APNDICE I:

DEDUCCIN DE LA ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN

Para llegar a la descripcin de la actividad enzimtica en funcin de la concentracin de
sustrato descrita por Michaelis-Menten se tuvieron que realizar algunas consideraciones,
debido a que existen varios pasos intermedios de la reaccin, todos reversibles y a que la
velocidad de formacin de cada una de las especies involucradas depende no solo de su
concentracin sino tambin de las constantes de velocidad (k 1, k-1, k2, k-2, kp, k-p) y que se
encuentran en la siguiente reaccin.

Las simplificaciones y suposiciones para obtener la curva matemtica que mejor se ajusta
a los datos experimentales fueron las siguientes:
1. Suponer que hay un complejo central (ES), esto es que ES se rompe directamente
en E + P.

Simplificndose la reaccin a dos pasos:

Paso 1. Formacin de ES que depende de:
A) La velocidad de formacin

v1=k1[S] [E]

B) La velocidad de disociacin

v-1=k-1[ES]

Paso 2. Formacin de productos que depende de:

A) La velocidad de formacin

vp=kp[ES]

B) La velocidad de disociacin

v-p=k-p[E] [P]
2. Asumir que la reaccin reversa (PS) es despreciable. La reaccin es
termodinmicamente factible y podemos establecer condiciones experimentales
que minimicen la reaccin reversa, por ejemplo aadiendo una enzima que
convierta P en otra especie como Q y que est no reaccione con nuestra enzima. O
bien podemos medir la velocidad de reaccin a tiempos muy cortos en donde la
reaccin reversa es insignificante. Lo anterior nos simplifica la reaccin:

De tal forma que la velocidad a tiempos cortos correspondera a la velocidad inicial

de reaccin y quedara expresada como sigue:

Pero para formar el producto debemos considerar que tan rpido se rompe el
complejo ES, quedando descrito en los dos siguientes pasos:
Paso 1. En la formacin del complejo ES debemos considerar:

[E]total= [E] + [ES]

entonces

[E]= [E]total-[ES]
V formacin ES = k1 [S] [E]

sustituyendo E en la ecuacin de velocidad de formacin de ES

resulta:

V formacin ES = k1 [S] ([E] total -[ES])

Paso 2. Ruptura del complejo ES:

Velocidad de ruptura ES = v-1+vp

Sustituyendo las velocidades

Velocidad de ruptura ES = k-1[ES] +kp[ES]

3. Suposicin del estado estacionario de Briggs Haldane.

Figura A.1. Cambios en las concentraciones de las especies involucradas en la catlisis. En el estado
estacionario la concentracin del complejo ES se mantiene pequea y constante.

En el modelo cintico del estado estacionario, hay un intervalo de tiempo durante la

catlisis enzimtica en el que la concentracin del complejo ES es constante
(Figura A.1), por lo tanto la velocidad de formacin del complejo ES es igual al de
su disociacin:

Despejando [ES]

rearreglando

Si regresamos a la ecuacin de velocidad inicial

ES, obtenemos lo siguiente:

y sustituimos

4. Por ltimo si se considera que la [S] >> [E] (Figura A.1) la interaccin de S con E
para formar ES no afecta significativamente la [S]. La enzima est saturada de
sustrato y

Entonces podemos definir la velocidad mxima de la enzima o Vmax como:

Si sustituimos en la ecuacin de velocidad inicial tendramos que:

Agrupando las constantes:

Sustituyendo Km en la ecuacin de velocidad inicial se obtiene la ecuacin

de Michaelis-Menten: