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COLIFORMES: COLIMETRIA
En esta prctica, vamos a centrarnos en determinar las bacterias coliformes
presentes en un agua mediante el Mtodo de los tubos mltiples
colimetria y en la prctica siguiente se realizara un recuento del nmero de
bacterias aerobias totales en un agua problema.
El anlisis microbiolgico de un agua, tiene como finalidad, el control de
calidad microbiolgica de la misma, segn establece el Ministerio de
Sanidad y Consumo por Orden Ministerial publicada en el BOE.
En dicha Orden se establecen las normas oficiales de anlisis para la
investigacin de:
Bacterias aerobias totales
Bacterias coliformes
Estreptococos fecales y
Clostridios sulfito reductores.
El objeto de la investigacin de estos microorganismos concretos es debido
a que todos ellos, son componentes habituales de la microbiota comensal
del intestino del hombre y de animales y es por ello, que sirven de
indicadores de una posible contaminacin fecal del agua en estudio.
Adems, debido a que presentan distintos grados de resistencia a los
factores medioambientales, su cuantificacin nos permite establecer la
evolucin de la contaminacin en el tiempo.
En la Orden Ministerial, se definen como coliformes totales aquellas
bacterias de morfologa bacilar, Gram negativas, aerobias anaerobias
facultativas, oxidasa negativas, no esporogenas, que fermentan la lactosa
con produccin de acido y de gas a 37C en un tiempo mximo de 48 h.
Este grupo comprende los gneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y
Enterobacter.
La denominacin especifica de coliformes fecales hace referencia a
aquellas bacterias incluidas en el grupo de coliformes totales y que adems
son capaces de fermentar a la lactosa con produccin de acido y gas a
44,5C en un tiempo mximo de 24 h.
El BOE, recomienda el Mtodo de los tubos mltiples del Numero mas
Probable (NMP) y como alternativa el Mtodo de filtro de membrana para
la determinacin de la presencia de este grupo en un agua.
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FUNDAMENTO
Se basa en la determinacin del numero de coniformes presentes en una
muestra mediante la siembra de distintos volmenes del agua problema en
series de tubos conteniendo un medio de cultivo liquido lactosado y una
posterior resiembra en un medio de cultivo selectivo con incubacin a
temperaturas adecuadas.
PROCEDIMIENTO
El procedimiento comprende tanto pruebas presuntivas como confirmativas
de coniformes totales y de confirmacin de coliformes fecales.
PRUEBA PRESUNTIVA
14
15
16
1%
0.5%
7.2
CALDO DE MacConkey
Bilis de buey
Peptona
Lactosa
Prpura de bromocresol
Agua destilada
pH
5g/l
20g/l
10g/l
0.01g/l
1000ml
7.3
10g/l
5g/l
5g/l
2g/l
14g/l
0.4g/l
0.065g/l
1000ml
7.2
REACTIVO DE KOVACS
Alcohol amlico
p-dimetil aminobenzaldehido
HCL concentrado
150ml
10g
50ml
17
18
19