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Accin Bacteriosttica del Cristal Violeta y Accin

Oleodinmica de los Metales Pesados
1. OBJETIVO:

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

Demostrar el efecto de diferentes concentraciones de cristal violeta
sobre bacterias Gram positivas y gram negativas.
Tambin es demostrar como las concentraciones en que se
diferencia cada crisol varia el crecimiento de microorganismos
Hacer la tincin gram para determinar si dicha bacteria es cocos o
bacilos segn los pasos que habamos hecho con anterioridad
Otro tambin es saber a qu tipo de agrupacin pertenece dicha
bacteria

2. FUNDAMENTO TEORICO:
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Los colorantes del grupo trifenilmetano presentan una marcada
accin bacteriosttica selectiva sobre las bacterias Gram positivas,
en diluciones que aparentemente no afectan a las Gram negativas.
Esta propiedad se aprovecha mediante la incorporacin de alguno de
esos colorantes en medios de cultivo con el fin de facilitar el
aislamiento de bacterias Gram negativas.
Entre los colorantes usados con estos propsitos estn: cristal
violeta, fucsina bsica, verde brillante y verde malaquita.

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ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Los iones de algunos metales pesados en altas diluciones son
capaces de ejercer una accin txica sobre las bacterias y otros
microorganismos. Si se coloca una moneda o un trozo de cobre
debajo o sobre un medio de cultivo slido recin inoculado con un
microorganismo, luego de incubar se puede observar que no hay
crecimiento en la zona alrededor del metal. Esta es la zona
oligodinmica; con frecuencia las colonias en el borde del halo de
inhibicin son de mayor tamao que en el resto de la placa, debido a
que tuvieron una mayor disponibilidad de nutrientes que no fueron
utilizados en la zona sin crecimiento.
Accin oligodinmica, son activos en muy bajas concentraciones
(ppm). Inactiva especficamente enzimas claves al reaccionar con
grupos SH. Son muy txicos y su actividad disminuye con la
existencia de fluidos biolgicos.

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3. Resultados
Accin bacteriolgica selectiva del cristal violeta
Diluciones
Cultivo
1:10000
1:100000
1:1000000
Sin colorante

Grupo 1
A
B

Grupo 2
A
B

Grupo 3
A
B

Grupo 4
A
B

Grupo 5
A
B

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(+)
(+)
(+)

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(+)
(+)
(+)

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(+)
(+)
()

(+) : hay crecimiento

(-) : no hay crecimiento

Grupo
N1
N2
N3
N4
N5

Colonia A
Gram positiva
Estafilococos
Gram negativa
Diplococos
Gram negativa
Estreplobacilo
Gram negativa
Estafilococos
Gram negativa
Bacilo

Colonia B
Gram negativa
Estreptococos
Gram negativa
Estreptococos
Gram negativa
Estafilococos
Gram negativa
Diplococos
Gram negativa
Estafilococos

Concentracin

E. Coli

B. Subtilis

1:10000

(-)

(-)

1:100000

(+)

(-)

1:1000000

(+)

(+)

Sin colorante

(+)

(+)

(+)
(+)
(+)
(+)

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4. PROCEDIMIENTO:
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Primero tuvimos que haber preparado el agar nutritivo:

Primero pesamos y trituramos el agar nutritivo.

Vertimos el agar en un vaso precipitado y agregar 375ml de
agua y mover con la bagueta.
Continuamos con la dilucin del agar, como no se disuelve
todo aumentamos la temperatura para aumentar la solubilidad
de la solucin y despus de ello los separamos en 25 tubos
de prueba de 15ml y tapamos los tubos con algodn
Despus se colocan los tubos en una canastilla y luego se
coloca en el autoclave.
Esterilizar los materiales a usar en el horno. Esterilizacin del
Agar en el autoclave a 121C por 15 min.

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Una vez obtenido el agar nutritivo comenzamos con las soluciones

del cristal.
Para la solucin 1/10000, transferimos 1 ml del cristal violeta de una
concentracin de 1/1000 a un tubo de 9 ml de agua
Para la solucin 1/100000, transferimos 1 ml de cristal violeta de una
concentracin de 1/10000 a un tubo de 9 ml de agua
Para la solucin 1/1000000, transferimos 1 ml de cristal violeta de
una concentracin de 1/100000 a un tubo de 9 ml de agua

Luego mezclamos las

el agar nutritivo,
tubos de ensayo y echar
agua
destilada,
ayudados
pipeta

diluciones con
tomamos 3
9 ml de

con una
de
1ml.
Sacar
con
una
pipeta
y una

bombilla 1ml del cristal violeta (0.1%) y echarlo en el tubo N1.

Proceder a sacar 1ml del tubo N1 con pipeta de 1ml y echarlo en el
tubo N2. Proceder a sacar 1ml del tubo N2 ayudado de una pipeta
limpia de 1ml y echarlo en el tubo N3.
Flameamos el tubo con agar nutritivo y echamos en una placa petri,
este primer tubo se echara en la placa N1 que no contiene colorante
y nos servir de control.

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Luego vertir el agar fundido en las tres placas petri restantes y

mezclar bien el colorante con el agar rotando suavemente la placa,
para obtener una distribucin uniforme de colorante.

Cuando ha solidificado el agar, dividir las placas en dos regiones

iguales y nombrarlos A y B.
Divisin de las placas en zonas A y B para inocular con los
microorganismos.
Incubar las placas a 37C durante 48 horas.

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5. CONCLUSIONES:
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Una de nuestras conclusiones a la que podamos llegar es como
varia la cantidad de microorganismos en las diluciones utilizadas
Tambin llegamos a la conclusin de algo que ya sabamos por
medio de la teora, por ejemplo que en 1/10000 no bamos a notar
ninguna de las dos bacteria (Escherichia Coli y Bacillus Subtilis), en
cambio que en 1/100000 bamos a notar solo el crecimiento de la
Escherichia Coli y que en 1/1000000 iba haber crecimiento de
ambos.
A esa conclusin fuimos capaces de llegar, ya que utilizamos la
tincin gram y combinado con el microscopio (objetivo 97) para
determinar a la bacteria, no solo para saber si era cocos o bacilus,
sino que tambin para poder afirmar que agrupacin pertenece.

6. RECOMENDACIONES:
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Al extraer el agar nutritivo de la autoclave debemos mantenerlo a
una temperatura de 45 C para evitar que se solidifique, ya que si
este se solidifica perjudicara en los resultados del experimento.
Se debe esterilizar correctamente el inoculador antes de usarlo para
extraer el cultivo.
Tener cuidado cuando se utiliza el acido ntrico en la limpieza de la
moneda, evitar el contacto directo con este, haciendo uso de
instrumentos adecuados como guantes, mascarillas para no
respirara el gas del cido , ya que este puede causar quemaduras o
irritaciones en los ojos,etc.

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7. referencias bibliogrficas
PELCZAR, Michael J. et al. Microbiologa. Mexico, Ed. Mc GrawHill,
1982.
FRAZIER, W.C. y D.C. Westhoff, Microbiologa de los Alimentos

8. anexo
Clases realizadas