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INTRODUCCIN

1. En el desarrollo de un proceso para la obtencin de una enzima a partir de E. coli, se sabe que
esta tiene un 80% de humedad y que el 60% de su peso seco es protena. El proceso de
purificacin de la enzima consta de 4 pasos. En la tabla siguiente se presenta la cantidad de
enzima y de protena total al final de cada paso. Se desea obtener el factor de purificacin de la
enzima en cada paso, el rendimiento por paso y el rendimiento global.
Paso

Protena (g)

Enzima (g)

Fraccin de enzima
x10-3 (g/g)

12.0

0.08

6.667

Precipitacin

1.8

0.06

33.33

Intercambio inico

0.24

0.048

200

Cromatografa en gel

0.036

0.036

1000

Ruptura celular

Respuesta: En el Captulo 1 del Tejeda


2. Completar la siguiente tabla relacionada con la purificaccin de una enzima.
Materi
al

Vol
(m
L)

Prot.
(mg/m
L)

Pr
ot.
(m
g)

Act.
Enz.
(U/m
L)

Extra
cto

50
0

14

1er.
paso

50

10

60

Act
.
En
z.
(U)

Act.
Esp.
(U/m
g)

Ren
d.
Eta
pa
(%)

Ren
d.
Tota
l
(%)

Fa
ct.
Pur
if

Respuesta:
Mater
ial

Vol
(m
L)

Prot.
(mg/
mL)

Pro
t.
(m
g)

Act.
Enz.
(U/m
L)

Act.
Enz
.
(U)

Act.
Esp.
(U/m
g)

Ren
d.
Eta
pa
(%)

Ren
d.
Tota
l
(%)

Fa
ct.
Pur
if

Extra
cto

50
0

14

70
00

350
0

0.5

100

100

1er.
paso

50

10

50
0

60

300
0

86

86

12

3. El proceso de separacin de un antibitico consta de 3 etapas. En la 1a. etapa se obtiene un


rendimiento de un 83%. En la 2a. etapa el rendimiento representa el 75% del de la etapa 1, y en la
etapa 3, el rendimiento es del 95%. Estime la cantidad de producto obtenido si su concentracin en
el caldo de cultivo es de 25g/L en un volumen total de 20 metros cbicos.
Respuesta: 245.42 Kg
4. Si el rendimiento promedio por paso es del 60% y se usan 10 pasos para recuperar un producto,
cual es el rendimiento global.

Respuesta: 0.6%
Si debido a la desnaturalizacin del producto el rendimiento por etapa desciende a 30% cual es el
rendimiento global.
Respuesta: 0.0006%
ROMPIMIENTO CELULAR
1. En el rompimiento intermitente para la obtencin de una enzima de S. cerevisiae se utiliz un
molino de perlas de alta velocidad de 4 L obtenindose los siguientes datos:
Tiempo (s)

Protena x 10-2 (kg/kg)

Enzima x 102
(mol/min-Kg)

15

1.025

0.625

30

2.15

1.15

45

2.525

1.675

60

3.425

2.15

Max

10

6.7

a) Calcular la constante cintica para la liberacin de la protena. R=6.984 x 10 -3 s-1


b) Calcular la constante cintica para la liberacin de la enzima. R=6.412 x 10 -3 s-1
2. Para la recuperacin B-galactosidasa de E. coli se hace pasar por un microfluidizador tipo M-110
una suspensin celular que contiene 47.6 g/L en peso seco. La presin de operacin utilizada fue
de 60 MPa.
La cantidad de protena liberada despus de cada paso se presenta en la siguiente tabla:
Paso

%protena liberada

Ln Rm/(Rm-R)

63

0.994

79

1.56

88

2.12

96

3.219

10

99.9

6.908

a) Estimar el valor de la constante cintica de rompimiento considerando a=2.2 y b=1.


R: k=8.4 x 10-5 MPa-2.2
b) Estimar el nmero de pasos requeridos para una liberacin del 93% de protena.
R: N=3.88 pasos
3. El anlisis del contenido citoplasmtico de una suspensin celular es el siguiente:
Protenas

75 000 da

2%

Lpidos

550 da

1%

Azcares

200 da

1%

Sales (eq. KCl)

63 da

2%

Cul es la presin osmtica de las clulas con relacin al agua pura?


R: 17.48 atm

4. Se utiliza un homogeneizador de alta presin para la eliminacin de una hormona; despus de


32 min de homogeneizar 16.6 L, se obtiene el 40% de suspensin de la hormona fuera de la clula.
Cunto tiempo tardar en obtener el 95%, si se tiene 460 L de suspensin?
R: 3.6 das
SEDIMENTACIN
1. Se desean precipitar gotas de aceite con dimetro de 30 micras suspendidas en aire a 37.8 C y
101.3 kPa de presin. Las densidades del aceite y el aire son 900 y 1.137 Kg/m3respectivamente.
La viscosidad del aire a esa temperatura es 1.897 x 10 -5 kg/m seg. Calcule la velocidad de
precipitacin de las gotas considerando que su esfericidad es 1.0.
R. 6.122 x10-3 m/s

2. Calcule la velocidad de precipitacin de esferas de vidrio con dimetro de 1.554 x 10 -4 m en


agua. La suspensin contiene 60% de slidos en peso. Las densidades de las esferas y del agua
son 2467 y 1000 Kg/m3 respectivamente. La viscosidad del agua es de 0.01 g/cm seg.
R. Vtlibre= 1.929 x 10-2 m/s; Vtfrenada= 1.529 x 10-3 m/s

3. Se quiere conocer la viscosidad de un lquido que tiene una densidad de 1045 Kg/m 3; para ello
se deja caer una partcula con densidad y tamao de 1200 Kg/m 3 y 0.08 mm respectivamente,
obtenindose una velocidad terminal libre de sedimentacin de 9.5mm/s. Considere que se
encuentra en la regin de Stokes.
R. 5.685 x 10-5 Kg/m seg

4. Se sedimentan partculas esfricas con un dimetro y densidad de 0.008 cm y 1.53 g/cm 3, en un


medio lquido con viscosidad y densidad de 0.012 g/cm*s y 1.15 g/cm 3respetivamente. Calcule la
velocidad terminal si:
a) la suspensin tiene 10% de slidos
b) Si la relacin Drec/Dpar es de 35.

CENTRIFUGACIN

1. Estimar el tiempo de sedimentacin relativo de una partcula de dimetro de 5 micrmetros con


respecto a una de un micrmetro. Suponga que ambas tienen la misma densidad y estn sujetas al
mismo campo centrfugo en una centrfuga de tubos que giran perpendicularmente al eje.
2. Se desean separar clulas bacterianas en una suspensin con las siguientes caractersticas:
viscosidad del fluido 0.01 g/cm seg; diferencia de densidades 50 Kg/m 3; dimetro de partcula 106
m; 20000 rpm, Distancia del eje de rotacin de la centrfuga a la interfase lquido-gas y al fondo
del tubo de 0.011 m y 0.022 respectivamente, longitud de la centrfuga tubular 1m. Se dese usar la
misma centrfuga para las clulas despus de la etapa de ruptura celular con dimetro de 0.5x10 6
m y con un caldo con viscosidad de 0.04 g/cm seg.
a) Calcular el flujo manejado en la separacin de clulas.
b) Calcular la relacin de flujos para claridad completa del sobrenadante con respecto al flujo para
50% de corte.
c) Calcular el flujo para la separacin completa de los restos celulares.
3. El factor G es la relacin entre la fuerza centrfuga y la fuerza gravitacional.
Calcule la velocidad de centrifugacin en rpm si se centrifuga a 3000g en una centrfuga con un
dimetro de 25 cm.
4. Se tienen dos centrfugas cuyos rotores tienen radios de 10 cm y 20 cm cada centrfuga. Calcule
las velocidades angulares y los factores G para ambas centrfugas girando a 2400 y 4800 rpm.
Discuta el resultado.
5. Una centrfuga tubular que gira a 3000 rpm tiene un radio exterior de 15 cm y el radio interior de
5 cm, con una longitud de 0.95 m. Las partculas que se desean separar tienen velocidad terminal
de 3.5x10-5cm/s.
a) Calcule el tiempo para sedimentar el 100% de las partculas.
b) Calcule el volumen a centrifugar en el tiempo obtenido.
c) Calcule el tiempo para sedimentar considerando el 50% de la distancia anular.
FILTRACIN
1. Durante la realizacin de una prueba de filtracin de una suspensin de cristales de cido ctrico
(0.34g de slido/100 cm3 de suspensin) en un filtro de 89 cm2, durante 30 seg, con una cada de
presin de25443.6 Kg/ms2 se obtuvo la siguiente ecuacin
y = -0.0002x2 + 0.0279x + 0.245 donde y = volumen de filtrado en litros y x= tiempo en segundos.
Calcule:
El tiempo requerido para filtrar 7300 l de suspensin con una concentracin de slidos de 0.28
g/100 cm3 en un filtro con un rea de 1.3 m2. =1*10-3 Kg/ms
2. Se desea filtrar cristales de un antibitico en un filtro de 89cm 2, con un gradiente de presin
0.50g/100cm3; la viscosidad del medio es de 0.0015Kg/ms; en las pruebas en el laboratorio se
obtuvieron los siguientes datos:
Estime el tiempo de filtracin, si el volumen que se desea separar es de 9000L, en un filtro de
1.8m2 y tomando en cuenta que la solucin tiene el 50% menos en la concentracin de slidos,
t (min)

V (m3)

0.1

0.0025

0.4

0.009

0.7

0.015

0.02

0.052

0.09

10

0.13

3. Se llev a cabo una prueba de filtracin a una caida de presin constante (340 kPa) en un filtro
prensa de laboratorio. Las masas colectadas fueron las siguientes:
El rea de filtracin del filtro de laboratorio fue de 0.186 m 2. Si se desea utilizar un filtro de escala
industrial para filtrar una suspensin que contiene el mismo material, pero a una concentracin
50% superior que la utilizada para el filtro prensa de laboratorio, y a una caida de presin de 270
kPa, estimar la cantidad de filtrado que se obtendr en una hora si el rea del filtro es de 9.3 m 2.
Masa de filtrado
(Kg)

20

40

60

80

26

54.5

93

Tiempo (min)

4. Se filtra una sal a temperatura ambiente, de un medio con una viscosidad de 0.001Kg/ms, con
densidad de 0.003g/L y con un P de 3.3atm, en un filtro prensa de 100cm 2. Para obtener la
resistencia especfica se realiz la filtracin en el laboratorio y arroj los siguientes datos:
Calcule el tiempo para filtrar 4000L en un filtro de 15 marcos que tienen un rea de 0.15m 2y el
tiempo de lavado.
t (s)

V (cm3)

80

10

140

15

195

20

243

25

290

30

330

40

390

50

450

60

515

CRISTALIZACIN
1. Se disuelven 10 Kg de cido adpico en 13.1 Kg de agua y se calientan a 90C para solubilizar el
cido. Posteriormente, la solucin se filtra para eliminar impurezas. Durante el calentamiento y la
filtracin se evapora 10 % de agua. La solucin es enfriada a 35C y filtrada. La solubilidad del
cido adpico es de 0.05 kg/Kg de agua a 35C. Determine el peso de cristales recuperados
despus de la filtracin a 35C.
2. Explique cuantos gramos de sal y agua se debe mezclar para prepara 400 cm 3 de una disolucin
con una concentracin de sal 150 g/L de agua. Si tomamos 50 cm 3 de esta disolucin y
evaporamos el agua. Obtenga los gramos de sal que cristalizar y el volumen de disolucin que se
debe tomar, para que al evaporar el agua, queden 20 g de sal.

3. Para recuperar el cido ctrico (PM=192) producido por cultivo sumergido con Aspergillus
niger se siguen las siguientes etapas: a)el medio de fermentacin es filtrado para remover la
biomasa, b) el cido ctrico es precipitado como citrato de calcio al agregar CaO (PM=56), c) el
precipitado es separado por filtracin, d) el precipitado es disuelto con cido sulfrico (PM=98), e)
finalmente el cido ctrico es cristalizado por evaporacin. En el ltimo lote de produccin se
obtuvieron 25 m3 de medio de cultivo con 140 g/l de cido ctrico.
Si se quiere precipitar el cido ctrico con CaO y la solubilidad del citrato de calcio (PM=378)es de
1 parte por 1000 partes de medio de cultivo.
a) Cuantos kilogramos de CaO se necesitan?
b) cuantos kilogramos de citrato de calcio se producen?
c) en el tercer paso la filtracin retiene el 95% de citrato de calcio, ste es disuelto en 2% de
exceso de cido sulfrico, cuanto cido sulfrico es necesario?
4. Se mezclan 15 kg de sacarosa con 20 L de agua y se calientan a 90 C hasta que la sacarosa se
solubiliza. Con el fin de remover impurezas solubles, la sol. se filtra. Durante ambos procesos
(calentamiento y filtracin), 8% del agua se pierde en forma de vapor. La solucin clarificada se
enfra a 25 C y se filtra. La solubilidad a 25 C es de 200 g por 100 mL de agua. Determinar el
peso de cristales recuperados.
PRECIPITACIN
1. En un experimento de precipitacin de la enzima piruvato quinasa con sulfato de amonio a pH 7,
se obtuvieron los siguientes resultados:
a) Determinar los parmetros de la ecuacin de solubilidad A y m.
b) Calcular la solubilidad de la enzima para una concentracin 2.34 M de sulfato de amonio
Solubilidad
Conc. SA
(mg/mL)
(M)
0.079
2.6
0.316
2.5
1.258
2.37
3.162
2.24
2. La cintica de desnaturalizacin de una protena tiene una energa de activacin de 400,000
J/mol. Cuando esta protena se mantiene a 50C por un lapso de 10 min se desnaturaliza en una
50%.
a) Calcular la constante de la velocidad especfica de desnaturalizacin
b) Calcular la temperatura a la cual la protena solo se desnaturaliza el 10% en 10 min.
3. 100 L de una solucin de 10 g/L de seroalbmina bovina y 5 g/L de otra proteina desconocida
sern tratadas con (NH4)2SO4. El objetivo es recuperar 90% de la albumina en el precipitado. Las
constantes de precipitacin para las dos protenas son:
Proteina
A
m
Seroalbmina bovina
21.6
7.65
Desconocida
20.0
7.00
Asumiendo que estas propiedades son independientes de la presencia de la otra protena, Calcule
la concentracin en el precipitado de la otra proteina e indique cual es la pureza de la seroalbumina
en el precipitado
4. Si la solubilidad de la seroalbmina bovina es de 1.2 y 0.26 g/L en (NH 4)2SO4 2.8 y 3.0 M
respectivamente. Cual es la solubilidad de la proteina en (NH 4)2SO4 3.5 M.