Laboratorio de Microbiologa General y

Aplicada
ACCIN DE AGENTES FSICOS SOBRE LOS
MICROORGANISMOS
I. EFECTO DE LA TEMPERATURA

OBJETIVOS:
- Determinar la temperatura de muerte trmica de los
microorganismos Escherichia coli y Staphylococcus aureus
tratados a 40C y 65C durante diferentes intervalos de tiempo

- Determinar el nmero de microorganismos

supervivientes resistentes al tratamiento trmico
- Determinar la temperatura optima de supervivencia de
los microorganismos Escherichia coli y Staphylococcus aureus.
MATERIALES

Cepas de Staphylococcus aureus.

Cepas de Escherichia coli

PROCEDIMIENTO

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Nos entregaron los dos cultivos de E.

coli y S. aureus, crecidos en caldo
nutritivo se sometera a 40C y 65C.

Cada 0,40, 80, 100 min. se cogera 1 ml

de cada uno de los tubos que contienen
y se realizara diluciones seriadas.

Luego de las diluciones seriadas de cada

tubo que contienen las cepas
microbianas a ambas temperaturas , se
sembrar por el mtodo de difusin

Agregamos el agar a nuestras placas.

Rotulamos cuando estas esten secas
correctamente, las placas petri donde
indicamos el tratamiento y la cepa
microbiana

Incubamos a 28 C por 48 horas en

posicion invertida
Observacin:
Para el mtodo de difusin se utilizaron placa plsticas que se esterilizaron con
xido de etileno.

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RESULTADOS
Realizamos el recuento de microorganismos en cada uno de los tratamientos.
ESCHERICHIA COLI
40C
ESCHERICHIA COLI (65C)

0 min.

N de colonias
contadas: 624

80 min.

N de colonias contadas:
2504

0 min.

N de colonias contadas:
624

40 min.

N de colonias contadas:
1592

100 min.

N de colonias
contadas: 1104

40 min.

N de colonias contadas:
1920

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80 min.

N de colonias contadas:
2826

100 min.

N de colonias contadas:
1984

STAPHYLOCOCCUS AUREUS
40C

0 min.

40 min.

N de colonias contadas:
489

N de colonias contadas:
1420

80 min.

100 min.

N de colonias contadas:
2072

N de colonias contadas:
2440

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STAPHYLOCOCCUS AUREUS
65

0 min.
N de colonias contadas:
489

40 min.
N de colonias contadas:
1465

80 min.
N de colonias contadas:
2720

100 min.
N de colonias contadas:
3712

UFC/ml = (Nmero de colonias x FDD)/ Volumen de siembra

Volumen de siembra: 1 mL
Factor decimal de dilucin (FDD) = 1/ dilucin realizada 1/ 10-3 FDD=103

CRECIMIENTO MICROBIANO (UFC/ml)

TEMPERATURA

TIEMPO (MIN)
Escherichia coli

40C
65C

0
40
80
100
0
40

624x103
1592 x103
2504 x103
1104 x103
624 x103
1920 x103

Staphylococcus
aureus
489 x103
1420 x103
2072 x103
2440 x103
489 x103
1468 x103

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2826 x103
1984 x103

80
100

2720 x103
3712 x103

Con los resultados obtenidos hallamos el Tiempo de Reduccin decimal o valor D en

ambas temperaturas utilizando la siguiente frmula:
X

Dt =

log (

No
)
Nx

Dt: Tiempo en minutos para reducir el 90% el nmero de microorganismos de

una poblacin a una temperatura dada.
x: Minutos a una determinada temperatura
No: n de clulas al inicio del tratamiento trmico
Nx: n de clulas supervivientes despus de un tratamiento

Escherichia coli
Temperatura 40C
1)
2) X= 100
3)
4)
No=624x103

5)
6)

7)
8)

Nx=1104x103

Dt= 403.5

9) Temperatura 65 C
10) 1)
11)
X= 100
12)
No=624x103

13)

Nx=1984x103
Dt= 199.06

14)
15) STAPHYLOCOCCUS AUREUS
16) Temperatura 40C
17) 1)

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20)

18) X=100
19)

Nx=2440x10

No=489x103

Dt= 143.24

21)
22) 2)
25)

23) X=100
24)

No=489x103

Nx=3712x103

Dt= 113.59

26)
27) CUADRO DE RESULTADOS:
28)
29)
31)
32)

43)

microorganismo
33)
34)
35)
36)
37)
38)
39)
40)
41)
42)
Escherichia coli
44)

30)

temperatura
45)
40C
46)
65C
48)
50)
Se observ que
49)
Se observ que a al
crecimiento
esta temperatura a los microbiano ascendente
tiempos tratados (0, 40,80 hasta los 80 minutos ,
minutos)
hubo despus
hay
un
crecimiento de poblacin descenso a los 100
microbiana de forma minutos
de
ascendente, pero despus aprocimadamente
el
hubo un descenso a los 70% de pobalcion con
100 minutos que fue respecto al anterior .
incluso las mitad de lo
que haba en el tiempo
80`.
52)
56)
53)
CRECIMIENTO
57)
CRECIMIEN
54)
POSITIVO
TO
ASCENDENTE
58)
POSITIV
55)
Hasta los 80`
O
ASCENDENTE
59)
Hasta los 80`
61)
63)
62)
REDUCCION DE
64)
REDUCCION
CRECIMIENTO
CRECIMIENTO
65)
POSITIVO
POBLACIONAL A 100
66)
En los 100
minutos
minutos

<

<

67)

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1)

microorganismo

3)
4)
5)

2)

temperatura

65C
Se observ
11)
Se observ que a
que el crecimiento
todos los tiempos tratados (0, poblacional
40,80 y 100 minutos) en esta microbiano fue de
temperatura hubo
forma ascendente en
crecimiento de poblacin
todo los tiempos .
microbiana de forma
ascendente.
14)
CRECIMIENTO
CRECIMIENTO
POSITIVO
POSITIVO
ASCENDENTE
ASCENDENTE
15)
7)

40C

8)
12)

10)
Staphylococcus

6)

aureus.

<

68)
COMPARASION DE CRECIMIENTO POBLACIONAL ENTRE LOS
MICROORGANISMOS
69)
70)
Analizando de forma general los crecimientos poblacionales en las dos
temperatura y a todos los tiempos con pequeos descenso en alguno de ellos se
determina :
71)
72)
CRECIMIENTO POBLACIONAL DEL Escherichia coli FUE MENOR
que el del Staphylococcus aureus.
73)
74)

DISCUSION DE RESULTADOS
-

Segn revisin de bibliografas e informacin terica investigada las

condiciones de crecimiento mnimas, optimas y mximas de la Escherichia coli
son 7-8 C, 35-40C y 46 C ,segun nuestros resultados los crecimientos
poblacionales del microorganismo fueron positivos a las dos temperaturas
analizadas ( 40 y 65 C ) siendo diferentes estos resultados con lo determinado
tericamente.Entonces se puede indicar que el comportamiento de la
Escherichia coli en la practica se debio a que activo su mecanismo de defensa
como las toxinas, llamadas verotoxinas o toxinas de tipo shiga y su antgeno O el
cual es termoestable y le permite sobrevivir en un alto rango de temperaturas .

75) Fuente : http://www.elika.net/datos/pdfs_agrupados/Documento84/3.Ecoli.pdf

-

De la misma manera se sabe segn datos tericos que las condiciones de

crecimiento minimo , optimo y mximo del Staphylococcus aureus son 10C , 40
-45 C y 48 C , datos que difieren totalmente con los resultados observados en
la practica donde hubo crecimiento poblacional ascendente del microorganismo

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a las temperaturas analizadas (40 y 65 C ) .Esto indicara que los
Staphylococcus aureus tambin activaron sus mecanismos de defensa sus
toxinas que estn compuestos por protenas o pptidos y que son
altamente estables, y resistentes al calor, congelacin e
irradiacin.Asi tambien tiene como estrategia adaptativa de
autoproteccin, la produccin de enterotoxinas y la formacin de
biopelculas .

76) Fuente
:http://www.elika.net/datos/pdfs_agrupados/Documento95/7.Staphylococcus.pdf
77)
78)
79)
80)
81)
82)
83)

CONCLUSIONES
- Se observ mayor crecimiento poblacional en Staphylococcus aureus.
- Los microorganismos sobrevivieron a las temperaturas de 40 y 65C debido a la
-

activacin de sus mecanismos de defensa ante situaciones de estrs o situaciones

de riesgo.
El Tiempo de Reduccin decimal fue MAYOR en Escherichia coli.
Staphylococcus aureus tiene sus mecanismos de defensa mucho mas optimos
que la Escherichia coli , lo cual se observa los diferentes crecimientos
poblacionales .

84)

85) ACCIN DE AGENTES QUMICOS SOBRE LOS

MICROORGANISMOS
I.

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE IONES

HIDRGENO (ph) EN LOS MICROORGANISMOS
86)
OBJETIVOS
- Determinar el efecto del pH en el crecimiento y desarrollo
microbiano
- Determinar el pH optimo del Escherichia coli.
PROCEDIMIENTO
87)
1. El profesor nos entreg la batera de tubos con los pH indicados, que
previamente estos tubos estn con caldo nutritivo estril previamente

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ajustados con HCl a 1.0 N y NaOH 1.0 N, con ph de 3.0, 5.0, 7.0, 9.0 y
11.0 (una de cada una).
88)
89)
2

El profesor nos
entreg un tubo
con cultivo de
24 horas de
edad de
Escherichia coli

90)
91)
92)
93)
94)
95)
96)
97)
98)
99)
100)

Procedemos a
inocular con una
aza de siembra el
cultivo de E. coli en
cada uno de los
tubos de caldo
nutritivo con
distintos valores de
ph.

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101)
4

Esterelizamo
s la boquilla
del tubo con
el cultivo
para que
este no se
contamine

Hacemos la
inoculacion a
cada tubo
con el ph
indicado

Rotulamos
los tubos con
numero de
mesa.

102)
7

Resultado
despues de
inocular a
cada tubo
con las
muestras de
E. coli

Incubamos a
28 C
durante dos
dias y
anotamos
nuestras
observacione
s.

103)

RESULTADO
104)

Anotamos las observaciones que tuvieron los tubos separadamente

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105)
106)

Nuestro factor para este proceso es la TURBIADEZ

pH 3

pH 5

En este tubo se
observo que es de
color hialino , se
podria que su
turbiadez es
poquisima con un
resultado negativo

En este tal como el

tubo anterior es de
color hialino,
tambien con poca
turbiadez con un
resultado negativo

pH 7

Este tubo se
observa con mayor
turbidez por lo cual
en terminos de
cantidad de
crecimiento: es de
regular crecimiento

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107)

pH 11

pH 9

108)
109)
110)

En el caso de la
turbiadez este tubo
representa un
crecimiento regular de
la E. coli

111)

Aca se observa la
mayor turbiadez con los
demas tubos por lo cual
el resultado es de
crecimiento moderado

112)
113)
114)
115)
116)
117)

TABLA DE RESULTADOS

118)

Escala:

119)

+ = poco crecimiento

120)

+ + = regular crecimiento

121)
+ + + = crecimiento
moderado
122)
+ + + + = abundante
crecimiento

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123)
129)
E. coli

124)
pH 3.0
130)
negativo

125)
pH 5.0
131)
negativo
135)

126)
pH 7.0
132)
++

127)
pH 9.0
133)
++

128)
pH 11.0
134)
+++

DISCUSIN DE RESULTADO
- Las condiciones de crecimiento de la Escherichia coli con respecto a su
pH minimo, optimo y mximo son 4.4 , 6-7 y 10 , ahora bien los resultados
obtenidos en la prctica coinciden con los datos tericos en un 85% debido a que
si se observ crecimiento microbiano a 7 y 9 de pH , con una diferencia en el pH
11 donde se observo mayor crecimiento ( mayor turbidez ) ; esto se puede
explicar porque el microorganuismo activo sus mecanismos de defensa ante un
extremo pH al que fue incubado .

136)
Fuente:http://www.elika.net/datos/pdfs_agrupados/Documento
84/3.Ecoli.pdf
CONCLUSIONES :
- Se determina que el rango ptimo de crecimiento de la Escherichia coli
-

es a pH 7.
Se reafirma que a pH 3 -5 el microorganismo obsevado no crece , confirmndose
este resultado con los datos tericos.

- El pH es un factor importante para determinar el crecimiento de los

microorganismo la cual se observa por el grado de turbidez .
137)
138)
139)