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TEMA 6.

GENTICA MICROBIANA
Elementos Genticos Bacterianos
El genoma bacteriano est compuesto:

Cromosoma. Son las estructuras altamente organizadas, formadas


por ADN y protenas, que contiene la mayor parte de la informacin
gentica de un individuo; todo lo esencial para la bacteria est
codificado en este elemento. Suele haber uno por bacteria.
Plsmidos. son molculas de ADN extracromosmico circular que se
replican y transmiten independientes del ADN cromosmico. Estn
presentes normalmente en bacterias, y en algunas ocasiones en
organismos eucariotas como las levaduras. El nmero de plsmidos
puede variar, dependiendo de su tipo, desde una sola copia hasta
algunos cientos por clula. Se trata de genes que codifican protenas
que no son esenciales, de manera que son prescindibles pero
importantes. Se replican de manera independiente y se pueden
generar varias copias.
Elementos genticos transponibles. es una secuencia de ADN de
doble cadena que puede moverse de manera autosuficiente de un
sitio a otro dentro de la misma molcula o entre molculas distintas
de la misma bacteria, un fenmeno conocido como transposicin. En
este proceso, se pueden causar mutaciones y cambio en la cantidad
de ADN del genoma. Estn insertados en uno de los dos anteriores,
de manera que no se replican de forma independiente y pueden
generar varias copias como los plsmidos, adems, codifican genes
que no son esenciales.

Replicacin del DNA semiconservativa


El DNA es una doble hlice con bases complementarias apareadas; la
adenina se aparea especficamente con la timina y la guanina se aparea
especficamente con la citosina. Si la doble hlice del DNA se abre, puede
sintetizarse una nueva cadena complementaria de cada una de las cadenas
parenterales. La replicacin es semiconservativa, es decir, cada una de las
dos dobles hlices resultantes contiene una cadena parenteral y otra de
nueva sntesis; cada nueva molecula tiene una de las hebras de la original y
una nueva complementaria.
La molcula de DNA que es copiada para formar una complementaria se
denomina molde, es decir, un modelo preformado que puede copiarse. La
nueva molcula de DNA no est covalentemente conectada con la vieja
molcula de DNA.
El precursor de cada nucletido en la cadena es un nucletido 5 tri
fosfato, del cual se eliminan los dos fosfatos terminales y el fosfato interno
se une covalentemente a la ribosa de la cadena naciente. La adicion del
nucletido a la cadena naciente requiere la presencia de un grupo hidrxido

libre, el cual se encuentra exclusivamente en el extremo 3 de la molecula:


la replicacin del DNA siempre ocurre desde el extremo 5 al hidroxilo del
extremo 3, unindose el fosfato 5 de cada nucletido nuevo que se
incorpora al hidroxilo 3 del nucletido aadido previamente.
Las enzimas que catalizan la adicion de los nucletidos se denominan DNA
polimerasas, que sintetizan el DNA en la direccin 5 3. Para comenzar
una nueva cadena debe existir un iniciador, un lugar al que la DNA
polimerasa pueda aadir el primer nucletido. En la mayora de los casos, es
un fragmento corto de RNA.
Cuando la doble hlice se abre al comienzo de la replicacin, primero actua
una enzima que polimeriza RNA, lo que da como resultado la sntesis de
este RNA iniciador. Una enzima especfica que polimeriza RNA, llamada
primasa, participa en la sntesis del iniciador, sintetizando un corto
fragmento de RNA. En el extremo creciente de este RNA iniciador, existe un
grupo 3 OH al cual la DNA polimerasa aade el primer
desoxirribonucletido. Por tanto, la subsecuente elongacin de la molcula
se produce como DNA y no como RNA. De esta manera, la nueva molcula
sintetizada tiene la siguiente estructura:

En este proceso interviene varias enzimas:

Helicasa. Se encarga de separar las dos hebras rompiendo los enlaces


que las mantiene unidas.
RNA primasa. Se encarga de sintetizar una secuencia de RNA que es
complementaria a la hebra molde. Es el iniciador del proceso.
DNA polimerasa III. A partir de la secuencia corta que se conoce
inicialmente, esta enzima va aadiendo los nucletidos restantes de
manera que se obtiene toda la secuencia; realiza el proceso de
replicacin sintetizando el DNA.

Horquilla de replicacin
el origen de replicacin consiste en una secuencia especifica de 300 pares
de bases que es reconocida por protenas especficas de la iniciacin. En el
origen de replicacin, la doble hlice del DNA se abre y la iniciacin de la
replicacin se produce en las dos cadenas. A medida que la replicacin
procede, el sitio de replicacin, denominado horquilla de replicacin, parece
moverse a lo largo del DNA.
La replicacin es frecuentemente bidireccional desde el origen de
replicacin y, por tanto, existen dos horquillas de replicacin replicando en
direcciones opuestas. En el DNA circular, la replicacin bidireccional
conduce a la formacin de estructuras caractersticas denominadas

estructuras theta (la formacin de intermediarios replicativos recuerdan a la


letra griega).
Cromosoma E. coli
El cromosoma de E. coli es una molcula de DNA circular y existe un nico
sitio en l, en el que se inicia la sntesis de DNA (origen de replicacin).
Existen dos formas de situar el gen:

Kilopares de bases
Minutos

Plsmidos
Hay varios y pueden aparecer en
varios nmeros de copias:

Monocopia
Bajo numero de copias
Alto numero de copias

Elementos genticos transponibles


Existen dos tipos:

Secuencias de insercin (IS). Se trata de una corta cadena de DNA


que contiene solo los genes que codifican las enzimas necesarias
para su trasposicin y que est limitada a ambos lados por
secuencias idnticas o muy similares de nucletidos que presentan
una orientacin inadvertida y que se conocen como secuencias
inversamente repetidas, las cuales varan segn el elemento IS. Entre
estas secuencias se encuentra un gen que codifica una enzima
denominada transposasa, necesaria para la transposicin y que es
capaz de reconocer con precisin los extremos del elemento IS.

Transposones (Tn). Contienen otros genes adems de los necesarios


para la transposicin, por ejemplo, genes que codifican la resistencia
a los antibiticos o que codifican toxinas. Se componen de una regin
central que contiene los genes extra, flanqueados a ambos lados por
elementos de secuencia idntica o muy similar. Estn limitados por
secuencias cortas inversamente repetidas y la regin codificadora
contiene tanto los genes de transposicin como genes extra.

Una caracterstica que tienen en comn es que en el lugar en el que


se van a insertar dentro del genoma, producen una duplicacin del
DNA del genoma en el que se insertan.

Transposicin. La insercin
de un elemento transponible
genera una duplicacin de
la secuencia diana.

Mutagnesis por transposn. El


transposn se traslada hasta la
mitad del gen 2, el cual queda
inactivado. El gen A del transposn
se expresar en ambas
localizaciones.

Existen dos tipos de transposicin segn su mecanismo:

Conservativa: el transposn sale del sitio original en el que se integr


y se dirige a otro sitio denominado receptor, desapareciendo del sitio

original.
Replicativa: antes de moverse del sitio original al sitio receptor, lleva
acabo una replicacin de manera que se encuentra en ambos sitios.

Intercambio Gentico De Bacterias

Transformacin. La bacteria o la clula puede captar el DNA del medio


exterior e integrarlo dentro de l.
Conjugacin. Intervienen dos bacterias, una es la donadora de genes
y otra es la receptora de genes, adems existe un contacto estrecho
entre ambas.
Transduccin. Una primera bacteria cede genes a una segunda pero
no se requiere contacto estrecho. Existe un intermediario que es un
virus.

Transformacin
El experimento de Griffith fue uno de los primeros experimentos que
demostr que las bacterias eran capaces de transferir informacin gentica
mediante un proceso llamado transformacin. Se investigaban varias cepas
de neumococo (Streptococcus pneumoniae) y se inyectaron en ratones
la cepa S y la cepa R de la bacteria.
La cepa lisa (S) era daina, mientras que la rugosa (R) no lo era. La cepa S
se cubre a si misma con una cpsula de polisacrido que la protege
del sistema inmune del ser que ha sido infectado, resultando la muerte de
este, mientras que la cepa R no contiene esa cpsula protectora.
Cuando se inyecta la cepa S viva, se produce la muerte del ratn. Sin
embargo, cuando se inyecta la cepa S inactivada por calor, no hay secuelas
y el ratn vive. De la misma manera, al inyectar la cepa R, el ratn sigue
viviendo. Sorprendentemente, al combinar cepa R (no letal), con cepa S
inactivada por calor (no letal), el ratn muri. Lo que ocurre es que al
inactivar por calor la cepa S, se eliminaron los lpidos, protenas y
polisacridos pero el estreptococo an conserv su capacidad de replicar su
ADN, de manera que la celula muerta se ha lisado y el ADN de las cepas S
entraron en las cepas R.

La transformacin es un proceso que implica DNA donador en estado libre


en el ambiente. El DNA libre se incorpora a una clula receptora y lleva a
cabo un cambio gentico. Este proceso puede llevarse a cabo de manera
natural o artificial.

Mecanismo de transferencia del DNA por transformacin en una bacteria


Gram positiva:
a. Fijacin del DNA por una protena de unin del DNA ligada a la membrana

b. Paso de una de las dos cadenas a la clula mientras la actividad nucleasa


degrada la otra cadena
c. la cadena sencilla dentro de la clula se une a protenas especficas, y
tiene lugar la recombinacin con regiones homlogas del cromosoma
bacteriano mediada por la protena RecA
d. Clula transformada
Una celula que es capaza de tomar una molecula de DNA y ser
transformada se dice que es competente. Las protenas especificas de la
competencia incluyen una protena de membrana de unin del DNA, una
autolisina de la pared celular y varias nucleasas. Las clulas producen y
excretan un pequeo pptido durante el crecimiento y llegan a ser
competentes a altas concentraciones de ese pptido, a travs de la accin
de una quinasa sensora (ComP) y de un regulador de respuesta (ComA).
Es posible inducir artificialmente la competencia. Un mtodo es tratar la
bacteria a altas concentraciones de iones calcio y luego mantenerse en fro,
de esta forma se convierte en transformable con baja eficacia. De esta
manera, la bacteria toma dNA bicatenario y as la transformacin por DNA
plasmdico es relativamente eficiente. Este mtodo esta siendo suplantado
por electroporacin, una tcnica en la que las clulas se exponene a campos
elctricos pulsados para abrir pequeos poros en sus membranas. Cuando
existen molculas de DNA fuera de las clulas durante un pulso elctrico,
pueden entrar en las clulas a travs de los poros. Este mtodo permite
tanto la entrada como la salida en la celula de pequeas molculas de DNA.
Conjugacin
La transferencia implica un contacto clula clula y la presencia de un
plsmido conjugativo en la clula donadora. Es una funcin codificada por
algunos plsmidos. Es un proceso replicativo y ambas clulas terminan con
copias del plsmido.

Transferencia del plsmido de clula a clula durante la conjugacin.

La
conjugacin
bacteriana
(apareamiento)
es
un
proceso
de
transferencia gentica que requiere contacto clula a clula. Un plsmido
conjugativo usa este mecanismo para transferir una copia de s mismo al
nuevo hospedador. Sin embargo, otros elementos genticos resultan a
veces movilizados durante la conjugacin. Estos pueden ser otros plsmidos
o el cromosoma del hospedador.
El plsmido F puede movilizar el cromosoma del hospedador. Los
mecanismos de transferencia por conjugacin pueden ser diferentes
dependiendo del plsmido concreto pero normalmente se utiliza el utilizado
por este plsmido F.
La conjugacin requiere una clula donadora (macho) que contiene un tipo
particular de plsmido conjugativo y una clula receptora (hembra) que
carece de l. Solo las clulas donadoras tienen pelo sexual. Los plsmidos F
y otros relacionados codifican pelos F. los pelos permiten el apareamiento
especifico entre la celula donadora y la celula receptora.
Mecanismo de la transferencia de DNA durante la conjugacin

Transduccin
La transferencia del DNA donador est mediada por un virus. El DNA se
transfiere de una clula a otra mediante un virus.

La transferencia gentica de genes puede ocurrir de dos maneras:

Transduccin generalizada. El DNA del husped, que puede proceder


de cualquier parte del genoma, pasa a formar parte del DNA de la
partcula madura del virus en lugar del genoma del virus. Cualquier
gen de la bacteria original puede ser transferida a otra.

Transduccin especializada. Ocurre solo en algunos virus


atemperados; el DNA de una regin especfica del cromosoma
bacteriano se integra directamente en el genoma del virus,
generalmente reemplazando algunos de los genes del virus. Solo
determinados genes pasan a una segunda bacteria.

Los bacterifagos son virus que infectan exclusivamente a las bacterias.


Estn constituidos por una cubierta proteica o cpside en cuyo interior est
contenido su material gentico, que puede ser; esto es la cabeza.
Los fagos son ubicuos y pueden ser encontrados en diversas poblaciones de
bacterias, tanto en el suelo como en la flora intestinal de los animales. Uno
de los ambientes ms poblados por fagos y otros virus es el agua de mar.
En los virus se pueden diferenciar dos simetrias: icosadrica (virus esfricos)
y helicoidal (virus alargada). No obstante, en los fagos se incluyen estas dos
simetras: la capside tiene simetra icosadrica y las fibras tienen simetr
helicoidal; se trata de una simetra mixta.
El virus debe inducir a la clula hospedadora a sintetizar todos los
componenetes necesarios para fabricar ms virus. Estos componentes
deben luego ser ensamblados en la estructura apropiada, y los nuevos

viriones deben escapar de la clula para infectar otras clulas. Fases del
proceso:
1. Unin o fijacin (adsorcin) del virus a una clula hospedadora
susceptible.
2. Penetracin (inyeccin) del virin o de su
cido nucleico en la clula.
3. Sntesis del cido nucleico y protena;
tiene lugar desde el comienzo hasta el final
de la infeccin. Al principio, el virus redirige
el metabolismo celular hacia la sntesis de
cido nucleico y protenas vricas. Ms tarde,
se sintetizan protenas estructurales que son
componentes de la cubierta vrica.
4.

Ensamblaje

estructurales
membranas

de
(y

en

las

subunidades

componentes
virus

envueltos)

de
y

empaquetamiento del cido nucleico para


originar nuevas partculas vricas.
5. Liberacin de los viriones maduros de la
clula.

Fijacin del bacterifago a la pared celular:

a. Partcula no fijada
b. Fijacin a la pared por fibras de
la cola interaccionando con el
polisacrido
c. Contacto entre la pared celular
y las espculas de la cola
d.

Contraccin de la vaina de la

cola e inyeccin del DNA

Ciclo de infeccin fgica

El ciclo ltico se denomina as porque la clula infectada muere por rotura al


liberarse las nuevas copias virales. Por otro lado, el ciclo lisognico se
caracteriza por presentar dos fases iguales a las del ciclo ltico, la fase de
anclaje y la fase de penetracin (el virus se pega a la pared de la bacteria o
clula a partir de una serie de mecanismos de anclaje y penetra o introduce
su cido nucleico en el interior de dicha bacteria o clula). En la fase de
eclipse, el cido nucleico viral (ADN bicatenario), se recombina con el ADN
bacteriano y permanece inactivo. Esta forma viral se denomina prfago y la
clula infectada se denomina clula lisognica. Esta clula se puede
mantener as indefinidamente e incluso puede llegar a reproducirse. Un
cambio en el medio celular, va a llevar consigo un cambio celular y con l, la
liberacin del prfago, convirtindose en un virus activo que continuar con
el ciclo infeccioso o ciclo ltico.