la
porcin que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra
interferencias de otras sustancias tales como DDT.
El clordano tcnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes
mayores y 30 ms componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y
gama), respectivamente, son los dos mayores componentes tcnicamente del
clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material tcnico
no est completamente definido y no es consistente de lote a lote.
El patrn de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de
aquel de la tcnica estndar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su
historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier
combinacin de: metabolitos animales y productos de degradacin causados
por la exposicin a factores ambientales tales como agua y luz solar.
Cuando los residuos de clordano no se parecen tcnicamente al clordano, pero
en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos
alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los
materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales.
Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del
clordano tcnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano
comparando el rea total del cromatograma del clordano usando los cinco
picos mayores o el rea total. Si el pico del heptacloro epxido es
relativamente pequeo, incluya esto como parte del rea del clordano total por
el clculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epxido estn muy
fuera de proporcin, calcule estos por separado y sustraiga sus reas del rea
total para dar un rea de clordano corregida.

NOTA: El octacloro epxido, un metabolito del clordano, puede ser fcilmente


confundido con el heptacloro epxido en una columna GC no polar.

Para medir el rea total del cromatograma de clordano, proceda como se


indica en la seccin de toxafeno. Inyecte una cantidad del estndar de
clordano el cual producir un cromatograma en el cual los picos mayores son
aproximadamente del mismo tamao como aquellos en el cromatograma de la
muestra.
No reporte concentraciones por debajo del lmite de deteccin.
Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del
anlisis.
Reporte los resultados de anlisis en g/kg con tres cifras significativas.

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1.1.2.

3.1.4.8 Desempeo del Mtodo


Los datos son los del mtodo de referencia y los de un laboratorio nacional
con experiencia.
3.1.4.8.1 Lmite de Deteccin: Ver Tabla 5.
3.1.4.8.2 Lmite Prctico de Cuantificacin: Ver Tabla 5
3.1.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tabla 5
3.1.4.8.4 Precisin del Mtodo: Ver Tabla 5
3.1.4.8.5 Exactitud del Mtodo: Ver Tabla 5

3.1.4.9 Tablas y Figuras


TABLA.1 LMITES DE DETECCIN DEL MTODO FUENTE EPA 8081

Parmetro
Aldrin
Clordano
4,4-DDD
4,4-DDE
4,4-DDT
Dieldrin
Endrin
Endrin aldehdo
Heptacloro
Heptacloro epxido
Toxafeno
Hexaclorobenceno

Lmite de Deteccin del


Mtodo g/L
Agua
0.034
0.008
0.050
0.058
0.081
0.044
0.039
0.050
0.040
0.032
NA
NA

Lmite de Deteccin del


Mtodo g/Kg
Suelo
2.2
4.2
2.5
3.6
3.6
1.6
2.0
2.1
NA
NA

NOTA: El lmite de deteccin del mtodo fue determinado a partir del anlisis
de 7 replicas de cada matriz procesada a travs del mtodo analtico
completo.

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TABLA 2 %R MTODO USEPA TO-4
Compuesto
Aldrin
4,4-DDE
4,4-DDT
Clordano
Clorobifenilos
4,4 Di2,4,5 Tri2,4,5 Tri2,2,5,5 Tetra2.2.4.5.5 Penta2.2.4.4.5.5 Hexa-

Concentracin en el
aire, ng/m3
0.3-3.0
0.6-6.0
1.8-18
15-150

% de recuperacin

2.0-20
0.2-2.0
0.2-2.0
0.2-2.0
0.2-2.0
0.2-2.0

62
36
86
94
92
86

28
89
83
73

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TABLA 3 DATOS DE PRECISIN, EXACTITUD Y LMITES DE DETECCIN
PARA LOS ANALITOS EN AGUA GRADO REACTIVO, AGUA SUBTERRNEA Y CORRIENTE

Analito
Aldrin
Aldrin
alfa-clordano
gama-clordano

0.012

Clordano

0.14

Dieldrin

0.012

Endrin

0.063

Heptacloro

0.003

Heptacloroepxido

0.004

Hexaclorobenceno

0.002

Lindano

0.003

Cis-nonacloro

0.027

Trans-nonacloro

0.011

Toxafeno

NA
(a)
(b)
(c)
(d)
*
-

LDM (b)
g/L
0.075
0.007
0.006

1.0

Concentracin*
g/L
0.15
0.05
0.06
0.35
0.06
0.35
0.17
3.4
0.10
3.6
0.10
3.6
0.032
1.2
0.04
1.4
0.003
0.09
0.03
1.2
0.06
0.45
0.06
0.35
10
80

Exactitud y datos de desviacin estndar


Agua grado
Agua subterrnea
Agua corriente
reactivo
R(c)
SR(d)
R
SR
R
SR
86
106
95
86
95
86
NA
NA
87
114
119
99
77
80
100
115
104
103
91
111
110
82
95
86
NA
NA

9.5
20.0
3.5
17.0
0.4
18.5
8.0
3.6
17.1
9.1
29.8
6.5
10.2
7.4
15.6
6.6
13.5
6.6
6.5
5.0
15.2
21.3
9.6
21.8
12.6
15.3

100
86
83
94
86
95
67
94
94
100
37
71
90
103
91
101
88
109
101
93
83
94
-

11.0
16.3
4.4
10.2
5.3
14.3
10.1
8.6
20.2
11.3
6.8
9.8
14.2
6.9
10.9
4.4
7.7
3.4
7.2
18.3
7.1
17.2
-

69
85
91
83
91
105
95
92
81
106
85
200
106
112
81
100
88
103
93
9
87
73
86
110
114

9.0
7.1
2.4
14.7
6.0
12.4
9.6
15.7
14.0
14.0
12.4
22.6
16.8
5.9
15.6
15.6
13.4
8.1
18.4
14.3
5.4
4.1
5.1
9.5
13.5

= No aplica. No se analiz por separado un juego de estndares acuosos, y el factor de respuesta para agua grado reactivo se
us para calcular una recuperacin para la matriz de agua corriente.
Datos corregidos por cantidades detectadas en el blanco, representan la media de 5-8 muestras.
MDL = g/L; calculado de multiplicar la desviacin estndar (S) por el valor de la t de Student apropiado para un nivel de
confianza de 99% y un estimado de desviacin estndar con n-1 grados de libertad.
R = Porcentaje de recuperacin promedio.
SR = Desviacin estndar sobre el porcentaje de recuperacin.
Se refiere a las concentraciones usadas para generar R y SR para las matrices de los tres tipos de agua, no para las
determinaciones de MDL.
No se realiz anlisis.

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TABLA 4 PRECISIN Y EXACTITUD DEL MTODO EN FUNCIN A LA CONCENTRACIN
AGUA GRADO REACTIVO
Parmetro

Hexaclorobenceno
Lindano
Heptacloro
Aldrin
Heptacloroepxido
Dieldrin
Endrin
Clordano
Toxafeno

Rango de trabajo
(g/L)
(0.01-0.37)
(0.04-1.39)
(0.04-1.41)
(0.04-1.42)
(0.04-1.42)
(0.10-7.53)
(0.10-7.50)
(0.51-50.90)
(5.63-70.40)

Exactitud como
recuperacin X
(g/L)
1.028C+0.00
1.009C+0.00
1.002C+0.02
1.066C+0.00
0.952C+0.00
1.027C+0.00
0.958C+0.01
1.037C+0.06
1.087C+0.24

Precisin de un
analista SR
(g/L)
0.108x+0.00
0.0577x+0.01
0.107x+0.01
0.031x+0.02
0.032x+0.02
0.091x+0.01
0.116x+0.01
0.084x+0.06
0.131x-0.031

Precisin total
(g/L)
0.227x+0.00
0.142x+0.00
0.211x+0.02
0.264x+0.00
0.129x+0.02
0.198x+0.02
0.136x+0.02
0.125x+0.19
0.269x+0.69

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TABLA 5 DATOS DE VALIDACIN DE UN LABORATORIO MEXICANO

VALIDACIN DE MTODO
METODO FUENTE:
TECNICA:

PARMETRO

HEXACLOROBENCENO

EPA 8081A-1996
GC/ECD
LDM
METODO
FUENTE

INTERVALO DE TRABAJO
DEL MTODO ABC
VALIDADO

ug/L

ug/L

MATRIZ:

AGUA

CRITERIO DE
CRITERIO DE
PRECISION PRECISION EXACTITUD EXACTITUD
OBTENIDA DEL METODO OBTENIDA DEL METODO
FUENTE
FUENTE

LDM
OBTENIDO

LPC
METODO
ABC

ug/L

ug/L

ug/L

%R

%R

NE

0.0005

0.02

0.00006

0.0003

0.40

20.00

112.48

70-130

HEPTACLORO

0.56

0.0005

0.02

0.00005

0.0003

0.45

20.00

95.49

70-130

ALDRIN

0.83

0.0005

0.02

0.00007

0.0003

0.49

20.00

121.63

70-130

HEPTACLORO EPOXIDO

0.34

0.0005

0.02

0.00006

0.0003

0.50

20.00

100.58

70-130

4-4'-DDE

0.59

0.0005

0.02

0.00006

0.0003

0.59

20.00

108.45

70-130

DIELDRIN

0.49

0.0005

0.02

0.00008

0.0004

0.47

20.00

99.06

70-130

ENDRIN

0.82

0.0005

0.02

0.00008

0.0004

0.56

20.00

95.45

70-130

4-4'-DDD

0.85

0.0005

0.02

0.00005

0.0003

0.56

20.00

95.45

70-130

4-4'D-DDT

0.71

0.0005

0.02

0.00006

0.0003

0.70

20.00

92.33

70-130

ENDRIN ALDEHIDO

0.36

0.0005

0.02

0.0002

0.0008

1.63

20.00

101.65

70-130

CLORDANO

0.58

0.0005

0.02

0.0001

0.0005

0.55

20.00

96.89

70-130

TOXAFENO

0.1

0.05

1030

0.005

0.025

2.45

20.00

94.35

70-130

Datos de Laboratorios ABC Qumica Investigacin y Anlisis S.A. de C.V.


NOTA: El lmite de deteccin del mtodo fue determinado a partir del anlisis de 7 replicas de cada matriz procesada a travs del
mtodo analtico completo, el LPC se obtuvo multiplicando el LDM * 5, los datos de precisin y exactitud se obtuvieron con 10 rplicas
de la concentracin media de la curva de calibracin.

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TABLA 6 LMITES DE DETECCIN Y DE CUANTIFICACIN.
COMPUESTO

Aldrin
Alfa-Clordano
Gamma44-DDD
44-DDE
44-DDT
Dieldrin
Endrin
Aldehdo de Endrin
Heptacloro
Epxido de heptacloro
Toxafeno (MR)

LDM
Liquido
(g/L)
0.034
0.037
0.050
0.058
0.081
0.044
0.030
0.050
0.040
0.032
0.025
0.150

LDM
Slido
(g/Kg)
2.2
1.5
4.2
2.5
3.6
NA
2.1
1.6
2.0
2.1
1.7
9.5

LPC
Lquido
(g/L)
0.255
0.270
0.350
0.410
0.600
0.300
0.225
0.350
0.275
0.240
0.165
1.250

LPC
Slido
g/Kg
15.5
11.2
30.5
15.6
21.5
28.5
15.2
10.2
14.5
15.0
11.5
90.5

Liquido = Agua reactivo libre de orgnicos


Slido = Arena
MR = respuesta de picos mltiples

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TABLA 7 PATRONES DE ELUCIN Y PROMEDIO DE RECUPERACIN DE LOS
PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS CON PARTICIN DE SILICA GEL (EXTRACTO DE
RESIDUO LQUIDO).

Compuesto
Heptacloro
Aldrin
Heptacloro epxido
Alfa-clordano
Gama-clordano
4,4-DDE
Dieldrin
Endrin
4,4-DDD
Endrin aldehdo
4,4-DDT

Recuperacin promedio +/- SD (RSD) (a,b)


Fraccin III
Fraccin I
Fraccin II
Cloruro de
Recuperacin
Hexano (80
Hexano (50 mL)
metileno
Total
mL)
(15 mL)
9011 (12)
9011 (12)
929.2 (10)
929.2 (10)
894.1 (4.6)
894.1 (4.6)
857.2 (8.5)
9516 (17)

109.2 (92)

334.0 (15)
8818 (21)

824.3 (5.3)
653.1 (4.7)
4316 (37)
C

958.0 (8.4)
9516 (17)
824.3 (5.3)
653.1 (4.7)
7616(21)
C
8818 (21)

(a) Los valores dados representan el promedio del porcentaje de recuperacin de 3


determinaciones replicadas una desviacin estndar. El nmero entre parntesis es la
desviacin estndar relativa.
(b) Las cantidades adicionadas son 15,000 30,000 y 150,000 ng/2 mL de extracto por
columna de los plaguicidas organoclorados y Aroclor 1016/Aroclor 1260, respectivamente.
(c) Imposible de determinar la recuperacin debido a las interferencias.

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3.2 BIFENILOS POLICLORADOS (PCBs)


El principio de este mtodo se basa en la extraccin, purificacin y concentracin del extracto
purificado con objeto de la medicin de los PCBs presentes en el extracto orgnico purificado de la
muestra inyectando una alcuota de 2 L en un cromatgrafo de gases acoplado a un detector
selectivo de masas que trabaja simultneamente en los modos SIM y SCAN. La identificacin de
los analitos se realiza por la comparacin de los espectros de masas con los de la biblioteca
estandarizada de la estacin de datos, las abundancias relativas de los iones cualificadotes y con
los tiempos de retencin de los estndares certificados, su cuantificacin se realiza por medio del
mtodo de estndar interno.

NOTA: Este mtodo est basado en su desempeo, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeo especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parmetros que se especifiquen como NO MODIFICABLES. Los
trminos debe, puede y deber son mencionados a travs de los mtodos y estn destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del mtodo. El trmino debe es usado para indicar que los desarrolladores de este
mtodo encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.

PARMETROS NO MODIFICABLES

Cromatgrafo de Gases (Columnas Capilares).


Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultneo en modos SIM y SCAN

3.2.1 Aplicacin y Alcances


3.2.1.1 Propsito Este es un mtodo para el anlisis de los Bifenilos Policlorados (PCBs)
como congneres, el nmero de congneres que se pueden identificar depender de la
resolucin de la columna cromatogrfica y de los materiales de referencia que se tengan, est
diseado para ser altamente sensible y especfico.
3.2.1.2 Analitos El mtodo es aplicable a los siguientes analitos:

PCBs totales
Los congneres con los que se cuenten materiales de referencia y que puedan ser
separados adecuadamente por la columna cromatogrfica.

3.2.1.3 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de los PCBs mencionados en el
inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aire Ambiente
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
65

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Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterrneas
Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales
Sangre
Leche Materna

3.2.1.4 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden
variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentracin de las muestras e
interferencias presentes en el extracto purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas expertos en el uso de
cromatografa de gases y en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.

3.2.2 Resumen
AIRE AMBIENTE
Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio y
un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo a
una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h.
El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego
trasladarse al laboratorio para su anlisis. Los PCBs se recuperan por extraccin Soxhlet
con ter al 5% en hexano.
El volumen de los extractos se reduce con la tcnica Kuderna-Danish (K-D) y se someten a
una limpieza con cido sulfrico diseado especficamente para este tipo de anlisis.
Los extractos se someten a cromatografa de gases con detector selectivo de masas
(GC/MSD) en el modo SIM y SCAN simultneamente para la deteccin y cuantificacin de
PCBs totales y de los congneres calibrados.
Generalmente se alcanzan lmites de deteccin <1 ng/m3 con un periodo de muestreo de
24 horas.
AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales y
Subterraneas)
Este mtodo est diseado para muestras de agua sin contaminacin aparente (no aplica
para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia orgnica,
principalmente grasas y aceites).
Los analitos se extraen en 1 L de muestra a travs de una extraccin liquido-liquido. El
volumen de los extractos se reduce con la tcnica Kuderna-Danish (K-D). Los extractos
para el anlisis de PCBs se someten a una limpieza cida con cido sulfrico Se inyectan 2
L de fase orgnica al GC/MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.

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El tiempo total del anlisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los analitos
y las condiciones analticas que se escojan.
Los lmites de deteccin del mtodo se encuentran entre 0.005 a 0.01 g/L.
SUELOS Y SEDIMENTOS
Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con cloruro de metileno-acetona (1:1) con
ayuda un brazo ultrasnico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse al
extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraida y de los
analitos. Despus de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alcuota de 2 L en
el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.
Los lmites de deteccin con este mtodo varan de 1 a 10 g/Kg BS segn los
diferentes analitos en matrices libres de interferencias.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Una muestra de 20 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos slidos y 100 mL de
alimentos lquidos se extrae utilizando la tcnica de extraccin apropiada.
Despus de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alcuota de 2 L en el
GC/MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.
SANGRE HUMANA
A 5 mL de muestra se agrega metanol y hexano-ter etlico, se mezclan y centrifugan. La
fase superior es concentrada con nitrgeno, se agrega hidrxido de potasio metanlico y se
reduce el volumen por evaporacin. Mientras se enfra se agrega metanol-agua y cuando
llega a temperatura ambiente se agrega n-hexano y se agita vigorosamente. La muestra se
purifica con una columna cromatogrfica.
LECHE MATERNA
Una alcuota de 10mL de leche se trata con una resina comercial y acido frmico, los
analitos se extraen .
La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografa en columna.
Los compuestos organoclorados son analizados por GC-MS

3.2.3 Procedimientos de Extraccin y Purificacin de muestras


Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una serie de estndares de
calibracin por medio del procedimiento para validar los patrones de elusin y la ausencia de interferencias de los
reactivos.
3.2.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del mtodo pueden originarse por la presencia de contaminantes en los
solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento
de la muestra (contaminacin cruzada).

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PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.
El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio
enjuagndolo profusamente con el ltimo disolvente utilizado en l. Despus lvelo con
agua caliente y detergente y enjuguelo con agua corriente y grado reactivo. Escrralo,
squelo y enjuguelo con acetona. Despus de secarlo y enfriarlo, selle el material de vidrio
y gurdelo en un ambiente limpio para evitar acumulacin de polvo u otros contaminantes.
Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.
El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de
interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilacin en material de
vidrio. PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan los estabilizadores, lo que
puede hacerlo peligroso. Tambin pueden eliminarse conservadores, reducindose su vida
de anaquel.
Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas de los
analitos despus de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto, despus de
una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias veces hexano para
asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente muestra.
Es importante que las muestras y los estndares de trabajo se encuentren en el mismo
disolvente. El disolvente de trabajo para los estndares debe ser el mismo que el disolvente
final utilizado en la preparacin de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la
comparacin cromatogrfica entre los estndares y la muestra.
3.2.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los qumicos utilizados en este mtodo no ha sido
determinadas con precisin; de todas maneras; cada sustancia qumica debe ser tratada
como potencial peligro a la salud. La exposicin a estas sustancias qumicas debe ser
reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene
ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos
resultados estn disponibles para los analistas.
PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo
peligroso.
Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo
de las normas de seguridad respecto a la exposicin y manejo seguro de las sustancias
qumicas especificadas en este mtodo. Debe tenerse un archivo de referencias de las
hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal
involucrado en estos anlisis.

3.2.3.3 Matrices
3.2.3.3.1 Aire Ambiente
3.2.3.3.1.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

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3.2.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.2.3.3.1.2.1 Reactivos
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.1.2.2 Materiales de referencia
Estndares de calibracin de congneres de PCBs
Si los resultados son para determinar congneres individuales de PCBs,
entonces deben preparase estndares para congneres puros. Los
siguientes congneres son los ms comunes y se pueden conseguir como
mezclas certificadas. Este procedimiento puede ser apropiado tambin para
otros congneres.
Compuestos
2-Clorobifenilo
2,3-Diclorobifenilo
2,2,5-Triclorobifenilo
2,4,5-Triclorobifenilo
2,2,3,5-Tetraclorobifenilo
2,2,5,5-Tetraclorobifenilo
2,3,4,4-Tetraclorobifenilo
2,23,4,5-Pentaclorobifenilo
2,2,4,5,5-Pentaclorobifenilo
2,3,3,4,6-Pentaclorobifenilo
2,2,3,4,4,5-Hexaclorobifeilo
2,2,3,4,5,5-Hexaclorobifenilo
2,2,3,5,5,6-Hexaclorobifenilo
2,2,4,4,5,5-Hexaclorobifenilo
2,2,3,3,4,4,5-Heptaclorobifenilo
2,2,3,4,4,5,5-Heptaclorobifenilo
2,2,3,4,4,5,6-Heptaclorobifenilo
2,2,3,4,5,5,6-Heptaclorobifenilo
2,2,3,3,4,4,5,5,6-Nonaclorobifenilo

No. CAS
2051-60-7
16605-91-7
37680-65-2
16606-02-3
41464-39-5
35693-99-3
32598-10-0
38380-02-8
37680-73-2
38380-03-9
35065-28-2
52712-04-6
52663-63-5
35065-27-1
35065-30-6
35065-29-3
52663-69-1
52663-68-0
40186-72-9

# IUPAC
1
5
18
31
44
52
66
87
101
110
138
141
151
153
170
180
183
187
206

Estndares Internos
Se debe utilizar como estndar interno el decaclorobifenilo, adicionado en
cada muestra extrada antes del anlisis e incluido en cada estndar inicial
de calibracin.
Estndares surrogados
Cuando sean determinados los congneres de PCBs, se utiliza el
tetracloro-meta-xileno como un surrogado.
3.2.3.3.1.3 Procedimiento de Extraccin

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VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.1.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras
De la extraccin se obtiene de 1 a 2 mL de extracto, estos se transfieren a un
tubo con tapn de rosca que contiene aproximadamente 5 mL de cido
Sulfrico concentrado.
Se agita vigorosamente el tubo durante 2 min y posteriormente se centrfuga
para separar las fases.
Se transfiere cuantitativamente la fase orgnica a un tubo limpio y se
concentra con flujo de nitrgeno hasta un volumen menor a 1 mL.
Debe tenerse especial cuidado al hacer la transferencia del extracto limpio
de no tomar la parte del cido (fase inferior) ya que este podra daar la
columna cromatogrfica durante el anlisis.
Con una pipeta pasteur, se transfiere el extracto limpio a un vial de 2 mL y se
afora a 1 mL, se cierra el vial y se enva para el anlisis cromatogrfico.

3.2.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales


epicontinentales y subterrneas)
3.2.3.3.2.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.2.3.3.1.2.

3.2.3.3.2.3 Procedimiento de Extraccin


VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.2.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras
VER PROCEDIMIENTO 3.2.3.3.1.4

3.2.3.3.3 Suelos
3.2.3.3.3.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.2.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia


VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.2.3.3.1.2

3.2.3.3.3.3 Procedimiento de Extraccin


VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

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3.2.3.3.3.4 Procedimiento de Purificacin de las muestras
Seguir procedimiento como en 3.2.3.3.1.4 y posteriormente al extracto
adicionar 2 g de cobre metlico en grnulos (limpio) y agitar vigorosamente
durante 1 minuto.

3.2.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)


3.2.3.3.4.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.2.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia


VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.2.3.3.4.3 Procedimientos de Extraccin


VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.2.3.3.4.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras


VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.2.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos


animales,
3.2.3.3.5.1 Tejidos y alimentos con grasa ( 2% GRASA)
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.1 LECHE
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.2 QUESO, YEMA DE HUEVO O HUEVO
DESHIDRATADO
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.3 MANTEQUILLA
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.4 HIGADO
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO

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VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)

3.2.3.3.5.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA


3.2.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5% azucares)
3.2.3.3.5.2.1.1 Lechugas, biota vegetal
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2.2 Alta humedad azucares intermedios ( > 75% agua y 5-15% de
azucares)
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad ( 75% agua)
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.6 Sangre Humana
3.2.3.3.6.1 Equipo y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
Columna de cromatografa 7 mm ID x 200 mm, de 50 mL con llave.
Columna Micro-Synder
Tubos de ensayo de 16 x 150 mm con tapas de rosca.
Tubos concentradores kuderna de 25 mL
Microjeringas de 10 L
3.2.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los disolventes que requiere el mtodo deben ser grado pesticida, a menos que otra cosa se
indique.
Metanol
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Hexano
ter etlico
Acetona
Hidrxido de potasio
Silica gel
Sulfato de sodio anhidro
Hidrxido de sodio 2% en metanol
3.2.3.3.6.3 Procedimiento de Extraccin

La muestra de sangre se centrifuga para separar el suero, este es aislado y congelado hasta su uso.
En un tubo de ensayo colocar 4 mL de metanol y 5 mL de suero, mezclar durante 4 minutos, agregar
5mL de una mezcla de hexano-ter etlico (1:1) agitar durante 15 minutos y centrifugar por 5 minutos
a 2000 rpm.
Transferir la fase superior a un tubo concentrador Kuderna-Danish y repetir los pasos anteriores dos
veces ms combinando los extractos en el concentrador.
Concentrar los extractos a 0,5mL bajo una corriente suave de nitrgeno, agregar 2mL de hidrxido de
potasio metanlico en al concentrador y agregar una piedra de ebullicin. Colocar una columna
Micro-Synder, llevar el contenido a ebullicin suave y reducir el volumen a 0,3 mL.

NOTA: Si se forma un precipitado, agregar unas gotas de hidrxido de potasio


metablico y calentar suavemente hasta que se disuelva.

Dejar enfriar y agregar 2 mL de una mezcla metanol-agua (1:1), cuando llegue a temperatura
ambiente, agregar 2 mL de n-hexano, tapar y agitar el tubo vigorosamente.

3.2.3.3.6.4 Procedimiento de Purificacin de las muestras


En una columna cromatogrfica de 7 mm DI x 200 mm, de 50 mL con llave, colocar un
tapn de fibra de vidrio en el fondo de la columna. Vaciar una suspensin de 3 g de silica gel
en 50 mL de hexano, dejar que la suspensin se asiente y agregar de 5 a 7 g de sulfato de
sodio. Enjuague la columna preparada con 20 mL de hexano. Cuando llegue al nivel de la
cama de sulfato de sodio, agregar la muestra y colocar una probeta graduada debajo de la
columna; cuando el extracto este entre a la fase de sulfato de sodio enjuagar el tubo
concentrador y la columna Micro-Synder con 1 mL de hexano, cuando estos lleguen a la fase
de sulfato de sodio agregar 25 mL de hexano. Colectar el eluyente de la columna en la
probeta graduada. Enjuagar las paredes de la probeta con 2 mL de hexano y concentrar a 1
mL bajo una corriente suave de nitrgeno.

3.2.3.3.7 Leche Materna


3.2.3.3.7.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia.
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3.2.3.3.7.3 Procedimiento de Extraccin
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.7.4 Procedimiento de Purificacin de las muestras
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.4 MTODO DE IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN INSTRUMENTAL
3.2.4.1 Aplicacin y Alcances
3.2.4.1.1 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de PCBs en los extractos
purificados de aguas naturales, residuales municipales e industriales, as como
suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su
purificacin depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos de
extraccin y purificacin adecuados para cada matriz.
3.2.4.1.2 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que
pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentracin de las
muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas expertos en
el uso de cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas y en la interpretacin
de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados
aceptables con este mtodo.
3.2.4.2 Resumen
El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografa de
Gases acoplado a espectrometra de masas con la capacidad de trabajar en los modos
SIM y SCAN simultneamente, en caso de que se detecte algn PCB mediante los
tiempos de retencin (Tr) coincidentes con los de los estndares respectivos y por el
espectro de masas en modo SCAN coincidente con el de la biblioteca estandarizada
del sistema de manejo de datos y con el ion cuantitativo y los 2 iones cualificadores
con sus respectivas reas proporcionales obtenidas de los estndares de la curva de
calibracin en el modo SIM, se cuantifica mediante el mtodo de estndar interno, en
caso de que se cumplan los Tr pero no exista coincidencia entre las proporciones de
los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la identificacin, en caso de
que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se trata de algn pico
interferente y no se reportan los resultados como positivos a PCBs.

3.2.4.3 Equipos y Materiales

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3.2.4.3.1 Equipo
Cromatgrafo de gases Sistema analtico completo con cromatgrafo de
gases con programacin de temperatura para tcnica de inyeccin splitsplitless con control electrnico de presin (Agilent 7890 o equivalente).
Espectrmetro de masas capaz de realizar barridos de 35 a 500 uma por
segundo o menor, usando una fuente de ionizacin de impacto electrnico
con energa de 70 electrn volts. El espectrmetro debe ser capaz de
producir una espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolucin de
decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios
mencionados en la seccin de control de calidad (Agilent 5975 o
equivalente).
Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este
sistema debe ser capaz de tener una adquisicin y almacenamiento
continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa
cromatogrfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las seales de los
compuestos eludos de la columna capilar del GC (agilent Chemsation).
Balanza analtica con precisin de 0.0001 g
3.2.4.3.2 Materiales
Columna capilar de slica fundida HP-5MS (Crosslinked 5% fenil metil
siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de dimetro y 0.25 m de pelcula
de espesor o equivalente.
Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o
equivalente.
Microjeringa de 25 L, marca Hamilton 702N, No. parte 9301-0022 o
equivalente.
Microjeringa de 500 L, marca Hamilton 750N, No. parte 9301-0034 o
equivalente.
Matraces volumtricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapn esmerilado.
Viales de vidrio con tapa de politetrafluoroetileno (PTFE) de rosca marca
Agilent o equivalente.
Insertos de vidrio para puerto de inyeccin marca Agilent o equivalente.
Septa color gris para bajo flujo, marca Agilent o equivalente.
O-ring de vespel marca Agilent o equivalente.

3.2.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia

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3.2.4.4.1 Reactivos y disoluciones
Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente
Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado ptima, plaguicida o equivalente
3.2.4.4.1.3 Materiales de referencia
Congneres de PCBs
Los patrones pueden ser estndares puros o adquirirse como disoluciones
certificadas (patrones de referencia).
Si los resultados son para determinar congneres individuales de PCBs,
entonces deben preparase estndares para congneres puros. Los
siguientes congneres son los ms comunes y se pueden conseguir como
mezclas certificadas. Este procedimiento puede ser apropiado tambin para
otros congneres.
Compuestos
2-Clorobifenilo
2,3-Diclorobifenilo
2,2,5-Triclorobifenilo
2,4,5-Triclorobifenilo
2,2,3,5-Tetraclorobifenilo
2,2,5,5-Tetraclorobifenilo
2,3,4,4-Tetraclorobifenilo
2,23,4,5-Pentaclorobifenilo
2,2,4,5,5-Pentaclorobifenilo
2,3,3,4,6-Pentaclorobifenilo
2,2,3,4,4,5-Hexaclorobifeilo
2,2,3,4,5,5-Hexaclorobifenilo
2,2,3,5,5,6-Hexaclorobifenilo
2,2,4,4,5,5-Hexaclorobifenilo
2,2,3,3,4,4,5-Heptaclorobifenilo
2,2,3,4,4,5,5-Heptaclorobifenilo
2,2,3,4,4,5,6-Heptaclorobifenilo
2,2,3,4,5,5,6-Heptaclorobifenilo
2,2,3,3,4,4,5,5,6-Nonaclorobifenilo

No. CAS
2051-60-7
16605-91-7
37680-65-2
16606-02-3
41464-39-5
35693-99-3
32598-10-0
38380-02-8
37680-73-2
38380-03-9
35065-28-2
52712-04-6
52663-63-5
35065-27-1
35065-30-6
35065-29-3
52663-69-1
52663-68-0
40186-72-9

# IUPAC
1
5
18
31
44
52
66
87
101
110
138
141
151
153
170
180
183
187
206

Disolucin Patrn
Preparar a partir de 3.2.4.4.1.3 una mezcla de congneres de PCBs en una
concentracin de 10 mg/L, se deben incluir el decaclorobifenilo como estndar
interno y el tetracloro-m-xileno como surrogado. El disolvente es hexano..
Disolucin intermedia de 1 mg/L
A partir de la disolucin de 10 mg/L, tome 500 L con una microjeringa en un
matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para
homogenizar. Guarde la disolucin en viales de 2 mL.

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Disoluciones de calibracin
Prepare 5 niveles como mnimo de diferente concentracin de las
disoluciones estndar para cada analito de inters en matraces volumtricos.
El punto de concentracin ms bajo de la curva de calibracin debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarn definidas por el intervalo lineal del detector.
Estndar de calibracin de 0.05 mg/L.- En un matraz aforado de 1 ml ponga
50 L de la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta
disolucin en viales de 2 ml y rotule con etiqueta que contenga mtodo, fecha
de preparacin, concentracin, solvente utilizado, persona que lo prepar
Estndar de calibracin de 0.1 mg/L.- En un matraz de 1 ml ponga 100 l de
la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolucin
en viales de 2 ml y etiquete.
Estndar de calibracin de 0.005 mg/L.-. En un matraz de 1 ml ponga 100 L
de la solucin de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta
disolucin en viales de 2 ml y etiquete..
Estndar de calibracin de 0.25 mg/L.-. En un matraz aforado 1 mL ponga
250 L de la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta
disolucin en viales de 2 mL y etiquete.
Estndar de calibracin de 0.5 mg/L.-. En un matraz aforado de 1 ml ponga
500 L de la solucin de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde la
disolucin en viales de 2ml y etiquete.
3.2.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de control de calidad
(CC) formal. Los requerimientos mnimos de este programa consisten en una demostracin inicial
de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeo del mtodo,
adems realizar anlisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la
precisin y exactitud continuas y el anlisis de blancos. El desempeo del laboratorio debe
compararse con los criterios aqu establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los
anlisis cumplen con las especificaciones de desempeo del mtodo. El analista debe hacer una
demostracin inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisin aceptables por este
mtodo.
Cada vez que se realice una modificacin al mtodo o que se cambie el analista responsable de
llevar a cabo est determinacin, el analista designado debe repetir la validacin del mtodo, si el
cambio va a afectar el lmite de deteccin del mtodo (LDM), el laboratorio debe demostrar que el
nuevo LDM determinado es igual o ms bajo que el anterior para los analitos de inters.
No se permite el uso de tcnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecucin
del mtodo. Si se utiliza una tcnica analtica que no sea la especificada en este mtodo, dicha
tcnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de las tcnicas descritas en este
documento para el analito de inters.
77

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Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este
mtodo. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificacin por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al mtodo para ese
analito.
- Los nombres, ttulos, direcciones y nmero de telfono de los analistas que ejecutaron los
anlisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenci y verific los
anlisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del mtodo modificado comparadas con el
mtodo original, dichos datos deben de incluir todos los parmetros mencionados en la
seccin de desempeo del mtodo.
- La informacin escrita en las bitcoras tanto del equipo como del analista, deben incluir
los siguientes datos:

Identificacin de la muestra
Nmero del lote analtico en el cual se analiz la muestra
Fecha del anlisis
Procedimiento cronolgico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Nmero de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin
Registros de bitcoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
informacin
Informacin cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados del lote analtico.
3.2.4.5.1 Verificacin del equipo
3.2.4.5.1.1 Verificacin de la sintona del espectrmetro de masas
(Autotune)
Realice una autosintona (autotune y DFTPP tune), siguiendo las
actividades descritas en el instructivo de la calibracin del
espectrmetro de masas correspondiente. Esta es una autosintona
(autotune) que hace el instrumento con respecto a una sustancia de
referencia llamada Perfluorotributilamina PFTBA
Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las
causas y corrija el problema, de acuerdo al instructivo de
mantenimiento preventivo del instrumento, documente las incidencias
y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del sistema
GC/MS.
Especificaciones para el autotune
Masa
69

Especificacin
100%
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219
502

30% respecto a la masa 69


1% respecto a la mas 69

3.2.4.5.1.2 Verificacin del Sistema (sintona del MS con DFTPP) de


acuerdo a las especificaciones el mtodo.
Inyecte 2 L de la disolucin de DFTPP segn las condiciones
instrumentales anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP.
Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios
ION MASICO

CRITERIO DE ABUNDANCIA RELATIVA DE IONES


MASICOS DE LA DFTPP

51

30 A 60% de la masa 198

68

< 2% DE LA MASA 69

70

< 2 % DE LA MASA 69

127

40 A 60 % DE LA MASA 198

197

<1% DE LA MASA 198

198

PICO BASE 100 %

199

5 A 9% DE LA MASA 198

275

10 A 30 % DE LA MASA 198

365

> A 1 % DE LA MASA 198

441

PRESENTE PERO MENOR QUE LA MASA 443

442

> 40% DE LA MASA 198

443

17 A 23 % DE LA MASA 442

Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones


anteriores ser necesario que revise los parmetros de sintona del
espectrmetro, repita nuevamente la sintona (autotune y DFTPP
tune) e inyecte nuevamente la disolucin de DFTPP.
Verifique que el sistema GC/MS est libre de contaminacin (nivel
seal-ruido)
Realice un blanco electrnico bajo las condiciones instrumentales
del mtodo. El blanco electrnico como su nombre lo dice es una
corrida electrnica exclusivamente (sin inyeccin alguna), y ste
debe estar libre de picos o en su defecto stos debern ser no
mayores a 5 veces el ruido.
En caso de no cumplir con lo mencionado en la seccin anterior,
eleve las temperaturas tanto de la columna a 300 C, del puerto de
inyeccin a 280 C y del detector a 300 C, mantenga el sistema
bajo stas condiciones de temperatura por 30 min y realice

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nuevamente el blanco electrnico. En caso de persistir el problema
lleve a cabo las acciones de limpieza del instrumento mencionadas
en el instructivo de mantenimiento preventivo correspondiente.
Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatogrficas sean
las adecuadas, segn se menciona posteriormente.
3.2.4.5.1.3 Verificacin del Funcionamiento del Sistema GC/MS
(SPCCs)
De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la
degradacin del DDT (compuesto incluido en la disolucin SPCCs)
a DDE y DDD, la suma de las respuestas del DDE y DDD no deben
exceder del 20% con respecto a la respuesta del DDT.
La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus
respuestas normales (ms menos 50%) y como picos bien definidos
y sin coleo. Si la degradacin es excesiva y/o dan pobre respuesta
cromatogrfica, revise el puerto de inyeccin y lmpielo, cambie el
liner, sello dorado y si es necesario que corte los primeros 5 a 10 cm
de la columna capilar en el extremo que conecta al puerto de
inyeccin.
3.2.4.5.2 Verificacin de la calibracin inicial.
La curva de la calibracin inicial deber realizarse inyectando los estndares
de calibracin preparados y se considera lineal, si el por ciento de la
desviacin estndar relativa (%RSD) de los factores de calibracin (CF) es
menor o igual al 20%, los clculos se realizan con las siguientes ecuaciones:

CF

total de rea
masa inyectada en nanogramos

% RSD

SDCF
x100
CF

Donde:
SDCF= Desviacin estndar de los factores de calibracin
CF = Promedio de los factores de calibracin
La verificacin de la calibracin inicial puede tambin efectuarse mediante la
regresin por mnimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptacin es que
el factor de correlacin "r2" sea mayor o igual a 0.997.
Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisin del
sistema cromatogrfico y la preparacin de las disoluciones de calibracin.
Posteriormente la curva de calibracin ser vigente, si el anlisis de un punto
intermedio de la curva no presenta una variacin de la concentracin mayor
al 15% y que ser calculada de la siguiente manera.
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Diferencia de concentracin % D

CC CT
x100
CT

Donde
CC= concentracin calculada
CT= concentracin terica
O si se utiliza el factor de calibracin

Diferencia porcentual %

CFv CF
x100
CF

Donde:
CFv= Es el factor de calibracin de cada compuesto en el estndar de
verificacin.
CF = Es la media del factor de calibracin del compuesto de la calibracin
inicial.
Si el criterio de aceptacin para la diferencia porcentual es mayor al 15% se
proceder a la revisin del sistema cromatogrfico y a la preparacin de la
solucin estndar utilizada.
3.2.4.5.3 Verificacin de contaminacin de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningn tipo de contaminante al
tiempo de retencin de los analitos, por lo que es importante que los
reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe
localizar la fuente de contaminacin y extraer y analizar nuevamente las muestras
asociadas al blanco contaminado
Use tambin los blancos de reactivos para verificar la contaminacin por arrastre de
muestras con altas concentraciones en anlisis secuenciales
3.2.4.5.4 Verificacin del lote analtico
Por cada lote analtico de muestras analice al menos una muestra sinttica
de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado
de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analtico, calcule el
% de recuperacin de cada analito y surrogados de la muestra control, los
cuales debern estar dentro del rango de 80 120 %R, de no ser as se debe
revisar la preparacin de la muestra control y el sistema cromatogrfico.
Realizar la correccin necesaria y reanalizar la muestra control, si el
problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analtico.

3.2.4.5.5 Verificacin de interferencias de matriz

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La verificacin de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo
mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el
anlisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique
una muestra por cada lote analtico o preferentemente una muestra de cada
tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben
analizar cuando por las caractersticas de la muestra se sospeche de
interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento
de calidad de un proyecto.
Efecto de la matriz en el recobro del analito Muestras fortificadas (MF):
Analice las muestras fortificadas:
Calcule el por ciento de recobro
El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analtico est fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
Efecto de la matriz en la precisin del analito Precisin de la matriz
duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la
duplicada para cada analito, con la siguiente ecuacin:

DPR

C1 C 2 * 200
C1 C 2

Donde:
C1 Concentracin de la primera muestra
C2 concentracin de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe
ser:<20%
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
Repita el anlisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provoc
que la prueba del DPR fallara.
3.2.4.5.6 Verificacin de la estabilidad de la curva de calibracin
En cada lote analizado, si ms de 20 muestras van a ser analizadas durante
el da, verifique la curva de calibracin analizando un estndar de

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concentracin media del intervalo de trabajo al principio del lote y despus
de cada 20 muestras 12 horas de anlisis continuo.
Calcule el factor de calibracin o la concentracin para cada analito del
estndar de concentracin media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la
siguiente ecuacin:

FC1 FC2
Diferencia porcentual
FC1

x100

Donde:
FC1 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en la curva de
calibracin, o la concentracin nominal de del estndar de verificacin.
FC2 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en el estndar de
concentracin media, o la concentracin calculada en el estndar de
verificacin.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deber ser menor al 15%, de
no ser as verifique su vigencia, revis tambin el sistema cromatogrfico y
determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre
nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estndar de
verificacin sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras
anteriores al estndar de verificacin que fall.
3.2.4.5.7 Verificacin de estndares surrogados.
Evale los datos de recobro de los surrogados de las muestras.
Calcule el % de recuperacin de los estndares surrugados en blancos,
muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras
duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuacin:

Re cuperacin % R

C1
x100
C2

Donde:
C1=Concentracin calculada de surrugados en la
muestra.
C2=Concentracin nominal del surrugado adicionado a
la muestra.
El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperacin de no ser as
verifique la preparacin de la muestra que fallo y el sistema cromatogrfico,
determine la causa de la falla y corrija, de no encontrarla, repita la extraccin
de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango de aceptacin
llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de matriz y los
resultados obtenidos.

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Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y
corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e
inclyalas en el expediente del resultado analtico.
3.2.4.5.8 Verificacin de estndares internos.
Compare el rea de el o los estndares internos de las muestras con el rea
promedio de los estndares internos obtenidos de los puntos de calibracin,
el valor obtenido en el o los estndares internos de la muestra no deben ser
menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva
de calibracin para cada estndar interno.
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
3.2.4.5.9 Control de Calidad Estadstico En esta seccin se especifica
como debe realizarse el control de calidad estadstico obligatorio para este
mtodo:
3.2.4.5.9.1 Preparacin de las Muestras de Control de Calidad (MCC)
Prepare la MCC de la siguiente forma:
Se deber preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser
preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de
calibracin.
Prepare una disolucin a una concentracin
rango de trabajo del mtodo.

que corresponda al

NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea


conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la
medicin
3.2.4.5.9.2 Grficas de Control de Exactitud El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las grficas de control de exactitud
para cada lote analizado a partir de la demostracin inicial de
desempeo.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deber
graficarse y deber estar dentro de los lmites de control superior e inferior (
3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, debern rechazarse todos los
resultados del lote analtico, determine las causas y corrija los errores,
documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deber
repetirse el anlisis del lote en cuestin.

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3.2.4.4.9.3 Grficas de Control de Precisin El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las grficas de control de precisin
para cada lote analizado a partir de la demostracin inicial de
desempeo
Determine los lmites de control de la siguiente forma:
Lmite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Lmite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisin es mayor al LSC, debern rechazarse todos
los resultados del lote analtico, determine las causas del problema y
corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y
acciones correctivas, deber repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.2.4.5.10 Validacin de modificaciones del mtodo o de mtodos alternos
Para validar las modificaciones que se efecten a este mtodo o para la
utilizacin de mtodos alternos deber seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente mtodo, debern validarse
parcialmente.
Si se utiliza un mtodo alterno cuya fuente sea un mtodo estandarizado por
alguna Institucin de carcter internacional o reconocida internacionalmente
(e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment
Canada, etc.) tambin deber validarse parcialmente.
Si se utiliza algn mtodo no estandarizado, deber evidenciarse, adems
de los parmetros de validacin parcial, los parmetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeo de todo el sistema analtico utilizando
los datos recolectados de anlisis de blancos reactivos, solucin verificadora
del desempeo del laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algn analito a comparacin de los
cromatogramas del mtodo, ste deber corregirse. Los problemas de
coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna
cromatogrfica, problemas en la instalacin de la columna o mala operacin
del detector.
Verifique la precisin con rplicas del anlisis. Una pobre precisin
generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de
inyeccin. Si el sistema cromatogrfico se est comportando aparentemente

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bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva
curva o juego de factores de calibracin para verificar las respuestas bajas
antes de buscar la fuente del problema.

3.2.4.5.11 Composicin del lote analtico (para cada 25 muestras 12 horas de


anlisis continuo)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14

Calibracin con PFTBA (Autotune)


Calibracin con PFTBA (DFTPP)
Anlisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture)
Blanco electrnico
Mezcla de Verificacin
Blanco de Reactivos
Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
Muestra real No. 1
Muestra real No. 2
Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de anlisis continuo)
Muestra fortificada (si se realizo)
Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
Muestra de Verificacin de la Calibracin Continua.
Siguientes 20 muestras reales

3.2.4.5.12 Criterios de Aceptacin y Rechazo


Verificacin del Equipo

Punto de verificacin

Criterio

Equipo libre de interferencias (blanco


electrnico)

No deber presenta picos a cualquier


tiempo de retencin
Cumple con especificaciones del
fabricante
Cumple con abundancias
especificadas en el mtodo
Degradacin del DDT menor al 15%,
no coleo de Bencidina y PCP

Autotune
DFTTP tune
Puerto de inyeccin libre de suciedad y baja
degradacin

Verificacin de la Calibracin Inicial

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin del % Diferencia de la concentracin


de la Mezcla de Verificacin, punto intermedio de
la curva de calibracin.

Menor al 15%

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Verificacin de Contaminacin de Reactivos

Punto de verificacin

Criterio

Blanco de reactivos

No deben presentar ningn tipo de


contaminante al tiempo de retencin
de los analitos medidos

Verificacin del Proceso Analtico

Punto de verificacin

Criterio

Muestra de control de calidad

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de estndares Surrogados

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de muestras adicionadas duplicadas

% DSR < 20%

Verificacin de Interferencias de Matriz

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de muestras adicionadas

% de Recuperacin 70 / 130

Estabilidad de la Curva de Calibracin

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de la Estndar de Verificacin


(Intermedio)

% de diferencia menor al 15%

3.2.4.6 Calibracin
Se necesitan al menos 5 estndares de calibracin. Uno debe contener analitos a una
concentracin cercana, pero superior a la del lmite prctico de cuantificacin para cada analito;
los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las muestras. Por
ejemplo, si el LDM es 0.01g/L y el LPC es de 0.05 g/L, se espera que la muestra contenga
concentraciones mayores de 0.05 g/L.
Una vez establecidas las condiciones de operacin inyecte un volumen adecuado (2 L) de cada estndar de
calibracin por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y agrguelo a la tabla de
calibracin del mtodo.
Si la DSR de cada PCB es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el
factor de calibracin promedio FC puede utilizarse para la cuantificacin de los resultados de las

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muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la
curva de calibracin.
Si se utiliza regresin lineal por mnimos cuadrados, deber obtener el factor de correlacin r2 para
cada analito, el cual deber ser mayor o igual a 0.997 si r es menor a este valor, la curva de
calibracin no es lineal y deber verificarse la preparacin de los estndares de calibracin y el
sistema cromatogrfico y repetir la calibracin.
3.2.4.6.1 Calibracin por Estndar Interno:
El analista debe seleccionar uno o ms estndares internos que sean similares en
comportamiento analtico a los compuestos de inters. El analista debe adems
demostrar que la medicin del estndar interno no es afectada por el mtodo o
interferencias de la matriz.
Prepare los estndares de calibracin a un mnimo de cinco concentraciones para
cada analito de inters por adicin de volmenes. Para cada estndar de calibracin,
adicione una cantidad conocida constante de uno o ms estndares internos y afore
con un solvente apropiado. Uno de los estndares debe estar a una concentracin
cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al
rango de trabajo.
Inyecte cada estndar de calibracin. Tabule la altura del pico o el rea de respuesta
contra la concentracin de cada compuesto y el estndar interno. Calcule el factor de
respuesta (RF) para cada compuesto como sigue:

RF

As * Cis
Ais * Cs

Donde:
As = Respuesta para el analito que ser medido.
Ais = Respuesta del estndar interno.
Cis = Concentracin del estndar interno, g/L.
Cs = Concentracin del analito a ser medido, g/L.

Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede


usarse para clculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una
curva de calibracin de la relacin de respuesta, As/Ais contra RF.
3.2.4.7 Procedimiento Analtico
3.2.4.7.1 Anlisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatogrficas:
Gas acarreador
Temperatura inicial
Tiempo inicial
Programa 1

Helio
100 C
5 min
10C/min
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Temperatura final 1
Programa 2
Temperatura final 2

200C
15C/min
300C 1 min

Temperatura del inyector


Temperatura del detector
Modo
Flujo de split
Purga de septa

250C
300C
splitless
50 mL/min
3 mL/min

Adicione un volumen de la mezcla de estndares internos, de manera que la concentracin


de estos en el vial sea igual a la concentracin que se utilizo en la preparacin de la curva
de calibracin.
Elabore la secuencia de anlisis de acuerdo a lo indicado en el punto de composicin del
lote analtico.
Inicie el anlisis.
Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estndar en el cromatgrafo de
gases. Registre el volumen final del extracto.
Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y criterios de
aceptacin y rechazo.
Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de
calibracin, diluya el extracto y reanalice.
3.2.4.7.2 Identificacin de los analitos
La determinacin cualitativa de cada compuesto determinado por este mtodo est basada
en la comparacin del tiempo de retencin y de los espectros de masas de las muestras,
con los tiempos y iones caractersticos de los espectros de masas de los estndares de
referencia en modo SCAN. Los espectros de masas de referencia en modo SIM estn
definidos por tres iones de mayor intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los
compuestos son identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:
El tiempo de retencin relativo TRR del compuesto detectado es 0.5 unidades del TRR del
estndar de referencia.
La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren dentro del
30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de referencia (ejemplo:
para un ion con abundancia del 50% en el espectro de referencia, la abundancia en el
espectro de la muestra debe encontrarse en el intervalo de 20% y 80%)
Los iones que estn presentes en el espectro de la muestra y que no estn en el espectro
del estndar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede tratarse de contaminacin
de fondo o coelusin de otros compuestos.

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Si hay iones que estn presentes en el espectro del estndar y no estn presentes en la
muestra, debe someterlo a revisin ya que stos pueden haberse perdido por posibles
sustracciones en el momento de limpiar los espectros
Para muestras que contienen componentes que no estn asociados con los estndares de
calibracin, realice una bsqueda por librera para obtener una identificacin y a partir de
los estndares internos, obtener una concentracin estimada.
3.2.4.7.3 Clculos
3.2.4.7.3.1 AIRE AMBIENTE
VER PLAGUICIDAS CLORADOS
1.1.3.
3.2.4.7.3.2 AGUA
VER PLAGUICIDAS CLORADOS

3.2.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS


VER PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS Y
ALIMENTOS
VER PLAGUICIDAS CLORADOS
1.1.4. 3.2.4.8 Desempeo del Mtodo
Los datos son los del mtodo de referencia y los de un laboratorio nacional con experiencia.
3.2.4.8.1 Lmite de Deteccin: Ver Tabla 5.
3.2.4.8.2 Lmite Prctico de Cuantificacin: Ver Tabla 5
3.2.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tabla 5
3.2.4.8.4 Precisin del Mtodo: Ver Tabla 5
3.2.4.8.5 Exactitud del Mtodo: Ver Tabla 5

3.2.4.9 Tablas y Figuras


TABLA 1 CANTIDADES DE MUESTRA SUGERIDAS PARA ANALIZAR VARIAS MATRICES (1)
Matriz de la
muestra (2)
Acuosa

Slido

Por ciento de
slidos
Muestras Monofsicas
Agua Potable
Agua subterrnea
<1
Aguas tratadas
Suelos seco
>20
Composta
Ejemplo

Fase

Cantidad
extrada

(3)

1000 mL

Solida

10 g

90

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Organica

Tejidos

Cenizas
Solventes residuales
Aceites gastados
<1
Organic polymer
Peces

Humano adiposo
Muestras Multifsicas

Organica

10 g

Organica

10 g

1-30

Slida

10 g

1-100

Ambas

10 g

<1

Orgnica

10 g

>1

Orgnica
y slida

10 g

Liquida/Solida

Acuosa/Slida

Orgnica/slida

Suelos hmedo o
sedimentos
Efluentes no tratados
Lodos municipales
digeridos
Lodos tratados secos
Pulpa de papel
Lodos Industriales
Residuos Aceitosos

Liquida/Liquida
Acuosa/orgnica

Acuosa/slida/sl
ida

Efluentes de proceso
Efluentes no tratados
Residuos lquidos
orgnicos
Efluentes industriales no
tratados
Residuos industriales

1. La cantidad de muestra a extraer se debe ajustar para proporcionar 10 g de slidos en base seca o 1 litro acuoso.
2. En general, cuando los PCBs estn en contacto con sistemas multifsicos, en el cual una de las fases es acuosa, los PCBs se dispersarn
preferentemente en la fase orgnica debido a la baja solubilidad de los mismos.
3. Las muestras acuosas se deben filtrar despus de su adicin de surrogados o de haberla fortificado, el filtrado y los slidos se deben extraer
separadamente y los extractos combinados antes de su purificacin y anlisis.

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TABLA 2

CONGENERES ESPECIFICOS QUE SON COMPONENTES MAYORES DE LOS


AROCLORES COMUNES
Aroclor
Congnere
Bifenilo
2-CB
2,3-DCB
3,4-DCB
2,4,4'-TCB
2,2',3,5'-TCB
2,3',4,4'-TCB
2,3,3',4',6-PCB
2,3',4,4',5-PCB
2,2',4,4',5,5'-HCB
2,2',3,4,4',5'-HCB
2,2',3,4,4',5,5'-HpCB
2,2',3,3',4,4',5-HpCB

Nmero
IUPAC
1
5
12
28*
44
66*
110
118*
153
138
180
170

1016
X
X
X
X

1221

1232

1242

X
X
X
X
X

X
X
X
X
X

X
X
X

1248

X
X
X
X
X

1254

X
X
X
X
X

1260

X
X
X
X
X
X
X

*Coelucin aparente del 28 con el 31 (2,4',5-triclorobifenilo


* Coelucin aparente del 66 con el 95 95 (2,2',3,5',6-pentaclorobifenilo
*Coelucin aparente del 118 con el 149 (2,2',3,4',5',6-hexaclorobifenilo
Esta tabla no tiene la intencin de ilustrar todos los congneres que pueden estar presente en un Aroclor dado, solo
cuales son los componentes mayores

92

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TABLA 3 IDENTIFICACION DE TODOS LOS CONGENERES DE PCBs Y SUS ANALOGOS
MARCADOS
CONGENERE
2-MoCB
3-MoCB
4-MoCB
2,2'-DiCB
2,3-DiCB
2,3'-DiCB
2,4-DiCB
2,4'-DiCB3
2,5-DiCB
2,6-DiCB
3,3'-DiCB
3,4-DiCB
3,4'-DiCB
3,5-DiCB
4,4'-DiCB
2,2',3-TrCB
2,2',4-TrCB
2,2',5-TrCB3
2,2',6-TrCB
2,3,3'-TrCB
2,3,4-TrCB
2,3,4'-TrCB
2,3,5-TrCB
2,3,6-TrCB
2,3',4-TrCB
2,3',5-TrCB
2,3',6-TrCB
2,4,4'-TrCB3
2,4,5-TrCB
2,4,6-TrCB
2,4',5-TrCB
2,4',6-TrCB
2',3,4-TrCB
2',3,5-TrCB
3,3',4-TrCB
3,3',5-TrCB
3,4,4'-TrCB
3,4,5-TrCB
3,4',5-TrCB
2,2',3,3'-TeCB
2,2',3,4-TeCB
2,2',3,4'-TeCB
2,2',3,5-TeCB
2,2',3,5'-TeCB3

No.

CAS

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44

2051-60-7
2051-61-8
2051-62-9
13029-08-8
16605-91-7
25569-80-6
33284-50-3
34883-43-7
34883-39-1
33146-45-1
2050-67-1
2974-92-7
2974-90-5
34883-41-5
2050-68-2
38444-78-9
37680-66-3
37680-65-2
38444-73-4
38444-84-7
55702-46-0
38444-85-8
55720-44-0
55702-45-9
55712-37-3
38444-81-4
38444-76-7
7012-37-5
15862-07-4
35693-92-6
16606-02-3
38444-77-8
38444-86-9
37680-68-5
37680-69-6
38444-87-0
38444-90-5
53555-66-1
38444-88-1
38444-93-8
52663-59-9
36559-22-5
70362-46-8
41464-39-5

ANALOGO MARCADO

No.

CAS

C12-2-MoCB2

1L

234432-85-0

C12-4-MoCB2
13C12-2,2'-DiCB2

3L
4L

208263-77-8
234432-86-1

C12-2,5-DiCB4

9L

250694-89-4

C12-4,4'-DiCB2

15L

208263-67-6

C12-2,2',6-TrCB2

19L

234432-87-2

C12-2,4,4'-TriCB5

28L

208263-76-7

C12-3,4,4'-TrCB2

37L

208263-79-0

13

13

13

13

13

13

13

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2,2',3,6-TeCB
2,2',3,6'-TeCB
2,2',4,4'-TeCB
2,2',4,5-TeCB
2,2',4,5'-TeCB
2,2',4,6-TeCB
2,2',4,6'-TeCB
2,2',5,5'-TeCB3
2,2',5,6'-TeCB
2,2',6,6'-TeCB
2,3,3',4'-TeCB
2,3,3',4'-TeCB
2,3,3',5-TeCB
2,3,3',5'-TeCB
2,3,3',6-TeCB
2,3,4,4'-TeCB
2,3,4,5-TeCB
2,3,4,6-TeCB
2,3,4',5-TeCB
2,3,4',6-TeCB
2,3,5,6-TeCB
2,3',4,4'-TeCB3
2,3',4,5-TeCB
2,3',4,5'-TeCB
2,3',4,6-TeCB
2,3',4',5-TeCB
2,3',4',6-TeCB
2,3',5,5'-TeCB
2,3',5',6-TeCB
2,4,4',5-TeCB
2,4,4',6-TeCB
2',3,4,5-TeCB
3,3',4,4'-TeCB3,6
3,3',4,5-TeCB
3,3',4,5'-TeCB
3,3',5,5'-TeCB
3,4,4',5-TeCB6
2,2',3,3',4-PeCB
2,2',3,3',5-PeCB
2,2',3,3',6-PeCB
2,2',3,4,4'-PeCB
2,2',3,4,5-PeCB
2,2',3,4,5'-PeCB
2,2',3,4,6-PeCB
2,2',3,4,6'-PeCB
2,2',3,4',5-PeCB
2,2',3,4',6-PeCB
2,2',3,5,5'-PeCB
2,2',3,5,6-PeCB

45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93

70362-45-7
41464-47-5
2437-79-8
70362-47-9
41464-40-8
62796-65-0
68194-04-7
35693-99-3
41464-41-9
15968-05-5
74338-24-2
41464-43-1
70424-67-8
41464-49-7
74472-33-6
33025-41-1
33284-53-6
54230-22-7
74472-34-7
52663-58-8
33284-54-7
32598-10-0
73575-53-8
73575-52-7
60233-24-1
32598-11-1
41464-46-4
41464-42-0
74338-23-1
32690-93-0
32598-12-2
70362-48-0
32598-13-3
70362-49-1
41464-48-6
33284-52-5
70362-50-4
52663-62-4
60145-20-2
52663-60-2
65510-45-4
55312-69-1
38380-02-8
55215-17-3
73575-57-2
68194-07-0
68194-05-8
52663-61-3
73575-56-1

13

C12-2,2',5,5'-TeCB4

52L

208263-80-3

13

C12-2,2',6,6'-TeCB2

54L

234432-88-3

C12-3,3',4,4'-TeCB2,7

77L

105600-23-5

C12-3,4,4',5-TeCB7

81L

208461-24-9

13

13

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2,2',3,5,6'-PeCB
2,2',3,5',6-PeCB
2,2',3,6,6'-PeCB
2,2',3',4,5-PeCB
2,2',3',4,6-PeCB
2,2',4,4',5-PeCB
2,2',4,4',6-PeCB
2,2',4,5,5'-PeCB3
2,2',4,5,6'-PeCB
2,2',4,5,'6-PeCB
2,2',4,6,6'-PeCB
2,3,3',4,4'-PeCB3,6
2,3,3',4,5-PeCB
2,3,3',4',5-PeCB
2,3,3',4,5'-PeCB
2,3,3',4,6-PeCB
2,3,3',4',6-PeCB

94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110

73575-55-0
38379-99-6
73575-54-9
41464-51-1
60233-25-2
38380-01-7
39485-83-1
37680-73-2
68194-06-9
60145-21-3
56558-16-8
32598-14-4
70424-69-0
70424-68-9
70362-41-3
74472-35-8
38380-03-9

2,3,3',5,5'-PeCB

111 39635-32-0

2,3,3',5,6-PeCB
2,3,3',5',6-PeCB

112 74472-36-9
113 68194-10-5

2,3,4,4',5-PeCB6

114 74472-37-0

2,3,4,4',6-PeCB
2,3,4,5,6-PeCB
2,3,4',5,6-PeCB

115 74472-38-1
116 18259-05-7
117 68194-11-6

2,3',4,4',5-PeCB3,6

118 31508-00-6

2,3',4,4',6-PeCB
2,3',4,5,5'-PeCB
2,3',4,5,'6-PeCB
2',3,3',4,5-PeCB
2',3,4,4',5-PeCB6
2',3,4,5,5'-PeCB
2',3,4,5,6'-PeCB
3,3',4,4',5-PeCB3,6
3,3',4,5,5'-PeCB
2,2',3,3',4,4'-HxCB3
2,2',3,3',4,5-HxCB
2,2',3,3',4,5'-HxCB
2,2',3,3',4,6-HxCB
2,2',3,3',4,6'-HxCB
2,2',3,3',5,5'-HxCB
2,2',3,3',5,6-HxCB
2,2',3,3',5,6'-HxCB
2,2',3,3',6,6'-HxCB
2,2',3,4,4',5-HxCB
2,2',3,4,4',5'-HxCB3
2,2',3,4,4',6-HxCB
2,2',3,4,4',6'-HxCB

119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140

56558-17-9
68194-12-7
56558-18-0
76842-07-4
65510-44-3
70424-70-3
74472-39-2
57465-28-8
39635-33-1
38380-07-3
55215-18-4
52663-66-8
61798-70-7
38380-05-1
35694-04-3
52704-70-8
52744-13-5
38411-22-2
35694-06-5
35065-28-2
56030-56-9
59291-64-4

13

C12-2,2',4,5,5'-PeCB4

101L

104130-39-4

13
13

C12-2,2',4,6,6'-PeCB2
C12-2,3,3',4,4'-PeCB7

104L
105L

234432-89-4
208263-62-1

13

C12-2,3,3',5,5'-PeCB5

111
L

235416-29-2

C12-2,3,4,4',5-PeCB7

114
L

208263-63-2

13

C12-2,3',4,4',5-PeCB7

118
L

104130-40-7

13

C12-2',3,4,4',5-PeCB7

123L

208263-64-3

C12-3,3',4,4',5-PeCB2,7

126L

208263-65-4

C12-2,2',3,4,4',5'-HxCB4

138L

208263-66-5

13

13

13

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2,2',3,4,5,5'-HxCB
2,2',3,4,5,6-HxCB
2,2',3,4,5,6'-HxCB
2,2',3,4,5',6-HxCB
2,2',3,4,6,6'-HxCB
2,2',3,4',5,5'-HxCB
2,2',3,4',5,6-HxCB
2,2',3,4',5,6'-HxCB
2,2',3,4',5',6-HxCB
2,2',3,4',6,6'-HxCB
2,2',3,5,5',6-HxCB
2,2',3,5,6,6'-HxCB
2,2',4,4',5,5'-HxCB3
2,2',4,4',5',6-HxCB
2,2',4,4',6,6'-HxCB
2,3,3',4,4',5-HxCB6
2,3,3',4,4',5'-HxCB6
2,3,3',4,4',6-HxCB
2,3,3',4,5,5'-HxCB
2,3,3',4,5,6-HxCB
2,3,3',4,5',6-HxCB
2,3,3',4',5,5'-HxCB
2,3,3',4',5,6-HxCB
2,3,3',4',5',6-HxCB
2,3,3',5,5',6-HxCB
2,3,4,4',5,6-HxCB
2,3',4,4',5,5'-HxCB6
2,3',4,4',5',6-HxCB
3,3',4,4',5,5'-HxCB3,6
2,2',3,3',4,4',5-HpCB3
2,2'3,3',4,4',6-HpCB
2,2',3,3',4,5,5'-HpCB
2,2',3,3',4,5,6-HpCB
2,2',3,3',4,5,6'-HpCB
2,2',3,3',4,5',6-HpCB
2,2',3,3',4,6,6'-HpCB
2,2',3,3',4',5,6-HpCB
2,2',3,3',5,5',6-HpCB
2,2',3,3',5,6,6'-HpCB
2,2',3,4,4',5,5'-HpCB3
2,2',3,4,4',5,6-HpCB
2,2',3,4,4',5,6'-HpCB
2,2',3,4,4',5',6-HpCB
2,2',3,4,4',6,6'-HpCB
2,2',3,4,5,5',6-HpCB
2,2',3,4,5,6,6'-HpCB
2,2',3,4',5,5',6-HpCB3
2,2',3,4',5,6,6'-HpCB
2,3,3',4,4',5,5'-HpCB6

141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189

52712-04-6
41411-61-4
68194-15-0
68194-14-9
74472-40-5
51908-16-8
68194-13-8
74472-41-6
38380-04-0
68194-08-1
52663-63-5
68194-09-2
35065-27-1
60145-22-4
33979-03-2
38380-08-4
69782-90-7
74472-42-7
39635-35-3
41411-62-5
74472-43-8
39635-34-2
74472-44-9
74472-45-0
74472-46-1
41411-63-6
52663-72-6
59291-65-5
32774-16-6
35065-30-6
52663-71-5
52663-74-8
68194-16-1
38411-25-5
40186-70-7
52663-65-7
52663-70-4
52663-67-9
52663-64-6
35065-29-3
74472-47-2
60145-23-5
52663-69-1
74472-48-3
52712-05-7
74472-49-4
52663-68-0
74487-85-7
39635-31-9

C12-2,2',4,4',6,6'-HxCB2
C12-2,3,3',4,4',5-HxCB7
13C12-2,3,3',4,4',5'-HxCB7

155L
156L
157L

234432-90-7
208263-68-7
235416-30-5

C12-2,3',4,4',5,5'-HxCB7

167L

208263-69-8

C12-3,3',4,4',5,5'-HxCB2,7
13C12-2,2',3,3',4,4',5-HpCB

169L
170L

208263-70-1
160901-80-4

C12-2,2',3,3',5,5',6-HpCB5

178L

232919-67-4

C12-2,2',3,4,4',5,5'-HpCB

180L

160901-82-6

188L
189L

234432-91-8
208263-73-4

13

13

13

13

13

13

C12-2,2',3,4',5,6,6'-HpCB2
13C12-2,3,3',4,4',5,5'-HpCB2,7
13

96

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2,3,3',4,4',5,6-HpCB
2,3,3',4,4',5',6-HpCB
2,3,3',4,5,5',6-HpCB
2,3,3',4',5,5',6-HpCB
2,2',3,3',4,4',5,5'-OcCB
2,2',3,3',4,4',5,6-OcCB3
2,2',3,3',4,4',5,6'-OcCB
2,2',3,3',4,4',6,6'-OcCB
2,2',3,3',4,5,5',6-OcCB
2,2',3,3',4,5,5',6'-OcCB
2,2',3,3',4,5,6,6'-OcCB
2,2',3,3',4,5',6,6'-OcCB
2,2',3,3',5,5',6,6'-OcCB
2,2',3,4,4',5,5',6-OcCB
2,2',3,4,4',5,6,6'-OcCB
2,3,3',4,4',5,5',6-OcCB

190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
203
204
205

41411-64-7
74472-50-7
74472-51-8
69782-91-8
35694-08-7
52663-78-2
42740-50-1
33091-17-7
68194-17-2
52663-75-9
52663-73-7
40186-71-8
2136-99-4
52663-76-0
74472-52-9
74472-53-0

2,2',3,3',4,4',5,5',6-NoCB3

206 40186-72-9

2,2',3,3',4,4',5,6,6'-NoCB

207 52663-79-3

2,2',3,3',4,5,5',6,6'-NoCB

208 52663-77-1

DeCB3

209

2051-24-3

13

C12-2,2',3,3',4,4',5,5'-OcCB4 194L

208263-74-5

13

C12-2,2',3,3',5,5',6,6'-OcCB2 202L

105600-26-8

C12-2,3,3',4,4',5,5',6-OcCB2 205L
13C12-2,2',3,3',4,4',5,5',6206L
NoCB2

234446-64-1

13

13

C12-2,2',3,3',4,5,5',6,6'NoCB2
C12-DeCB2

208263-75-6

208L

234432-92-9

209L

105600-27-9

1. Abreviaciones para los niveles de cloracin:


MoCB monoclorobifenilos
DiCB diclorobifenilos
TrCB triclorobifenilos
TeCB tetraclorobifenilos
PeCB pentaclorobifenilos
HxCB hexaclorobifenilos
HpCB heptaclorobifenilos
OcCB octaclorobifenilos
NoCB nonaclorobifenilos
DeCB decaclorobifenilos
2. Congnere marcado que define el Nivel de cloracin
3. Congnere de inters para la National Oceanic and Atmospheric Administration (NOAA)
4. Estndar interno marcado
5. Estndar marcado de limpieza
6. Congnere considerado txico para la OMS
7. Congnere marcado de los considerados txicos por la OMS

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TABLA 4 COMPOSICIN DE CONGNERES INDIVIDUALES EN SOLUCIONES DE CALIBRACIN
COMERCIALES1
Identificacin de la Solucin de Accu-Standard
B2
C2
D2
No. de parte de Accu-Standard
M-1668A-1
M-1668A-2
M-1668A-3
M-1668A-4
2
7
13
25
10
5
17
21
9
12
29
69
6
18
20
47
8
24
46
42
14
23
65
64
11
28
59
70
30
22
40
102
27
39
67
97
32
53
76
115
34
51
80
123
26
73
93
134
31
48
84
131
33
62
101
163
36
71
112
180
38
68
86
125
35
58
116
110
50
61
107
126
45
55
154
155
52
60
147
138
49
94
140
169
75
100
146
188
41
91
141
189
72
121
164
202
57
90
158
205
63
99
182
208
66
109
174
206
79
117
173
209
78
111
193
81
108
96
118
103
114
95
150
88
145
89
135
92
149
113
139
83
132
119
165
87
168
85
137
82
160
120
128
124
162
106
157
122
184
105
186
A2

E2
M-1668A-5
1
3
4
15
19
16
37
54
43
44
74
56
77
104
98

98

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127
152
136
148
151
144
143
142
133
161
153
130
129
166
159
167
156
179
176
178
175
183
177
171
172
191
170
190
200
204
201
198
196
195
194
207

187
185
181
192
197
199
203

83

54

No. Total de congneres


29

15

28

1. Congneres presentes en cada solucin estndar se listan en orden de elusin para cada nivel de cloracin identificada
por su nmero IUPAC.

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TABLA 5 LMITES DE DETECCIN ESTIMADOS Y LMITES PRCTICOS DE CUANTIFICACIN
ESTIMADOS

Congnere No.
IUPAC
1
5
31
52
44
66
81
77
101
87
110
118
114
105
126
151
141
138
167
156
183
180
170
206

Lmites de Deteccin por Matriz


Extractos
Agua (pg/L)
Slidos (ng/kg)
(pg/L)
LDM
LPC
LDM
LPC
LPC
820
2000
80
200
100
110
500
100
500
200
1520
5000
150
500
200
1910
5000
190
500
200
1950
5000
190
500
200
1620
5000
160
500
200
1770
5000
180
500
200
1690
5000
170
500
200
2410
10000
240
1000
500
1490
5000
150
500
200
2430
10000
240
1000
500
1930
5000
190
500
200
1200
5000
120
500
200
1090
2000
110
200
100
1360
5000
140
500
200
1120
5000
110
500
200
930
2000
90
200
100
2110
5000
210
500
200
1150
5000
110
500
200
1320
5000
130
500
200
4010
10000
400
1000
500
1360
5000
140
500
200
1620
5000
160
500
200
4510
10000
450
1000
500

LDM = Limite de deteccin estimado


LPC = Limite Prctico de Cuantificacin
USEPA METHOD 1668 MOD.

100

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3.3 HIDROCARBUROS POLIAROMTICOS (HPAs), CLORDECON Y


PENTACLOROBENCENO
El principio de este mtodo se basa en la extraccin, purificacin y concentracin del extracto
purificado con objeto de la medicin de los HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno presentes en
el extracto orgnico purificado de la muestra inyectando una alcuota de 2 L en un cromatgrafo
de gases acoplado a un detector selectivo de masas que trabaja simultneamente en los modos
SIM y SCAN. La identificacin de los analitos se realiza por la comparacin de los espectros de
masas con los de la biblioteca estandarizada de la estacin de datos, las abundancias relativas de
los iones cualificadores y con los tiempos de retencin de los estndares certificados, su
cuantificacin se realiza por medio del mtodo de estndar interno.

NOTA: Este mtodo est basado en su desempeo, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeo especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parmetros que se especifiquen como NO MODIFICABLES. Los
trminos debe, puede y deber son mencionados a travs de los mtodos y estn destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del mtodo. El trmino debe es usado para indicar que los desarrolladores de este
mtodo encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.

PARMETROS NO MODIFICABLES

Cromatgrafo de Gases (Columnas Capilares).


Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultneo en modos SIM y SCAN.

3.3.1 Aplicacin y Alcances


3.3.1.1 Propsito.- Este mtodo se aplica para la identificacin y cuantificacin de los 16
HPAs, est diseado para ser altamente sensible y especfico.
3.3.1.2 Analitos.- Los Hidrocarburos Poliaromticos que pueden ser determinados por este
mtodo son:

Acenafteno
Acenaftileno
Antraceno
Benzo(a)antraceno
Benzo(a)pireno
Benzo(b)fluoranteno
Benzo(ghi)perileno
Benzo(k)fluoranteno
Criseno
Dibenzo(a,h)antraceno
Fenantreno
101

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Fluoranteno
Fluoreno
Indeno(1,2,3-cd)pireno
Naftaleno
Pireno
Clordecone
Pentaclorobenceno

3.3.1.3 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de los Hidrocarburos


Poliaromticos mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aire Ambiente
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterrneas
Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales
Sangre
Leche Materna

3.3.1.4 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden
variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentracin de las muestras e
interferencias presentes en el extracto purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas expertos en el uso de
cromatografa de gases y en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.

3.3.2 Resumen
AIRE AMBIENTE
Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio y
un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo a
una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h.
El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego
trasladarse al laboratorio para su anlisis. Los HPAs se recuperan por extraccin Soxhlet
con ter al 5% en hexano.
El volumen de los extractos se reduce con la tcnica Kuderna-Danish (K-D) y se someten a
una limpieza con cido sulfrico diseado especficamente para este tipo de anlisis.
Los extractos se someten a cromatografa de gases con detector selectivo de masas
(GC/MSD) en el modo SIM y SCAN simultneamente para la deteccin y cuantificacin de
HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno.
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Generalmente se alcanzan lmites de deteccin <1 ng/m3 con un periodo de muestreo de
24 horas.
AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales y
Subterrneas)
Este mtodo est diseado para muestras de agua sin contaminacin aparente (no aplica
para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia orgnica,
principalmente grasas y aceites).
Los analitos se extraen en 1 L de muestra a travs de una extraccin liquido-liquido. El
volumen de los extractos se reduce con la tcnica Kuderna-Danish (K-D) y se purifican por
cromatografa en columna. Se inyectan 2 L al GC/MSD en modo SIM/SCAN
simultneamente.
El tiempo total del anlisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los analitos
y las condiciones analticas que se escojan.
Los lmites de deteccin del mtodo se encuentran entre 0.005 a 0.01 g/L.
SUELOS Y SEDIMENTOS
Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con cloruro de metileno-acetona (1:1) con
ayuda un brazo ultrasonico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse al
extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraida y de los
analitos. Despus de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alcuota de 2 L en
el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.
.
Los lmites de deteccin con este mtodo varan de 1 a 10 g/Kg BS segn los
diferentes analitos en matrices libres de interferencias.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Una muestra de 10 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos slidos y 100 mL de
alimentos lquidos se extrae utilizando la tcnica de extraccin apropiada.
Los extractos para el anlisis de HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno se someten a una
limpieza en columna.
Despus de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alcuota de 2L en el
GC/MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.
SANGRE HUMANA
La muestra se extrae 3 veces con cloruro de metileno, despus se agrega sulfato de sodio
y se homogeniza por 3 minutos en cada extraccin. Los extractos se combinan, se hacen
pasar por una columna con sulfato de sodio y se concentran. Se realiza cambio de
disolvente a ciclohexano. La muestra se limpia por columna cromatogrfica con silica gel,

103

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se evapora el disolvente y se pasa a un vial para su anlisis por GC/MS SIM/SCAN
simultneamente.
LECHE MATERNA
Una alcuota de 10g de leche se extrae con una mezcla de metanol, cloruro de sodio y
cloroformo.
La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografa de exclusin molecular.
Los compuestos se determinan por GC-MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.

3.3.3 Procedimientos de Extraccin y Purificacin de muestras


Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una serie de estndares de
calibracin por medio del procedimiento para validar los patrones de elusin y la ausencia de interferencias de los
reactivos.
3.3.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del mtodo pueden originarse por la presencia de contaminantes en los
solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento
de la muestra (contaminacin cruzada).
El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio
enjuagndolo profundamente con el ltimo disolvente utilizado en l. Despus lvelo con
agua caliente y detergente y enjuguelo con agua corriente y grado reactivo. Escrralo,
squelo y enjuguelo con acetona. Despus de secarlo y enfriarlo, selle el material de vidrio
y gurdelo en un ambiente limpio para evitar acumulacin de polvo u otros contaminantes.
Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.
El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de
interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilacin en material de
vidrio. PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan los estabilizadores, lo que
puede hacerlo peligroso. Tambin pueden eliminarse conservadores, reducindose su vida
de anaquel.
Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas de los
analitos despus de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto, despus de
una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias veces hexano para
asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente muestra.
Es importante que las muestras y los estndares de trabajo se encuentren en el mismo
disolvente. El disolvente de trabajo para los estndares debe ser el mismo que el disolvente
final utilizado en la preparacin de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la
comparacin cromatogrfica entre los estndares y la muestra.
3.3.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los qumicos utilizados en este mtodo no ha sido
determinadas con precisin; de todas maneras; cada sustancia qumica debe ser tratada
como potencial peligro a la salud. La exposicin a estas sustancias qumicas debe ser
reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene

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ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos
resultados estn disponibles para los analistas.
PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo
peligroso.
Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo
de las normas de seguridad respecto a la exposicin y manejo seguro de las sustancias
qumicas especificadas en este mtodo. Debe tenerse un archivo de referencias de las
hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal
involucrado en estos anlisis.

3.3.3.3 Matrices
3.3.3.3.1 Aire Ambiente
3.3.3.3.1.1Equipo y Materiales
3.3.3.3.1.1.1 Equipos
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.3.3.3.1.2.1 Reactivos
Silica Gel malla 100/120 (Davison Chemical grado 923 o equivalente),
active la slica gel durante 16 horas a 130C antes de su uso.
Ciclohexano grado pesticida o equivalente
Pentano grado pesticida o equivalente
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.3.3.3.1.2.2 Materiales de referencia


3.3.3.3.1.2.2.1 Estndares de calibracin de HPAs, Pentaclorobenceno y Clordecone
Los HPAs son los ms comunes y se pueden conseguir como mezclas certificadas. El
pentaclorobenceno y Clordecone se pueden encontrar puro o en disoluciones
certificadas.
Compuesto
Acenafteno
Acenaftileno
Antraceno
Benzo(a)antraceno
Benzo(a)pireno

CAS
83-32-9
208-96-8
120-12-7
56-55-3
50-32-8
105

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Benzo(b)fluoranteno
Benzo(ghi)perileno
Benzo(k)fluoranteno
Criseno
Dibenzo(a,h)antraceno
Fenantreno
Fluoranteno
Fluoreno
Indeno(1,2,3-cd)pireno
Naftaleno
Pireno
Pentaclorobenceno
Clordecone (Kepone)

200-99-2
191-24-2
207-08-9
218-01-9
53-70-3
85-07-8
206-44-0
86-73-7
193-39-5
91-20-3
129-00-0

608-93-5
143-50-0

Los estndares deben utilizarse para preparar un mnimo de cinco


concentraciones por dilucin con hexano. Las concentraciones deben
corresponder al intervalo esperado de concentraciones que se
encontrarn en las muestras reales y deben ajustarse al rango linear del
detector.

Estndares internos

Se deben utilizar como estndares internos: Naftaleno-d5, Acenfteno-d10,


Fenantreno-d10, Criseno-d12 y Perileno-d12.

Estndares surrogados

Se deben utilizar el como estndar surrogado: p-terfenilo-d14


3.3.3.3.1.3 Procedimiento de Extraccin
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.1.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras
La silica gel (cido silcico) es un adsorbente de silica regenerable con propiedades
ligeramente cidas se puede activar con calentamiento o desactivar con la adicin
de agua.
Al extracto obtenido en la extraccin se debe intercambiar el hexano por
ciclohexano; para ello en un micro KD agregue 4 mL de ciclohexano y concentre a
1-2 mL (NOTA: No deje que el volumen de ciclohexano disminuya a menos de 1 mL
o se perdern los HPAs de bajo peso molecular).
Prepare una masa con 10 g de silica gel y cloruro de metileno y colquelo en la
columna, asiente con algunos pequeos golpes el relleno y agregue 1 o 2 cm de
sulfato de sodio anhidro en la parte superior de la columna.
Pre-eluya la columna con 40 mL de pentano a un flujo de 2 mL/min. Descarte el
eluato y justo antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, transfiera

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cuantitativamente el extracto de la muestra a la columna, enjuague el tubo del
extracto con 2 mL de ciclohexano.
Antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, lave la columna con 25
mL de pentano, deseche el eluato.
Eluya la columna con 25 mL de cloruro de metileno/pentano (2:3 v/v) y colecte el
eluato en un matraz de 50 mL.
Concentre el eluato identificado en el concentrador a 1 mL (NOTA: No deje que el
volumen de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perdern los HPAs de bajo
peso molecular).

3.3.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales


epicontinentales y subterrneas)
3.3.3.3.2.1 Equipo y Materiales
VER PARA AIRE AMBIENTE Y PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.3.3.3.1.2.2
3.3.3.3.2.3 Procedimientos de Extraccin
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.2.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras
VER PROCEDIMIENTO EN 3.3.3.3.1.4

3.3.3.3.3 Suelos
3.3.3.3.3.1 Equipo y Materiales
VER PARA AIRE AMBIENTE Y PLAGUICIDAD CLORADOS

3.3.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia


VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.3.3.3.1.2.2

3.3.3.3.3.3 Procedimientos de Extraccin


VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.3.3.3.3.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras


VER PROCEDIMIENTO EN 3.3.3.3.1.4

3.3.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)


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3.3.3.3.4.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.3.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia


VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.3.3.3.4.3 Procedimientos de Extraccin


VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS

3.3.3.3.4.4 Procedimientos de Purificacin de Muestras


VER PROCEDIMIENTO EN 3.3.3.3.1.4

3.3.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos


animales,
3.3.3.3.5.1 Tejidos y alimentos con grasa ( 2% GRASA)
3.3.3.3.5.1.1 LECHE
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final es
de 1 mL)
3.3.3.3.5.1.2 QUESO, YEMA DE HUEVO O HUEVO
DESHIDRATADO
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final es
de 1 mL)
3.3.3.3.5.1.3 MANTEQUILLA
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final es
de 1 mL)
3.3.3.3.5.1.4 HIGADO
Se toman 10 g de muestra y se adicionan de 20 a 50 g de sulfato de
sodio anhidro, se mezcla perfectamente hasta que se tenga la
apariencia de un polvo uniforme sin la presencia de grumos.
El brazo sonicador debe lavarse con agua, metanol y cloruro de
metileno por 3 minutos en ese orden.
A la muestra se le adiciona 100 mL de cloruro de metileno, colocar la
muestra en el brazo sonicador y extraer durante 3 minutos.
El extracto de la muestra se decanta y se filtra atraves de un embudo
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que contiene 10 g de sulfato de sodio (previamente humedecido con
cloruro de metileno).
La extraccin se repite 2 veces mas con alicuatas de 100 mL de
cloruro de metileno durante 3 minutos. Los extractos obtenidos se
hacen pasar por el embudo con sulfato de sodio y se mezclan.
Se lleva a cabo una reduccion de volumen en un matraz KD a un
volumen de aproximadamente 2mL a una temperatura de 70C, en
ese momento se le adiciona 2 mL de hexano, seguir concentrando
hasta un volumen aparente de 2 mL.
3.3.3.5.1.4.1 Procedimeinto de purificacin de muestras
Una columna cromatografica de 30 cm x 1,1 cm ID se enjuaga tres
veces con aproximadamente 5 mL de metanol, seguido de 3
enjuagues de aproximadamente 5 mL de cloruro de metileno. Se
taponea la punta de la columna con una pequea cantidad de fibra de
vidrio y se adiciona 30 mL de cloruro de metileno posteriormente se
adiciona 2 cm de arena calcinada (400C por 4 horas).
La alumina (oxido de aluminio) grado cromatografico calcinada
(400C por 4 horas y a 120C antes de su uso) es desactivada con
agua (10 g de alumina se le adiciona 0.1 mL de agua desionizada y
se agita por lo menos 1 hora).
Silica 100/200 (170C 24 horas antes de su uso) se desactiva con
agua a 20 g de silica se le adiciona 1 mL de agua desionizada y se
agita por lo menos una hora.
Para la preparacin de la columna se adiciona lentamente la alumina
dando ligeros golpes en la columna de vidrio para asegurar su
empacado. A la silica despus de su desactivacion se adiciona
cloruro de metileno hasta formar una mezcla homonea tipo gel,
adicionar lentamente e ir drenando el cloruro de metileno.
En la parte superior de la silica se adicionan aproximadamente 2 cm
de sulfato de sodio, se eluye el cloruro de metileno y se adicionan los
2 mL del extracto antes de que se seque el sulfato de sodio. Se hace
pasar una mezcla de pentano-cloruro de metileno 50:50 v/v (200 mL)
y se concentra en KD a un volumen final de 1 mL a 60-65C.
3.3.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO
VER PROCEDIMIENTO DE 3.3.3.3.5.1.4
3.3.3.3.5.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA
3.3.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5% azucares)
3.3.3.3.5.2.1.1 Lechugas, biota vegetal, etc.

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VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo
final es de 1 mL)
3.3.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo
final es de 1 mL)
3.3.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios ( > 75% agua y 5-15% de
azucares)
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo
final es de 1 mL)
3.3.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo
final es de 1 mL)
3.3.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad ( 75% agua)
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final
es de 1 mL)

3.3.3.3.6 Sangre Humana


3.3.3.3.6.1 Equipos y Materiales
Columna de cromatografa 7 mm ID x 200 mm, de 50 mL con llave
Tubos concentradores kuderna de 25 mL
Embudo de separacin
Vasos de precipitados
3.3.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los disolventes que requiere el mtodo deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa se
indique.
Silica Gel malla 100/120 (Davison Chemical grado 923 o equivalente),
active la slica gel durante 16 horas a 130C antes de su uso.
Diclorometano
Sulfato de sodio
Ciclohexano grado pesticida o equivalente
Pentano grado pesticida o equivalente
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3.3.3.3.6.3 Procedimientos de Extraccin


A 5 mL de sangre se le agrega un anticoagulante y se congela hasta su uso.
En un embudo de separacin se colocan 5 mL de sangre y se le realizan 3 extracciones
con cloruro de metileno. Los extractos se unen homogenizndolos y posteriormente se
hacen pasar por una columna que tenga 10 cm de sulfato de sodio anhidro y este es
transferido a un Kuderna-Danish, se aaden piedras de ebullicin y se concentran los
extractos en un bao maria a una temperatura de 60-65 C. hasta que se tenga un
volumen aparente de 1 mL. Despus se aaden 4 mL de ciclohexano seguido de una
reduccin de volumen de 1-2 mL en el Kuderna-Danish (NOTA: No deje que el volumen
de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perdern los HPAs de bajo peso
molecular).
3.3.3.3.6.4 Procedimientos de Purificacin de las Muestras
Prepare una masa con 10 g de silica gel y cloruro de metileno y colquelo en la
columna, asiente con algunos pequeos golpes el relleno y agregue 1 o 2 cm de sulfato
de sodio anhidro en la parte superior de la columna.
Pre-eluya la columna con 40 mL de pentano a un flujo de 2 mL/min. Descarte el eluato
y justo antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, transfiera
cuantitativamente el extracto de la muestra a la columna, enjuague el tubo del extracto
con 2 mL de ciclohexano.
Antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, lave la columna con 25 mL
de pentano, deseche el eluato.
Eluya la columna con 25 mL de cloruro de metileno/pentano (2:3 v/v) y colecte el eluato
en un matraz de 50 mL.
Concentre el eluato identificado en el concentrador a 1 mL (NOTA: No deje que el
volumen de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perdern los HPAs de bajo peso
molecular).

3.3.3.3.7 Leche Materna


3.3.3.3.7.1 Equipo y Materiales
Resina Bio-Beads S-X3. Se utiliza para la separacin de polmeros
lipoflicos y compuestos hidrofbicos de bajo peso molecular, mediante
cromatografa de permeacin en gel.
3.3.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Cloruro de sodio grado analtico
Sulfato de sodio anhidro grado analtico

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Agua grado HPLC
Cloruro de metileno grado HPLC
3.3.3.3.7.3 Procedimientos de Extraccin
En un embudo de separacin se adiciona 10g de leche y la mezcla de estndares
internos, se extrae, una vez con 42mL de CHCl3/CH3OH/NaCl al 0.7% 2:1:0.5 (v/v/v) y
dos veces con 12 mL de CHCl3. Los extractos obtenidos en cada ocasin son
mezclados y tratados con 100mL de una disolucin acuosa de NaCl al 0.7%, y
posteriormente se pasan por una columna de sulfato de sodio anhidro.
La fase orgnica se evapora hasta la obtencin de la grasas.
3.3.3.3.7.4 Procedimientos de Purificacin de las Muestras
Las grasas son disueltas en 4mL de CH2Cl2 y sometidas a cromatografa de exclusin
molecular en una resina Bio-Beads S-X3 utilizando cloruro de metileno como eluyente,
a una velocidad de 5mL/min.
fraccin obtenida se evapora en rotavapor hasta un volumen de 5mL y posteriormente
se lleva hasta 100L bajo una de nitrgeno.
El extracto se analiza por GC/MSD SIM y SCAN simultaneo.
3.3.4 MTODO DE IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN INSTRUMENTAL
3.3.4.1 Aplicacin y Alcances
3.3.4.1.1 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de HPAs, Clordecone y
Pentaclorobenceno en los extractos purificados de aguas naturales, residuales
municipales e industriales, as como suelo, residuos, sedimentos, organismos,
tejidos y alimentos, los extractos y su purificacin depende de la matriz analizada,
se deben seguir los procedimientos de extraccin y purificacin adecuados para
cada matriz.
3.3.4.1.2 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que
pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentracin de las
muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas expertos en
el uso de cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas y en la interpretacin
de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados
aceptables con este mtodo.
3.3.4.2 Resumen
El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografa de Gases acoplado a
espectrometra de masas con la capacidad de trabajar en los modos SIM y SCAN simultneamente, en caso
de que se detecte algn HAP, Clordecone y Pentaclorobenceno mediante los tiempos de retencin (Tr)
coincidentes con los de los estndares respectivos y por el espectro de masas en modo SCAN coincidente con
el de la biblioteca estandarizada del sistema de manejo de datos y con el ion cuantitativo y los 2 iones
cualificadores con sus respectivas reas proporcionales obtenidas de los estndares de la curva de calibracin

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en el modo SIM, se cuantifica mediante el mtodo de estndar interno, en caso de que se cumplan los Tr pero
no exista coincidencia entre las proporciones de los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la
identificacin, en caso de que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se trata de algn
pico interferente y no se reportan los resultados como positivos a HPAs, Pentaclorobenceno o Clordecone.
3.3.4.3 Equipos y Materiales
3.3.4.3.1 Equipo
Cromatgrafo de gases Sistema analtico completo con cromatgrafo de
gases con programacin de temperatura para tcnica de inyeccin splitsplitless con control electrnico de presin (Agilent 7890 o equivalente).

Espectrmetro de masas capaz de realizar barridos de 35 a 500 uma por


segundo o menor, usando una fuente de ionizacin de impacto electrnico
con energa de 70 electrn volts. El espectrmetro debe ser capaz de
producir una espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolucin de
decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios
mencionados en la seccin de control de calidad (Agilent 5975 o
equivalente).

Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este


sistema debe ser capaz de tener una adquisicin y almacenamiento
continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa
cromatogrfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las seales de los
compuestos eludos de la columna capilar del GC

Balanza analtica con precisin de 0.0001 g.


3.3.4.3.2 Materiales
Columna capilar de slica fundida HP-5MS (Crosslinked 5% fenil metil
siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de dimetro y 0.25 m de pelcula
de espesor o equivalente.
Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o
equivalente.
Microjeringa de 25 L, marca Hamilton 702N, No. parte 9301-0022 o
equivalente.
Microjeringa de 500 L, marca Hamilton 750N, No. parte 9301-0034 o
equivalente.
Matraces volumtricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapn esmerilado.
Viales de vidrio con tapa de politetrafluoroetileno (PTFE) de rosca marca
Agilent o equivalente.
Insertos de vidrio para puerto de inyeccin marca Agilent o equivalente.

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Septa color gris para bajo flujo, marca Agilent o equivalente.
O-ring de vespel marca Agilent o equivalente.
3.3.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.3.4.4.1 Reactivos y disoluciones
VER PROCEDIMIENTO PARA BIFENILOS POLICLORADOS
3.3.4.4.2 Materiales de referencia
Los patrones pueden ser estndares puros o adquirirse como disoluciones certificadas
(patrones de referencia).
3.3.4.4.2.1 Disoluciones
Disolucin patrn (50 mg/L)
A la disolucin de los HPAs, Pentaclorobenceno y Clordecone se deben
incluir el Naftaleno-d5, Acenfteno-d10, Fenantreno-d10, Criseno-d12 y
Perileno-d12. como estndares internos y el p-terfenilo-d14 como estndar
surrogado.
Disoluciones de calibracin
Prepare 5 niveles como mnimo de diferente concentracin de las
disoluciones estndar para cada analito de inters en matraces volumtricos.
Para cada disolucin estndar de calibracin, adicione una cantidad conocida
de los compuestos a analizar y lleve al aforo con el solvente apropiado. El
punto de concentracin ms bajo de la curva de calibracin debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarn definidas por el intervalo lineal del detector.
Estndar de calibracin de 0.5 mg/L. En un matraz aforado de 1 ml ponga 10
L de la solucin de mg 50 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta
disolucin en viales de 2 mL y rotule con etiqueta que contenga mtodo,
fecha de preparacin, concentracin, solvente utilizado, persona que lo
prepar.
Estndar de calibracin de 1,0 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 20 L de
la solucin de 50 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolucin
en viales de 2 ml y ponga etiquetelos.
Estndar de calibracin de 2,5 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 50 L de
la solucin de 50 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolucin
en viales de 2 ml y ponga etiquetelos.
Estndar de calibracin de 5 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 100 L
de la solucin de 50mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta
disolucin en viales de 2 mL y ponga etiquetelos.
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Estndar de calibracin de 10 mg/L. En un matraz aforado de 1 ml ponga 200
L de la solucin de 50 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde la
disolucin en viales de 2mL y ponga etiquetelos.

3.3.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo


Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de control de
calidad (CC) formal. Los requerimientos mnimos de este programa consisten en una
demostracin inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de
desempeo del mtodo, adems realizar anlisis continuos de muestras de control de calidad
(MCC) para demostrar la precisin y exactitud continuas y el anlisis de blancos. El desempeo
del laboratorio debe compararse con los criterios aqu establecidos, con objeto de determinar si
los resultados de los anlisis cumplen con las especificaciones de desempeo del mtodo. El
analista debe hacer una demostracin inicial de su habilidad para generar una exactitud y
precisin aceptables por este mtodo.
Cada vez que se realice una modificacin al mtodo o que se cambie el analista responsable de
llevar a cabo est determinacin, el analista designado debe repetir la validacin del mtodo, si el
cambio va a afectar el lmite de deteccin del mtodo (LDM), el laboratorio debe demostrar que el
nuevo LDM determinado es igual o ms bajo que el anterior para los analitos de inters.
No se permite el uso de tcnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la
ejecucin del mtodo. Si se utiliza una tcnica analtica que no sea la especificada en este
mtodo, dicha tcnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la tcnica
descrita en este documento para el analito de inters.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este
mtodo. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificacin por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al mtodo para ese
analito.
- Los nombres, ttulos, direcciones y nmero de telfono de los analistas que ejecutaron los
anlisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenci y verific los
anlisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del mtodo modificado comparadas con el
mtodo original, dichos datos deben de incluir todos los parmetros mencionados en la
seccin de desempeo del mtodo.
- La informacin escrita en las bitcoras tanto del equipo como del analista, deben incluir
los siguientes datos:

Identificacin de la muestra
Nmero del lote analtico en el cual se analiz la muestra
Fecha del anlisis
Procedimiento cronolgico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Nmero de muestras de control de calidad analizadas en el lote
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Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin
Registros de bitcoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
informacin
Informacin cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados del lote analtico.
3.3.4.5.1 Verificacin del equipo
El criterio de resolucin es tal que la profundidad del valle entre dos picos adyacentes en la
mezcla de verificacin de resolucin debe ser mayor o igual a 60.0% de la altura del pico
ms corto.
3.3.4.5.1.1 Verificacin de la sintona del espectrmetro de masas (Autotune)
Realice una autosintona (autotune y DFTPP tune), siguiendo las actividades
descritas en el instructivo de la calibracin del espectrmetro de masas
correspondiente. Esta es una autosintona (autotune) que hace el instrumento
con respecto a una sustancia de referencia llamada Perfluorotributilamina PFTBA
Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las causas y corrija
el problema, de acuerdo al instructivo de mantenimiento preventivo del
instrumento, documente las incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el
expediente del sistema GC/MS.
Especificaciones para el autotune
Masa
69
219
502

Especificacin
100%
30% respecto a la masa 69
1% respecto a la mas 69

3.3.4.5.1.2 Verificacin del Sistema (sintona del MS con DFTPP) de acuerdo a


las especificaciones el mtodo.
Inyecte 2 L de la disolucin de DFTPP segn las condiciones instrumentales
anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP.
Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios
ION MASICO

CRITERIO DE ABUNDANCIA RELATIVA DE IONES


MASICOS DE LA DFTPP

51

30 A 60% de la masa 198

68

< 2% DE LA MASA 69

70

< 2 % DE LA MASA 69

127

40 A 60 % DE LA MASA 198

197

<1% DE LA MASA 198

198

PICO BASE 100 %

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199

5 A 9% DE LA MASA 198

275

10 A 30 % DE LA MASA 198

365

> A 1 % DE LA MASA 198

441

PRESENTE PERO MENOR QUE LA MASA 443

442

> 40% DE LA MASA 198

443

17 A 23 % DE LA MASA 442

Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones anteriores


ser necesario que revise los parmetros de sintona del espectrmetro, repita
nuevamente la sintona (autotune y DFTPP tune ) e inyecte nuevamente la
disolucin de DFTPP.
Verifique que el sistema GC/MS est libre de contaminacin (nivel seal-ruido)
Realice un blanco electrnico bajo las condiciones instrumentales del mtodo. El
blanco electrnico como su nombre lo dice es una corrida electrnica
exclusivamente (sin inyeccin alguna), y ste debe estar libre de picos o en su
defecto stos debern ser no mayores a 5 veces el ruido.
En caso de no cumplir con lo mencionado en la seccin anterior, eleve las
temperaturas tanto de la columna a 300 C, del puerto de inyeccin a 280 C y
del detector a 300 C, mantenga el sistema bajo stas condiciones de
temperatura por 30 min y realice nuevamente el blanco electrnico. En caso de
persistir el problema lleve a cabo las acciones de limpieza del instrumento
mencionadas en el instructivo de mantenimiento preventivo correspondiente.
Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatogrficas sean las
adecuadas, segn se menciona posteriormente.
3.3.4.5.1.3 Verificacin del Funcionamiento del Sistema GC/MS (SPCCs)
De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la degradacin del DDT
(compuesto incluido en la disolucin SPCCs) a DDE y DDD, la suma de las
respuestas del DDE y DDD no deben exceder del 20% con respecto a la
respuesta del DDT.
La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus respuestas normales
(ms menos 50%) y como picos bien definidos y sin coleo. Si la degradacin es
excesiva y/o dan pobre respuesta cromatogrfica, revise el puerto de inyeccin y
lmpielo, cambie el liner, sello dorado y si es necesario que corte los primeros 5 a
10 cm de la columna capilar en el extremo que conecta al puerto de inyeccin.
3.3.4.5.2 Verificacin de la calibracin inicial.
La curva de la calibracin inicial deber realizarse inyectando los estndares de calibracin
preparados y se considera lineal, si el por ciento de la desviacin estndar relativa (%RSD)
de los factores de calibracin (CF) es menor o igual al 20%, los clculos se realizan con las
siguientes ecuaciones:

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CF

Total de rea
Masa inyectada en nanogramos
% RSD

SDCF
x100
CF

Donde:
SDCF= Desviacin estndar de los factores de calibracin
CF = Promedio de los factores de calibracin
La verificacin de la calibracin inicial puede tambin efectuarse mediante la regresin por
mnimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptacin es que el factor de correlacin "r 2"
sea mayor o igual a 0.997.
Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisin del sistema
cromatogrfico y la preparacin de las disoluciones de calibracin.
Posteriormente la curva de calibracin ser vigente, si el anlisis de un punto intermedio de
la curva no presenta una variacin de la concentracin mayor al 15% y que ser calculada
de la siguiente manera.

Diferencia de concentraciones % D

CC CT
x100
CT

Donde
CC= concentracin calculada
CT= concentracin terica
O si se utiliza el factor de calibracin

Diferencia porcentual %

CFv CF
x100
CF

Donde:
CFv= Es el factor de calibracin de cada compuesto en el estndar de
verificacin.
CF = Es la media del factor de calibracin del compuesto de la calibracin
inicial.
Si el criterio de aceptacin para la diferencia porcentual es mayor al 15% se proceder a la
revisin del sistema cromatogrfico y a la preparacin de la solucin estndar utilizada.
3.3.4.5.3 Verificacin de contaminacin de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningn tipo de contaminante al tiempo de
retencin de los analitos medidos, por lo que es importante que los reactivos utilizados
cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe localizar la fuente de
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contaminacin y extraer y analizar nuevamente las muestras asociadas al blanco contaminado
Use tambin los blancos de reactivos para verificar la contaminacin por arrastre de muestras con
altas concentraciones en anlisis secuenciales
3.3.4.5.4 Verificacin del lote analtico
Por cada lote analtico de muestras analice al menos una muestra sinttica de control de
calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la misma matriz de las
muestras analizadas en el lote analtico, calcule el % de recuperacin de cada analito y
surrogados de la muestra control, los cuales debern estar dentro del 80 a 120 %R. De no
ser as se debe revisar la preparacin de la muestra control y el sistema cromatogrfico.
Realizar la correccin necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se
deben reanalizar todas las muestras del lote analtico.
3.3.4.5.5 Verificacin de interferencias de matriz
La verificacin de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo mediante las
muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el anlisis de muestras fortificadas
(MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una muestra por cada lote analtico o
preferentemente una muestra de cada tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras
fortificadas se deben analizar cuando por las caractersticas de la muestra se sospeche de
interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un
proyecto.
Efecto de la matriz en el recobro del analito Muestras fortificadas (MF): Analice las
muestras fortificadas:
Calcule el por ciento de recobro
El % de Recobro debe estar dentro de 70 a 130 %R.
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analtico est fuera de
control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y
acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado analtico.
Efecto de la matriz en la precisin del analito Precisin de la matriz duplicada (MD):
Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la duplicada para
cada analito, con la siguiente ecuacin:

DPR

C1 C 2
x 200
C1 C 2

Donde:
C1= Concentracin de la primera muestra
C2= Concentracin de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser: <20%
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Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est fuera de
control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y
acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado analtico.
Repita el anlisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provoc que
la prueba del DPR fallara.
3.3.4.5.6 Verificacin de la estabilidad de la curva de calibracin
En cada lote analizado, si ms de 20 muestras van a ser analizadas durante el da,
verifique la curva de calibracin analizando un estndar de concentracin media del
intervalo de trabajo al principio del lote y despus de cada 20 muestras 12 horas de
anlisis continuo.
Calcule el factor de calibracin o la concentracin para cada analito del estndar de
concentracin media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la siguiente ecuacin:

Diferencia porcentual

FC1 FC2
FC1

x100

Donde:
FC1 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en la curva de
calibracin, o la concentracin nominal de del estndar de verificacin.
FC2 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en el estndar de
concentracin media, o la concentracin calculada en el estndar de
verificacin.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deber ser menor al 15%, de no ser as
verifique su vigencia, revis tambin el sistema cromatogrfico y determine la causa de la
falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre nuevamente el sistema y en le caso de
que la falla del estndar de verificacin sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las
10 muestras anteriores al estndar de verificacin que fall.
3.3.4.5.7 Verificacin de estndares surrogados.
Evale los datos de recobro de los surrogados de las muestras.
Calcule el % de recuperacin de los estndares surrugados en blancos, muestras control,
muestras adicionadas (si se realizaron), muestras duplicadas (si se realizaron) y muestras
reales, con la siguiente ecuacin:

Re cuperacn % R

C1
x100
C2

Donde:
C1=Concentracin calculada de surrugados en la muestra.
C2=Concentracin nominal del surrugado adicionado a la muestra.
El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperacin de no ser as verifique la
preparacin de la muestra que fallo y el sistema cromatogrfico, determine la causa de la
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falla y corrija, de no encontrarla, repita la extraccin de la muestra y vuelva a analizar si el
%R esta fuera del rango de aceptacin llene hoja de incidencia y reporte como interferencia
de matriz y los resultados obtenidos.
Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y corrija el problema,
documente las incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del
resultado analtico.
3.3.4.5.8 Verificacin de estndares internos.
Compare el rea de el o los estndares internos de las muestras con el rea promedio de
los estndares internos obtenidos de los puntos de calibracin, el valor obtenido en el o los
estndares internos de la muestra no deben ser menores a 50% ni mayores a 200% del
valor promedio obtenido en la curva de calibracin para cada estndar interno.
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est fuera de control,
determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones
correctivas e inclyalas en el expediente del resultado analtico.
3.3.4.5.9 Control de Calidad Estadstico En esta seccin se especifica como debe
realizarse el control de calidad estadstico obligatorio para este mtodo:
3.3.4.5.9.1 Preparacin de las Muestra de Control de Calidad (MCC) Prepare las
MCC de la siguiente forma:
Se deber preparar la MCC de una fuente diferente a la utilizada en la curva de
calibracin.
Prepare una disolucin a una concentracin que corresponda al rango de trabajo
del mtodo.
.
NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea conocido por
el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la medicin
3.3.4.5.9.2 Grficas de Control de Exactitud El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las grficas de control de exactitud para cada lote analizado
a partir de la demostracin inicial de desempeo.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deber graficarse y
deber estar dentro de los lmites de control superior e inferior ( 3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, debern rechazarse todos los resultados del lote
analtico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las
incidencias y acciones correctivas, deber repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.3.4.5.9.3 Grficas de Control de Precisin El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las grficas de control de precisin para cada lote analizado
a partir de la demostracin inicial de desempeo

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Determine los lmites de control de la siguiente forma:
Lmite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Lmite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisin es mayor al LSC, debern rechazarse todos los resultados
del lote analtico, determine las causas del problema y corrija los errores,
documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deber
repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.3.4.5.10 Validacin de modificaciones del mtodo o de mtodos alternos.
Para validar las modificaciones que se efecten a este mtodo o para la utilizacin de
mtodos alternos deber seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente mtodo, debern validarse.
Si se utiliza un mtodo alterno cuya fuente sea un mtodo estandarizado por alguna
Institucin de carcter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA,
AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) tambin deber validarse
parcialmente.
Si se utiliza algn mtodo no estandarizado, deber evidenciarse, adems de los
parmetros de la validacin parcial, los parmetros de Robustez, Reproducibilidad y
Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeo de todo el sistema analtico utilizando los datos
recolectados de anlisis de blancos reactivos, solucin verificadora del desempeo del
laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algn analito a comparacin de los cromatogramas del
mtodo, ste deber corregirse. Los problemas de coleado generalmente pueden
rastrearse a sitios activos en la columna cromatogrfica, problemas en la instalacin de la
columna o mala operacin del detector.
Verifique la precisin con rplicas del anlisis. Una pobre precisin generalmente puede
deberse a fugas, especialmente en el puerto de inyeccin. Si el sistema cromatogrfico se
est comportando aparentemente bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario
generar una nueva curva o juego de factores de calibracin para verificar las respuestas
bajas antes de buscar la fuente del problema.
3.3.4.5.11 Composicin del lote analtico (para cada 25 muestras 12 horas de anlisis
continuo)

1
2

Calibracin con PFTBA (Autotune)


Calibracin con PFTBA (DFTPP)

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6
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8
9
10
11
12
13
14

anlisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture)


Blanco electrnico
Mezcla de Verificacin
Blanco de Reactivos
Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
Muestra real No. 1
Muestra real No. 2
Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de anlisis continuo)
Muestra fortificada (si se realizo)
Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
Muestra de Verificacin de la Calibracin Continua.
Siguientes 20 muestras reales

3.3.4.5.12 Criterios de Aceptacin y Rechazo


Verificacin del Equipo

Punto de verificacin

Criterio

Equipo libre de interferencias (blanco


electrnico)

No deber presenta picos a cualquier


tiempo de retencin
Cumple con especificaciones del
fabricante
Cumple con abundancias
especificadas en el mtodo
Degradacin del DDT menor al 15%,
no coleo de Bencidina y PCP

Autotune
DFTTP tune
Puerto de inyeccin libre de suciedad y baja
degradacin

Verificacin de la Calibracin Inicial

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin del % Diferencia de la concentracin


de la Mezcla de Verificacin, punto intermedio de
la curva de calibracin.

Menor al 15%

Verificacin de Contaminacin de Reactivos

Punto de verificacin

Criterio

Blanco de reactivos

No deben presentar ningn tipo de


contaminante al tiempo de retencin
de los analitos medidos

Verificacin del Proceso Analtico

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Punto de verificacin

Criterio

Muestra de control de calidad

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de estndares Surrogados

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de muestras adicionadas duplicadas

% DSR < 20%

Verificacin de Interferencias de Matriz

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de muestras adicionadas

% de Recuperacin 70 / 130

Estabilidad de la Curva de Calibracin

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de la Estndar de Verificacin


(Intermedio)

% de diferencia menor al 15%

3.3.4.6 Calibracin
Se necesitan al menos 5 estndares de calibracin. Uno debe contener analitos a una
concentracin cercana, pero superior a la del lmite prctico de cuantificacin para cada analito;
los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las muestras. Por
ejemplo, si el LDM es 0.01g/L y el LPC es de 0.05 g/L, se espera que la muestra contenga
concentraciones mayores de 0.05 g/L.
Una vez establecidas las condiciones de operacin inyecte un volumen adecuado (2 L) de cada estndar de
calibracin por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y agrguelo a la tabla de
calibracin del mtodo.
Si la DSR de cada HAP es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el
factor de calibracin promedio FC puede utilizarse para la cuantificacin de los resultados de las
muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la
curva de calibracin.
Si se utiliza regresin lineal por mnimos cuadrados, deber obtener el factor de correlacin r2 para
cada analito, el cual deber ser mayor o igual a 0.997 si r es menor a este valor, la curva de
calibracin no es lineal y deber verificarse la preparacin de los estndares de calibracin y el
sistema cromatogrfico y repetir la calibracin.
3.3.4.6.1 Calibracin por Estndar Interno:
El analista debe seleccionar uno o ms estndares internos que sean similares en
comportamiento analtico a los compuestos de inters. El analista debe adems
demostrar que la medicin del estndar interno no es afectada por el mtodo o
interferencias de la matriz.
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Prepare los estndares de calibracin a un mnimo de cinco concentraciones para
cada analito de inters por adicin de volmenes. Para cada estndar de calibracin,
adicione una cantidad conocida constante de uno o ms estndares internos y afore
con un solvente apropiado. Uno de los estndares debe estar a una concentracin
cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al
rango de trabajo.
Inyecte cada estndar de calibracin. Tabule la altura del pico o el rea de respuesta
contra la concentracin de cada compuesto y el estndar interno. Calcule el factor de
respuesta (RF) para cada compuesto como sigue:

RF

As * Cis
Ais * Cs

Donde:
As = Respuesta para el analito que ser medido.
Ais = Respuesta del estndar interno.
Cis = Concentracin del estndar interno, g/L.
Cs = Concentracin del analito a ser medido, g/L.
Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede
usarse para clculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una
curva de calibracin de la relacin de respuesta, As/Ais contra RF.
3.3.4.7 Procedimiento Analtico
3.3.4.7.1 Anlisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatogrficas:
Gas acarreador
Temperatura inicial
Tiempo inicial
Programa 1
Temperatura final 1
Programa 2
Temperatura final 2
Temperatura del inyector
Temperatura del detector
Modo splitless
Flujo de split
Purga de septa

Helio
50 C
3 min
8C/min
180C
15C/min
300C 6 minutos
250C
300C
0.3 min
20 mL/min
2 mL/min

Adicione un volumen de la mezcla de estndares internos, de manera que la concentracin


de estos en el vial sea igual a la concentracin que se utilizo en la preparacin de la curva
de calibracin.
Elabore la secuencia de anlisis de acuerdo a lo indicado en el punto de composicin del
lote analtico.

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Inicie el anlisis.
Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estndar en el cromatgrafo de
gases. Registre el volumen final del extracto.
Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y criterios de
aceptacin y rechazo.
Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de
calibracin, diluya el extracto y reanalice.
3.3.4.7.2 Identificacin de los analitos
La determinacin cualitativa de cada compuesto determinado por este mtodo est basada
en la comparacin del tiempo de retencin y de los espectros de masas de las muestras,
con los tiempos y iones caractersticos de los espectros de masas de los estndares de
referencia en modo SCAN. Los espectros de masas de referencia en modo SIM estn
definidos por tres iones de mayor intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los
compuestos son identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:
El tiempo de retencin relativo TRR del compuesto detectado es 0.5 unidades del TRR del
estndar de referencia.
La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren dentro del
30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de referencia (ejemplo:
para un ion con abundancia del 50% en el espectro de referencia, la abundancia en el
espectro de la muestra debe encontrarse en el intervalo de 20% y 80%)
Los iones que estn presentes en el espectro de la muestra y que no estn en el espectro
del estndar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede tratarse de contaminacin
de fondo o coelusin de otros compuestos.
Si hay iones que estn presentes en el espectro del estndar y no estn presentes en la
muestra, debe someterlo a revisin ya que stos pueden haberse perdido por posibles
sustracciones en el momento de limpiar los espectros
Para muestras que contienen componentes que no estn asociados con los estndares de
calibracin, realice una bsqueda por librera para obtener una identificacin y a partir de
los estndares internos, obtener una concentracin estimada.
3.3.4.7.3 Clculos
AIRE AMBIENTE
1.1.5. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
AGUA
VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
SUELOS Y SEDIMENTOS

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1.1.6. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
TEJIDOS, ORGANISMOS, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
1.1.7. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
1.1.8. 3.3.4.8 Desempeo del Mtodo
Los datos son los del mtodo de referencia y los de un laboratorio nacional con experiencia.
3.3.4.8.1 Lmite de Deteccin: Ver Tablas 3 y 4.
3.3.4.8.2 Lmite Prctico de Cuantificacin: Ver Tablas 3 y 4
3.3.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tablas 3 y 4
3.3.4.8.4 Precisin del Mtodo: Ver Tablas 3 y 4
3.3.4.8.5 Exactitud del Mtodo: Ver Tablas 3 y 4

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3.3.4.9 Tablas y Figuras

TABLA 1
MASAS DE LOS IONES PRIMARIOS Y SECUNDARIOS DE LOS
COMPUESTOS ANALIZADOS

Parmetro

Ion principal del


espectro de
masas

Iones secundarios
del espectro de
masas (SIM)

Naftaleno d-5
Naftaleno
Acenafteno d-10
2-Fluorobifenilo
Acenaftileno
Acenafteno
Fluoreno
Fenantreno d-10
Fenantreno
Antraceno
Fluoranteno
Criseno d-10
Pireno
p-Terfenilo d-14
Benzo (a) antraceno
Criseno
Pireno d-12
Benzo (b) fluoranteno
Benzo (k) fluoranteno
Benzo (a) pireno
Indeno (1, 2, 3cd)pireno
Dibenzo (a, h) perileno
Benzo (g, h, i) perileno

136
128
164
172
152
153
166
188
178
178
202
240
202
244
228
228
264
252
252
252
276
278
276

108,54
129,127
162,160
171,170
151,153
154,152
165
187,184
176,179
176,179
200,203
236,120
200,203
243,245
226,229
226,229
260,132
250,253
250,253
250,253
138,277
276,279
138,277

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TABLA 2

ESTANDARES INTERNOS ASIGNADOS PARA LA


CUANTIFICACION DE LOS ANALITOS
NAFTALENO d-5
Naftaleno
FENANTRENO d-10
Fenatreno
Antraceno
Fluorantreno
ACENAFTENO d10
Acenaftileno
Fluoreno
CRISENO d-12
Pireno
p-Terfenilo d-14
Benzo (a) antraceno
Criseno
PIRENO d-12
Benzo (b) fluoranteno
Benzo (k) fluoranteno
Benzo (a) pireno
Indeno (1, 2, 3cd) pireno
Dibenzo (a, h) antraceno
Benzo (g, h, i)perileno

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TABLA 3 DATOS DE LA VALIDACIN DEL MTODO EN UN LABORATORIO MEXICANO


EN AGUA

VALIDACIN DE MTODO
METODO FUENTE:

EPA 8270D 1998

TECNICA:

HRGC/MS

PARMETRO

Unidades

INTERVALO
LDM
DE TRABAJO
METODO
DEL MTODO
FUENTE
ABC
****
VALIDADO

LDM
OBTENIDO

LDM
METODO
ABC
VALIDADO

LPC
METODO
ABC
VALIDADO
g/L

CRITERIO DE
CRITERIO DE
PRECISION PRECISION EXACTITUD EXACTITUD
OBTENIDA DEL METODO OBTENIDA DEL METODO
FUENTE
FUENTE

g/L

g/L

g/L

Naftaleno

1.0

0.1-25

0.025

0.025

0.074

2.18

<20

%R
97.54

70-130

%R

Acenaftileno

1.0

0.1-25

0.017

0.017

0.052

2.64

<20

104.57

70-130

Acenafteno

1.0

0.1-25

0.011

0.011

0.033

3.36

<20

102.18

70-130

Fluoreno

1.0

0.1-25

0.015

0.015

0.046

2.00

<20

104.88

70-130

Fenantreno

1.0

0.1-25

0.014

0.014

0.042

2.78

<20

100.16

70-130

Antraceno

1.0

0.1-25

0.013

0.013

0.038

2.50

<20

97.95

70-130

Fluoranteno

1.0

0.25-25

0.012

0.012

0.036

3.14

<20

95.99

70-130

Pireno

1.0

0.25-25

0.023

0.023

0.069

2.39

<20

101.95

70-130

Benzo(a)antraceno

1.0

0.1-25

0.028

0.028

0.085

4.02

<20

98.29

70-130

Criseno

1.0

0.25-25

0.024

0.024

0.072

3.15

<20

100.19

70-130

Benzo(b)fluoranteno

1.0

0.1-25

0.025

0.025

0.076

2.11

<20

108.34

70-130

Benzo(k)fluoranteno

1.0

0.25-25

0.020

0.020

0.059

2.87

<20

105.45

70-130

Benzo(a)pireno

1.0

0.1-25

0.027

0.027

0.080

1.10

<20

108.44

70-130

Indeno(1,2,3cd)pireno

1.0

0.25-25

0.020

0.020

0.061

3.53

<20

102.01

70-130

Dibenzo(a,h)antraceno

1.0

0.25-25

0.016

0.016

0.047

3.21

<20

107.43

70-130

Benzo(g,h,i)perileno

1.0

0.25-25

0.014

0.014

0.042

2.28

<20

106.53

70-130

Datos de Laboratorios ABC Qumica Investigacin y Anlisis S.A. de C.V.


NOTA: El lmite de deteccin del mtodo fue determinado a partir del anlisis de 7 replicas de cada matriz procesada a travs del
mtodo analtico completo, el LPC se obtuvo multiplicando el LDM * 5, los datos de precisin y exactitud se obtuvieron con 10 rplicas
de la concentracin media de la curva de calibracin.

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TABLA 4 DATOS DE LA VALIDACIN DEL MTODO EN UN LABORATORIO MEXICANO


EN AGUA

VALIDACIN DE MTODO
METODO FUENTE:

EPA 8270D 1998

TECNICA:

GC/MS

PARMETRO

Unidades

MATRIZ:

INTERVALO
DE TRABAJO
DEL MTODO
VALIDADO

LDM
OBTENIDO

LPC
METODO
ABC
VALIDADO
m g/Kg

SUELO

CRITERIO DE
CRITERIO DE
PRECISION PRECISION EXACTITUD EXACTITUD
OBTENIDA DEL METODO OBTENIDA DEL METODO
FUENTE
FUENTE

m g/Kg

m g/Kg

Naftaleno

0.02-5

0.0049

0.015

2.18

<20

%R
97.54

70-130

%R

Acenaftileno

0.02-5

0.0035

0.010

2.64

<20

104.57

70-130

Acenafteno

0.02-5

0.0022

0.007

3.36

<20

102.18

70-130

4-Nitrofenol

0.05-5

0.0056

0.017

1.68

<20

107.71

70-130

Fluoreno

0.02-5

0.0031

0.009

2.00

<20

104.88

70-130

Fenantreno

0.02-5

0.0028

0.008

2.78

<20

100.16

70-130

Antraceno

0.02-5

0.0026

0.008

2.50

<20

97.95

70-130

Fluoranteno

0.05-5

0.0024

0.007

3.14

<20

95.99

70-130

Pireno

0.05-5

0.0046

0.014

2.39

<20

101.95

70-130

Bencidina

0.05-5

0.0091

0.027

3.19

<20

100.19

70-130

Benzo(a)antraceno

0.02-5

0.0057

0.017

4.02

<20

98.29

70-130

Criseno

0.05-5

0.0048

0.014

3.15

<20

100.19

70-130

Benzo(b)fluoranteno

0.02-5

0.0050

0.015

2.11

<20

108.34

70-130

Benzo(k)fluoranteno

0.05-5

0.0039

0.012

2.87

<20

105.45

70-130

Benzo(a)pireno

0.02-5

0.0054

0.016

1.10

<20

108.44

70-130

Indeno(1,2,3cd)pireno

0.05-5

0.0041

0.012

3.53

<20

102.01

70-130

Dibenzo(a,h)antraceno

0.05-5

0.0031

0.009

3.21

<20

107.43

70-130

Benzo(g,h,i)perileno

0.05-5

0.0028

0.008

2.28

<20

106.53

70-130

Datos de Laboratorios ABC Qumica Investigacin y Anlisis S.A. de C.V.


NOTA: El lmite de deteccin del mtodo fue determinado a partir del anlisis de 7 replicas de cada matriz procesada a travs del
mtodo analtico completo, el LPC se obtuvo multiplicando el LDM * 5, los datos de precisin y exactitud se obtuvieron con 10 rplicas
de la concentracin media de la curva de calibracin.

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3.4 BIFENILOS POLIBROMADOS y (PBBs) BIFENILOS POLIBROMADOS


ETER (PBDEs)
El principio de este mtodo se basa en la extraccin, purificacin y concentracin del extracto
purificado con objeto de la medicin de los PBBs y PBDEs presentes en el extracto orgnico
purificado de la muestra inyectando una alcuota de 2 L en un cromatgrafo de gases acoplado a
un detector selectivo de masas que trabaja simultneamente en los modos SIM y SCAN. La
identificacin de los analitos se realiza por la comparacin de los espectros de masas con los de la
biblioteca estandarizada de la estacin de datos, las abundancias relativas de los iones
cualificadores y con los tiempos de retencin de los estndares certificados, su cuantificacin se
realiza por medio del mtodo de estndar interno.

NOTA: Este mtodo est basado en su desempeo, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeo especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parmetros que se especifiquen como NO MODIFICABLES. Los
trminos debe, puede y deber son mencionados a travs de los mtodos y estn destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del mtodo. El trmino debe es usado para indicar que los desarrolladores de este
mtodo encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.

PARMETROS NO MODIFICABLES

Cromatgrafo de Gases (Columnas Capilares).


Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultneo en modos SIM y SCAN

3.4.1 Aplicacin y Alcances


3.4.1.1 Propsito Este es un mtodo para el anlisis de los Bifenilos polibromados
(PBBs) y Bifenilos policromados ter (PBDEs) por cromatografa de gases acoplado a
espectrometra de masas (GC/MS).
3.4.1.2 Analitos El mtodo es aplicable a los siguientes analitos:
PBBs
PBDEs
De estos grupos de compuestos slo son de inters:

2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil
2,2',4,4'-Tetrabromobifenil ter (PBDE 47)
2,2',4,4',5-Pentabromobifenil ter (PBDE 99)
2,2',4,4',5,5'-Hexabromobifenil ter (PBDE 153)
2,2',4,4',5,6'-Hexabromobifenil ter (PBDE 154)
2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil ter (PBDE 175)
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2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil ter (PBDE 183)
3.4.1.3 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de los PBBs y
PBDEs mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterrneas
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales

3.4.1.4 Limitaciones
Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las interferencias presentes en las
mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a
1,000 veces (factores de concentracin de las muestras e interferencias presentes en el extracto
purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas expertos en el uso de
cromatografa de gases y en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.

3.4.2 Resumen
AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales
y Subterrneas)
Este mtodo est diseado para muestras de agua sin contaminacin aparente (no
aplica para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia
orgnica, principalmente grasas y aceites).
Los analitos se extraen en 1 L de muestra a travs de una extraccin liquido-liquido. El
volumen de los extractos se reduce con la tcnica Kuderna-Danish (K-D). Los extractos
para el anlisis de PBBs y PBDEs se someten a una limpieza cida con cido sulfrico
Se inyectan 2 L de fase orgnica al GC/MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.
El tiempo total del anlisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los
analitos y las condiciones analticas que se escojan.
Los lmites de deteccin del mtodo se encuentran entre 0.005 a 0.01 g/L.
SUELOS Y SEDIMENTOS
Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con cloruro de metileno-acetona (1:1)
con ayuda un brazo ultrasnico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse
al extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraida y
de los analitos. Despus de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alcuota de
2 L en el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.
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Los lmites de deteccin con este mtodo varan de 1 a 10 g/Kg BS segn los diferentes analitos
en matrices libres de interferencias.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Una muestra de 20 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos slidos y 100 mL de
alimentos lquidos se extrae utilizando la tcnica de extraccin apropiada.
Despus de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alcuota de 2 L en el
GC/MSD en modo SIM y SCAN simultneamente.

3.4.3 Procedimientos de Extraccin y Purificacin de muestras


Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una
serie de estndares de calibracin por medio del procedimiento para validar los patrones
de elusin y la ausencia de interferencias de los reactivos.
3.4.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del mtodo pueden originarse por la presencia de contaminantes
en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el
procesamiento de la muestra (contaminacin cruzada).
El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio
enjuagndolo profusamente con el ltimo disolvente utilizado en l. Despus lvelo
con agua caliente y detergente y enjuguelo con agua corriente y grado reactivo.
Escrralo, squelo y enjuguelo con acetona. Despus de secarlo y enfriarlo, selle el
material de vidrio y gurdelo en un ambiente limpio para evitar acumulacin de polvo
u otros contaminantes. Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.
El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de
interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilacin en
material de vidrio. PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan los
estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. Tambin pueden eliminarse
conservadores, reducindose su vida de anaquel.
Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas
de los analitos despus de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto,
despus de una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias
veces hexano para asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente
muestra.
Es importante que las muestras y los estndares de trabajo se encuentren en el
mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estndares debe ser el mismo que
el disolvente final utilizado en la preparacin de la muestra. De no ser este el caso,
puede afectarse la comparacin cromatogrfica entre los estndares y la muestra.
3.4.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los qumicos utilizados en este mtodo no han sido
determinadas con precisin; de todas maneras; cada sustancia qumica debe ser

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tratada como potencial peligro a la salud. La exposicin a estas sustancias qumicas
debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice
monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto
el analista y que dichos resultados estn disponibles para los analistas.
PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede
hacerlo peligroso.
Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas
con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro
y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposicin y manejo seguro de
las sustancias qumicas especificadas en este mtodo. Debe tenerse un archivo de
referencias de las hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a
todo el personal involucrado en estos anlisis.

3.4.3.3 Matrices
3.4.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales
epicontinentales y subterrneas)
3.4.3.3.1.1 Equipo y Materiales
VER PARA PCBs
3.4.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.4.3.3.1.2.1 Reactivos
VER PARA PCBs
3.4.3.3.1.2.2 Materiales de referencia
Estndares de calibracin
Estndares puros o en disolucin certificados de:
Compuestos
2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil
2,2',4,4'-Tetrabromobifenil ter
2,2',4,4',5-Pentabromobifenil ter
2,2',4,4',5,5'-Hexabromobifenil ter
2,2',4,4',5,6'-Hexabromobifenil ter
2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil ter
2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil ter

No. CAS
36355-01-8
5436-43-1
60348-60-9
68631-49-2
207122-15-4
446255-22-7
207122-16-5

# IUPAC
PBDE 47
PBDE 99
PBDE 153
PBDE 154
PBDE 175
PBDE 183

Estndares internos
Se debe utilizar como estndar interno el criseno-d12, adicionado en cada
muestra extrada antes del anlisis e incluido en cada estndar inicial de
calibracin.

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Estndares surrogados
Se utiliza el perileno-d12 como un surrogado.
3.4.3.3.1.3 Procedimiento de Extraccin
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.1.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs

3.4.3.3.2 Suelos
3.4.3.3.2.1 Equipo y Materiales
VER PARA PCBs

3.4.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia


VER REACTIVOS PARA PCBs Y EN 3.4.3.3.1.2

3.4.3.3.2.3 Procedimiento de Extraccin


VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs

3.4.3.3.2.4 Procedimiento de Purificacin de las muestras


VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs

3.4.3.3.3 Sedimentos (marinos y epicontinentales)


3.4.3.3.3.1 Equipo y Materiales
VER PARA PCBs

3.4.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia


VER REACTIVOS PARA PCBs Y EN 3.4.3.3.1.2

3.4.3.3.3.3 Procedimiento de Extraccin


VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs

3.4.3.3.3.4 Procedimiento de Purificacin de las muestras


VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs

136

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3.4.3.3.4 Alimentos procesados,


animales,

sin procesar, Organismos, y Tejidos

3.4.3.3.4.1 Tejidos y alimentos con grasa ( 2% GRASA)


VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.1.1 LECHE
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.1.2 QUESO, YEMA DE HUEVO O HUEVO
DESHIDRATADO
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.1.3 MANTEQUILLA
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS
VER PARA PROCEDIMIENTO PCBs
3.4.3.3.4.1.4 HIGADO
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.1.5 TEJIDO GRASO
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA

3.4.3.3.4.2.1 Alta humedad azucares bajos (> 75% agua < 5%


azucares)
3.4.3.3.4.2.1.1 Lechugas, biota vegetal, etc.
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2.1.2 Huevo entero
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2.2 Alta humedad azucares intermedios (> 75% agua y 515% de azucares)
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)

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VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2.4 Alimentos secos con baja humedad ( 75% agua)
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs

3.4.4 MTODO
INSTRUMENTAL

DE

IDENTIFICACIN

CUANTIFICACIN

3.4.4.1 Aplicacin y Alcances


3.4.4.1.1 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de PBBs y PBDEs en
los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e
industriales, as como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y
alimentos, los extractos y su purificacin depende de la matriz analizada, se
deben seguir los procedimientos de extraccin y purificacin adecuados
para cada matriz.
3.4.4.1.2 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta
que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de
concentracin de las muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas
expertos en el uso de cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas y
en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para
generar resultados aceptables con este mtodo.
3.4.4.2 Resumen
El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografa de Gases
acoplado a espectrometra de masas con la capacidad de trabajar en los modos SIM y SCAN
simultneamente, en caso de que se detecte algn PBBs y PBDEs mediante los tiempos de
retencin (Tr) coincidentes con los de los estndares respectivos y por el espectro de masas en
modo SCAN coincidente con el de la biblioteca estandarizada del sistema de manejo de datos y
con el ion cuantitativo y los 2 iones cualificadores con sus respectivas reas proporcionales
obtenidas de los estndares de la curva de calibracin en el modo SIM, se cuantifica mediante
el mtodo de estndar interno, en caso de que se cumplan los Tr pero no exista coincidencia
entre las proporciones de los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la
identificacin, en caso de que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se
trata de algn pico interferente y no se reportan los resultados como positivos a PBB y PBDEs.
3.4.4.3 Equipos y Materiales

3.4.4.3.1 Equipo

138

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Cromatgrafo de gases Sistema analtico completo con cromatgrafo de
gases con programacin de temperatura para tcnica de inyeccin splitsplitless con control electrnico de presin (Agilent 7890 o equivalente).
Espectrmetro de masas capaz de realizar barridos de 35 a 500 uma por
segundo o menor, usando una fuente de ionizacin de impacto electrnico
con energa de 70 electrn volts. El espectrmetro debe ser capaz de
producir un espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolucin de
decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios
mencionados en la seccin de control de calidad (Agilent 5975 o
equivalente).
Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este
sistema debe ser capaz de tener una adquisicin y almacenamiento
continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa
cromatogrfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las seales de los
compuestos eludos de la columna capilar del GC (agilent Chemsation).
Balanza analtica con precisin de 0.0001 g
3.4.4.3.2 Materiales
Columna capilar de slica fundida HP-5MS (Crosslinked 5% fenil metil
siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de dimetro y 0,25 m de pelcula
de espesor o equivalente.
Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o
equivalente.
Microjeringa de 25 L, marca Hamilton 702N, No. parte 9301-0022 o
equivalente.
Microjeringa de 500 L, marca Hamilton 750N, No. parte 9301-0034 o
equivalente.
Matraces volumtricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapn esmerilado.
Viales de vidrio con tapa de politetrafluoroetileno (PTFE) de rosca marca
Agilent o equivalente.
Insertos de vidrio para puerto de inyeccin marca Agilent o equivalente.
Septa color gris para bajo flujo, marca Agilent o equivalente.
O-ring de vespel marca Agilent o equivalente.
3.4.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.4.4.4.1 Reactivos y disoluciones

139

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Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente
Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado ptima, plaguicida o equivalente
3.4.4.4.2 Materiales de referencia
Hexabromobifenilo, Tetra, penta, hexa y heptabromobifenilo ter
Los patrones pueden ser estndares puros o adquirirse como disoluciones
certificadas (patrones de referencia).

Compuestos
2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil
2,2',4,4'-Tetrabromobifenil ter
2,2',4,4',5-Pentabromobifenil ter
2,2',4,4',5,5'-Hexabromobifenil ter
2,2',4,4',5,6'-Hexabromobifenil ter
2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil ter
2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil ter

No. CAS
36355-01-8
5436-43-1
60348-60-9
68631-49-2
207122-15-4
446255-22-7
207122-16-5

# IUPAC
PBDE 47
PBDE 99
PBDE 153
PBDE 154
PBDE 175
PBDE 183

Disolucin Patrn
Preparar a partir de 3.2.4.4.1.3 una mezcla de Hexabromobifenilo, Tetra,
penta, hexa y heptabromobifenilo ter
en una concentracin de 10 mg/L, se deben incluir el criseno-d12 como estndar
interno y el perileno-d12 como surrogado. El disolvente es hexano.
Disolucin intermedia de 1 mg/L
A partir de la disolucin de 10 mg/L, tome 500 L con una microjeringa en un
matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para
homogenizar. Guarde la disolucin en viales de 2 mL.
Disoluciones de calibracin
Prepare 5 niveles como mnimo de diferente concentracin de las
disoluciones estndar para cada analito de inters en matraces volumtricos.
El punto de concentracin ms bajo de la curva de calibracin debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarn definidas por el intervalo lineal del detector.
Estndar de calibracin de 0,05 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga
50 L de la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta
disolucin en viales de 2 ml y rotule con etiqueta que contenga mtodo, fecha
de preparacin, concentracin, solvente utilizado, persona que lo prepar
Estndar de calibracin de 0,1 mg/L. En un matraz de 1 ml ponga 100 L de
la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolucin
en viales de 2 ml y etiquete.
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Estndar de calibracin de 0,2 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 200 L de
la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolucin
en viales de 2 ml y etiquete.
Estndar de calibracin de 0,5 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 500
L de la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta
disolucin en viales de 2 mL y etiquete.
3.4.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de
control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mnimos de este programa
consisten en una demostracin inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con
las especificaciones de desempeo del mtodo, adems realizar anlisis continuos de
muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisin y exactitud
continuas y el anlisis de blancos. El desempeo del laboratorio debe compararse con
los criterios aqu establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los anlisis
cumplen con las especificaciones de desempeo del mtodo. El analista debe hacer
una demostracin inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisin
aceptables por este mtodo.
Cada vez que se realice una modificacin al mtodo o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo est determinacin, el analista designado debe repetir la
validacin del mtodo, si el cambio va a afectar el lmite de deteccin del mtodo
(LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o ms
bajo que el anterior para los analitos de inters.
No se permite el uso de tcnicas determinativas alternativas y cambios que degraden
la ejecucin del mtodo. Si se utiliza una tcnica analtica que no sea la especificada
en este mtodo, dicha tcnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las
de las tcnicas descritas en este documento para el analito de inters.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a
este mtodo. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificacin por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al
mtodo para ese analito.
- Los nombres, ttulos, direcciones y nmero de telfono de los analistas que
ejecutaron los anlisis y modificaciones, y el encargado de control de calidad
que presenci y verific los anlisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del mtodo modificado
comparadas con el mtodo original, dichos datos deben de incluir todos los
parmetros mencionados en la seccin de desempeo del mtodo.
- La informacin escrita en las bitcoras tanto del equipo como del analista,
deben incluir los siguientes datos:

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Identificacin de la muestra
Nmero del lote analtico en el cual se analiz la muestra
Fecha del anlisis
Procedimiento cronolgico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Nmero de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin
Registros de bitcoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
informacin
Informacin cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados del lote analtico.
3.4.4.5.1 Verificacin del equipo
3.4.4.5.1.1 Verificacin de la sintona del espectrmetro de masas
(Autotune)
Realice una autosintona (autotune y DFTPP tune), siguiendo las
actividades descritas en el instructivo de la calibracin del espectrmetro de
masas correspondiente. Esta es una autosintona (autotune) que hace el
instrumento con respecto a una sustancia de referencia llamada
Perfluorotributilamina PFTBA
Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las causas y
corrija el problema de acuerdo al instructivo de mantenimiento preventivo del
instrumento, documente las incidencias y acciones correctivas e inclyalas
en el expediente del sistema GC/MS.
Especificaciones para el autotune
Masa
69
219
502

Especificacin
100%
30% respecto a la masa 69
1% respecto a la mas 69

3.4.4.5.1.2 Verificacin del Sistema (sintona del MS con DFTPP) de


acuerdo a las especificaciones del mtodo.
Inyecte 2 L de la disolucin de DFTPP segn las condiciones
instrumentales anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP.
Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios
ION MASICO

CRITERIO DE ABUNDANCIA RELATIVA DE IONES


MASICOS DE LA DFTPP

51

30 A 60% de la masa 198

68

< 2% DE LA MASA 69

70

< 2 % DE LA MASA 69

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127

40 A 60 % DE LA MASA 198

197

<1% DE LA MASA 198

198

PICO BASE 100 %

199

5 A 9% DE LA MASA 198

275

10 A 30 % DE LA MASA 198

365

> A 1 % DE LA MASA 198

441

PRESENTE PERO MENOR QUE LA MASA 443

442

> 40% DE LA MASA 198

443

17 A 23 % DE LA MASA 442

Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones


anteriores ser necesario que revise los parmetros de sintona del
espectrmetro, repita nuevamente la sintona (autotune y DFTPP tune) e
inyecte nuevamente la disolucin de DFTPP.
Verifique que el sistema GC/MS est libre de contaminacin (nivel sealruido)
Realice un blanco electrnico bajo las condiciones instrumentales del
mtodo. El blanco electrnico como su nombre lo dice es una corrida
electrnica exclusivamente (sin inyeccin alguna), y ste debe estar libre
de picos o en su defecto stos debern ser no mayores a 5 veces el ruido.
En caso de no cumplir con lo mencionado en la seccin anterior, eleve las
temperaturas tanto de la columna a 300 C, del puerto de inyeccin a 280
C y del detector a 300 C, mantenga el sistema bajo stas condiciones de
temperatura por 30 min y realice nuevamente el blanco electrnico. En
caso de persistir el problema lleve a cabo las acciones de limpieza del
instrumento mencionadas en el instructivo de mantenimiento preventivo
correspondiente.
Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatogrficas sean las
adecuadas, segn se menciona posteriormente.
3.4.4.5.1.3 Verificacin del Funcionamiento del Sistema GC/MS
(SPCCs)
De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la degradacin del
DDT (compuesto incluido en la disolucin SPCCs) a DDE y DDD, la suma
de las respuestas del DDE y DDD no deben exceder del 20% con respecto
a la respuesta del DDT.
La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus respuestas
normales (ms menos 50%) y como picos bien definidos y sin coleo. Si la
degradacin es excesiva y/o dan pobre respuesta cromatogrfica, revise el
puerto de inyeccin y lmpielo, cambie el liner, sello dorado y si es

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necesario que corte los primeros 5 a 10 cm de la columna capilar en el
extremo que conecta al puerto de inyeccin.
3.4.4.5.2 Verificacin de la calibracin inicial.
La curva de la calibracin inicial deber realizarse inyectando los estndares
de calibracin preparados y se considera lineal; si el por ciento de la
desviacin estndar relativa (%RSD) de los factores de calibracin (CF) es
menor o igual al 20%, los clculos se realizan con las siguientes ecuaciones:

CF

total de rea
masa inyectada en nanogramos

% RSD

SDCF
x100
CF

Donde:
SDCF= Desviacin estndar de los factores de calibracin
CF = Promedio de los factores de calibracin
La verificacin de la calibracin inicial puede tambin efectuarse mediante la
regresin por mnimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptacin es que
el factor de correlacin "r2" sea mayor o igual a 0,997.
Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisin del
sistema cromatogrfico y la preparacin de las disoluciones de calibracin.
Posteriormente la curva de calibracin ser vigente, si el anlisis de un punto
intermedio de la curva no presenta una variacin de la concentracin mayor
al 15% y que ser calculada de la siguiente manera.

Diferencia de concentracin % D

CC CT
x100
CT

Donde
CC= concentracin calculada
CT= concentracin terica
O si se utiliza el factor de calibracin

Diferencia porcentual %

CFv CF
x100
CF

Donde:
CFv= Es el factor de calibracin de cada compuesto en el
estndar de verificacin.
CF = Es la media del factor de calibracin del compuesto de
la calibracin inicial.

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Si el criterio de aceptacin para la diferencia porcentual es mayor al 15% se
proceder a la revisin del sistema cromatogrfico y a la preparacin de la
solucin estndar utilizada.
3.4.4.5.3 Verificacin de contaminacin de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningn tipo de contaminante al
tiempo de retencin de los analitos medidos, por lo que es importante que los
reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe
localizar la fuente de contaminacin y extraer y analizar nuevamente las muestras
asociadas al blanco contaminado
Use tambin los blancos de reactivos para verificar la contaminacin por arrastre de
muestras con altas concentraciones en anlisis secuenciales
3.4.4.5.4 Verificacin del lote analtico
Por cada lote analtico de muestras analice al menos una muestra sinttica
de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado
de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analtico, calcule el
% de recuperacin de cada analito y surrogados de la muestra control, los
cuales debern estar dentro del rango de 80 120 %R, de no ser as se debe
revisar la preparacin de la muestra control y el sistema cromatogrfico.
Realizar la correccin necesaria y reanalizar la muestra control, si el
problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analtico.
3.4.4.5.5 Verificacin de interferencias de matriz
La verificacin de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo
mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el
anlisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique
una muestra por cada lote analtico o preferentemente una muestra de cada
tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben
analizar cuando por las caractersticas de la muestra se sospeche de
interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento
de calidad de un proyecto.
Efecto de la matriz en el recobro del analito Muestras fortificadas (MF):
Analice las muestras fortificadas:
Calcule el por ciento de recobro
El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analtico est fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.

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Efecto de la matriz en la precisin del analito Precisin de la matriz
duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la
duplicada para cada analito, con la siguiente ecuacin:

DPR

C1 C 2 * 200
C1 C 2

Donde:
C1 Concentracin de la primera muestra
C2 concentracin de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe
ser:<20%
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
Repita el anlisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provoc
que la prueba del DPR fallara.
3.4.4.5.6 Verificacin de la estabilidad de la curva de calibracin
En cada lote analizado, si ms de 20 muestras van a ser analizadas durante
el da, verifique la curva de calibracin analizando un estndar de
concentracin media del intervalo de trabajo al principio del lote y despus
de cada 20 muestras 12 horas de anlisis continuo.
Calcule el factor de calibracin o la concentracin para cada analito del
estndar de concentracin media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la
siguiente ecuacin:

FC1 FC2
Diferencia porcentual
FC1

x100

Donde:
FC1 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en la curva de
calibracin, o la concentracin nominal del estndar de verificacin.
FC2 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en el estndar
de concentracin media, o la concentracin calculada en el estndar de
verificacin.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deber ser menor al 15%, de
no ser as verifique su vigencia, revis tambin el sistema cromatogrfico y
determine la causa de la falla y corrija; de no lograr corregir la falla, recalibre
nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estndar de
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verificacin sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras
anteriores al estndar de verificacin que fall.
3.4.4.5.7 Verificacin de estndares surrogados.
Evale los datos de recobro de los surrogados de las muestras.
Calcule el % de recuperacin de los estndares surrugados en blancos,
muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras
duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuacin:

Re cuperacin % R

C1
x100
C2

Donde:
C1=Concentracin calculada de surrugados en la muestra.
C2=Concentracin nominal del surrugado adicionado a la
muestra.
El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperacin. De no ser as
verifique la preparacin de la muestra que fallo y el sistema cromatogrfico,
determine la causa de la falla y corrija; de no encontrarla, repita la extraccin
de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango de
aceptacin, llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de matriz y
los resultados obtenidos.
Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y
corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e
inclyalas en el expediente del resultado analtico.
3.4.4.5.8 Verificacin de estndares internos.
Compare el rea de el o los estndares internos de las muestras con el rea
promedio de los estndares internos obtenidos de los puntos de calibracin,
el valor obtenido en el o los estndares internos de la muestra no deben ser
menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva
de calibracin para cada estndar interno.
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
3.4.4.5.9 Control de Calidad Estadstico En esta seccin se especifica
como debe realizarse el control de calidad estadstico obligatorio para este
mtodo:
3.4.4.5.9.1 Preparacin de las Muestras de Control de Calidad
(MCC) Prepare la MCC de la siguiente forma:

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Se deber preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o
ser preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de
calibracin.
Prepare una disolucin a una concentracin que corresponda al
rango de trabajo del mtodo.

NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea


conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la
medicin
3.4.4.5.9.2 Grficas de Control de Exactitud El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las grficas de control de exactitud
para cada lote analizado a partir de la demostracin inicial de
desempeo.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deber
graficarse y deber estar dentro de los lmites de control superior e inferior
( 3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, debern rechazarse todos los
resultados del lote analtico. Determine las causas y corrija los errores,
documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deber
repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.4.4.5.9.3 Grficas de Control de Precisin El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las grficas de control de precisin
para cada lote analizado a partir de la demostracin inicial de
desempeo
Determine los lmites de control de la siguiente forma:
Lmite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Lmite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisin es mayor al LSC, debern rechazarse todos
los resultados del lote analtico. Determine las causas del problema
y corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y
acciones correctivas, deber repetirse el anlisis del lote en
cuestin.
3.4.4.5.10 Validacin de modificaciones del mtodo o de mtodos alternos

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Para validar las modificaciones que se efecten a este mtodo o para la
utilizacin de mtodos alternos deber seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente mtodo, debern validarse
parcialmente.
Si se utiliza un mtodo alterno cuya fuente sea un mtodo estandarizado por
alguna Institucin de carcter internacional o reconocida internacionalmente
(e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment
Canada, etc.) tambin deber validarse parcialmente.
Si se utiliza algn mtodo no estandarizado, deber evidenciarse, adems
de los parmetros de validacin parcial, los parmetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeo de todo el sistema analtico utilizando
los datos recolectados de anlisis de blancos reactivos, solucin verificadora
del desempeo del laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algn analito a comparacin de los
cromatogramas del mtodo, ste deber corregirse. Los problemas de
coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna
cromatogrfica, problemas en la instalacin de la columna o mala operacin
del detector.
Verifique la precisin con rplicas del anlisis. Una pobre precisin
generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de
inyeccin. Si el sistema cromatogrfico se est comportando aparentemente
bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva
curva o juego de factores de calibracin para verificar las respuestas bajas
antes de buscar la fuente del problema.

3.4.4.5.11 Composicin del lote analtico (para cada 25 muestras 12 horas de


anlisis continuo)
1 Calibracin con PFTBA (Autotune)
2 Calibracin con PFTBA (DFTPP)
3 Anlisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture)
4 Blanco electrnico
5 Mezcla de Verificacin
6 Blanco de Reactivos
7 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
8 Muestra real No. 1
9 Muestra real No. 2
10 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de anlisis continuo)
11 Muestra fortificada (si se realizo)
12 Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
13
Muestra de Verificacin de la Calibracin Continua.
14
Siguientes 20 muestras reales

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3.4.4.5.12 Criterios de Aceptacin y Rechazo


Verificacin del Equipo

Punto de verificacin

Criterio

Equipo libre de interferencias (blanco


electrnico)

No deber presenta picos a cualquier


tiempo de retencin
Cumple con especificaciones del
fabricante
Cumple con abundancias
especificadas en el mtodo
Degradacin del DDT menor al 15%,
no coleo de Bencidina y PCP

Autotune
DFTTP tune
Puerto de inyeccin libre de suciedad y baja
degradacin

Verificacin de la Calibracin Inicial

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin del % Diferencial de la concentracin


de la Mezcla de Verificacin, punto intermedio de
la curva de calibracin.

Menor al 15%

Verificacin de Contaminacin de Reactivos

Punto de verificacin

Criterio

Blanco de reactivos

No deben presentar ningn tipo de


contaminante al tiempo de retencin
de los analitos medidos

Verificacin del Proceso Analtico

Punto de verificacin

Criterio

Muestra de control de calidad

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de estndares Surrogados

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de muestras adicionadas duplicadas

% DPR < 20%

Verificacin de Interferencias de Matriz

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Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de muestras adicionadas

% de Recuperacin 70 / 130

Estabilidad de la Curva de Calibracin

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de la Estndar de Verificacin


(Intermedio)

% de diferencia menor al 15%

3.4.4.6 Calibracin
Se necesitan al menos 5 estndares de calibracin. Uno debe contener analitos a una
concentracin cercana, pero superior a la del lmite prctico de cuantificacin para
cada analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo
esperado en las muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0,01g/L y el LPC es de 0,05
g/L, se espera que la muestra contenga concentraciones mayores de 0,05 g/L.
Una vez establecidas las condiciones de operacin inyecte un volumen adecuado (2 L) de
cada estndar de calibracin por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y
agrguelo a la tabla de calibracin del mtodo.
Si la DPR de cada analito es 20%, entonces la respuesta del instrumento es
considerada lineal y el factor de calibracin promedio FC puede utilizarse para la
cuantificacin de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces
no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibracin.
Si se utiliza regresin lineal por mnimos cuadrados, deber obtener el factor de
correlacin r2 para cada analito, el cual deber ser mayor o igual a 0,997 si r es
menor a este valor, la curva de calibracin no es lineal y deber verificarse la
preparacin de los estndares de calibracin y el sistema cromatogrfico, y repetir la
calibracin.
3.4.4.6.1 Calibracin por Estndar Interno:
El analista debe seleccionar uno o ms estndares internos que sean similares en
comportamiento analtico a los compuestos de inters. El analista debe adems
demostrar que la medicin del estndar interno no es afectada por el mtodo o
interferencias de la matriz.
Prepare los estndares de calibracin a un mnimo de cinco concentraciones para cada
analito de inters por adicin de volmenes. Para cada estndar de calibracin, adicione
una cantidad conocida constante de uno o ms estndares internos y afore con un
solvente apropiado. Uno de los estndares debe estar a una concentracin cercana, pero
por arriba del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al rango de trabajo.

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Inyecte cada estndar de calibracin. Tabule la altura del pico o el rea de respuesta
contra la concentracin de cada compuesto y el estndar interno. Calcule el factor de
respuesta (RF) para cada compuesto como sigue:

RF

As * Cis
Ais * Cs

Donde:
As = Respuesta para el analito que ser medido.
Ais = Respuesta del estndar interno.
Cis = Concentracin del estndar interno, g/L.
Cs = Concentracin del analito a ser medido, g/L.
Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede usarse
para clculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una curva de
calibracin de la relacin de respuesta, As/Ais contra RF.
3.4.4.7 Procedimiento Analtico
3.4.4.7.1 Anlisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatogrficas:
Gas acarreador
Helio
Temperatura inicial
150 C
Tiempo inicial
0 min
Programa 1
8C/min
Temperatura final 1
180C 0 min
Programa 2
15C/min
Temperatura final 2
320C 6 min
Temperatura del inyector 250C
Volumen inyeccion:
2L
Modo
splitless
Flujo purga septum
2 mL/min
Solvent delay
4.4 min
Detector:
Modo de adquisicin:
SIM/SCAN
Rango de masas:
100-900
Temperatura de la fte:
230 C
Temperatura cuadrupolo: 150 C
Grupos SIM
Grupo 1 iones 219, 241, 236, 326, 240 y 486. Minuto 0-11,5
Grupo 2 iones 297, 403,8 y 566 Minuto 11-12,4
Grupo 3 iones 260, 264, 264,300,307,9, 468, 483, 628 y 644 Minuto 12,4
a 13
Grupo 4 iones 290, 300, 483,8, 561,7, 644 y 722. Minuto 13 a 19

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Adicione un volumen de la mezcla de estndares internos, de manera que la
concentracin de estos en el vial sea igual a la concentracin que se utilizo en
la preparacin de la curva de calibracin.
Elabore la secuencia de anlisis de acuerdo a lo indicado en el punto de
composicin del lote analtico.
Inicie el anlisis.
Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estndar en el
cromatgrafo de gases. Registre el volumen final del extracto.
Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y
criterios de aceptacin y rechazo.
Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de
calibracin, diluya el extracto y reanalice.
3.4.4.7.2 Identificacin de los analitos
La determinacin cualitativa de cada compuesto determinado por este mtodo
est basada en la comparacin del tiempo de retencin y de los espectros de
masas de las muestras, con los tiempos y iones caractersticos de los espectros
de masas de los estndares de referencia en modo SCAN. Los espectros de
masas de referencia en modo SIM estn definidos por tres iones de mayor
intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los compuestos son
identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:
El tiempo de retencin relativo TRR del compuesto detectado es 0,5 unidades
del TRR del estndar de referencia.
La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren
dentro del 30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de
referencia (ejemplo: para un ion con abundancia del 50% en el espectro de
referencia, la abundancia en el espectro de la muestra debe encontrarse en el
intervalo de 20% y 80%)
Los iones que estn presentes en el espectro de la muestra y que no estn en
el espectro del estndar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede
tratarse de contaminacin de fondo o coelusin de otros compuestos.
Si hay iones que estn presentes en el espectro del estndar y no estn
presentes en la muestra, debe someterlo a revisin ya que stos pueden
haberse perdido por posibles sustracciones en el momento de limpiar los
espectros
Para muestras que contienen componentes que no estn asociados con los
estndares de calibracin, realice una bsqueda por librera para obtener una
identificacin y a partir de los estndares internos obtener una concentracin
estimada.

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3.4.4.7.3 Clculos
3.4.4.7.3.1 AGUA
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.4.7.3.2 SUELOS Y SEDIMENTOS
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.4.7.3.3 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS Y
ALIMENTOS
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs

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3.5 Acido Perfluoroctanico sulfnico (PFOS) y sus sales


El principio de este mtodo se basa en la extraccin, purificacin y concentracin de los PFOS,
sus sales presentes en el extracto orgnico de la muestra con objeto de la medicin, inyectando
una alcuota de 10 L en un cromatgrafo de lquidos acoplado a un detector selectivo de masas.
La identificacin de los analitos se realiza por la comparacin de los espectros de masas con los
estndares, las abundancias relativas de los iones cualificadores y con los tiempos de retencin de
los estndares certificados.
NOTA: Este mtodo est basado en su desempeo, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeo especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parmetros que se especifiquen como NO MODIFICABLES. Los
trminos debe, puede y deber son mencionados a travs de los mtodos y estn destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del mtodo. El trmino debe es usado para indicar que los desarrolladores de este
mtodo encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.
PARMETROS NO MODIFICABLES
LC/MS

3.5.1 Aplicacin y Alcances


3.5.1.1 Propsito Este es un mtodo para el anlisis del Acido
Perfluoroctanico Sulfnico (PFOS), sus sales por cromatografa de lquidos acoplado a
espectrometra de masas (LC/MS).
3.5.1.2 Analitos El mtodo es aplicable a los siguientes analitos:

PFOS

3.5.1.3 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de los PBBs y


PBDEs mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterrneas
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales

3.5.1.4 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de


las interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden
variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentracin de las muestras e
interferencias presentes en el extracto purificado).
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Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas expertos en el uso de
cromatografa de gases de alta resolucin y en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe
demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo usando los procedimientos
establecidos en el Manual de Control de Calidad.

3.5.2 Resumen
AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales
y Subterrneas)
Una muestra de agua es extrada por extraccin en fase slida (SPE) y posteriormente
analizada por LC/MS
SUELOS Y SEDIMENTOS
Una muestra de suelo es tratada con NaOH y HCl en metanol y extrada con metanol
y finalmente se realiza una segunda extraccin con Carbono grafitado no poroso.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Se pesa una cantidad de muestra a la cual se le adiciona un reactivo de par inico y
se extrae con acetato de etilo. Se evapora a sequedad y se reconstituye con
acetonitrilo y se pasa para su anlisis por LC/MS.

3.5.3 Procedimientos de Extraccin y Purificacin de muestras


3.5.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del mtodo pueden originarse por la presencia de contaminantes
en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el
procesamiento de la muestra (contaminacin cruzada).
Interferencias de matriz pueden ser causadas por contaminantes co-extrados de las
muestras. La ausencia de interferencias de matriz vara considerablemente,
dependiendo de la naturaleza de la muestra. En aguas subterrneas las
interferencias son mnimas, pero en aguas de desechos, aguas de mar, suelos,
sedimentos, tejidos y alimentos puede existir interferencias de matriz.
El material de los recipientes que contienen la muestra no deben ser de ningn
plstico polifluorado incluyendo el politetrafluoroetileno (PTFE) y
materiales
fluoroeslastomeros; todos estos materiales no deben ser usados durante el muestreo,
almacenamiento o procesamiento de la muestra. Todo el material utilizado debe ser
enjuagado con agua y metanol.
Es importante que las muestras y los estndares de trabajo se encuentren en el
mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estndares debe ser el mismo que
el disolvente final utilizado en la preparacin de la muestra. De no ser este el caso,
puede afectarse la comparacin cromatogrfica entre los estndares y la muestra.

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3.5.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los qumicos utilizados en este mtodo no ha sido
determinadas con precisin; de todas maneras; cada sustancia qumica debe ser
tratada como potencial peligro a la salud. La exposicin a estas sustancias qumicas
debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice
monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto
el analista y que dichos resultados estn disponibles para los analistas.
PRECAUCIN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede
hacerlo peligroso.
Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con
su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y
un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposicin y manejo seguro de
las sustancias qumicas especificadas en este mtodo. Debe tenerse un archivo de
referencias de las hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a
todo el personal involucrado en estos anlisis.
3.5.3.3 Matrices

3.5.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales


epicontinentales y subterrneas)
3.5.3.3.1.1 Equipo y Materiales
La mencin de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este mtodo se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propsitos ilustrativos.
Su mencin no implica ninguna aprobacin oficial. Puede obtenerse un desempeo equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este mtodo, pero la
demostracin del desempeo equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este mtodo.
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
Cartuchos de extraccin en fase slida: Oasis-WAX 100-200 mg
Oasis-HLB 60-200 mg ambos de Waters
Sistema de vaci
Contenedores de 500 mL
Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales
de fluoropolimeros

3.5.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia


Los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.

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3.5.3.3.1.2.1 Reactivos

Acido actico
Hidrxido de amonio al 25%.
Acetato de amonio
Metanol
Agua A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.

Buffer de acetato 0.025 M pH 4: Mezclar 0,5 mL de cido actico con 349,5 mL de


agua. Disolver 0.116 g de acetato de amonio en 60 mL de agua. Mezclar 200 mL del
acido actico diluido con 50 mL de la disolucin de acetato de amonio.
Disolucin de Amoniaco 0.1% en metanol: Mezclar 0,4 mL de amoniaco al 25% con
99,6 mL de metanol.

3.5.3.3.1.2.2 Materiales de referencia


Compuesto
PFOS

Estndares puros o en disolucin certificados de:


No. CAS
1763-23-1

3.5.3.3.1.3 Procedimiento de Extraccin


La muestra debe encontrarse a 4 C y debe analizarse dentro de las 2 semanas posteriores a su
muestreo; de no ser as, la muestra debe de mantenerse en congelacin desde el muestreo hasta
su procesamiento.
Primero se realiza el acondicionamiento del cartucho SPE:
Se acondiciona el cartucho hacindole pasar 4 mL de la disolucin de amoniaco/metanol y
finalmente 4 mL de agua. El cartucho nunca debe quedar seco, para ello cerrar a la llave
cuando el nivel del agua se encuentre por arriba de la cama del adsorbente, de esta manera se
mantendr activado.
Haga pasar por el cartucho 500 mL de la muestra a un flujo de 3-6 mL/min. Para las muestras
que contengan ms de 500 mg/L de materia suspendida solo utilizar 100 mL. Para eliminar el
agua atrapada en el adsorbente hacer pasar 30 segundos vaco; si no fue suficiente repetir en
periodos de 30 segundos pero no debe de hacerlo mas de 2 minutos pues puede resultar en
perdida de los analitos. Adicione 4 mL del buffer de acetato y seque el cartucho desechando el
lquido eludo.
Para eluir los PFOS haga pasar por el cartucho 4 mL de metanol seguido de 4 mL de 0,1% de
amoniaco/MeOH a un flujo de una gota por segundo. Colectar el eluato y concentrarlo con
nitrgeno a 500 L.
3.5.3.3.1.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras
No Aplica
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3.5.3.3.2 Suelos y Sedimentos
3.5.3.3.2.1 Equipo y Materiales
La mencin de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este mtodo se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propsitos ilustrativos.
Su mencin no implica ninguna aprobacin oficial. Puede obtenerse un desempeo equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este mtodo, pero la
demostracin del desempeo equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este mtodo.
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
Fase slida de carbono grafitado no poroso: Supelcelan ENVI-Carb
120/400 de Supelco
Contenedores de 500 mL
Tubos de centrifuga de polipropileno
Tubos para centrifuga Eppendorf de 1.7 mL
Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales de
fluoropolimeros.
Matraces volumtricos de 500 mL.

3.5.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia


Los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.

3.5.3.3.2.2.1 Reactivos

Metanol (CH3OH)
Hidrxido de sodio (NaOH)
Acido actico glacial (CH3COOH)
Acetato de amonio (CH3COO NH4)
Acido Clorhdrico concentrado (HCl)
Metanol
Agua A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.

NaOH 200 mM en metanol: Pesar 4 g de NaOH disolver en MeOH en un matraz


volumtrico de 500 mL y llevar al aforo con MeOH.
HCl 2 M en metanol: Tomar 88 mL de HCl concentrado y colocarlos en un matraz
aforado de 500 mL y con cuidado llevar al aforo con metanol.

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Acetato de amonio 4 mM: Pesar 0.0576 g de acetato de amonio, disolverlos en 100
mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumtrico de 200 mL.

3.5.3.3.2.2.2 Materiales de referencia


Estndares puros o en disolucin certificados de:
Compuesto
No. CAS
1763-23-1
PFOS

3.5.3.3.2.3 Procedimiento de Extraccin


El suelo o sedimento debe encontrarse en congelacin hasta el momento de su
procesamiento.
Descongelar el suelo o sedimento, pesar 2.5 g colocndolos en un tubo de centrifuga
de polipropileno y adicionar 1 mL de NaOH 200 mM en metanol dejando remojar por
30 minutos. Adicionar 100 L de HCl 2M en 9 mL de metanol, tapar el tubo (la tapa
debe ser de polipropileno) y agitar durante 15 minutos.
Centrifugar a 2000 rpm durante 5 min y transferir el sobrenadante a otro tubo de
polipropileno. Al tubo que contiene la fase slida adicionar 9 mL de metanol y repetir
el procedimiento de agitacin y centrifugacin. Repetir nuevamente la extraccin. Unir
los tres extractos de las tres extracciones y concentrar a aproximadamente 1 mL.
En un tubo de centrifuga Eppendorf de 1,7 mL adicionar 25 mg de ENVI-Carb y 50 L
de acido actico glacial y adicionar el mL de extracto obtenido en la parte de
concentracin. Tapar, agitar en vortex y centrifugar a 10000 rpm durante 10 minutos.
Pasar 0,5 mL del sobrenadante del tubo Eppendorf a. un vial de polipropileno y
adicionar 0,5 mL de acetato de amonio 4 mM. La muestra esta lista para su anlisis
por LC/MS
3.5.3.3.2.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras
No Aplica

3.5.3.3.3 Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales


3.5.3.3.3.1 Tejido graso e hgado
3.5.3.3.3.1.1 Equipo y Materiales
La mencin de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este mtodo
se citan debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen
propsitos ilustrativos. Su mencin no implica ninguna aprobacin oficial. Puede
obtenerse un desempeo equivalente usando otros equipos y materiales que no hayan
sido especificados en este mtodo, pero la demostracin del desempeo equivalente de
otros equipos y materiales es responsabilidad del laboratorio que utilice este mtodo.

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Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este
mtodo analtico.
Viales 40 mL

Mezclador de alta velocidad con vaso de polietileno o polipropileno

Tubos de centrifuga de polipropileno


Microjeringas de 10 y 50 L.
Filtros para jeringa de nylon de 0,2m. 25mm
Jeringas de plstico de 3 mL
Matraz volumtrico de 1L
Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales de
fluoropolimeros

3.5.3.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia


Los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a
menos que otra cosa se indique.

3.5.3.3.3.1.2.1 Reactivos
Sulfato acido de Tetrabutilamonio (TBA)
Hidrxido de sodio (NaOH)
Carbonato de sodio (NaCO3)
Bicarbonato de sodio (NaHCO3)
Metanol
Acetato de etilo (CH3COOCH2CH3)
Agua A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.
NaOH 10 N: Pesar 200g de NaOH en un vaso de precipitados de 500 mL, agregar
250mL de agua desionizada, agitar hasta disolver los slidos. Pasar a un matraz
aforado de 500 mL y llevar al aforo con agua. Debe almacenarse en una botella de
polietileno con capacidad de 500 mL.
NaOH 1 N: Colocar 10mL de la disolucin 10N preparada anteriormente en un
matraz volumtrico de 100mL y llevar al aforo con agua desionizada Debe
almacenarse en una botella de polietileno con capacidad de 125mL

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Tetrabutilamonio hidrogenosulfato (TBA) 0.5M: Pesar 169g de TBA en un
matraz volumtrico de 1L y disolver con 500mL de agua, ajustar el pH a 10
utilizando aproximadamente 64mL de la disolucin de NaOH 10N; llevar al
aforo con agua desionizada El ltimo mililitro de NaOH debe agregarse
cuidadosamente ya que el pH cambia abruptamente.
Esta disolucin debe almacenarse en una botella de polietileno con
capacidad de 1L. La disolucin de TBA requiere ser revisada justo antes de
su uso para asegurar pH=10. Si requiere ajuste, se utiliza la disolucin de
NaOH 1N.
Disolucin amortiguadora de Carbonato de sodio/Bicarbonato de Sodio
(Na2CO3/NaHCO3) 0,25M: Pesar aproximadamente 26,5g de carbonato de
sodio y 21g de bicarbonato de sodio; y colocarlos en un matraz volumtrico
de 1L, llevar a la marca de aforo con agua desionizada. Almacenar en una
botella de polietileno con capacidad de 1L.
3.5.3.3.3.1.2.2 Materiales de referencia

Compuesto
PFOS

Estndares puros o en disolucin certificados de:


No. CAS
1763-23-1

3.5.3.3.3.1.3 Procedimiento de Extraccin


Pesar 1 g de la muestra en un vaso de mezcla de alta velocidad, adicionar 2,5 mL de
agua y moler la muestra durante dos minutos hasta que sea homognea; pasar a un vial
de polietileno raspando las paredes del vaso con una esptula y/o adicionando 2,5 mL
mas de agua al vaso. Tapar y agitar en vortex durante 15 segundos.
En otro tubo de centrifuga colocar 1 mL de la mezcla homognea, 1 mL de TBA 0.5
M, 2 mL del buffer 0,25 M de carbonato de sodio/bicarbonato de sodio y 5 mL de
acetato de etilo. Tapar muestra y agitar durante 20 minutos en vortex. Posteriormente
centrifugar a 3500 rpm hasta la separacin de fases. Pasar 4 mL de la fase orgnica a
un tubo de centrifuga limpio. Posteriormente se evapora el disolvente con nitrgeno
hasta sequedad.
Adicionar 1 mL de MeOH, agitar 30 segundos en vortex y filtrar sobre un filtro de
nylon de 0,2 m colocndola en un vial de polipropileno. La muestra esta lista para su
anlisis en LC/MS
3.5.3.3.3.1.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras
No Aplica

3.5.3.3.3.2 Alimentos procesados y sin procesar


3.5.3.3.3.2.1 Equipo y Materiales
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La mencin de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este mtodo se
citan debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propsitos
ilustrativos. Su mencin no implica ninguna aprobacin oficial. Puede obtenerse un
desempeo equivalente usando otros equipos y materiales que no hayan sido
especificados en este mtodo, pero la demostracin del desempeo equivalente de otros
equipos y materiales es responsabilidad del laboratorio que utilice este mtodo.
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
Agitador mecnico
Mezclador de alta velocidad con vaso de polietileno o polipropileno
Tubos de centrifuga de polipropileno
Cartuchos de extraccin en fase slida de intercambio aninico dbil
Microjeringas de 10 y 50 L.
Filtros para jeringa de nylon de 0,2m. 25mm
Jeringas de plstico de 3 mL
Matraz volumtrico de 1L
Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales de
fluoropolimeros

3.5.3.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia


Los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a
menos que otra cosa se indique.

3.5.3.3.3.2.2.1 Reactivos
Hidrxido de potasio (KOH)
Metanol
Acetato de amonio (CH3COO NH4)
Hidrxido de amonio (NH4OH)
Agua A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.
KOH 0.01 M: Pesar 0.2805 g de KOH en un vaso de precipitados de 500 mL,
agregar 250mL de agua desionizada, agitar hasta disolver los slidos. Pasar a un

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matraz aforado de 500 mL y llevar al aforo con agua. Debe almacenarse en una
botella de polietileno con capacidad de 500 mL.
Acetato de amonio 25 mM - pH 4. Pesar 0,36 g de acetato de amonio, disolverlos en
100 mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumtrico de 200 mL.
Metanol bsico (0.1% NH4OH): En un matraz volumtrico de 250 mL se colocan
aproximadamente 200 mL de metanol y se agrega 0.25 mL de hidrxido de amonio
con una microjeringa y se lleva al aforro con metanol.
Disolucin amortiguadora de Carbonato de sodio/Bicarbonato de Sodio
(Na2CO3/NaHCO3) 0,25M: Pesar aproximadamente 26,5g de carbonato de
sodio y 21g de bicarbonato de sodio; colocarlos en un matraz volumtrico
de 1L, llevar a la marca de aforo con agua desionizada. Almacenar en una
botella de polietileno con capacidad de 1L.

3.5.3.3.3.2.2.2 Materiales de referencia


Compuesto
PFOS

Estndares puros o en disolucin certificados de:


No. CAS
1763-23-1

3.5.3.3.3.2.3 Procedimiento de Extraccin


En un vaso de alta velocidad se colocan 10 g de muestra y se adicionan 20 mL
de metanol y se homogeniza. Adicionar 20 mL de metanol y mezclar
nuevamente. La muestra se somete a agitacin vigorosa durante toda la noche
(16 horas).
Posteriormente las muestras son centrifugadas a 5000 rpm durante 15 minutos.
Las muestras de leche y huevo se someten a calentamiento (70) durante 2
horas para inducir la precipitacin de las protenas.
Se colecta el extracto metanlico y se evapora a sequedad con nitrgeno a 80
C y se reconstituye con 25 mL de KOH 0,01 M; se sonica durante 10 minutos y
se centrifuga a 5000 rpm 15 minutos.
Transferir la fase lquida con mucho cuidado a un tubo limpio de polipropileno.
Se acondiciona el cartucho de intercambio aninico de acuerdo a las
instrucciones del fabricante. Se hace pasar el extracto liquido por gravedad (si
es requerido se utiliza vaco). Se lava el cartucho con dos porciones de 6 mL de
acetato de amonio 25 mM, pH 4,5. La elusin se lleva a cabo con 4 mL de la
disolucin de metanol bsico colectando.
Al extracto obtenido de la elusin se evapora el disolvente con nitrgeno en un
bao de agua a 30 C y justo antes de que llegue a sequedad se reconstituye
con 400 L de metanol.

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3.5.3.3.3.2.4 Procedimiento de Purificacin de Muestras
No Aplica

3.5.4 MTODO DE IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN INSTRUMENTAL


3.5.4.1 Aplicacin y Alcances
3.5.4.1.1 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de PFOS y sus sales
en los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e
industriales, as como suelos, sedimentos, organismos, tejidos y
alimentos, los extractos y su purificacin depende de la matriz analizada;
se deben seguir los procedimientos de extraccin y purificacin
adecuados para cada matriz.
3.5.4.1.2 Limitaciones Los lmites de deteccin en las muestras reales dependern de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en
cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de
concentracin de las muestras e interferencias presentes en el extracto
purificado).
Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas
expertos en el uso de cromatografa de lquidos acoplada a espectrometra de
masas y en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.
3.5.4.2 Resumen
Este mtodo describe el anlisis de PFOS y sus sales de extractos por HPLCelectrospray/espectrometra de masas. La cuantificacin se lleva a cabo monitoreando el ion
caracterstico de PFOS M/Z 499.
3.5.4.3 Equipos y Materiales
3.5.4.3.1 Equipo
Cromatgrafo de lquidos (HPLC)electrospray/MS con controlador de
temperatura en el compartimiento de columna y todos los accesorios
necesarios incluyendo gases, inyector, automuestreador, etc. Debe tener
una interfase de Ionizacin por electrospray acoplado a un detector de
masas.
Balanza analtica con precisin de 0,0001 g
3.5.4.3.2 Materiales

2.0 Columna Thermo Keystone Betasil C18 HPLC Column 4.6 x 150mm
5m

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Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o
equivalente.
Microjeringa de 25 L, marca Hamilton 702N, No. parte 9301-0022 o
equivalente.
Microjeringa de 500 L, marca Hamilton 750N, No. parte 9301-0034 o
equivalente.
Matraces volumtricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapn esmerilado.
Viales de polipropileno o bien silanizados.
3.5.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.5.4.4.1.1 Reactivos

Acetonitrilo. Grado HPLC


Acetato de amonio
Metanol. Grado HPLC
Acetato de amonio 2 mM: Pesar 0.0288 g de acetato de amonio, disolverlos
en 100 mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumtrico de
200 mL.

3.5.4.4.1.2 Material de referencia


Estndares puros o en disolucin certificados de:
Compuesto
No. CAS
1763-23-1
PFOS

Disolucin Patrn de 100 mg/L


Pesar 0.01 mg del STD de PFOS en un matraz aforado de 100 mL, disolver y llevar
al aforo con metanol. Guardar en frasco de polipropileno.
Disolucin intermedia de 10 mg/L
A partir de la disolucin patrn tomar 100 L en un matraz aforado de 1 mL y
llevar al aforo con metanol.
Disoluciones de calibracin
Prepare 5 niveles como mnimo de diferente concentracin de las
disoluciones estndar para cada analito de inters en matraces volumtricos.
El punto de concentracin ms bajo de la curva de calibracin debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden

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al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarn definidas por el intervalo lineal del detector.
Estndar de calibracin de 1 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga 100
L de la solucin de 10 mg/L y afore a la marca con metanol.
Estndar de calibracin de 0,5 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 50 L de la
solucin de 10 mg/L y afore a la marca con metanol.
Estndar de calibracin de 0,25 mg/L. En un matraz de 1 ml ponga 25 L de
la solucin de 10 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolucin
en viales de 2 ml y etiquete.
Estndar de calibracin de 0,1 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 100
L de la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con metanol.
Estndar de calibracin de 0,05 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga
50 L de la solucin de 1 mg/L y afore a la marca con metanol.
3.5.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de
control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mnimos de este programa
consisten en una demostracin inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con
las especificaciones de desempeo del mtodo, adems realizar anlisis continuos de
muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisin y exactitud
continuas y el anlisis de blancos. El desempeo del laboratorio debe compararse
con los criterios aqu establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los
anlisis cumplen con las especificaciones de desempeo del mtodo. El analista debe
hacer una demostracin inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisin
aceptables por este mtodo.
Cada vez que se realice una modificacin al mtodo o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo est determinacin, el analista designado debe repetir la
validacin del mtodo, si el cambio va a afectar el lmite de deteccin del mtodo
(LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o ms
bajo que el anterior para los analitos de inters.
No se permite el uso de tcnicas determinativas alternativas y cambios que degraden
la ejecucin del mtodo. Si se utiliza una tcnica analtica que no sea la especificada
en este mtodo, dicha tcnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las
de las tcnicas descritas en este documento para el analito de inters.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas
a este mtodo. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificacin por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al
mtodo para ese analito.

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- Los nombres, ttulos, direcciones y nmero de telfono de los analistas que
ejecutaron los anlisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que
presenci y verific los anlisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del mtodo modificado
comparadas con el mtodo original, dichos datos deben de incluir todos los
parmetros mencionados en la seccin de desempeo del mtodo.
- La informacin escrita en las bitcoras tanto del equipo como del analista,
deben incluir los siguientes datos:

Identificacin de la muestra
Nmero del lote analtico en el cual se analiz la muestra
Fecha del anlisis
Procedimiento cronolgico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Nmero de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin
Registros de bitcoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
informacin
Informacin cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados del lote
analtico.
3.5.4.5.1 Verificacin del equipo
La verificacin del equipo debe realizarse de acuerdo a las instrucciones del
fabricante. En general:
Verificar que se tiene fase mvil necesaria en los reservorios.
Estabilizar el sistema con la columna por al menos 10 min.
Abrir la alimentacin de nitrgeno
3.5.4.5.2 Verificacin de la calibracin inicial.
La curva de la calibracin inicial deber realizarse inyectando los estndares
de calibracin preparados y se considera lineal, si el por ciento de la
desviacin estndar relativa (%RSD) de los factores de calibracin (CF) es
menor o igual al 20%, los clculos se realizan con las siguientes ecuaciones:

CF

total de rea
masa inyectada en nanogramos

% RSD

SDCF
x100
CF

Donde:

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SDCF= Desviacin estndar de los factores de calibracin
CF = Promedio de los factores de calibracin
La verificacin de la calibracin inicial puede tambin efectuarse mediante la
regresin por mnimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptacin es que
el factor de correlacin "r2" sea mayor o igual a 0.997.
Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisin del
sistema cromatogrfico y la preparacin de las disoluciones de calibracin.
Posteriormente la curva de calibracin ser vigente, si el anlisis de un punto
intermedio de la curva no presenta una variacin de la concentracin mayor
al 15% y que ser calculada de la siguiente manera.

Diferencia de concentracin % D

CC CT
x100
CT

Donde
CC= concentracin calculada
CT= concentracin terica

O si se utiliza el factor de calibracin

Diferencia porcentual %

CFv CF
x100
CF

Donde:
CFv= Es el factor de calibracin de cada compuesto en el estndar de
verificacin.
CF = Es la media del factor de calibracin del compuesto de la
calibracin inicial.
Si el criterio de aceptacin para la diferencia porcentual es mayor al 30% se
proceder a la revisin del sistema cromatogrfico y a la preparacin de la
solucin estndar utilizada.
3.5.4.5.3 Verificacin de contaminacin de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningn tipo de contaminante al
tiempo de retencin de los analitos, por lo que es importante que los
reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe
localizar la fuente de contaminacin y extraer y analizar nuevamente las muestras
asociadas al blanco contaminado
Use tambin los blancos de reactivos para verificar la contaminacin por arrastre de
muestras con altas concentraciones en anlisis secuenciales
3.5.4.5.4 Verificacin del lote analtico
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Por cada lote analtico de muestras analice al menos una muestra sinttica
de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado
de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analtico, calcule el
% de recuperacin del analito de la muestra control, los cuales debern estar
dentro del rango de 80 120 %R, de no ser as se debe revisar la preparacin
de la muestra control y el sistema cromatogrfico. Realizar la correccin
necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se deben
reanalizar todas las muestras del lote analtico.

3.5.4.5.5 Verificacin de interferencias de matriz


La verificacin de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo
mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el
anlisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique
una muestra por cada lote analtico o preferentemente una muestra de cada
tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben
analizar cuando por las caractersticas de la muestra se sospeche de
interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento
de calidad de un proyecto.
Efecto de la matriz en el recobro del analito Muestras fortificadas (MF):
Analice las muestras fortificadas:
Calcule el por ciento de recobro
El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analtico est fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
Efecto de la matriz en la precisin del analito Precisin de la matriz
duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la
duplicada para cada analito, con la siguiente ecuacin:

DPR

C1 C 2 * 200
C1 C 2

Donde:
C1 Concentracin de la primera muestra
C2 concentracin de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe
ser:<20%
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Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analtico est
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclyalas en el expediente del resultado
analtico.
Repita el anlisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provoc
que la prueba del DPR fallara.
3.5.4.5.6 Verificacin de la estabilidad de la curva de calibracin
En cada lote analizado, si ms de 10 muestras van a ser analizadas durante
el da, verifique la curva de calibracin analizando un estndar de
concentracin media del intervalo de trabajo al principio del lote y despus
de cada 10 muestras.
Calcule el factor de calibracin o la concentracin para cada analito del
estndar de concentracin media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la
siguiente ecuacin:

FC1 FC2
Diferencia porcentual
FC1

x100

Donde:
FC1 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en la curva
de calibracin, o la concentracin nominal de del estndar de
verificacin.
FC2 = Factor de calibracin promedio para cada plaguicida en el
estndar de concentracin media, o la concentracin calculada en el
estndar de verificacin.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deber ser menor al 15%, de
no ser as verifique su vigencia, revis tambin el sistema cromatogrfico y
determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre
nuevamente el sistema.
3.5.4.5.7 Verificacin de estndares surrogados.
NO APLICA
3.5.4.5.8 Verificacin de estndares internos.
NO APLICA
3.4.4.5.9 Control de Calidad Estadstico En esta seccin se especifica
como debe realizarse el control de calidad estadstico obligatorio para este
mtodo:
3.5.4.5.9.1 Preparacin de las Muestras de Control de Calidad (MCC)
Prepare la MCC de la siguiente forma:

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Se deber preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser
preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de
calibracin.
Prepare una disolucin a una concentracin
rango de trabajo del mtodo.

que corresponda al

NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea


conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la
medicin
3.5.4.5.9.2 Grficas de Control de Exactitud El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las grficas de control de exactitud
para cada lote analizado a partir de la demostracin inicial de
desempeo.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deber
graficarse y deber estar dentro de los lmites de control superior e inferior (
3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, debern rechazarse todos los
resultados del lote analtico, determine las causas y corrija los errores,
documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deber
repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.5.4.5.9.3 Grficas de Control de Precisin El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las grficas de control de precisin
para cada lote analizado a partir de la demostracin inicial de
desempeo
Determine los lmites de control de la siguiente forma:
Lmite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Lmite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisin es mayor al LSC, debern rechazarse todos
los resultados del lote analtico, determine las causas del problema y
corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y
acciones correctivas, deber repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.5.4.5.10 Validacin de modificaciones del mtodo o de mtodos alternos

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Para validar las modificaciones que se efecten a este mtodo o para la
utilizacin de mtodos alternos deber seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente mtodo, debern validarse
parcialmente.
Si se utiliza un mtodo alterno cuya fuente sea un mtodo estandarizado por
alguna Institucin de carcter internacional o reconocida internacionalmente
(e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment
Canada, etc.) tambin deber validarse parcialmente.
Si se utiliza algn mtodo no estandarizado, deber evidenciarse, adems
de los parmetros de validacin parcial, los parmetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeo de todo el sistema analtico utilizando
los datos recolectados de anlisis de blancos reactivos, solucin verificadora
del desempeo del laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algn analito a comparacin de los
cromatogramas del mtodo, ste deber corregirse. Los problemas de
coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna
cromatogrfica, problemas en la instalacin de la columna o mala operacin
del detector.
Verifique la precisin con rplicas del anlisis. Una pobre precisin
generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de
inyeccin. Si el sistema cromatogrfico se est comportando aparentemente
bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva
curva o juego de factores de calibracin para verificar las respuestas bajas
antes de buscar la fuente del problema.
3.5.4.5.11 Composicin del lote analtico (para cada 10 muestras)
1 Blanco electrnico
2 Mezcla de Verificacin
3 Blanco de Reactivos
4 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
5 Muestra real No. 1
6 Muestra real No. 2
7 Muestra fortificada
8 Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
9 Muestra real 5 a 10
10 Muestra de Verificacin de la Calibracin Continua.
3.5.4.5.12 Criterios de Aceptacin y Rechazo
Verificacin del Equipo

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Punto de verificacin

Criterio

Equipo libre de interferencias (blanco


electrnico)

No deber presenta picos a cualquier


tiempo de retencin

Verificacin de la Calibracin Inicial

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin del % Diferencia de la concentracin


de la Mezcla de Verificacin, punto intermedio de
la curva de calibracin.

Menor al 30%

Verificacin de Contaminacin de Reactivos

Punto de verificacin

Criterio

Blanco de reactivos

No deben presentar ningn tipo de


contaminante al tiempo de retencin
de los analitos medidos

Verificacin del Proceso Analtico

Punto de verificacin

Criterio

Muestra de control de calidad

% de Recuperacin de 70 / 130

Evaluacin de muestras adicionadas duplicadas

% DSR < 20%

Verificacin de Interferencias de Matriz

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de muestras adicionadas

% de Recuperacin 70 / 130

Estabilidad de la Curva de Calibracin

Punto de verificacin

Criterio

Evaluacin de la Estndar de Verificacin


(Intermedio)

% de diferencia menor al 35%

3.5.4.6 Calibracin
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Se necesitan al menos 5 estndares de calibracin. Uno debe contener analitos a una
concentracin cercana, pero superior a la del lmite prctico de cuantificacin para
cada analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo
esperado en las muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01g/L y el LPC es de 0.05
g/L, se espera que la muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 g/L.
Una vez establecidas las condiciones de operacin inyecte un volumen adecuado de cada
estndar de calibracin por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y
agrguelo a la tabla de calibracin del mtodo.
Si la DSR de cada analito es 20%, entonces la respuesta del instrumento es
considerada lineal y el factor de calibracin promedio FC puede utilizarse para la
cuantificacin de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces
no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibracin.
Si se utiliza regresin lineal por mnimos cuadrados, deber obtener el factor de
correlacin r2 para cada analito, el cual deber ser mayor o igual a 0.997 si r es
menor a este valor, la curva de calibracin no es lineal y deber verificarse la
preparacin de los estndares de calibracin y el sistema cromatogrfico y repetir la
calibracin.
3.5.4.7 Procedimiento Analtico
3.5.4.7.1 Anlisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatogrficas:
Temperatura columna
Fase mvil A
Fase mvil B
Gradiente:
Tiempo (min)
0
7.5
11
11.5

40 C
Acetato de amonio 2 mM
Metanol

% FM B
45
90
90
45

Volumen inyeccin
Flujo
MS Ionizacin
Modo MS
Voltaje del capilar
Temperatura de la fuente
Temperatura desolvatacion
Flujo del gas
Flujo del gas desolvatacion
m/z monitoreada

% FM A
55
10
10
55
10 L
3 mL/min
ESI negativo
SIM
3 kV
150 C
350 C
140 L/min
460 L/min
499

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Elabore la secuencia de anlisis de acuerdo a lo indicado en el punto de
composicin del lote analtico.
Inicie el anlisis.
Inyecte un volumen de10 L del extracto de la muestra o estndar en el
cromatgrafo de gases. Registre el volumen final del extracto.
Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y
criterios de aceptacin y rechazo.
Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de
calibracin, diluya el extracto y reanalice.
3.5.4.7.2 Identificacin de los analitos
La determinacin cuantitativa del PFOS se basa en que la curva de calibracin
esta hecha con los valores obtenidos de las reas del ion cuantificador vs
concentracin, por lo que las muestras que presenten picos al tiempo de
retencin del analito se les realiza la bsqueda del ion cuantificador y si esta
presente el ion se obtiene su concentracin con base en la ecuacin obtenida
de la regresin lineal de la curva de calibracin.
3.5.4.7.3 Clculos

3.5.4.7.3.1 AGUA
Calcule la concentracin como:

Volumen final extracto

Concentracing / L C i
Volumen de muestra

Donde
Ci = concentracin obtenida del cromatograma
Hay software en los cuales es posible introducir el factor de correccin para obtener el
resultado expresado en muestra.
3.5.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS
Calcule la concentracin como:

Volumen final extracto

Concentracing / Kg C i

Peso
de
muestra

Donde
Ci = concentracin obtenida del cromatograma

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Hay software en los cuales es posible introducir el factor de correccin para obtener el
resultado expresado en muestra.
3.5.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS Y
ALIMENTOS

Volumen final extracto

Concentracing / Kg C i

Peso
de
muestra

Donde
Ci = concentracin obtenida del cromatograma
Hay software en los cuales es posible introducir el factor de correccin para obtener el
resultado expresado en muestra.

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3.6 METALES Y METALOIDES (EXCEPTO MERCURIO)


El principio de este mtodo se basa en la digestin cida de las muestras y el anlisis por
Espectroscopa de Emisin Atmica con Plasma Inductivamente Acoplado (ICP/AES)

NOTA: Este mtodo est basado en su desempeo, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeo especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parmetros que se especifiquen como NO MODIFICABLES. Los
trminos debe, puede y deber son mencionados a travs de los mtodos y estn destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del mtodo. El trmino debe es usado para indicar que los desarrolladores de este
mtodo encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.

PARMETROS NO MODIFICABLES
Espectrmetro de Emisin Atmica con Plasma Inductivamente Acoplado (ICP/AES)

3.6.1 Aplicacin y Alcances


3.6.1.1 Propsito: La espectroscopa de Emisin Atmica con Plasma Inductivamente
Acoplado (ICP/AES) es aplicable para la determinacin de concentraciones de g/L para un
gran nmero de elementos (metlicos y no metlicos). Se requiere una digestin cida
previa al anlisis y filtracin para analizar los metales totales a analizar.
De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes mtodos de digestin para solubilizar
los metales en las muestras antes de su anlisis instrumental.
3.6.1.2 Analitos: El mtodo es aplicable a los siguientes analitos:
Ag, As, Ba, Be, Cd, Ca, Cr, Cu, Co, Fe, Ni, Mg, Mn, Mo, Pb, Na, Ni, Se, Sb, Tl, V y Zn.
Este mtodo puede ser aplicado a otros elementos, se debe validar la aplicacin para cada
uno de los analitos que quiera ser analizado.
Este mtodo no puede ser utilizado para la determinacin de Mercurio .
3.6.1.3 Matrices: Este mtodo es aplicable para el anlisis de metales en las siguientes
matrices ambientales:

Aire Ambiente
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras

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PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. Mxico, p. 222.

Aguas Superficiales Epicontinentales


Aguas Subterrneas
Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales
Sangre
Leche Materna

3.6.1.4 Limitaciones: Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de analistas
expertos en el uso de ICP/AES y en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe demostrar
la habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.

3.6.2 Resumen
Una porcin homogenizada de una muestra lquida o slida es pesada con exactitud para su
procesamiento. Para un anlisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos
utilizando el mtodo de preparacin de muestras apropiado, quedando esta lista para ser
analizada por ICP-AES utilizando un instrumento secuencial de plasma axial, dicho instrumento
mide espectros de emisin caractersticos por espectrometra ptica. Los espectros son
dispersados por una rejilla de difraccin y las intensidades de las lneas de emisin son
monitoreadas por dispositivos fotosensitivos.
AIRE AMBIENTE
Se determina la concentracin de partculas suspendidas totales en el aire ambiente, por
medio de un muestreador de alto volumen adecuadamente localizado, que succiona a
travs de un filtro una cantidad entre 1 600 y 2 400 m3 de aire ambiente, a un flujo entre
1,13 y 1,70 m3/min durante un perodo de muestreo de 24 hrs. La velocidad de flujo del aire
ambiente y la geometra del muestreador son tales que favorecen la recoleccin de
partculas hasta de 50 micrmetros (m) de dimetro aerodinmico, dependiendo de la
velocidad del viento y su direccin. Los filtros usados deben tener una eficiencia de
recoleccin mnima del 99 % para partculas de 0.3 m.
El filtro se pesa en el laboratorio bajo condiciones de humedad y temperatura controladas,
antes y despus de su uso, para determinar su ganancia neta de peso (masa). El volumen
total de aire muestreado, corregido a las condiciones de referencia, se determina a partir
del flujo de aire ambiente medido y del tiempo de muestreo. La concentracin de partculas
suspendidas totales en el aire ambiente se calcula dividiendo la masa de las partculas
recolectadas entre el volumen de aire muestreado y se expresa en microgramos por metro
cbico patrn (g/ m3 ptn), corregidos a las condiciones de referencia.
En muestras tomadas a temperaturas y presiones baromtricas que difieren
significativamente de las condiciones de referencia, las concentraciones corregidas pueden
variar de las concentraciones reales (g/ m3 real), sobre todo a elevadas altitudes. Las
concentraciones reales de partculas pueden ser calculadas a partir de las concentraciones
corregidas, utilizando las temperaturas y presiones que se hayan presentado durante el
perodo de muestreo.
El filtro es dividido en tiras y se digiere una de ellas por el mtodo de microondas, se afora a
un volumen conocido y de analiza por ICP/AES para metales y metaloides..
AGUAS (Superficiales, Epicontinentales y Subterrneas)

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Una alcuota representativa de 45 mL de muestra acuosa es digerida en microondas con 4
mL de cido ntrico concentrado y 1 mL de cido clorhdrico concentrado; en vasos de
digestin de tefln (PFA o TFM compuestos) s durante 20 minutos. Posteriormente al
proceso de digestin, la muestra es enfriada, filtrada y colocada en un tubo limpio para su
posterior anlisis por ICP/AES.
AGUAS MARINAS, ESTAURINA Y SALMUERAS
Este mtodo es usado para preconcentrar elementos traza usando una resina quelatante
de iminodiacetato funcionalizada. Seguida de una solubilizacin cida, la muestra es
buffereada y pasada por la columna quelatante; los grupos metlicos I y II, al igual que los
aniones, son separados selectivamente para el anlisis por elusin con acetato de amonio
a pH 5,5. Los analitos son subsecuentemente eludos en una matriz simplificada que
consiste en cido ntrico 0,75 M.
SUELO Y SEDIMENTOS
Una alcuota representativa de 1,0 g de muestra se digiere en microondas con 9 mL de
cido ntrico concentrado y 1,0 mL de cido clorhdrico concentrado, para matrices
complejas no pese ms de 1,0 g de muestra adicione 9 mL de cido ntrico concentrado y 3
mL de cido fluorhdrico en vasos de digestin de tefln (PFA o TFM compuestos) durante
10 min. Posteriormente al proceso de digestin, la muestra es enfriada, filtrada y colocada
en un tubo limpio para su posterior anlisis por ICP/AES.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Una alcuota representativa de 0.25 - 1,0 g de muestra se digiere en microondas con 8 mL
de cido ntrico concentrad y aadir 1 mL de H202 al 30% en vasos de digestin de tefln
(PFA o TFM compuestos) durante 10 min. Posteriormente al proceso de digestin, la
muestra es enfriada, filtrada y colocada en un tubo limpio para su posterior anlisis por
ICP/AES.
SANGRE HUMANA
La muestra se digiere con HNO3:HClO4:H2SO4 (3:1:1), se reduce su volumen a 1 mL y se
deja enfriar. Las muestras son analizadas por ICP/AES.
LECHE HUMANA
Una alcuota representativa de leche se mezcla cido ntrico, se calienta,, una vez fra se
adicionan cido perclrico concentrado y nuevamente se somete la mezcla a
calentamiento. Se aade H202 al 30% y se calienta a 70C, finalmente se lleva a un
volumen de 10mL con agua doblemente destilada y agua desionizada.
La determinacin de los metales en la muestra se realiza mediante ICP/AES.

3.6.3 Procedimientos de Digestin de muestras


3.6.3.1 Interferencias generales

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Solventes, reactivos, material de vidrio, etc. pudieran causar interferencias. Todo lo
mencionado anteriormente debe demostrarse que no aportan interferencia alguna.
La digestin de muestras con alto contenido de orgnicos puede generar presiones
altas debido a los gases generados durante la digestin. Lo anterior pudiera causar
desfogue en los liners teniendo el riesgo de perdida de los analitos.
Muchas muestras pueden disolverse con este mtodo; sin embargo cuando la
muestra contiene slidos suspendidos tales como compuestos refractarios (como
dixido de silicio, dixido de titanio, alumina y otros xidos) estos pudieran
secuestrar analitos target. Los enlaces con estos elementos pueden considerarse
como no mviles en el ambiente por lo que son excluidos de la mayora de los
mecanismos de transporte de contaminantes acuosos.
Muestras altamente reactivas o contaminadas pudieran requerir dilucin antes de su
anlisis. Muestras altamente reactivas pueden requerir pre-digestin para minimizar
reacciones vigorosas
En la preparacin de muestras para aire ambiente puede presentarse la prdida de
partculas voltiles. Las partculas voltiles recogidas en el filtro pueden perderse
durante el muestreo subsecuente o durante el envo posterior, durante el
almacenamiento del filtro antes de pesarse o despus del muestreo. Aunque tales
prdidas son en gran medida inevitables, para reducir el error, el filtro se debe pesar
tan pronto como sea posible despus del muestreo.
Partculas artificiales. Se pueden llegar a formar partculas a partir de los gases
cidos de la muestra de aire y el material alcalino del filtro, lo cual incrementara la
concentracin real de partculas suspendidas totales. De ocurrir esto, generalmente
se presenta al inicio del perodo de muestreo y es una funcin del pH del filtro y la
presencia de los gases cidos. Este efecto cobra importancia cuando se presentan
partculas de peso relativamente pequeo.
Los filtros de fibra de vidrio son relativamente estables ante los cambios de la
humedad relativa, pero las partculas colectadas pueden ser higroscpicas. El
procedimiento de acondicionamiento de humedad puede minimizar, pero no eliminar
completamente el error debido a sta.
3.6.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los qumicos utilizados en este mtodo no ha sido
determinadas con precisin; de todas maneras; cada sustancia qumica debe ser tratada
como potencial peligro a la salud. La exposicin a estas sustancias qumicas debe ser
reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene
ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos
resultados estn disponibles para los analistas.
La acidificacin de las muestras que contienen materiales reactivos puede ocasionar
la liberacin de gases txicos, como cianuros o sulfuros. La acidificacin debe
realizarse en una campana de extraccin.
Los cidos y bases concentradas causan severas quemaduras e irritaciones en la piel. Debe utilizarse
ropa protectora tal como: Batas, guantes y lentes de seguridad cuando se manejan estos productos

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qumicos.
Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo
de las normas de seguridad respecto a la exposicin y manejo seguro de las sustancias
qumicas especificadas en este mtodo. Debe tenerse un archivo de referencias de las
hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal
involucrado en estos anlisis.

3.6.3.3 Matrices
3.6.3.3.1 Aire Ambiente
3.6.3.3.1.1 Equipo y Materiales
Solo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso comn en el
laboratorio analtico.
3.6.3.3.1.1.1 Equipo
Muestreador de aire de alto volumen (HV)
Filtros de medio o super alta eficiencia de recoleccin para partculas muy
pequeas ( tamao submicrometro)
Cmara ambiental de acondicionamiento para filtros: La temperatura
controlada debe ser entre 15 y 30C con un mximo de 3C de variacin
durante el perodo de equilibrio. La humedad debe controlarse en un nivel
menor del 50% de humedad relativa constante dentro de 5%.
Balanza analtica: La sensibilidad de la balanza analtica debe ser de 0.01
mg. La cmara de pesado debe estar diseada para que pueda ser
introducido un filtro sin doblar
Unidad luminosa de inspeccin. La fuente de luz debe ser similar a la de un
visor de pelculas de rayos X para la inspeccin de los filtros.
Se debe disponer de un foliador para numerar los filtros antes de que se
coloquen en la cmara de acondicionamiento ambiental, en caso de no
estar numerados por el fabricante.
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente
que proporcione una energa de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energa requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presin y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestin de tefln PFA marca CEM modelo ACV,
HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o
equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura mxima de
210C.

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Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribucin homognea de la
radiacin dentro de la unidad.
PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operacin del
modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de
este mtodo y requerimientos del anlisis deben consultarse con las
especificaciones del manual del equipo.
3.6.3.3.1.1.2 Materiales:
Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.
Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.
Embudos para filtracin de polipropileno.
Matraz Erlenmeyer de 125 mL
3.6.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS
grado reactivo
Agua Reactivo A menos que otra forma se indique, el agua utilizada debe
ser agua grado reactivo tipo II ASTM.
cido ntrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.
cido Clorhdrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.
Acido Fluorhdrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente
3.6.3.3.1.3 Procedimiento de digestin de Muestra
3.6.3.3.1.3.1 preparacin del filtro previo su muestreo
Se debe inspeccionar a contra luz cada filtro para detectar posibles
orificios u otras imperfecciones; deben descartarse los filtros con
imperfecciones evidentes. Deben foliarse cada filtro en dos orillas
opuestas de la cara que no va a ser expuesta, todo esto antes de
someter los filtros al proceso de estabilizacin.
Se debe poner el cuarto de balazas a las condiciones de humedad
relativa y temperatura que se registren en la camara de
acondicionamiento. Los filtros son colocados en la camara de
acondicionamiento registrando temperatura y humedad.
Acondicionar los filtros en la camara ambiental con una temperatura
controlada de 15 a 30 C con un mximo de variacin de 3C de
variacin y con una humedad relativa de 50% 5% por 24 horas.
Pasado el tiempo poner el cuarto de balanzas a las condiciones de
temperatura y humedad relativa de la camara y pesar cada uno de los
filtros registrando su peso (Gi). Guardarlos individualmente en sobres.
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3.6.3.3.1.3.2 Preparacin del filtro despus del muestreo.


Permita que el filtro alcance el equilibrio a condiciones ambientales por
lo menos 24 horas.
Inmediatamente despus del acondicionamiento, pese el filtro llevando
la fraccin al miligramo ms cercano y registrar el peso neto del filtro (G f)
junto con el nmero del filtro.
Determine el peso neto de partculas retenidas en el filtro por diferencia
entre el peso final y el peso inicial del filtro.
3.6.3.3.1.3.3 Digestin de las muestras
Corte el filtro en 12 tiras de 2.5 cm x 20 cm (20 x 25 cm) usando guantes
de vinilo y un molde prehecho de plexiglas duro o acrlico lavado con
cido antes de cada uso y una navaja.
Enrolle cada tira del filtro e introdzcala con cuidado al liner y agregue
15 mL de HNO3 3M (el cido debe cubrir totalmente el filtro enrollado),
ponga el liner de microondas y agregue 31 mL de agua reactivo, tape el
liner y pselo con una exactitud de 0,01 g. Digiera a W durante 23 min.
(es importante digerir los 12 tubos) si se usan menos tubos es necesario
ajustar la potencia del horno para que sea equivalente (ver instructivo
especfico de cada equipo para realizar su calibracin).
Al terminar la digestin, enfre los vasos digestores, pese los vasos y la
diferencia entre el peso inicial y el final no debe ser mayor a 0,1 g, si es
mayor repita la digestin ya que existi alguna fuga en el vaso digestor.
Retire el tubo de centrfuga y agregue 10 mL de agua reactivo, tape el
tubo y agite en vortex por 3 minutos, por medio de una jeringa de nylon o
tefln tome 10 mL del digerido en un tubo nuevo de plstico y la muestra
se entrega para anlisis por ICP/AES.

3.6.3.3.2 Aguas superficiales epicontinentales y subterrneas


3.6.3.3.2.1 Equipo y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
Todo el material volumtrico utilizado en ste mtodo debe ser clase A o estar
verificada su calibracin.
3.6.3.3.2.1.1 Equipo
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente

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que proporcione una energa de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energa requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presin y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestin de tefln PFA marca CEM modelo ACV,
HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o
equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura mxima de
210C.
Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribucin homognea de la
radiacin dentro de la unidad.
PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operacin del
modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de
este mtodo y requerimientos del anlisis deben consultarse con las
especificaciones del manual del equipo.
Balanza analtica con precisin de 0,1 mg.
3.6.3.3.2.1.2 Materiales:

Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.


Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.
Embudos para filtracin de polipropileno.
Matraz Erlenmeyer de 125 mL.

3.6.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia


A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS
grado reactivo
Agua Reactivo A menos que otra forma se indique, el agua utilizada debe
ser agua grado reactivo tipo II ASTM.
cido ntrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.
cido Clorhdrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.
cido Fluorhdrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente.
3.6.3.3.2.3 Digestin de las muestras
3.6.3.3.2.3.1 Lavado de vasos
Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de
digestin; adicione 3 mL de cido ntrico concentrado a cada uno de los
vasos, tape el vaso. Deposite los vasos en el carrusel del microondas
Lave de acuerdo al programa
ETAPA

POTENCIA

RAMPA PSI

TEMP.

MANT.
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1

1 a 3 vasos 300 W
4 a 6 vasos 600 W 100
7 a 14 vasos 1200 W

10:00

100

200C

5:00

Permita que los vasos se enfren al menos 5 minutos en la unidad de


microondas. Destape cuidadosamente y enjuague con agua
desionizada.
3.6.3.3.2.3.2 Digestin cida por microondas
Mida una alcuota de 45 mL de muestra homognea, esta alcuota es
depositada dentro de los vasos de digestin. En el proceso un blanco de
reactivos es tratado en la misma manera que las muestras junto con
muestras duplicadas.
Adicione 4 mL de HNO3 y 1 mL de HCl a cada vaso, tape el vaso.
Deposite los vasos en el carrusel del microondas.
NOTA: Durante el proceso pueden ser liberados xidos de nitrgeno, por lo cual
debe asegurarse que el sistema de ventilacin funcione apropiadamente.
La distribucin de los vasos en el carrusel debe
equilibrio. El propsito de los blancos de muestra
balance a la energa seleccionada.
El programa de microondas para la secuencia de las
ir a 160C 5C en 10 min y permitir un ascenso
170C durante los siguientes 10 min.

ETAPA
1

POTENCIA
1 a 3 vasos 300 W
4 a 6 vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W
1 a 3 vasos 300 W
4 a 6 vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W

RAMPA

PSI

MAN

100

10:00

250

160

0:00

100

10:00

250

170

00:00

estar siempre en
es para darle un
muestras debe de
lento de 160C a

-Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfren al
menos 5 min en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar
posibles daos en el sistema de ventilacin de los vasos. Asegrese que
estn fras para evitar prdidas de mercurio.
NOTA: Las muestras pueden enfriarse fuera de la unidad, si se desea que el
enfriado sea ms rpido se puede meter en refrigeracin.

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Complete la preparacin de la muestra destapando cuidadosamente
cada vaso dentro de la campana de extraccin. Lleve la muestra a un
volumen final de 50 mL, si la muestra digerida contiene partculas las
cuales puedan obstruir el nebulizador, pase la muestra a travs de filtros
Whatman No. 41 equivalente y transfirala a un tubo previamente
etiquetado..

3.6.3.3.3 Aguas marinas, estaurinas y lagunas costeras


3.6.3.3.3.1 Equipo y Materiales
3.6.3.3.3.1.1 Equipo
Balanzas Balanza analtica, con presicin de 0,1 mg, balanza de
platillos principales con presicin de 0,01g.
Parrilla de calentamiento.
Centrfuga.
Horno de secado capaz de mantener 105 5 C.
pHmetro resolucin de 0,1 unidades de pH.
Sistema de Preconcentracin no debe tener partes metlicas donde
tenga contacto con el analito
Columna. Resina quelante de iminodiacetato con macroporos
Sistema de bombeo de eluyente (P1
Bombas auxiliares de bombeo con pistn (P2), acarreadora (P3) y
peristltica (P4).
Vlvulas de Control Inert Double Snack, neumtica de cuatro vas.
3.6.3.3.3.1.2 Materiales
Pipeta automtica capaz de dar volmenes de 10 a 2500 L, con un
surtidor libre de metal y puntas desechables.
Vasos de precipitado de 250 mL
Vidrios de reloj
3.6.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Debido a la alta sensibilidad del mtodo, todos los reactivos deben ser de ultra alta
pureza y agua ASTM tipo I a menos que se especifique lo contrario.
cido actico glacial.
Hidrxido de amonio (20%).
Buffer de acetato de amonio 1M, pH 5,5 aadir 58mL de cido actico
glacial a 600mL de agua tipo ASTM. Agregar 65mL de hidrxido de amonio
al 20% y mezclar. Revisar el pH de la disolucin . Ajustar el pH en 5,5 0,1
con pequeos volmenes de acido actico o hidrxido de amonio si es
necesario. Enfriar y diluir a 1L con agua ASTM.

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Buffer de acetato de amonio 2M, pH 5,5 preparar igual al punto anterior,
usando 116 mL de cido actico glacial y 130 mL de hidrxido de amonio
al 20%, y diluirlo a 1L con agua ASTM.
NOTA: Las soluciones buffer de acetato de amonio pueden ser purificadas ms
adelante hacindolas pasar a travs de una columna quelatante a un flujo de 5
mL/min.
cido ntrico concentrado.
cido oxlico hidratado 0,2 M

3.6.3.3.3.3 Digestin de las Muestras


A 100mL de muestra, agregar 2mL (1-1) de cido ntrico. Colocarlo en la parrilla
para evaporar la solucin. La parrilla debe estar colocada en una campana y dejar
evaporar a una temperatura no mayor a 85C. El vaso debe ser cubierto con un
vidrio de reloj para evitar la contaminacin de la muestra con el ambiente de la
campana. Reducir el volumen de la alcuota de la muestra a 20 mL.
NOTA: Para un calentamiento apropiado, ajustar el control de temperatura de la
parrilla de forma tal que un vaso descubierto que contenga 50mL de agua puesto en
el centro de la parrilla pueda ser mantenido a una temperatura de aproximadamente
pero no mayor a 85C (Una vez que se coloca el vaso cubierto con el vidrio de reloj
la temperatura aumentar a aproximadamente 95C)
Dejar enfriar el vaso, y transferir cuantitativamente la muestra a un matraz
volumtrico de 100mL y diluir al volumen con agua, tapar y mezclar.
Permitir a cualquier material no disuelto reposar toda la noche o centrifugar una
porcin de la muestra (si despus de centrifugar o dejar reposar toda la noche, la
muestra contiene slidos suspendidos, una porcin de la muestra debe ser filtrada
antes del anlisis. Tener cuidado en la filtracin para evitar cualquier tipo de
contaminacin). Debido a los efectos de varias matrices en la estabilidad de las
muestras diluidas, todos los anlisis deben ser realizados tan pronto como sea
posible despus de la preparacin completa.
Antes de usar el sistema de preconcentracin debe ser limpiado y descontaminado
usando cido oxlico 0,2M. Colocar aproximadamente 500mL de cido oxlico
0,2M en los contenedores de la solucin eluyente y correr la muestra con cido
oxlico 0,2M usando la bomba de la muestra a un flujo de 3 5mL/min. Con el
sistema de preconcentracin desconectado del ICP-MS, usar el programa de
secuencia como se muestra en la tabla siguiente para limpiar el sistema completo
con cido oxlico. Repetir la limpieza 3 veces.
Programa de Secuencia de Bombeo de Eluyente para la Preconcentracin de
Elementos Traza.
Tiempo
(min)

Flujo
(mL/min)

Eluyente

Vlvula A,
B

Vlvula C

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0,0
4,5
5,1
5,5
7,5
8,0
10,0
11,0
12.5

4,0
4,0
1,0
1,0
4,0
4,0
4,0
4,0
0.0

1M Acetato de Amonio
1,25M cido Ntrico
1,25M cido Ntrico
1,25M cido Ntrico
1,25M cido Ntrico
1M Acetato de Amonio
1,25M cido Ntrico
1M Acetato de Amonio

Abierta
Abierta
Cerrada
Cerrada
Cerrada
Cerrada
Cerrada
Cerrada
Cerrada

Abierta
Abierta
Abierta
Cerrada
Abierta
Abierta
Abierta
Abierta
Abierta

Repetir la secuencia usando cido ntrico 1,25M, y despus usando agua ASTM en
lugar del cido oxlico 0,2M.
Enjuague los recipientes con agua ASTM, llnelos con los reactivos designados y
corra la secuencia de la tabla anterior. Inicie el ICP-MS y reconecte el sistema de
preconcentracin.
Con las vlvulas A y B cerradas y la vlvula C abierta, corra la muestra hacia los
desechos con la bomba (P4) por 4 minutos a un flujo de 4mL/min. Encienda la
bomba acarreadora (P3) y bombe cido ntrico 1% al nebulizador del ICP-MS a un
flujo de 0,8 1,0mL/min. Encienda la bomba del buffer de acetato de amonio 2M
(P2) a un flujo de 1,0mL/min.
La preconcentracin de la muestra puede ser corrida a travs de una secuencia de
bombeo de eluyente como en la tabla anterior. El tiempo exacto de esta secuencia
debe ser modificada de acuerdo al volumen interno y al hardware.
Inyeccin de la muestra con las vlvulas A, B y C abiertas, correr la muestra hacia
la columna usando acetato de amonio 1M por 4,5min a 4,0mL/min. Los analitos son
retenidos en la columna mientras que la mayor parte de la matriz es llevada a los
desechos,
Elusin de los analitos cierre las vlvulas A y B y comience la elusin de los
analitos b
bombeando cido ntrico 1,25M a travs de la columna a 4,0mL/min; cierre la
vlvula C y bombe los analitos eludos al ICP-MS a 1,0mL/min, e inicie el software.
Reacondicionamiento de la columna abra la vlvula C para dirigir el eluyente de la
columna hacia los residuos, y bombe cido ntrico 1,25 M, acetato de amonio 1 M,
cido ntrico 1,25 M y acetato de amonio 1 M alternadamente a travs de la columna
a 4,0 mL/min. Durante este proceso, la siguiente muestra puede ser cargada usando
la bomba P4.
Repetir la secuencia para cada muestra a ser analizada. Al final de las corridas
analticas, dejar la columna llena del buffer de acetato de amonio 1M hasta el
siguiente uso.
NOTA: Las muestras que hayan sido concentradas de ms, deben ser diluidas con
HNO3 al 1% y reanalizadas.

3.6.3.3.4 Suelos
189

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3.6.3.3.4.1 Equipo y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
Todo el material volumtrico utilizado en ste mtodo debe ser clase A o estar
verificada su calibracin.
3.6.3.3.4.1.1 Equipo

La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente


que proporcione una energa de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energa requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presin y un
controlador de microondas.

El sistema requiere de vasos de digestin de tefln PFA marca CEM modelo ACV,
HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o
equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura mxima de
210C.

Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribucin homognea de la


radiacin dentro de la unidad.
PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operacin del
modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de
este mtodo y requerimientos del anlisis deben consultarse con las
especificaciones del manual del equipo.

Balanza analtica con precisin de 0,1 mg.


3.6.3.3.4.1.2 Materiales:
Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.
Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.
Embudos para filtracin de polipropileno.
Matraz Erlenmeyer de 125 mL.

3.6.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia


A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS
grado reactivo
Agua Reactivo A menos que otra forma se indique, el agua utilizada debe
ser agua grado reactivo tipo II ASTM.
cido ntrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.

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cido Clorhdrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.
cido Fluorhdrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente.
Peroxido de Hidrogeno (H2O2)
3.6.3.3.4.3 Digestin de las muestras
3.6.3.3.4.3.1 Lavado de vasos
Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de
digestin., adicione 3 mL de cido ntrico concentrado a cada uno de los
vasos, tape el vaso.
Deposite los vasos en el carrusel del microondas
Lave de acuerdo al programa
ETAPA
1

POTENCIA
% RAMPA PSI
1 a 3 vasos 300 W
4 a 6 vasos 600 W 100 10:00 100
7 a 14 vasos 1200 W

TEMP.

MANT.

200C

5:00

Permita que los vasos se enfren al menos 5 minutos en la unidad de


microondas y destape cuidadosamente y enjuague con agua desionizada.
3.6.3.3.4.3.2 Digestin cida por microondas
Mezcle bien la muestra, pese aproximadamente 0,5 g en un vaso de digestin,
adicione 9 mL de cido ntrico concentrado y 1 mL de cido clorhdrico
concentrado. Si ocurre una reaccin vigorosa espere a que la reaccin se detenga
antes de cerrar los vasos. Cierre los vasos y depostelos en el carrusel del
microondas.
PRECAUCIN: Pueden liberarse xidos de nitrgeno, verifique que el sistema de
ventilacin funcione adecuadamente. La digestin puede ocasionar una reaccin
vigorosa. Si esto ocurre espere a que los vasos se enfren antes de taparlos.
PRECAUCIN: Cuando la digestin de muestras contienen voltiles o
componentes orgnicos que se oxiden fcilmente, use inicialmente no ms de 0,10
g de muestra y observe la reaccin antes de tapar los vasos. Si ocurre una reaccin
vigorosa espere a que la reaccin cese antes de tapar los vasos. Si no ocurre una
reaccin aparente, puede usar un peso de muestra de 0,25 g.
La distribucin de los vasos en el carrusel debe estar siempre en equilibrio. El
propsito de los blancos de muestras es para darle un balance a la energa
seleccionada.
El programa de microondas debe ser de acuerdo a las recomendaciones del
fabricante. La secuencia de las muestras debe ir de 175C 4C en 5 minutos y
mantener esta temperatura por 5 minutos.
ETAPA

POTENCIA

RAMPA

PSI

MAN
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1 a 3 Vasos 300 W
4 a 6 Vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W

100

05:00

250

175

5:00

Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfren al menos
por 5 minutos en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar posibles daos
en el sistema de ventilacin de los vasos. Las muestras pueden enfriarse fuera de
la unidad, si desea que el enfriado sea ms rpido puede meterlos a refrigeracin.
Asegrese que este fro para no perder mercurio.
Complete la preparacin de las muestras destapando cuidadosamente cada vaso
dentro de la campana de extraccin. Lleve la muestra a un volumen final de 50
mL, si la muestra digerida contienen partculas las cuales pueden obstruir el
nebulizador, pase la muestra a travs de filtro Whatman No. 41 y transfiera a un
matraz Erlenmeyer.

3.6.3.3.5 Sedimentos (marinos y epicontinentales)


VER PROCEDIMIENTO PARA SUELOS
3.6.3.3.6 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos animales,
Equipo y Materiales
VER PROCEDIMIENTO PARA SUELOS
Reactivos y Materiales de Referencia
VER PROCEDIMIENTO PARA SUELOS
Digestin de las muestras
Lavado de vasos
Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de digestin.,
adicione 3 mL de cido ntrico concentrado a cada uno de los vasos, tape el
vaso.
Deposite los vasos en el carrusel del microondas
Lave de acuerdo al programa
ETAPA
1

POTENCIA
% RAMPA PSI
1 a 3 vasos 300 W
4 a 6 vasos 600 W 100 10:00 100
7 a 14 vasos 1200 W

TEMP.

MANT.

200C

5:00

Permita que los vasos se enfren al menos 5 minutos en la unidad de


microondas y destape cuidadosamente y enjuague con agua desionizada.
Digestin cida por microondas

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Es necesario considerar el contenido energtico de la muestra, pues dependiendo de
ello se decide la cantidad a pesar. De 0.5 a 1g de muestra se pesa en un vaso de
digestin, adicione 8 mL de cido ntrico concentrado debe adicionarlo escurriendo
por las paredes gota a gota hasta que ya no ocurran reacciones violentas. Algunos
alimentos especialmente los que contienen alto contenido de azucares pueden
reaccionar con el acido ntrico durante varios minutos Si ocurre una reaccin
vigorosa coloque los vasos en una campana de extraccin y espere a que la
reaccin se detenga.
Adicione 1 mL de H2O2. Cierre los vasos y depostelos en el carrusel del
microondas.
PRECAUCIN: Pueden liberarse xidos de nitrgeno, verifique que el sistema de
ventilacin funcione adecuadamente. La digestin puede ocasionar una reaccin
vigorosa. Si esto ocurre espere a que los vasos se enfren antes de taparlos.
La distribucin de los vasos en el carrusel debe estar siempre en equilibrio. El
propsito de los blancos de muestras es para darle un balance a la energa
seleccionada.
El programa de microondas debe ser de acuerdo a las recomendaciones del
fabricante. La secuencia de las muestras debe ir de 175C 4C en 5 minutos y
mantener esta temperatura por 5 minutos.
POTENCIA

RAMPA

CONTROL PRESION

TEMPERATURA

DURANTE

1200 W

25 min

800 PSI

200 C

15 min

Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfren al menos
por 5 minutos en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar posibles daos
en el sistema de ventilacin de los vasos. Las muestras pueden enfriarse fuera de
la unidad, si desea que el enfriado sea ms rpido puede meterlos a refrigeracin.
Asegrese que este fro para no perder mercurio.
Complete la preparacin de las muestras destapando cuidadosamente cada vaso
dentro de la campana de extraccin. Lleve la muestra a un volumen final de 25
mL, si la muestra digerida contienen partculas las cuales pueden obstruir el
nebulizador, pase la muestra a travs de filtro Whatman No. 41 y transfiera a un
tubo para su anlisis por ICP/AES.
3.6.3.3.7 Sangre Humana
3.6.3.3.7.1 Equipo y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.

Balanza analtica
Parrilla de calentamiento
Vaso de pp de 125 mL
Vidrio de reloj

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Pipeta de 5 y 10 mL
Matraces volumtricos de 5, 10 y 1000 mL.
3.6.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los disolventes que requiere el mtodo deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa se
indique.

cido Ntrico conc.


cido Preclrico conc.
cido sulfrico conc.
Agua Desinoizada
3.6.3.3.7.3 Digestin de las Muestras

Al momento de la toma de muestra se le debe adicionar un anticoagulante como el


heparin. Se congela hasta el momento de tratamiento.
En un vaso de pp colocar 10 g de sangre, agregar 10 mL de HNO 3:HClO4:H2SO4
(3:1:1) y calentar a 110C por 2 horas en parrilla. Incrementar la temperatura a
250C hasta reducir el volumen a 1 mL, dejar enfriar y llevar a un volumen final de
10 mL con agua desionizada; en este momento la muestra esta lista para su anlisis
por ICP/AES.

3.6.3.3.8 Leche Materna


3.6.3.3.8.1 Equipo y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.

3.6.3.3.8.2 Reactivos y Materiales de Referencia

Agua desionizada
Agua doblemente destilada
cido ntrico concentrado SUPRAPUR o equivalente
cido perclrico concentrado SUPRAPUR o equivalente
Peroxido de hidrogeno SUPRAPUR o equivalente

3.6.3.3.8.3 Digestin de las muestras


Una alcuota de 2mL de leche se pesa con exactitud y se mezcla con 7mL de cido
ntrico, se calienta a 110C hasta alcanzar un volumen de 1mL.
Una vez que la muestra se ha enfriado, se adicionan 2mL de cido perclrico
concentrado y nuevamente se somete la mezcla a calentamiento hasta que el
lquido se torna caf oscuro.

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Se deja enfriar la muestra, posteriormente se aaden 2mL de peroxido de hidrogeno
al 30%. La mezcla se calienta a 70C hasta que esta se aclara y llega a un volumen
de 1mL aproximadamente.
Cuando se ha enfriado la mezcla, esta se transfiere cuantitativamente a un tubo de
ensayo calibrado y se lleva a un volumen de 10mL con agua doblemente destilada y
agua desionizada.
La determinacin de los metales en la muestra se realiza mediante ICP/AES.

3.6.4 MTODO DE IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN INSTRUMENTAL


3.6.4.1 Aplicacin y Alcances
3.6.4.1.1 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de metales
exceptuando mercurio en los extractos digeridos de aguas naturales, residuales
municipales e industriales, as como suelo, residuos, sedimentos, organismos,
tejidos y alimentos, los extractos y su purificacin depende de la matriz analizada,
se deben seguir los procedimientos de digestin adecuados para cada matriz.
3.6.4.1.2 Limitaciones Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin
de analistas expertos en el uso de ICP/AES y en la interpretacin de sus resultados. Cada
analista debe demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.
3.6.4.2 Resumen
.Para un anlisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos utilizando
el mtodo de preparacin de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada
por ICP-AES utilizando un instrumento de plasma axial, dicho instrumento mide espectros
de emisin caractersticos por espectrometra ptica. Los espectros son dispersados por
una rejilla de difraccin y las intensidades de las lneas de emisin son monitoreadas por
dispositivos fotosensitivos.
3.6.4.3 Equipos y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso comn en el laboratorio analtico.
Todo el material volumtrico utilizado en ste mtodo debe ser clase A o estar verificada su
calibracin.
3.6.4.3.1 Equipo
Espectrmetro de emisin de plasma acoplado inductivamente; controlado
totalmente a travs de una computadora, con capacidad de realizar correccin de
fondo, con generador de radiofrecuencia de 27,12 MHz a una potencia de 2,0 KW,
de autosintona con cristal controlado, Thermo ICP 6500 o equivalente con
automuestreador.
Balanza analtica con sensibilidad de 0.1 mg, para el pesado de slidos, preparacin
de estndares y reactivos.

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3.6.4.3.2 Materiales
Pipetas volumtricas de diferentes capacidades.
Material de laboratorio Todo el material de laboratorio (vidrio, cuarzo,
polietileno, PTFE, FEP, etc.) debe estar suficientemente limpio para cubrir los
objetivos del mtodo. Existen varios procedimientos para la limpieza del material
incluyendo el lavado con detergente, enjuague con agua de la llave, remojarlos por
4 horas o mas en 20% (v/v) de cido ntrico o una mezcla de ntrico clorhdrico,
lavar con agua y almacenar en lugar limpio.
Matraces volumtricos de 10, 25, 50 y 100 mL, probetas graduadas, embudos.
3.6.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que se indique otro grado, los reactivos que se requieren en el mtodo deben ser tipo ACS
(American Chemical Society) grado reactivo analtico.
3.6.4.4.1 Reactivos
Agua A menos que otra cosa se indique, el agua de referencia debe
cumplir con las siguientes caractersticas:
Resistividad: megohm-cm a 25C: 0.2 Mnima
Conductividad: S/cm a 25C: 5.0 Mxima
pH: 5.0 a 8.0
Purificada por desionizacin
cido clorhdrico concentrado (HCl) libre de los elementos a analizar (puede ser
grado Suprapur o equivalente).
cido ntrico concentrado (HNO3) libre de los elementos a analizar (puede ser
grado Suprapur o equivalente).
cido ntrico al 5%:
3.6.4.4.2 Materiales de referencia
Los patrones pueden ser estndares puros o adquirirse como disoluciones certificadas
(patrones de referencia).
Mezcla Analtica con trazabilidad a NIST para ICP ICP SOLUTION STOCK SOLUCION
A Marca High-Purity o equivalente, que contenga los siguientes elementos en una
concentracin de 1000 mg/L 0,5% en HNO3 al 4% + Tr HF : Arsnico, Aluminio,
Antimonio, Bario, Berilio, Boro, Bismuto, Cadmio, Cromo, Cobalto, Cobre, Hierro, Plomo,
Litio, Manganeso, Nquel, Selenio, Silicio, Estroncio, Talio, Vanadio y Zinc y una
concentracin de 1000 g/mL 0,5% en HNO3 para Calcio, Magnesio, Potasio y Sodio.
Disoluciones Patrn

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Diluya la Solucin Stock 1:10 con cido ntrico al 5% para tener 100 mg/L de
los analitos.
Disoluciones de calibracin
Elabore una curva de calibracin con cido ntrico al 5% con varios niveles de
concentracin, las concentraciones deben de estar de acuerdo al intervalo de trabajo
requerido, utilice los patrn mencionados en el inciso anterior para tener presentes
todos los analitos de inters en disolucin. A continuacin se indican las
concentraciones necesarias para la curva de calibracin:
Conc. Inicial Vol. estndar Vol de Aforo
mg/L
(mL)
(mL)
10
10
10
100
100
100
100

0,5
2,0
5,0
1,0
5
10
25

Conc. Final**
mg/L

250
250
250
250
250
250
250

0,02
0,08
0,2
0,4
2,0
4,0
10,0

*La concentracin final de K, Ca, Mg y Na es el valor obtenido multiplicado por 10 ya que la concentracin inicial de estos
elementos es 10000 mg/L

3.6.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo


Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de control
de calidad (CC) formal. Los requerimientos mnimos de este programa consisten en una
demostracin inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones
de desempeo del mtodo, adems realizar anlisis continuos de muestras de control de
calidad (MCC) para demostrar la precisin y exactitud continuas y el anlisis de blancos.
El desempeo del laboratorio debe compararse con los criterios aqu establecidos, con
objeto de determinar si los resultados de los anlisis cumplen con las especificaciones de
desempeo del mtodo. El analista debe hacer una demostracin inicial de su habilidad
para generar una exactitud y precisin aceptables por este mtodo.
Cada vez que se realice una modificacin al mtodo o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo est determinacin, el analista designado debe repetir la
validacin del mtodo, si el cambio va a afectar el lmite de deteccin del mtodo (LDM),
el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o ms bajo que el
anterior para los analitos de inters.
No se permite el uso de tcnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la
ejecucin del mtodo. Si se utiliza una tcnica analtica que no sea la especificada en este
mtodo, dicha tcnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la tcnica
descritas en este documento para el analito de inters.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a
este mtodo. Estos registros deben de incluir lo siguiente:

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- La justificacin por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al mtodo para ese
analito.
- Los nombres, ttulos, direcciones y nmero de telfono de los analistas que ejecutaron
los anlisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenci y verific
los anlisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del mtodo modificado comparadas con el
mtodo original, dichos datos deben de incluir todos los parmetros mencionados en la
seccin de desempeo del mtodo.
- La informacin escrita en las bitcoras tanto del equipo como del analista, deben incluir
los siguientes datos:

Identificacin de la muestra
Nmero del lote analtico en el cual se analiz la muestra
Fecha del anlisis
Procedimiento cronolgico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Nmero de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin
Registros de bitcoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
informacin
Informacin cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados del lote analtico.
3.6.4.5.1 Verificacin del equipo
Verifique que el equipo se encuentra en ptimas condiciones operativas, para lo cual debe
encender y permitir que se estabilice trmicamente por 30 min. Y realizar la verificacin
correspondiente de acuerdo a los instructivos de verificacin de la calibracin de acuerdo
al equipo a utilizar.
3.6.4.5.2 Verificacin de la calibracin inicial
La calibracin inicial debe tener un blanco y 4 estndares mnimo y debe cumplir
con un coeficiente de correlacin >= 0.997. Enseguida se analiza un estndar
para verificar la estandarizacin y este debe de ser el punto medio de dicha
estandarizacin y se debe de tener un por ciento de recobro de 90-110%.
3.6.4.5.3 Verificacin de contaminacin de reactivos
Blanco de reactivos (BR) Prepare un blanco de reactivos a la misma concentracin de
cido que las muestras para analizar, procese el blanco de reactivos al igual que las
muestras y verifique que el blanco de reactivos sea menor al Lmite de deteccin del
mtodo (LDM). En caso de no cumplir, verifique los reactivos, prepare nuevamente el
blanco de reactivos y reprocese el lote analtico con los nuevos reactivos.
3.6.4.5.4 Verificacin del Lote Analtico

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La verificacin del proceso analtico se realiza a travs del anlisis de la muestra
de control de calidad (MCC), La MCC debe provenir de una fuente externa,
diferente a los estndares de calibracin, preparada con las mismas mezclas de
cidos que los estndares de calibracin y llevada a travs de todo el proceso de
digestin y anlisis que las muestras. La MCC debe tener un porcentaje de
recuperacin de 80-120% .
3.6.4.5.5 Verificacin de interferencias de matriz
Se utilizan muestras adicionadas y adicionadas duplicadas. La muestra
adicionada se incluye en el lote analtico, el criterio de aceptacin es de 75-125%
de recobro, en caso de no cumplir, reanalice nuevamente, si persiste el problema
reporte como interferencia de matriz.
3.6.4.5.6 Verificacin de la estabilidad de la Curva de Calibracin.
Utilice el punto medio de las disoluciones con que se estandariz el mtodo para
verificar la estabilidad de la estandarizacin. Esta disolucin debe ser analizada
cada 10 muestras y al final de la corrida. El criterio de aceptacin es de 90-110 %
de recobro. s no es as, se corrige el problema y se reanalizan las muestras a
partir de la siguiente despus del ltima verificacin de la estabilidad de la
estandarizacin
3.6.4.5.7 Verificacin de estndares surrogados
No aplica
3.6.4.5.8 Verificacin de estndares internos
No aplica
3.6.4.5.9 Control de Calidad Estadstico En esta seccin se especifica como
debe realizarse el control de calidad estadstico obligatorio para este mtodo:
Se debern preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada
de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibracin, las concentracin
debe corresponder al rango de trabajo del mtodo.

NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea conocido


por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la medicin
3.6.4.5.9.1 Grficas de Control de Exactitud El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las grficas de control de exactitud para cada lote
analizado a partir de la demostracin inicial de desempeo.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deber graficarse
y deber estar dentro de los lmites de control superior e inferior ( 3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, debern rechazarse todos los resultados del

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lote analtico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las
incidencias y acciones correctiva y deber repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.6.4.5.9.2 Grficas de Control de Precisin El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las grficas de control de precisin para cada lote
analizado a partir de la demostracin inicial de desempeo
Determine los lmites de control de la siguiente forma:
Lmite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Lmite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisin es mayor al LSC, debern rechazarse todos los
resultados del lote analtico, determine las causas del problema y corrija los
errores, documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas,
deber repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.6.4.5.10 Validacin de modificaciones del mtodo o de mtodos alternos Para validar
las modificaciones que se efecten a este mtodo o para la utilizacin de mtodos alternos
deber seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente mtodo, debern revalidarse.
Si se utiliza un mtodo alterno cuya fuente sea un mtodo estandarizado por alguna
Institucin de carcter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM,
USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) siga el
mismo procedimiento de validacin presentado.
Si se utiliza algn mtodo no estandarizado, deber evidenciarse, adems de los
parmetros mencionados en este mtodo, los parmetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeo de todo el sistema analtico utilizando los datos
recolectados de anlisis de blancos reactivos, solucin verificadora del desempeo del
laboratorio.
3.6.4.5.11 Composicin del lote analtico
1.- Blanco de calibracin
2.- Estandarizacin
3.- Verificacin de la calibracin
3.- Blanco de Reactivos
4.- Muestra de Control de Calidad (MCC)
5.- Muestra real No. 1
6.- Muestra duplicada

200

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7.- Muestra fortificada
8.- Muestras reales (5)
9.- Muestra de Verificacin de la Calibracin Continua
3.6.4.5.12 Criterios de Aceptacin y Rechazo
Para el seguimiento de las especificaciones de aceptacin y rechazo consultar las siguientes
tablas:
Verificacin del equipo:
Punto de verificacin
Lo que el fabricante recomiende

Criterio
Ver instructivo de de equipo
correspondiente

Verificacin de la estandarizacin
Punto de verificacin

Criterio
>0.997

Correlacin
Verificacin de la calibracin
Punto de verificacin
CCV

Criterio
10%

Verificacin de contaminacin de reactivos


Punto de verificacin
Blanco de reactivos

Criterio
< limite de deteccin

Verificacin del proceso analtico


Punto de verificacin
Muestra de control de calidad

Criterio
+- 20 %R

Verificacin de interferencias de matriz


Punto de verificacin
Muestras adicionadas

Criterio
+- 20 %

Verificacin de la estabilidad de la estandarizacin


Punto de verificacin
Estndar de verificacin continua

Criterio
+- 10 %

3.6.4.6 Calibracin
Dado que cada instrumento y modelo tienen diferentes especificaciones, siga las
instrucciones del fabricante para su calibracin, ver instructivo de equipo
correspondiente.
201

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La calibracin del equipo se realiza conforme a las instrucciones del fabricante, sobre cada una de las
longitudes de onda de cada elemento a analizar.
La estandarizacin diaria se prepara con un blanco as como un mnimo de 4 estndares, esta curva se
verifica con el estndar de verificacin contina de la curva de calibracin, que debe ser de una
concentracin equivalente al punto medio de la curva. El porcentaje de recuperacin debe ser de 90110%.
Se necesitan al menos 4 estndares de calibracin. Uno debe contener analitos a una
concentracin cercana, pero superior a la del lmite prctico de cuantificacin para cada
analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las
muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01g/L y el LPC es de 0.05 g/L, se espera que la
muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 g/L.
Si se utiliza regresin lineal por mnimos cuadrados, deber obtener el factor de correlacin
r2 para cada analito, el cual deber ser mayor o igual a 0.997 si r es menor a este valor, la
curva de calibracin no es lineal y deber verificarse la preparacin de los estndares de
calibracin, el ICP/AES y repetir la calibracin.
3.6.4.7 Procedimiento Analtico
3.6.4.7.1 Anlisis de los extractos de las muestras.
Antes de la estandarizacin diaria del instrumento, inspeccione el sistema de introduccin
incluyendo el nebulizador, antorcha, tubo central de la antorcha por posible incrustacin de
sales, suciedad que restrinjan el flujo de la disolucin y afecten el desempeo del
instrumento. Limpie el instrumento cada vez que sea necesario.
El instrumento debe estabilizarse por alrededor de 30 minutos antes de la calibracin y
anlisis y lleve a cabo la calibracin ptica.
Para la operacin de rutina diaria siga las instrucciones de encendido, anlisis, apagado del
equipo que se indica en el instructivo de operacin del equipo a utilizar. Estandarice el
equipo usando la curva de calibracin.
Despus de cumplir con los requerimientos iniciales de este mtodo, analice las muestras
bajo las mismas condiciones de operacin de la rutina de calibracin con un enjuague entre
cada una de las muestras y blancos.
Condiciones instrumentales:
RF power:
1100-1500 watts
Flujo de enfriamiento: 15-19 L/min
Flujo de nebulizacion: 0.6-1.5 L
Velocidad de bomba: 1-1.8 mL/min
3.6.4.7.2 Identificacin de las Analitos
La determinacin cualitativa de cada elemento de este mtodo est basada en la intensidad
de la seal captada por el detector a la longuitud de onda seleccionada para cada elemento.
3.6.4.7.3 Clculos

202

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3.6.4.7.3.1 AIRE AMBIENTE
El volumen total de la muestra se calcula de las lecturas de flujo peridico
(Magnehelic) con la siguiente ecuacin:

Q Q2 ... Qn T
V m 1

1000
Donde:
V(m)= Volumen total de la muestra (m3).
Q1,Q2,.,Qn= Flujos determinados al inicio, final y puntos intermedios durante el tiempo
muestreado (L/minuto).
n= Nmero de datos promediados.
T= Tiempo de muestreado (minutos).
El volumen de muestreado debe convertirse a condiciones estndar (760 mm Hg y
25C) con la siguiente ecuacin.

P A 298

V s V m

760 273 t a
Donde:
V(s)= Volumen total de la muestra a 25C y 760 mm Hg (m3).
V(m)= Volumen total de flujo a condiciones ambientales (m3).
P(A)= Presin ambiental (mm Hg).
t(a)= Temperatura ambiental (C).
La concentracin del elemento en la muestra se calcula con la siguiente ecuacin:

C A

A * V E
V i * V s

Donde:
C(A)= Concentracin del analito en la muestra (g/m3).
A= Cantidad calculada de material analizado, basada en la curva de calibracin para
estndares analizados (nanogramos).
V(i)= Volumen inyectado del extracto (L).
V(E)= Volumen final del extracto (mL).
V(s)= Volumen total de la muestra de aire corregido a condiciones estndar (m3).
Determine la concentracin de compuestos individuales en la muestra.
Informe los resultados en g/m3a condiciones STD.
Todos los datos de control de calidad obtenido debern ser informados junto con los
resultados de la muestra.
2.1.1.
3.6.4.7.3.2 AGUA

203

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Utilice la curva de calibracin para calcular directamente la concentracin de cada
analito en la muestra; este valor debe ser afectado por el factor de preparacin de
muestra:

50 mL .vol.aforo

concentracin = Conc. obtenida en equipo * FC 45 mL .vol.mtra


No reporte concentraciones por debajo del lmite de deteccin.
Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del anlisis.
Los resultados deben reportarse con un nmero apropiado de cifras significativas. La
experiencia indica que tres cifras significativas pueden ser usadas para concentraciones
por arriba de 99 g/L, dos cifras significativas para concentraciones entre 1-99 g/L y
una cifra significativa para concentraciones menores a 1 g/L.
3.6.4.7.3.3 SUELOS
Calcule la concentracin utilizando la siguiente ecuacin:

g
kg

C *V
P

Donde:
C= Concentracin en el extracto digerido (g/L)
V= Volumen del extracto digerido (L)
P= Peso de la muestra digerida
Reporte los resultados del anlisis en g/Kg con tres cifras significativas y
aclarando si son en Base Seca o Base Hmeda. Si reporta en base seca debe
considerar el valor de la humedad para obtener el resultado.
3.6.4.7.3.4 SEDIMENTOS (MARINOS Y EPICONTINENTALES)
VER CALCULOS PARA SUELOS
3.6.4.7.3.5 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS, ORGANISMOS,

g
kg

C *V
P

C= Concentracin en el extracto digerido (g/L)


V= Volumen del extracto digerido (L)
P= Peso de la muestra digerida
Todos los factores de dilucin o concentracin deben ser considerados.
No reporte concentraciones por debajo del lmite de deteccin.

204

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Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del anlisis.
Reporte los resultados de anlisis en g/kg con tres cifras significativas.
2.1.2. 3.6.4.8 Desempeo del Mtodo
Los datos son los del mtodo de referencia y los de un laboratorio nacional con
experiencia.
3.6.4.8.1 Lmite de Deteccin: Ver Tablas 3 y 4.
3.6.4.8.2 Lmite Prctico de Cuantificacin: Ver Tablas 3 y 4
3.6.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tablas 3 y 4
3.6.4.8.4 Precisin del Mtodo: Ver Tablas 3 y 4
3.6.4.8.5 Exactitud del Mtodo: Ver Tablas 3 y 4
2.1.3. 3.6.4.9 Tablas y Figuras

TABLA 1 LONGITUDES DE ONDA UTILIZADAS RECOMENDADAS Y LIMITES DE DETECCION


INSTRUMENTALES ESTIMADOS (segn EPA 6010C 2000)

ELEMENTO

Plata
Arsnico
Bario
Berilio
Cadmio
Nquel
Plomo
Selenio
Talio
Vanadio

Ag
As
Ba
Be
Cd
Ni
Pb
Se
Tl
V

2.1.4. S
I
M
BLONG. ONDA
O
L
O
328,07
193,70
455,40
313,04
226,50
231,60 x 2
220,35
196,03
190,86
292,40

LDI
ESTIMADOS**
g/L

4,7
35
0,87
0.18
2.3
10
28
50
27
5,0

1) Las longitudes de onda (nm) listadas son las recomendadas para obtener una adecuada sensibilidad, Cuando es (x 2) es de segundo
orden. Otras longitudes de onda pueden ser utilizadas (en caso de interferencias).
2) Los lmites de deteccin instrumental estimados muestran una gua sobre los lmites del instrumento, los lmites de deteccin del
mtodo son dependientes del tipo de matriz de las muestras.
3) Altamente dependiente de las condiciones y posicin del plasma.

205

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TABLA 2 FACTORES DE CORRECCIN INTERELEMENTO.
INTEREFERNCIA POR FIERRO
Metal
Ag
As
Cd
Cr
Pb
Se

Factor de Correccin
0,000540
0,000663
0,000029
0,0007340
0,0003940
0,0024000
INTERFERENCIA POR ALUMINIO

Metal
As
Pb
Se

Factor de Correccin
0,0005
0,0004
0,0012

Nota: Los datos anteriores son proporcionados por el fabricante del instrumento

206

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TABLA 3 PRECISIN Y EXACTITUD INSTRUMENTAL PARA SOLUCIONES ACUOSAS.

Elemento
As
Ba
Be
Cd
Pb
Ni
Se
Ag
Tl
V

Concentracin
Media
(mg/L)
14,7
3,66
3,78
3,61
14,4
3,70
15,3
3,69
15,1
3,51

Nb

DSR b

Precisin c
(%)

7
7
8
8
7
7
8
6
7
8

6,4
3,1
5,8
7,0
5,9
5,7
7,5
9,1
8,5
6,6

99
99
102
97
97
100
104
100
102
95

Los valores son independientes de la preparacin de las muestras.


(b)= Numero de mediciones para la media y la desviacin estndar relativa.
(c)= La precisin esta expresada como el porcentaje del valor nominal para cada analito en
soluciones acidificada de multielementos.
NOTA: Pruebas realizadas por varios laboratorios.

207

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TABLA 4 PRECISIN Y EXACTITUD PARA ICP
Elemento

Valor
(g/L)

Conc.
Media
(g/L)

DSR
(%)

A
(%)

Valor
(g/L)

Conc.
Media
(g/L)

DSR
(%)

B
(%)

Valor
(g/L)

Conc.
Media
(g/L)

DSR
(%)

C
(%)

Be
V
As
Cd
Ni
Pb
Zn
Se

750
750
200
50
250
250
200
40

733
749
208
48
245
236
201
32

6,2
1,8
7,5
12
5,8
16
5,6
21,9

98
100
104
96
98
94
100
80

20
70
22
2,5
30
24
16
6

20
69
19
2,9
28
30
19
8,5

9.8
2,9
23
16
11
32
45
42

100
99
86
116
93
125
119
142

180
170
60
14
60
80
80
10

176
169
63
13
55
80
82
8.5

5,2
1,1
17
16
14
14
9,4
8,3

98
99
105
93
92
100
102
85

A= Precisin de muestra No. 1


B= Precisin de muestra No. 2
C= Precisin de muestra No. 3
DSR= Desviacin estndar relativa
La precisin es expresada como la concentracin media dividida entre el valor verdadero de la
concentracin 100 veces.
NOTA: Pruebas realizadas por varios laboratorios.

208

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3.7 MERCURIO
Existen 2 tcnicas analticas para analizar mercurio en muestras ambientales, la
Espectrofotometra de Absorcin Atmica con Vapor fro y la Espectrofotometra de Fluorescencia
Atmica con Vapor Fro, la primera es una tcnica utilizable para matrices de aguas, suelos,
sedimentos, organismos y alimentos, la segunda es una tcnica utilizable en aire ambiente
principalmente, la ventaja es que es un mtodo de medicin directa y es muy sensible (en el orden
de ng/m3), en la actualidad se han desarrollado equipos automticos que adems pueden medir
cantidades traza de mercurio en todas las matrices sin procesamiento de muestra alguno, lo que
representa grandes ventajas al elevar considerablemente la sensibilidad y eliminar las
interferencias y prdidas del analito por el procesamiento de las muestras.
En este documento se presentan los mtodos de AAEVP para todas las matrices de inters
excepto aire ambiente, en esta matriz la medicin se deber realizar por medicin directa con un
equipo EFAVP para aire ambiente, este mtodo an no est estandarizado por lo que quien lo
realice deber validarlo.
No se debe utilizar ICP/AES para analizar mercurio por las bajas sensibilidades que tiene esta
tcnica para este analito (en el orden de mg/kg).

NOTA: Este mtodo est basado en su desempeo, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeo especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parmetros que se especifiquen como NO MODIFICABLES. Los
trminos debe, puede y deber son mencionados a travs de los mtodos y estn destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del mtodo. El trmino debe es usado para indicar que los desarrolladores de este
mtodo encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.

PARMETROS NO MODIFICABLES
Ninguno

3.7.1 Aplicacin y Alcances


3.7.1.1 Propsito: La espectrometra de absorcin atmica con vapor fro (AAEVF) es
aplicable para la determinacin de concentraciones de g/kg para mercurio en matrices
slidas y lquidas. Se requiere una digestin cida previa al anlisis y filtracin para analizar
los metales totales a analizar.
De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes mtodos de digestin para solubilizar
los metales en las muestras antes de su anlisis instrumental.
3.7.1.2 Analitos El mtodo es aplicable a los siguientes analitos:

209

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Metal
Mercurio

# CAS
7439-97-6

3.7.1.3 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis de metales en las siguientes
matrices ambientales:

Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterrneas
Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales
Sangre
Leche Materna

3.7.1.4 Limitaciones Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin de
analistas expertos en el uso de AAEVF en la interpretacin de sus resultados. Cada analista debe
demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.

3.7.2 Resumen
Una porcin bien homogenizada de una muestra lquida o slida es pesada con exactitud para su
procesamiento. Para el anlisis de Mercurio total, la muestra es solubilizada o digerida utilizando el
mtodo de preparacin de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada por AAEVF
utilizando un espectrofotmetro de absorcin atmica con el aditamento para procesar muestras
por vapor fro.

3.7.3 Procedimientos de Digestin de muestras


3.7.3.1 Interferencia Generales
3.7.3.1.1 Se ha reportado interferencias de cobre; sin embargo concentraciones de cobre
de 10 mg/L no tiene efectos en el recobro de mercurio sobre muestras
adicionadas.
3.7.3.1.2 Aguas marinas o muestras con alto contenido de cloro requiere la adicin de
permanganato ya que durante la oxidacin los cloruros pasan a cloro libre el
cual tambin absorbe radiacin a 253.7 nm.
3.7.3.1.3 Algunos compuestos orgnicos voltiles pueden absorbe a la misma longitud de
onda causando interferencias.
3.7.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los qumicos utilizados en este mtodo no ha sido
determinadas con precisin; de todas maneras; cada sustancia qumica debe ser tratada
como potencial peligro a la salud. La exposicin a estas sustancias qumicas debe ser
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reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene
ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos
resultados estn disponibles para los analistas.
La acidificacin de las muestras que contienen materiales reactivos puede ocasionar la liberacin de
gases txicos, como cianuros o sulfuros. La acidificacin debe realizarse en una campana de
extraccin.
Los cidos y bases concentradas causan severas quemaduras e irritaciones en la piel. Debe utilizarse
ropa protectora tal como: Batas, guantes y lentes de seguridad cuando se manejan estos productos
qumicos.
Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo
de las normas de seguridad respecto a la exposicin y manejo seguro de las sustancias
qumicas especificadas en este mtodo. Debe tenerse un archivo de referencias de las hojas
de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en
estos anlisis.

3.7.3.3 Matrices
3.7.3.3.1 Aire Ambiente
3.7.3.3.1.1 Equipo y Materiales
Solo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso comn en el
laboratorio analtico.
3.7.3.3.1.1.1 Equipo

Bombas y sistema de medicin de flujo.

Congelador para el almacenamiento de muestras de partculas de Hg a -40


C
Balanza analtica: La sensibilidad de la balanza analtica debe ser de 0.01
mg. La cmara de pesado debe estar diseada para que pueda ser
introducido un filtro sin doblar
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente
que proporcione una energa de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energa requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presin y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestin de tefln PFA marca CEM modelo ACV,
HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o
equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura mxima de
210C.
Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribucin homognea de la
radiacin dentro de la unidad.
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Portafiltros de tefln de 47 mm de entrada cerrada para fase-vapor Hg y entrada
abierta para fase-partculas
PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operacin del
modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de
este mtodo y requerimientos del anlisis deben consultarse con las
especificaciones del manual del equipo.
3.7.3.3.1.1.2 Materiales:
Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.
Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.
Embudos para filtracin de polipropileno.
Matraz Erlenmeyer de 125 mL
Filtros de fibra de vidrio 47 mm
Termmetro de inmersin
3.7.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el mtodo deben ser tipo ACS
grado reactivo

Agua Reactivo A menos que otra forma se indique, el agua


utilizada debe ser agua grado reactivo tipo II ASTM.
Acetona

cido ntrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.

cido Clorhdrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.

Acido Fluorhdrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente

BrCl

Cloruro de estao II dihidratado (SnCl2 )

Mercurio elemental, liquido de alta pureza.

3.7.3.3.1.3 Procedimiento de digestin de Muestra


3.7.3.3.1.3.1 preparacin del filtro previo su muestreo
Los filtros de fibra de vidrio se deben calentar en la mufla a 500 C por
durante una hora. Se deben dejar enfriar y se guardan en un recipiente

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de tefln (50 mm de dimetro) el cual se debe sellar con cinta tefln. Se
guarda en triple bolsa y se guarda hasta que se utilicen.
3.7.3.3.1.3.2 Digestin de las muestras
En un vaso digestor se coloca el filtro que previamente fue cortado en
cuatro con 20 mL de HNO3 al 10%, el vaso digestor es colocado en el
carrusel del digestor.
Las condiciones del digestor son las siguientes: 160C a 70 PSI durante
20 minutos. Permita que se enfren.
Lleve el vaso digestor a una campana de extraccin y adicione
cuidadosamente 0.5 mL de BrCl, esto para oxidar el mercurio en
solucin a Hg2+ . Tape el vaso mezclando el contenido y permita que
reaccione al menos 1 hora.

3.7.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales


epicontinentales y subterrneas)
3.7.3.3.2.1 Equipo y Materiales
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.2.3 Digestin de las muestras
VER EN METALES Y METALOIDES

3.7.3.3.3 Suelos
3.7.3.3.3.1 Equipo y Materiales
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.3.3 Digestin de las muestras
VER EN METALES Y METALOIDES

3.7.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)


VER EN METALES Y METALOIDES

3.7.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales,


3.7.3.3.5.1 Equipo y Materiales

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VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.5.2 Reactivos y Materiales de Referencia
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3.7.3.3.5.3 Digestin de las muestras
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3.7.3.3.6 Sangre Humana
3.7.3.3.6.1 Equipo y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este mtodo
analtico.
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente
que proporcione una energa de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energa requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presin y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestin de tefln PFA marca CEM
modelo
ACV, HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad
o equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura mxima
de 210C.
3.7.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los disolventes que requiere el mtodo deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa
se indique.
cido Ntrico
Perxido de hidrgeno
3.7.3.3.6.3 Digestin de las Muestras
Las muestras de sangre se colectaron en tubos de ensayo previamente heparinizados y se
mantienen en congelacin hasta su procesamiento..

Paso
T (C)
TM*(min)
T (min)

1
160
5
5

Las muestras se preparan en un tubo de digestin donde se colocan 0,5 mL de sangre, 5


mL de cido ntrico concentrado y 1 mL de perxido de hidrgeno. Se procede a realizar
una digestin asistida por microondas. El tubo se coloca en el microondas y se procesa
de acuerdo a la siguiente secuencia.
2
3
4
190 100 100
1
1
1
10
10
10

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*Tiempo de mantenimiento

Terminado el tiempo se deja enfriar, se diluye a 10 mL y se transvasa para su anlisis.

3.7.3.3.7 Leche Materna


3.7.3.3.7.1 Equipo y Materiales
Liners de tefln con capacidad de 22mL

3.7.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia

cido ntrico
cido sulfrico
cido clorhdrico
Bromato de Potasio
Bromuro de Potasio

Disolucin Stock de cloruro de bromo.- 0.2mol/L en 10mol/L de cido


clorhdrico. Se prepara disolviendo 11g de bromato de potasio y 15g de
bromuro de potasio en 180mL de agua y posteriormente se agregan 800mL
de cido clorhdrico concentrado. Las sales de potasio son pre-tratadas
mediante el calentamiento en un horno a 200C durante 1 hora, a fin de
remover cualquier contaminacin debida a mercurio. Una vez fra, la
solucin es diluida a 1L con agua y almacenada en la oscuridad.
Disolucin de trabajo.- 0.002mol/L de cloruro de bromo en 0.1mol/L de
cido clorhdrico. Se deriva de la solucin stock realizando una dilucin
1:100 con agua.
3.7.3.3.7.3 Digestin de las muestras
Se coloca la muestra de leche dentro de un liner de tefln de 22mL, se aade una
mezcla de cido sulfrico y cido ntrico 70:30 (v/v), se cierra el liner y se coloca en
un horno a 70C durante mnimo 16 horas. La cantidad de muestra en cido
corresponde a 1g/5mL.
Para enfriar la muestra, se coloca el liner en un congelador durante 2 horas, de
acuerdo al volumen de muestra que se obtenga, se agrega el mismo volumen de la
disolucin de cloruro de bromo para convertir el mercurio en Hg 2+.Se deja reposar la
muestra durante 2 horas a temperatura ambiente.
3.7.4 MTODO DE IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN INSTRUMENTAL
3.7.4.1 Aplicacin y Alcances
3.7.4.1.1 Matrices Este mtodo es aplicable para el anlisis mercurio en los
extractos digeridos de aguas naturales, residuales municipales e industriales, as

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como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y
su purificacin depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos
de digestin adecuados para cada matriz.
3.7.4.1.2 Limitaciones Este mtodo est restringido para utilizarse slo bajo la supervisin
de analistas expertos en el uso de AAEVF y en la interpretacin de sus resultados. Cada
analista debe demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.
3.7.4.2 Resumen
.Para un anlisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos utilizando el mtodo
de preparacin de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada por AAEVF en dicho
instrumento el mercurio es convertido a su estado basal con una solucin de cloruro estaoso en
H2SO4. El vapor de mercurio metlico es removido de la solucin por burbujeo y llevado por un flujo
de nitrgeno al espectrofotmetro de absorcin atmica, la lectura de absorbancia de la muestra es
comparada con la de una curva de calibracin analizada en las mismas condiciones que la muestra.
El anlisis cuantitativo se basa en la determinacin de la radiacin a 253.7 nm de vapor de mercurio.
3.7.4.3 Equipos y Materiales
Slo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso comn en el laboratorio analtico.
Todo el material volumtrico utilizado en ste mtodo debe ser clase A o estar verificada su
calibracin.
3.7.4.3.1 Equipo
Espectrmetro de Absorcin atmica por vapor fro (AAEVF)
Balanza analtica con sensibilidad de 0.1 mg, para el pesado de slidos, preparacin
de estndares y reactivos.
3.7.4.3.2 Materiales
Pipetas volumtricas de diferentes capacidades.
Material de laboratorio Todo el material de laboratorio (vidrio, cuarzo,
polietileno, PTFE, FEP, etc.) debe estar suficientemente limpio para cubrir los
objetivos del mtodo. Existen varios procedimientos para la limpieza del material
incluyendo el lavado con detergente, enjuague con agua de la llave, remojarlos por
4 horas o mas en 20% (v/v) de cido ntrico o una mezcla de ntrico clorhdrico,
lavar con agua y almacenar en lugar limpio.
Matraces volumtricos de 10, 25, 50 y 100 mL, probetas graduadas, embudos.
3.7.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que se indique otro grado, los reactivos que se requieren en el mtodo deben ser tipo ACS
(American Chemical Society) grado reactivo analtico.

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3.7.4.4.1 Reactivos
Agua A menos que otra cosa se indique, el agua de referencia debe
cumplir con las siguientes caractersticas:
Resistividad: megohm-cm a 25C: 0.2 Mnima
Conductividad: S/cm a 25C: 5.0 Mxima
pH: 5.0 a 8.0
Purificada por desionizacin
cido clorhdrico concentrado (HCl) libre de los elementos a analizar (puede ser
grado Suprapur o equivalente).
cido ntrico concentrado (HNO3) libre de los elementos a analizar (puede ser
grado Suprapur o equivalente).
Acido ntrico al 5%:
3.7.4.4.2 Materiales de referencia
Los patrones pueden ser estndares puros o adquirirse como disoluciones
certificadas (patrones de referencia).
Estndar certificado de mercurio de 1000 mg/L Hg
Disoluciones de calibracin
Elabore una curva de calibracin con cido ntrico al 5% con varios niveles de
concentracin, las concentraciones deben de estar de acuerdo al intervalo de trabajo
requerido, utilice los patrn mencionados en el inciso anterior. 0.0, 1.0, 2.0, 5.0,
10.0 y 20.0 ug/L
3.7.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptacin y rechazo
Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de control
de calidad (CC) formal. Los requerimientos mnimos de este programa consisten en una
demostracin inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones
de desempeo del mtodo, adems realizar anlisis continuos de muestras de control de
calidad (MCC) para demostrar la precisin y exactitud continuas y el anlisis de blancos.
El desempeo del laboratorio debe compararse con los criterios aqu establecidos, con
objeto de determinar si los resultados de los anlisis cumplen con las especificaciones de
desempeo del mtodo. El analista debe hacer una demostracin inicial de su habilidad
para generar una exactitud y precisin aceptables por este mtodo.
Cada vez que se realice una modificacin al mtodo o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo est determinacin, el analista designado debe repetir la
validacin del mtodo, si el cambio va a afectar el lmite de deteccin del mtodo (LDM),
el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o ms bajo que el
anterior para los analitos de inters.
No se permite el uso de tcnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la
ejecucin del mtodo. Si se utiliza una tcnica analtica que no sea la especificada en este

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mtodo, dicha tcnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la tcnica
descritas en este documento para el analito de inters.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a
este mtodo. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificacin por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al mtodo para ese
analito.
- Los nombres, ttulos, direcciones y nmero de telfono de los analistas que ejecutaron
los anlisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenci y verific
los anlisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del mtodo modificado comparadas con el
mtodo original, dichos datos deben de incluir todos los parmetros mencionados en la
seccin de desempeo del mtodo.
- La informacin escrita en las bitcoras tanto del equipo como del analista, deben incluir
los siguientes datos:

Identificacin de la muestra
Nmero del lote analtico en el cual se analiz la muestra
Fecha del anlisis
Procedimiento cronolgico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Nmero de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin
Registros de bitcoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
informacin
Informacin cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados del lote analtico.
3.7.4.5.1 Verificacin del equipo
Verifique que la succin en los capilares de la muestra y del cloruro estaoso sea
la adecuada (sin interrupciones) y que la bomba peristltica gire adecuadamente.
Verifique que el equipo se encuentra en ptimas condiciones operativas, para lo
cual debe encender y permitir que se estabilice trmicamente por 30 min. Y
realizar la verificacin correspondiente de acuerdo a los instructivos de
verificacin de la calibracin de acuerdo al equipo a utilizar.
3.7.4.5.2 Verificacin de la calibracin inicial
Se realiza la lectura de los estndares de calibracin, aceptando un 10% de
RSD. El coeficiente de correlacin debe ser >= 0.995 con un blanco y al menos 4
estndares.
3.7.4.5.3 Verificacin de contaminacin de reactivos
Blanco de reactivos (BR) Prepare un blanco de reactivos a la misma concentracin de
cido que las muestras para analizar, procese el blanco de reactivos al igual que las

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muestras y verifique que el blanco de reactivos sea menor al Lmite de deteccin del
mtodo (LDM). En caso de no cumplir, verifique los reactivos, prepare nuevamente el
blanco de reactivos y reprocese el lote analtico con los nuevos reactivos.
3.7.4.5.4 Verificacin del Lote Analtico
La verificacin del proceso analtico se realiza a travs del anlisis de la muestra
de control de calidad (MCC), La MCC debe provenir de una fuente externa,
diferente a los estndares de calibracin, preparada con las mismas mezclas de
cidos que los estndares de calibracin y llevada a travs de todo el proceso de
digestin y anlisis que las muestras. La MCC debe tener un porcentaje de
recuperacin de 80-120% .
3.7.4.5.5 Verificacin de interferencias de matriz
Se utilizan muestras adicionadas. La muestra adicionada se incluye en el lote
analtico, el criterio de aceptacin es de 75-125% de recobro, en caso de no
cumplir, reanalice nuevamente, si persiste el problema reporte como interferencia
de matriz.
3.7.4.5.6 Verificacin de la estabilidad de la Curva de Calibracin.
Si ms de 25 muestras van a ser analizadas durante el da, la curva estndar de
trabajo debe verificarse con un estndar de referencia o un estndar de
concentracin media del rango de trabajo despus de cada 25 muestras y un
blanco de verificacin. Este valor de la muestra debe tener un recobro del 80120%, de no ser as entonces las 25 muestras previas deben volver a analizarse.
El blanco de verificacin debe estar por debajo del Lmite de deteccin del
mtodo.
3.7.4.5.7 Verificacin de estndares surrogados
No aplica
3.7.4.5.8 Verificacin de estndares internos
No aplica
3.7.4.5.9 Control de Calidad Estadstico En esta seccin se especifica como
debe realizarse el control de calidad estadstico obligatorio para este mtodo:
Se debern preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada
de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibracin, las concentracin
debe corresponder al rango de trabajo del mtodo.

NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea conocido


por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la medicin

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3.7.4.5.9.1 Grficas de Control de Exactitud El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las grficas de control de exactitud para cada lote
analizado a partir de la demostracin inicial de desempeo.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deber graficarse y
deber estar dentro de los lmites de control superior e inferior ( 3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, debern rechazarse todos los resultados del lote
analtico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las
incidencias y acciones correctiva y deber repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.7.4.5.9.2 Grficas de Control de Precisin El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las grficas de control de precisin para cada lote
analizado a partir de la demostracin inicial de desempeo
Determine los lmites de control de la siguiente forma:
Lmite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Lmite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisin es mayor al LSC, debern rechazarse todos los
resultados del lote analtico, determine las causas del problema y corrija los
errores, documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas,
deber repetirse el anlisis del lote en cuestin.
3.7.4.5.10 Validacin de modificaciones del mtodo o de mtodos alternos
Para validar las modificaciones que se efecten a este mtodo o para la utilizacin de
mtodos alternos deber seguirse el siguiente procedimiento:
- Si se realizan modificaciones al presente mtodo, debern revalidarse.
- Si se utiliza un mtodo alterno cuya fuente sea un mtodo estandarizado por
alguna Institucin de carcter internacional o reconocida internacionalmente (e. g.
ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.)
siga el mismo procedimiento de validacin presentado.
- Si se utiliza algn mtodo no estandarizado, deber evidenciarse, adems de los
parmetros mencionados en este mtodo, los parmetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeo de todo el sistema analtico utilizando los datos
recolectados de anlisis de blancos reactivos, solucin verificadora del desempeo del
laboratorio.

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3.7.4.5.11 Composicin del lote analtico
1.- Blanco de calibracin
2.- Estandarizacin
3.- Verificacin de la calibracin
4.- MCC
5.- Blanco de Reactivos.
6.- Muestra 1
7.- Muestra duplicada
8- Muestra adicionada
9.- Muestra 2 a 25
10.- Estndar de verificacin de la estabilizacin de calibracin
11.- Blanco de chequeo.
3.7.4.5.12 Criterios de Aceptacin y Rechazo
Para el seguimiento de las especificaciones de aceptacin y rechazo consultar las siguientes
tablas:
Verificacin del equipo:
Punto de verificacin
Lo que el fabricante recomiende

Criterio
Ver instructivo de de equipo
correspondiente

Verificacin de la calibracin inicial


Punto de verificacin
Estndar de verificacin de la calibracin inicial

Criterio
80 120 % Recobro

Verificacin de contaminacin de reactivos


Punto de verificacin
Blanco de reactivos

Criterio
< limite de deteccin

Verificacin del proceso analtico


Punto de verificacin
Muestra de control de calidad

Criterio
80 120 % Recobro

Verificacin de interferencias de matriz


Punto de verificacin
Muestras adicionadas

Criterio
75 125 % Recobro

Verificacin de la estabilidad de la curva de calibracin


Punto de verificacin
Estndar de verificacin continua

Criterio
80 120 % Recobro

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3.7.4.6 Calibracin
La estandarizacin diaria se prepara con un blanco as como un mnimo de 4 estndares, esta curva se
verifica con el estndar de verificacin contina de la curva de calibracin, que debe ser de una
concentracin equivalente al punto medio de la curva. El porcentaje de recuperacin debe ser de 90110%.
Se necesitan al menos 4 estndares de calibracin. Uno debe contener analitos a una
concentracin cercana, pero superior a la del lmite prctico de cuantificacin para cada
analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las
muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01g/L y el LPC es de 0.05 g/L, se espera que la
muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 g/L.
Si se utiliza regresin lineal por mnimos cuadrados, deber obtener el factor de correlacin
r2 para cada analito, el cual deber ser mayor o igual a 0.997 si r es menor a este valor, la
curva de calibracin no es lineal y deber verificarse la preparacin de los estndares de
calibracin, el ICP/AES y repetir la calibracin.
3.7.4.7 Procedimiento Analtico
3.7.4.7.1 Anlisis de los extractos de las muestras para aire ambiente
Los extractos para el anlisis de aire ambiente se deben analizar en un espectrmetro de
fluorescencia atmica por vapor fro (CVAFS) siguiendo los lineamentos que se establecen
en el EPA Compendium Method IO-5.
3.7.4.7.2 Anlisis de los extractos de las muestras para todas las dems matrices
Los extractos son analizados en el AAEVF referido en 3.7.4.3
3.7.4.7.3 Clculos
2.1.5.
3.7.4.7.3.1 AGUA
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.4.7.3.2 SUELOS
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.4.7.3.3 SEDIMENTOS (MARINOS Y EPICONTINENTALES)
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS,
ORGANISMOS
VER EN METALES Y METALOIDES

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