Sala Especializada 12: Uso da seleo genmica e dos marcadores moleculares no algodoeiro

USO DE MARCADORES MOLECULARES NA INTROGRESSO E CONTROLE DE EVENTOS GM

Leonardo Bitencourt Scoz1
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Instituto Matogrossense do Algodo-IMAmt (leonardoscoz@imamt.com.br)

J faz mais de uma dcada que os cultivos transgnicos (GM) vm sendo adotados pelos os
produtores brasileiros que plantam algodo, milho e soja, e pelo que tudo indica essa adoo ser
ampliada a cada safra, uma vez que as plantas GM possibilitam uma maior praticidade de cultivo,
auxiliam no controle de pragas e so pea chave de sistemas que objetivam o aumento de
produtividade com maior sustentabilidade. Tal tecnologia GM pode ser basicamente caracterizada
pelo processo de transferncia de qualquer gene exgeno, de uma bactria de solo, por exemplo,
para o genoma da planta atravs de metodologias de transformao gentica. Desta forma a planta
geneticamente transformada passa a produzir e acumular a protena bacteriana em seus tecidos, o
que confere uma nova caraterstica fenotpica. Ou seja, se a protena bacteriana possui uma
caraterstica inseticida a planta transgnica passar a ser txica determinada praga, assim como a
planta ser tolerante aos herbicidas caso a protena bacteriana possua caractersticas de no se
ligar ou degradar compostos fitotxicos que compe o princpio ativo destes produtos. Atravs
deste sistema de transformao gentica foram e so desenvolvidos diversos eventos transgnicos,
sendo cada um deles constitudo por uma insero particular e irreproduzvel de um gene exgeno
no genoma da planta. Habitualmente aps o seu desenvolvimento os mesmos so selecionados
quanto a sua funcionalidade, segurana para o consumidor, impossibilidade de impactos
ambientais negativos e ento liberados comercialmente conforme o sistema regulamentar de cada
pas.
No Brasil a liberao comercial destes eventos precisa ter o aval da Comisso Tcnica
Nacional de Biossegurana (CTNBio). Neste contexto, a primeira liberao da CTNBio para o
algodo foi o evento MON531 conhecido comercialmente como Bollgard I. Este evento,
desenvolvido pela Monsanto e aprovado em 2005, expressa o gene modificado cry1Ac que codifica
a endotoxina derivada da bactria de solo Bacillus thurgienses, ou Bt como conhecido
popularmente. Esta protena possui ao especfica para insetos da ordem Lepidptera e no possui
ao contra outros gneros ou diferentes espcies de organismos. Posteriormente, em 2008 foram
aprovados os primeiros eventos com tolerncia a herbicidas como LLcotton25 e Roundup Ready
(MON 1445). O primeiro deles foi desenvolvido pela Bayer CropScience e expressa o gene bar,
isolado da bactria do solo gram-positiva Streptomyces hygroscopius. A protena codificada por este
gene conhecida como fosfinotricina- acetil-transferase (PAT), que acetila a L- fosfinotricina,
composto ativo do glufosinato de amnio, no composto no fitotxico N- acetil-L-glufosinato.
Enquanto que o segundo, desenvolvido pela Monsanto, codifica uma verso da enzima 5enolpiruvilshiquimato-3-fosfato sintase EPSPS tolerante ao glifosato. Em sequncia na mesma linha
de resistncia aos Lepidpteros vieram o WideStrike (182-24-236 x 3006-210-23) e o Bollgard II
(MON 15985), assim como os novos eventos com tolerncia a herbicidas Roundup Ready Flex
(MON 88913) e Glytol (GHB614). Alm destes, tambm j foram liberadas combinaes de
eventos como TwinLink, Bollgard I- Roundup Ready e Bollgard II- Roundup Ready Flex, que
conferem resistncia a insetos e tolerncia a herbicida simultaneamente, e TwinLink- Glytol e
Glytol- LL, com tolerncia a dois herbicidas com modos de ao diferentes.

Brasilia, 3-6 Setembro 2013

Entretanto, estes eventos so apenas um complemento tecnolgico e a sua presena em

uma variedade algodo por si s no garante bons nveis de produtividade ou demais atributos de
interesse agronmico, assim sendo antes de irem a campo os mesmos precisam estar introgredidos
em cultivares produtivas e adaptadas s regies de cultivo. Essa introgresso de eventos GM em
cultivares convencionais principalmente realizada atravs do retro- cruzamento de um material
transgnico com um no GM, e tende a torna- se complexa e custosa a medida que tecnologias
com mltiplos eventos piramidados so introgredidos. Sendo que o principal motivo da maior
dificuldade neste ponto devido a uma reduo proporcional de plantas contendo todos os genes
da tecnologia GM nas prognies que sero utilizadas consecutivamente durante os retro
cruzamentos, favorecendo assim a obteno de linhagens com eventos descaracterizados. Por
outro lado, a introgresso torna- se vivel e eficiente com o emprego da anlise gentica
marcadores moleculares via PCR em tempo Real (qPCR). Neste sistema so utilizadas sequncias
nucleotdicas conhecidas como iniciadores e sondas marcadas com fluorforos, que correspondem
ao ponto de insero dos genes exgenos no genoma vegetal, sendo essa a marca de cada evento
GM. Logo, todo DNA vegetal extrado e analisado atravs do sistema de qPCR juntamente com os
iniciadores e sonda especficos para determinado evento emitir um sinal de fluorescncia, o qual
ser captado e lido pelo aparelho de qPCR caso este evento esteja presente. Por outro lado, caso o
evento no esteja presente no DNA analisado no ocorrer a emisso do sinal de fluorescncia,
assim caracterizando a planta como convencional, ou apenas negativo para o evento analisado.
Dessa forma, os marcadores utilizados via qPCR tornam possvel identificar quais plantas ainda
possuem a totalidade dos eventos a cada processo retro- cruzamento de maneira eficiente. Ao
mesmo tempo esses mesmos marcadores tambm so utilizados para quantificar relativamente o
nmero de cpias de determinado evento nas plantas analisadas, permitindo assim a
identificao precoce das plantas homozigotas j em F2, no sendo necessrio o avano alm de
geraes F6. Tal seleo de homozigotas possui uma importncia prtica ainda maior quando se
leva em considerao a proporo de homozigotas em F2 de 1/16 para tecnologias com dois
eventos, 1/64 para as que possuem trs e 1/256 para as de quatro eventos. Adicionalmente, em
termos de controle de qualidade, essa mesma anlise de qPCR pode ser realizada a cada ciclo para
o monitoramento da presena de eventos transgnicos indesejados, uma vez que a fecundao
cruzada algo bastante comum no algodoeiro, o que favorece a contaminao por eventos
adventcios. Essa contaminao pode se propagar e fixar ao longo do processo e assim arruinar o
desenvolvimento de uma nova cultivar, e por isso deve ser mitigada atravs de medidas como
deteco e destruio de plantas geneticamente contaminadas.
Finalmente, evidente que o uso de marcadores moleculares via qPCR viabiliza o
desenvolvimento eficiente de novas cultivares transgnicas, pois proporciona uma grande reduo
de custo e tempo entre os cruzamentos iniciais at a produo de lotes de sementes oficiais,
sempre mantendo altos nveis de qualidade.

Brasilia, 3-6 Setembro 2013