Introduccin

Canales de sodio juegan un papel importante en excitabilidad

neuronal
o Incluyendo iniciacin y propagacin del potencial de accin
o Cambian su expresin en las neuronas sensoriales cuand hay
lesiobnes inflamatoias y nerviosas llevando la activacin del
dolor.
Genes de canales de Sodio con 9 isoformas (Nav (1,1 1,9))
o Diferentes propiedades electrofisiolgicas
o Diferentes distribuciones en el sistema nervioso
o al aire y despus se almacen a -20 C.
Inmunohistoqumica.
o Se realiz una inmunotincion con anticuerpos primarioa y
secundarios
o Una seccin de cada par normales se ti con Na v 1.7 / N52 / PGP9.5,
mientras que la seccin adyacente de seleccionar pares de muestras se
tieron con Na v 1.7 / caspr / MBP.

La evaluacin microscpica confocal y de adquisicin de imagen.

o Las secciones fueron evaluados con un microscopio confocal de barrido

lser Nikon Eclipse 90i C1si con una NA objetivo de inmersin en aceite
de 40 / 1.30. Esta evaluacin incluye la seleccin de un ajuste de
ganancia de lser utilizado para la imagen Na v 1.7-inmunofluorescencia
para evitar pxeles saturados de manera de permitir un rango dinmico
de Na v intensidad de pxel 1,7-inmunofluorescencia y para seleccionar los
ajustes de ganancia de lser utilizados para la imagen todos los otros
anticuerpos primarios . Una serie de imgenes pticas a 6 micras
incrementos a lo largo del eje "z" de las secciones teidas con Na v 1.7 /
N52 anticuerpos / PGP9.5 fueron adquiridas por el medio y 18 micras de
cada seccin de espesor 30 micras en el asta de la pulpa y haces de
axones en las regiones coronales y radiculares cuando est presente.
Imgenes obtenidas del cuerno pulpar en muestras dolorosas incluyen
slo aquellas reas en las que las clulas inflamatorias se observaron en
las inmediaciones de las fibras. Se tuvo cuidado de seleccionar haces de
fibras que mostraron tincin N52 / PGP9.5 dentro de las fibras intactas,
ya que las fibras ampliamente fragmentados pueden representar los
degeneracin. Estos criterios de seleccin permiten la recogida de una
serie z de las imgenes pticas de la bocina pulpa en 8 normal y 6
muestras dolorosas, haces de axones coronales en 12 normal y 8
muestras dolorosas, y haces de axones radicular en 8 normal y 8
muestras dolorosas. Una serie z de imgenes pticas tambin se
obtuvieron en incrementos de 1 m de la zona central 20 micras de las
secciones gruesas de manojos de axones coronales y radiculares 30
micras de cuatro normales y cuatro muestras dolorosas teidas con Na v
1.7 anticuerpos / caspr / MBP. Todas las imgenes fueron capturadas con
ajustes idnticos (incluyendo ajustes de ganancia de lser) a una
resolucin de 1024 1024 (donde
cada pxel es 0,3 m de ancho, con un rea 0,09 m 2) y se guardan como 12 bits
imgenes de un solo canal con un 0-4095 gama de intensidades de pxel. Las imgenes fueron procesadas
en las ilustraciones usando Adobe Photoshop CS2 (Adobe Systems, San
Jose, CA) y CorelDRAW 12 (Corel Corporation, Ottawa, Canad). Muestras
de tejido de control se procesaron tal como anteriormente, excepto el sin
diluir Na v anticuerpo 1.7 se preincub con antgeno peptdico

(aproximadamente 30: 1 pptido al anticuerpo relacin de concentracin

molar) durante un mnimo de 4 horas antes de la aplicacin del
anticuerpo pptido-bloqueado. Especmenes de control adicionales
carecan de la aplicacin de anticuerpos primarios. Las secciones de
control carecan de inmunofluorescencia especfica.
en dos distintas Na v 1.7 acumulaciones fueron separados por un hueco
en el Na v 1.7 tincin dentro de la misma fibra y con cada Na v 1.7
acumulacin est flanqueado en un solo lado por caspr.

El anlisis estadstico.
o El anlisis estadstico para determinar la significacin utiliz el Student ttest, mientras que las barras de error en todos los grficos representan
el error estndar de la media (SEM). Los valores de "n" utilizados en
todos los casos representados el nmero de muestras evaluadas.