UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR Y TISULAR

TECNICA HISTOLOGICA

Dra. Isabel Garca Pelez

jueves 8 de agosto de 2013

TOMA DE MUESTRA
Cadver. NECROPSIA
CITOLOGIA EXFOLIATIVA: se toman clulas que
fcilmente se descaman
POR PUNCION: se toma con
una aguja que se clava en la
lesin

Persona viva
BIOPSIA: se toma
una muestra de
tejido

INCISIONAL: se toma
con instrumental
quirrgico parte de la
lesin
EXCISIONAL: se extrae
toda la lesin y se toman
muestras

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TECNICA HISTOLOGICA PARA LA

MICROSCOPIA OPTICA

jueves 8 de agosto de 2013

FIJACION DE LA MUESTRA
La fijacin es esencialmente un mtodo para la preservacin de
la morfologa y composicin qumica de la clula.
La fijacin detiene el metabolismo celular y evita la autlisis.
Los fijadores son de dos tipos
Fsicos: Congelacin
Qumicos: El fijador qumico ms utilizado es el
formaldehdo. El formaldehido es un gas que se presenta
para su uso diluido al 37 % en agua, y esta dilucin se le
denomina formol o formalina.
Para la fijacin las muestras se sumergen en formol al
10% en agua.

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INCLUSION EN PARAFINA

1. EXTRACIN DEL FIJADOR. Se lava la muestra con agua.

2. DESHIDRATACION. Se sumerge la muestra en etanol
comenzando por concentraciones bajas hasta llegar a etanol
absoluto.
3. ACLARAMIENTO. Se sumerge la muestra en xileno
4. INFILTRACION. Se sumerge la muestra en parafina lquida
5. INCLUSION. Se sumerge la muestra infiltrada en un molde
lleno de parafina lquida y se deja enfriar. La muestra queda
incluida en un bloque de parafina.

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INCLUSION EN PARAFINA

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CORTES EN PARAFINA

El bloque de parafina se coloca en un microtomo.

En el microtomo el bloque se desliza por una cuchilla de

acero y as se obtiene el corte de la muestra.

Los cortes se extienden en un bao de flotacin con agua

caliente y se recogen en un portaobjetos

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CORTES EN PARAFINA

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CORTES POR CONGELACION

El tejido fijado con formol o no, dependiendo de la tcnica, se

congela.

En este caso se puede cortar directamente sin necesidad de

incluirlo en parafina.

Los cortes se realizan en un aparato que es el criostato y se

corta de la misma forma que en parafina pero en fro.

En el cristato la muestra congelada se desliza por una

cuchilla de acero y as se obtiene el corte de la muestra.

Los cortes se recogen directamente con el portaobjetos

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CORTES POR CONGELACION

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TINCION
CORTES EN PARAFINA. Los portaobjetos en los que estn
adheridos los cortes infiltrados en parafina se sumergen en
diferentes lquidos para realizar la tincin y completar la
preparacin de la muestra.
1. DESPARAFINACION. Se realiza con xileno.
2. HIDRATACION. Se realiza con etanol desde etanol absoluto,
pasando por soluciones menos concentradas hasta llegar al
agua pura.
3. TINCIN. Con diferentes colorantes.
4. DESHIDRATACION. Con concentraciones crecientes de
etanol.
5. ACLARAMIENTO. Con xileno.
6. MONTAJE. Con resinas naturales o sintticas.
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TINCION

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TINCION
CORTES POR CONGELACION.
Los cortes por congelacin se utilizan cuando se necesita
hacer un diagnstico rpido como en una biopsia
intraoperatoria, o para no alterar determinadas molculas
con los solventes o el calor como en algunas tcnicas de:
histoqumoica, histoqumica enzimtica o
inmunohistoqumica.
Los cortes no estn infiltrados en parafina y estn
hidratados por lo que pueden pasar directamente a los
colorantes.
El resto de la tcnica es semejante a la de los cortes en
parafina.

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TINCION
HEMATOXILINA/EOSINA
Se utilizan dos colorantes
vLa HEMATOXINA que es un colorante BASICO, de
color morado, que tie molculas o estructuras ACIDAS que
se denominan BASOFILAS
vLa EOSINA que es un colorante ACIDO, de color rosa
anaranjado, que tie molculas o estructuras BASICAS que
se denominan ACIDOFILAS
vEl ncleo de las clulas se tie con HEMATOXILINA y el
citoplasma con EOSINA. Estructuras basfilas del
citoplasma como los ribosomas y el retculo endoplsmico
rugoso tambin se tien con HEMATOXILINA
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HEMATOXILINA / EOSINA

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TINCION
TRICROMICOS
TRICROMICO DE MASSON.
vNcleo. Morado/caf
vCitoplasma y fibras musculares. Rojo
vFibras de colgena. Azul
TRICROMICO DE GALLEGO.
vNcleo. Morado/caf
vCitoplasma y clulas musculares. Verde claro
vFibras de colgena. Verde obscuro

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TRICROMICO DE MASSON

TRICROMICO DE GALLEGO

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WRIGHT

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IMPREGNACIONES METALICAS

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TINCION
METACROMASIA. Es el cambio del color original del
colorante al unirse a un determinado compuesto.
Es por la unin de varias molculas de un colorante bsico
que al unirse a una molcula poliannica (muchas cargas
negativas) cambia su color.
AZUL DE TOLOUIDINA

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HISTOQUIMICA

Mediante la histoqumica se localizan determinados

compuestos qumicos en la clula o el tejido

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HISTOQUIMICA
PAS
Esta tcnica se utiliza para la localizacin de
macromolculas ricas en carbohidratos: Glucgeno o
glucoprotenas
Se utiliza
Acido peryodico : PA
Reactivo de Shiff: S
Cuando ests molculas estn presentes se tien de e
color rosa fucsia y se dice que son PAS+

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HISTOQUIMICA DE CARBOHIDRATOS
PAS

MUCICARMIN DE
MAYER

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CARMIN DE BEST

HISTOQUIMICA

FEULGEN
Esta tcnica se utiliza para la localizacin del ADN.
Se utiliza
Hidrlisis suave
METODO DE FEULGEN
Reactivo de Shiff

El ADN se tie de color

rosa fucsia

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HISTOQUIMICA
DETERMINACION DE LIPIDOS
Las muestras se fijan con formol
Los cortes se hacen por congelacin
La coloracin se puede
TETRAOXIDO DE
realizar con
OSMIO
ROJO OLEOSO: Triglicridos
SUDAN ROJO: Triglicridos
SUDAN NEGRO: Lipoprotenas
TETRAOXIDO DE OSMIO:
Lpidos en general

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HISTOQUIMICA ENZIMATICA
Se utiliza para la localizacin de enzimas especficas en
clulas y tejidos
Las muestras se fijan con fijadores qumicos dbiles o se
congelan directamente
Los cortes se hacen por congelacin
ATPasa

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PEROXIDASA

INMUNOCITOQUMICA
Es la tcnica que permite la localicin de molculas
especficas como protenas.
La localizacin es porque estas molculas se unen
especficamente a un anticuerpo al que se le ha
unido:
Un fluorocromo: INMUNOFLOURESCENCIA
Una enzima: INMUNOHISTOQUMICA
ENZIMTICA.

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INMUNOFLUORESCENCIA

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INMUNOHISTOQUMICA ENZIMATICA

anti-Insulina

anti-tubulina

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anti-Vimentina

INMUNOFLUORESCENCIA

anti-Citomegalovirus