1.4.

VITAMINAS
En peces, las funciones primarias de las vitaminas son similares a las cumplidas en
otros animales. En su mayora, las vitaminas del complejo B son requeridas para
metabolizar carbohidratos, protenas y grasas y las liposolubles (A,D,E y K) aportan
configuraciones nicas a precursores de molculas irremplazables en qumica
biolgica. El cido ascrbico o vitamina C es esencial slo para humanos, primates,
cobayos y peces. El inositol y la colina son componentes estructurales de ciertos tejido
especializados.
La Tabla 1.3. contiene una recopilacin personal del rango de los niveles de
suplementacin recomendados por diversos autores. En muchos de los casos, el
requerimiento no ha sido objetivamente determinado y son ms bien derivaciones de
las exigencias determinadas en otras especies. Adems, en todos los casos, ignora el
aporte de vitaminas que hacen los macro-ingredientes del alimento

Tabla 1.3. Niveles de suplementacin vitamnica recomendados

Ingrediente

mg/kg dieta seca

Salmn

Trucha

Carpa

Tiamina

1015

1012

23

Riboflavina

525

2030

710

Piridoxina

1020

1015

510

Pantotenato

4050

4050

3040

Niacina

150200

120150

3050

cido flico

610

610

B12

0.0150.020

Mio-inositol

300400

Colina

600800

Biotina

11.5

11.5

11.5

Vit. C

100150

100150

3050

2,2002,500

1,0002,000

Vit. A (U.I.)
Vit. E (*)
Vit. D

300400

200300
500600

4050

80100
1,000

(*) Requerimiento dependiente de la cantidad y tipo de la grasa insaturada contenida en

el alimento.

En vitamina C, tambin se usa megadosis, lo que es aparentemente un absurdo

debido a su extrema solubilidad, lo que hace que toda cantidad excedentaria se pierda
de inmediato. Lo interesante es que en este caso, lo que se busca de la vitamina es su
accin anti-stress, situacin a que se son muy expuestos los salmones por haber sido
slo recientemente sometidos a cautiverio. Para enfrentar ese riesgo, conviene
mantener literalmente pasando por el cuerpo de los salmones un torrente de vitamina
C, para tener el organismo activado cuando sobrevenga una emergencia.
En vitamina C, tambin se usa megadosis, lo que es aparentemente un absurdo
debido a su extrema solubilidad, lo que hace que toda cantidad excedentaria se pierda
de inmediato. Lo interesante es que en este caso, lo que se busca de la vitamina es su
accin anti-stress, situacin a que se son muy expuestos los salmones por haber sido
slo recientemente sometidos a cautiverio. Para enfrentar ese riesgo, conviene
mantener literalmente pasando por el cuerpo de los salmones un torrente de vitamina
C, para tener el organismo activado cuando sobrevenga una emergencia.

3. ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION
MOLECULAR ULTRAVIOLETAVISIBLE
Por:
Sergio Valladares
Merck Qumica Chilena Soc. Ltda.

3.1. INTRODUCCIN
La espectrofotometra de absorcin molecular ultravioleta visible, comnmente llamada
espectrofotometra UV-VIS, tiene una larga y continua historia en el campo de la
qumica analtica. Esta tcnica est basada en la medicin de absorcin de radiacin
U.V. o visible por determinadas molculas. La radiacin correspondiente a estas
regiones del espectro electromagntico provocan transiciones electrnicas a
longitudes de ondas caractersticas de la estructura molecular de un compuesto.

3.2. CONCEPTOS BSICOS DE ESTRUCTURA MOLECULAR

Toda consideracin de la estructura de las molculas debe comenzar con un estudio
de los enlaces qumicos, las fuerzas que mantienen unidos a los tomos en una
molcula.
Enlace inico:

el enlace inico es un enlace que se forma por la transferencia de uno o

ms electrones de un tomo o grupo de tomos.

Enlace covalente: se forma cuando dos tomos comparten uno o ms pares de electrones. La
mayora de estos enlaces abarcan dos o tres pares de electrones. As dos
tomos forman un enlace covalente simple cuando comparten un par de

electrones; un enlace covalente doble, dos pares de electrones y un triple

enlace tres pares de electrones.
CH3 - CH3; CH2 = CH2; CH = CH

3.3. ORBITALES MOLECULARES Y ENLACE QUMICO

Las distribuciones espaciales de los electrones en las molculas se denominan
orbitales moleculares (O.M.) y de una manera simple se puede suponer que el orbital
molecular es la suma de los orbitales atmicos (O.A.) enlazantes y que el nmero de
orbitales resultante es igual al nmero de orbitales utilizados en la combinacin.
Cuando se combinan dos O.A. resulta un orbital molecular de enlace de baja energa
y un orbital molecular antienlazante de alta energa .
O.A. sigma ():

O.A. pi ():

en las molculas orgnicas est asociado con el enlace simple. Resulta del
solapamiento frontal de dos orbitales atmicos.
O. Molecular enlazante ; O. Molecular * antienlazante.
el doble enlace en las molculas orgnicas contiene dos tipos de orbitales
moleculares, un orbital y un orbital .
Los orbitales moleculares resultan del solapamiento lateral de orbitales
atmicos .
O. Molecular enlazante ; O. Molecular * antienlazante.

Adems de los electrones y , muchas molculas orgnicas contienen electrones

que no forman enlaces. Estos electrones no compartidos se representan en el smbolo
.
Figura 3.1. Transiciones electrnicas entre orbitales , , y .

Tabla 3.1. Caractersticas de transiciones electrnicas entre orbitales , y

Transicin

(nm)

(L mol4cm-1)

Ejemplo

<200

Hidrocarburos saturados

200500

104

Alquenos, alquinos aromticos

160260

102 103

H2O, CH3OH, CH3CL

250600

10 103

Carbonilos, nitro, nitrato, carbonilo.

3.4. RADIACIN ELECTROMAGNTICA (R.E.)

La radiacin electromagntica es un tipo de energa que se transmite por el espacio a
enormes velocidades. Muchas de las propiedades de la R.E. se explican
convenientemente mediante la teora ondulatoria clsica con parmetros como
velocidad, frecuencia, longitud de onda y amplitud. En contraste con otros fenmenos
ondulatorios, como el sonido, la R.E. no requiere un medio de transporte para su
transmisin, por lo tanto se transmite fcilmente en el vaco.
La teora ondulatoria para la R.E. no explica completamente los fenmenos asociados
con la absorcin o la emisin de energia radiante, para estos procesos es necesario
considerar la energa radiante como un flujo de partculas discretas de energa
llamados fotones o cuantos.
Estos dos conceptos se complementan muy bien (dualidad, onda partcula) y se
aplican tanto al flujo de electrones como al de otras partculas elementales.
En la Figura 3.2. se ha representado el vector elctrico en la ordenada, de una onda
electromagntica.
Figura 3.2. Haz de radiacin electromagntica

3.5. PARMETROS ONDULATORIOS

tiempo necesario para que dos mximos sucesivos de una onda pasen por un
punto.
nmero de oscilaciones del campo elctrico por segundo y es igual 1/p (1 ciclo
Frecuencia (v): por segundo = 1 Hertz, Hz). La frecuencia es una magnitud invariable que est
determinada por la fuente de radiacin.
velocidad a la que un frente de onda se desplaza a travs de un medio,
Velocidad de
depende tanto de la densidad del medio como de v. En el vaco la velocidad
propagacin
de la R.E. es independiente de la frecuencia: Cvaco =2.997 1010 cm/s 3.0
(V1):
1010 cm/s
Longitud de
es la distancia lineal entre dos mximo o dos mnimos sucesivos de una onda.
onda ():
Perodo (p):

Unidades de
Angstrm

10-10m

(rayos X; UV en el vaco)

Nanometro nm

10-9m

(UV-VIS)

Micrometro m

10-6m

(IR)

Nmero de onda:
1/ (cm-1).

se define como el nmero de ondas por centmetro y es igual a

3.6. PROPIEDADES CORPUSCULARES DE LA RADIACIN

ELECTROMAGNTICA
Ciertas interacciones de la radiacin con la materia requieren que la R.E. sea tratada
como paquetes de energa llamados fotones o cuantos.

donde h es la constante de Planck, h = 6.63. 10-27 erg.s

3.7. ESPECTRO ELECTROMAGNTICO

El espectro comprende una gran variedad de longitudes de onda o energas. El
siguiente esquema describe cualitativamente las principales regiones utilizadas con
fines analticos.
Figura 3.3. Propiedades espectrales, aplicaciones e interacciones de la radiacin
electromagntica

Energia

kcal/
mol

Num Long
ero itud Frecu
de
de encia
ond ondo

Electro
volts cm-1
eV

9.4 4.1
107
106

cm

3.3 3
1010 10-11

Hz
1021

Tipo de
radiocin

Tipo de
espectroscopio

Tipo de
transicin
cuntica

9.4 4.1
105
104

3.3 3
108
10-9

1019

9.4 4.1
103
102

3.3 3
106
10-7

1017

9.4 4.1
101
100

3.3 3
104
10-5

1015

9.4 4.1
10-1
10-2

3.3 3
102
10-3

1013

9.4 4.1
10-3
10-4

3.3 3
100
10-1

1011

9.4 4.1
10-5
10-6

3.3 3
10-2 101

109

9.4 4.1
10-7
10-8

3.3 3
10-4 103

107

3.8. INTERACCIONES ENTRE LA MATERIA Y LA ENERGA RADIANTE (E.R.)

Cuando la radiacin pasa desde el vaco a la superficie de una porcin de materia, el
vector elctrico de la radiacin interacciona con los tomos y molculas del medio. La
naturaleza de esta interaccin depende de las propiedades de la materia y puede dar
lugar a la transmisin, la absorcin o la dispersin de la radiacin.
FENMENO

EXPLOTACIN ANALTICA

Transmisin
Dispersin
Absorcin

Indice de refraccin
Reflexin. Efecto Tyndal. Nefelometria
Molecular, atmica

3.9. ABSORCIN DE LA RADIACIN

Al pasar R.E. por una capa transparente de un slido, lquido o gas, pueden eliminarse
selectivamente ciertas frecuencias como consecuencia del proceso llamado absorcin.
En este caso la E.R. se transfiere a los tomos o molculas que constituyen la
muestra, como resultado de ello estas partculas pasan del estado de menor energa a
estados de mayor energia o estados excitados.

3.9.1 Absorcin molecular

La absorcin por molculas poliatmicas, es un proceso considerablemente ms
complejo que la absorcin atmica, ya que el nmero de estados de energa est muy
aumentado. Aqu la energia total de una molcula est dada por:
E = Eelectrnica + Evibracional + Erotacional
Para cada estado de energa electrnica de la molcula hay normalmente varios
estados vibratorios posibles y a su vez, para cada uno de stos existen numerosos
estados rotatorios. Como consecuencia el nmero de posibles niveles de energa de
una molcula es mucho mayor que el de una partcula atmica. Es por ello que los
espectros de absorcin aparecen como anchas bandas.

3.9.2 Espectro de absorcin

Tanto las molculas como los tomos tienen un nmero limitado de niveles o estados
energticos cuantizados. Para que se produzca absorcin de radiacin, la energa del
fotn excitante (incidente) debe igualar a la diferencia de energa entre el estado
fundamental y uno de los estados excitados de la especie absorbente. Estas
diferencias de energa (E) son nicas, por lo tanto permiten caracterizar los
constituyentes de una muestra. Para este objeto se obtiene experimentalmente una
representacin grfica de la variacin de la absorbancia en funcin de la longitud de
onda.
Figura 3.4. Espectros de absorcin molecular caractersticos

3.9.3 Medidas cuantitativas de la radiacin - Ley de Beer

La Figura 3.5. esquematiza el fenmeno de absorcin, aqu un haz de radiacin
monocromtico, pasa a travs de una capa de solucin de b cm de espesor y que
contiene una especie molecular absorbente cuya concentracin es c.
Figura 3.5. Fenmeno de absorcin

Como consecuencia de las interacciones entre los fotones y las partculas

absorbentes, la potencia del haz disminuye de Po a P. Por lo tanto la transmitancia T
de la solucin es la fraccin de radiacin incidente transmitida (o no absorbida) por la
solucin segn:

Segn la Ley de Beer, entonces, la absorcin A estar determinada por:

donde:

absortividad molar
b longitud de paso ptico
c concentracin en moles/l

3.9.4 Medicin experimental de la absorcin

Segn vimos en el esquema anterior la absorcin es directamente proporcional a la
longitud (b) de la trayectoria de la radiacin a travs de la solucin y a la concentracin
(c) de la especie absorbente: A = a . b . c (con a: cte. de proporcionalidad).
Si c se expresa en moles por litro y b en cm, entonces la absortividad se denomina
absortividad molar ():A=.b.c.
La Ley de Beer se cumple igualmente en soluciones que contienen ms de una
especie absorbente, siempre que no haya interaccin entre dichas especies. Por tanto,
para un sistema multicomponente la relacin ser:
AT = A1+A2++An
AT = 1bc1+2bc2++nbcn

3.9.5 Limitaciones a la aplicabilidad de la Ley de Beer

Se observan frecuentemente desviaciones de la proporcionalidad entre A y c (cuando
b es constante). Algunas de estas desviaciones son importantes y representan
limitaciones reales de la ley. Estas son de tipo:

qumico;
instrumental.

La Ley de Beer es slo aplicable a soluciones en las que las interacciones

dependientes de la concentracin de las molculas o iones son mnimas.
Concentraciones alts alteran las absortividades molares y por lo tanto conducen a
una relacin no lineal entre A y c.

a) Desviaciones qumicas
Cuando las especies absorbentes experimentan asociacin, disociacin o reaccin
con el solvente originan productos con caractersticas absorbentes distintas de las del
analito.
Un ejemplo tpico se observa con soluciones de dicromato potsico no amortiguadas,
en las que existen los siguientes equilibrios:

Cr2O7+H2O 2HCrO4 2H+ + 2CrO4-2

A casi todas las longitudes de onda los valores de del ion dicromato y las dos
especies de cromatos son muy diferentes.

b) Desviaciones instrumentales
Radiacin
policromtica:
Radiacin
dispersa:

el requisito bsico para el cumplimiento de la Ley de Beer es que la radiacin

incidente sea monocromtica. Dependiendo de las caractersticas
tecnolgicas del sistema ptico del instrumento ser ms o menos accesible
poder utilizar en forma prctica una radiacin una radiacin limitada a una
sola longitud de onda.
la radiacin dispersa suele diferir considerablemente en longitud de onda con
respecto a la radiacin principal; adems puede alcanzar el detector sin
haber pasado a travs de la muestra.

3.10. APLICACIONES DE LAS MEDICIONES DE ABSORCIN DE

RADIACIN ULTRAVIOLETA Y VISIBLE
3.10.1 Especies absorbentes
La absorcin de radiacin ultravioleta y visible por una especie M, puede considerarse
como un proceso en dos etapas, la primera de las cuales corresponde a la excitacin
segn:
M+h.vM*
donde M* representa la partcula atmica o molecular en su estado electrnico
excitado que se produce como resultado de la absorcin del fotn h v. Este estado
excitado tiene un breve tiempo de existencia (10-8 a 10-9 s) y desaparece a travs de
travs de algunos de los diferentes procesos de relajacin (calor).
M*M+calor
La absorcin de la radiacin ultravioleta o visible, se produce por lo general como
consecuencia de la excitacin de los electrones de enlace; debido a esto, la longitud
de onda de los picos de absorcin se puede correlacionar con los tipos de enlace
existentes en la especie que se estudia.

3.10.2 Explotacin analtica

Identificacin proximal de los grupos funcionales en una molcula.

Mtodo bastante selectivo para el anlisis cuantitativo de compuestos cuyos
enlaces producen absorcin.

Conviene considerar tres tipos de transiciones electrnicas que permiten explicar

porqu algunas especies pueden absorber energa radiante. Estos tres tipos son:

Los electrones , y .
Los electrones d y f.

Los electrones de transferencia de carga.

a) Especies qumicas absorbentes que contienen electrones ,

y
La absorcin de radiacin ultravioleta y visible (200800 nm) se restringe a un nmero
limitado de grupos funcionales, llamados cromforos, que contienen electrones de
valencia con energas de excitacin relativamente bajos.
Tabla 3.2. Caracteristicas de absorcin de algunos cromforos comunes
Cromforo

Ejemplo

Disolvente mx (nm)

mx

Tipo de transicin

Alqueno

C6H13CH = CH2

n-Heptano

177

13,000 *

Alquino

C5H11C=CCH3

n-Hexano

178
196
225

10,000 *
2,000 160
-

n-Heptano

186
280

1,000
16

*
*

n-Hexano

180

larga

*
*

Etanol

204

41

Agua

214

60

Carbonilo

Carboxilo

Amido

Azo

CH3N=NCH3

Etanol

339

Nitro

CH3NO2

Isooctano

280

22

Nitroso

C4H9NO

ter etlico

300
665

100
20

Nitrato

C2H5ONO2

Dioxano

270

12

b) Absorcin en la que participah los electrones d y f

Iones de los metales de transicin

Serie de los lantnidos y actnidos

Los iones y complejos de los 18 elementos de las dos primeras series de transicin
son coloreados en uno de sus estados de oxidacin o en todos ellos. Dependiendo las
caractersticas colorimtricas del complejo; del tipo de ligando (agente complejante) y
del estado de oxidacin.
Tabla 3.3. Efecto de los ligantes sobre los mximos de absorcin asociados con
transiciones d-d
mx (nm) para los ligantes indicados
Aumento de fuerza del campo de unin
6CI

Ion central
Cr (III)

736

6H2O

3en(1)

6NH3

6CN-

573

462

456

380

Co (III)

538

435

428

294

Co (II)

1345

980

909

Ni (II)

1370

1279

925

863

Cu (II)

794

663

610

(1) en = etilendiamina, un ligante bidentado.

c) Absorcin por transferencia de carga

Para fines analticos es el tipo ms importante de absorcin por especies inorgnicas,
debido a que las absortividades molares de los picos son muy grandes ( < 105). Esta
es una particular caracterstica de los complejos inorgnicos denominados tambin,
complejos de transferencia de carga.
Ejemplos:

Hierro III- ion tiocianato

Hierro II - (o-Fenantrolina)

Ion triyoduro I3-

3.11. INSTRUMENTACIN
Los instrumentos que miden la absorcin selectiva de la radiacin en las soluciones se
conocen con los nombres de: colormetros, fotmetros y espectrofotmetros. Hoy en
da es pertinente diferenciar los instrumentos segn su sistema de deteccin:
detectores simples (convencional) o detectores multicanal (arreglo de diodo).
Algunos de los diseos bsicos de los instrumentos usados en la medicin de la
absorcin de Energa Radiante se ilustra en el siguiente esquema:

Figura 3.6. Diagrama de bloques de diferentes tipos de instrumentos de medicin de la

absorcin molecular

3.11.1 Breve descripcin de los principales componentes de

instrumentos convencionales

a) Fuente de energa radiante

Debe producir un haz de radiacin cuya potencia sea suficiente para facilitar la
deteccin y medida; debe ser estable. Ej.:

Lmpara de hidrgeno

Lmpara de deuterio.

Ambas lmparas producen un espectro continuo entre 160375 nm y deben

emplearse ventanas de cuarzo en los tubos: ya que el vidrio absorbe fuertemente en
esta regin del espectro electromagntico.

Lmpara de filamento de tungsteno

Es la fuente ms comn para la zona del visible e infrarrojo. Esta lmpara es til para
la regin entre 320 2,500 nm.

b) Sistema selector de la longitud de onda de trabajo

(i) Fotmetro (colormetro): este tipo de instrumentos utiliza filtros que permiten
obtener bandas de radiacin que abarcan un intervalo limitado de longitudes de onda
(con un fotmetro no es posible obtener una banda de absorcin variable en forma
continua).
Regin (nm

Color filtro

Color solucin

380435

Azul

Amarillo

480490

Verde azuloso

Rojo

500560

Verde amarillento

Violeta

580595

Anaranjado

Azul verdoso

595650

Rojo

Verde azuloso

(ii) Espectrofotmetro: utilizan un complejo sistema ptico de seleccin de longitud de

onda (sistema monocromador). el cual consta de variados componentes tales como:

prisma o rejilla;
lentes;
espejos;
ranuras de entrada y salida.

Estos instrumentos pueden seleccionar longitud de onda en forma continua y en

algunos casos con precisin de dcimas de nm. Por lo tanto, es posible obtener en
forma continua el espectro de absorcin de una molcula.

c) Recipientes para la muestra

La mayor parte de las aplicaciones espectrofotomtricas utiliza las muestras en
solucin lquida, por esta razn se requieren recipientes para colocar la muestra
(celdas). La celda debe transmitir el 100% de la energa radiante en la zona espectral
de trabajo.
Regin U.V.
(2002,000
Celdas de cuarzo
=
nm)
Regin VIS =
(3502,000
Celdas de vidrio
nm)
Algn tipo de
plstico.

La longitud ms comn para el trabajo en las regiones UV-VIS es 1 cm (otras son: 2, 5

y 10 cm).

d) Deteccin de la radiacin
Dispositivo electrnico llamado transductor que convierten la energa radiante en una
seal elctrica.
Requisitos:

 Responder a la E.R. en un amplio intervalo de .

Respuesta lineal.
Detectores de fotones:
Celdas fotovoltaicas.
Fototubos.

Poseer elevada sensibilidad.

Tiempo de respuesta rpido, etc
Tubos fotomultiplicadores.
Diodo de silicio.

e) Procesadores de seales e instrumento de lectura

Dispositivo electrnico que amplifica la seal elctrica generada en un detector. En
este sentido existe una amplia gama de alternativas, desde galvanmetros hasta
avanzadas computadoras.
Figura 3.7. Componentes y materiales de los instrumentos espectroscpicos

3.11.2 Esquema general de los sistemas pticos de

espectrofotmetros
Figura 3.8. Sistema con arreglo de diodo mono haz

Figura 3.9. Sistema convencional doble haz

3.12. ANLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO

3.12.1 Tcnicas cualitativas
Las aplicaciones cualitativas no ofrecen una herramienta muy til, ya que con estos
espectros existe un nmero relativamente escaso de mximos y mnimos. Sin
embargo el anlisis cualitativo es una excelente herramienta cuando va precedido de
algn mtodo de separacin.

3.12.2 Anlisis cuantitativo

a) Aplicacin:
Compuestos
orgnicos:

Aldehdos y cetonas

Aromticos
Drogas
Vitaminas, etc
Compuestos
(especies
inorgnicos:
absorbentes)
Compuestos no absorbentes
Derivatizacin
(Por ej.: formacin de complejos
coloreados).

b) Principales caractersticas:

Alta sensibilidad:
Absortividades molares 105

Intervalos de concentracin 10-4 a 10-6M.

Selectividad: seleccin de la longitud de onda en la que el nico componente

absorbente de una muestra sea la sustancia que se determina.

Precisin y exactitud: dependiendo del nivel de concentracin es posible lograr

valores menores que 1% de error relativo.

3.12.3 Procedimiento en el anlisis cuantitativo

a) Recopilacin de antecedentes:

Referencias bibliogrficas.
Mtodos normalizados.

b) Preparacin y/o tratamiento de la muestra:

Separacin del compuesto de inters (precipitacin, extraccin por solvente,

cromatografa, etc).
Derivatizacin si es necesaria.

c) Seleccin de la longitud de onda de trabajo ( mx.):

Obtencin del espectro de absorcin:

En el espectro de mono haz, se va alternando la medida de la absorbancia

entre el disolvente (blanco) y la solucin que contiene la muestra en la medida
que se va variando gradualmente la longitud de onda.

En el espectro de doble haz, la operacin descrita anteriormente es posible

hacerla automtica y simultneamente.

Para ello los instrumentos disponen de sistemas con microprocesador que permiten
una fcil y expedita obtencin de la informacin. Mediante estos instrumentos es
posible hacer barrido de longitudes de ondas en determinadas zonas del espectro y a
diferentes velocidades.
La excepcin a esto ltimo la proporcionan los espectrofotmetros de Arreglo de
Diodos ya que dada su configuracin es posible obtener el espectro de absorcin en
un amplio rango de longitudes de onda (200800 nm) en fraccin de segundos.
Una vez establecida la longitud de mx. (mxima sensibilidad) se prepara la curva de
calibracin.

3.13. CURVA DE CALIBRACIN

Set de soluciones de concentraciones crecientes del analito, en un rango tal que se
cumple la Ley de Beer.
No es conveniente suponer que para una determinada concentracin se cumple la
Ley de Beer y por ello utilizar un patrn nico como referencia .
Una vez obtenidos los distintos puntos (o niveles de calibracin) se debe determinar la
ecuacin de la recta mediante anlisis de regresin lineal (o ajuste de la curva por
mnimos cuadrados). Los instrumentos automatizados traen estas funciones ya
incorporadas en su sistema de clculo, lo cual permite obtener el resultado final
directamente.
La ecuacin que relaciona la absorbancia con la concentracin ms comn es del tipo:
Y = Ax + B

donde:

A = pendiente
()
B = intercepto

r es un parmetro estadstico que da cuenta de la calidad de la curva de calibracin y

se denomina coeficiente de regresin. En anlisis cuantitativo se considera buena una
curva cuando su valor de r es mayor que 0.99.

3.14. OTRAS

APLICACIONES

3.14.1 Anlisis de mezclas

Definimos anteriormente que en una mezcla de sustancias absorbentes, a una misma
longitud de onda las absorbancias son aditivas.
Considerando esto, es posible determinar componentes en una mezcla determinando
las respectivas absorbancias a diferentes longitudes de onda.
As tendremos:
A1 = Cxx + Cyy a 1
A2 = Cxx + Cyy a 2

A partir de estndares puros de las especies X e Y se obtienen, por separado los

respectivos valores de las absortividades molares de X e Y. Luego quedan como

incgnitas las concentraciones de X e Y a ambas longitudes de onda y se resuelve el

sistema de ecuaciones.
Figura 3.10. Espectros de absorcin mezcla componentes

3.14.2 Titulaciones
Las titulaciones espectrofotomtricas son otras aplicacines mediante las cuales es
posible determinar constantes termodinmicas tales como de formacin de complejos
metlicos, etc

ANALISIS CLUSTER Y NIVELES DE FOSFORO TOTAL

EN ALGUNAS MIELES TROPICALES COLOMBIANAS
Salamanca G.G.* Serra B. J.A.**; Quijano, M.A.***
*Departamento de Qumica Universidad del Tolima
A.A 546 Ibagu Tolima Colombia.
**Departamento de Ciencia y Tecnologa de los Alimentos
Universidad Politcnica de Valencia Espaa
Camino de Vera S/N46022.
***Centro Experimental Vitivincola Puntalarga Boyac Colombia.

Introduccin
El fsforo es un componente normal en las mieles, se encuentra principalmente
bajo la forma de steres orgnicos y en posiblemente en forma de fitatos. El fsforo
participa en los procesos metablicos y es el responsable de la actividad de algunas
enzimas, convirtindose en el elemento limitante de la actividad biolgica.
Los nectrios florales son la fuente de los nutrientes generalmente presentan
contenidos de fosforo provenientes de la actividad bioquimica del sistema vascular,
haciendose variable su contenido conforme a la condicion climatica predominante
y el tipo de flora asociada. Como fuente de nectar para la miel es necesario indicar
que los nectarios estan . en la base de las flores y son elaborados por clulas
especializadas. Con alguna frecuencia estos nectrios se presentan en el tlamo, en
los ptalos, en los spalos o en los estambres. Los nectrios extraflorales se
presentan por lo general en las estpulas o en los peciolos.
La produccin de nctar no es continua, varia conforme a las condiciones florales
de cada planta, con las condiciones climticas, la intensidad del brillo solar y en
general con las condiciones pedoclimaticas de una zona en particular. El nctar se
ofrece a las abejas que liban las flores bajo formas distintas en algunos casos se
hace de forma directa tal como sucede en algunas especies de Umbellifereae, en
otros casos se hace bajo condiciones de intensa actividad solar como sucede en el
caso de algunas Cruciferaceae, en otros casos el nctar permanece disponible a las
abejas pero se mantiene oculto por cunto sus recipientes permanecen al interior
de las plantas.
Desde el punto de vista de los requerimientos, las necesidades de fsforo como
fosfato oscilan entre 0.8-1.2 Kg/da. La relacin entre Ca/P en los alimentos es del
orden de 1. Los compuestos orgnicos de fsforo inician su metabolismo con la
accin de las fosfatasas, por lo que la absorcin procede va fosfato inorgnico.
Numerosos estudios se han realizado en procura de establecer los niveles de
minerales mediante espectrofotometria (Chung. 1992, Li-1995; Salamanca, 1989).).
Y en general de la composicion de los alimentos, as se han adelantado por ejemplo
cuantificaciones en vinos ( Gaines1990). La determinacin consiste en establecer el
exceso de hidrxido de sodio remanente luego de la disolucin de un precipitado de
molibdofosfato, mientras que en otros la determinacin procede luego de la
reaccin entre el fsforo y una solucin de vanadomolibdato, como tambin la
reaccin resultante entre el azul de heteropoliacio mediante reduccin con
clorhidrato de 2-4 diaminofenol y metabisulfito en unos casos, o con sulfato de
hidrazina en otros.(Vargas 1994).
El cido ascorbico igualmente ha sido utilizado como agente de reduccin del
fosfomolibato. El mtodo de cido vanadomolibdofosfrico es til para las
muestras de alimentos que contienen hasta 200 g P/l. Los procedimientos de
reduccin con cido ascorbico son sensibles solamente hasta 10 g P/l pero se ven
influenciados por la presencia de algunos cationes metlicos. (Salamanca,1991, Ib.
1995).

En este trabajo se presenta la metodologa necesaria para la determinacin

cuantitativa de los niveles de fsforo Total en mieles procesadas y artesanales bajo
condiciones de mayor sensibilidad y reproducibilidad analtica.

2. Seccin Experimental
En el desarrollo de este trabajo se adelantaron tres fases bien diferenciadas. Una
tendiente a la implementacin del mtodo y la optimizacin de las condiciones de
trabajo, como del control de calidad de las determinaciones, la reproducibilidad,
los factores de recuperacin y el rango lineal de respuesta, como el volumen de
muestra mnimo en las determinaciones.

2.1 Reactivos y soluciones

Se us cido ntrico 2N (140 ml en 1000 ml), molibdato de amonio
(NH4Mo7O24.7H2O), Etanol, glicerina y cloruro de estaoso.
Las soluciones necesarias para el desarrollo del color se prepararon de la siguiente
manera: 12.5 gramos de molibdato de amonio (NH4Mo7O24.7H2O) en 87.5 ml de
agua destilada, a los que se les adicion cuidadosamente 140 ml de cido sulfrico
y agua destilada hasta completar un volumen final de 500 ml
1.25 g de cloruro estaoso SnCl2. H20 en 50 ml de glicerol necesaria para la
reduccin del cido molibdofosfrico hasta azul de molibdeno de color azul. La
mezcla resultante se homogeneiz durante 15 minutos en la unidad de ultrasonido
Selecta (instrumentos Cientficos S.A Valencia).

2.2. Procedimiento
Las soluciones empleadas en este trabajo se prepararon con agua destilada de
conductividad 3.27 S/cm. Se prepar una solucin madre de fsforo de 400 g/ml
hasta un volumen final de 100 ml, por dilacin apropiada se prepar una solucin
hija de 100 g/ml hasta un volumen final de 100 ml, que se utiliz para la
preparacin de la curva de calibracin en el rango 50-400 g/l.
Las muestras de miel se homogeneizaron y luego se pesaron con exactitud 3 g de
muestra que se incineracin a 550 C hasta cenizas blancas, con incrementos
mesurados en la rampa de temperatura desde 120 a 550 C a intervalos de 20. A
todas las muestras se les adicion 5 ml de etanol para evitar la homogeneizar el
proceso de combustin en los primeros 220 C. Los slidos resultantes se pesaron y
disolvieron con solucin cido ntrico 2N, posteriormente se tomaron 5 ml de
muestra y complet a 50 ml.
Se adicion para el desarrollo del color 4 ml de solucin cida de molibdato de
amonio y 0,25 ml de solucin de cloruro estaoso.

2.3 Equipos
Los estndares de fsforo y soluciones, se determinaron usando la unidad
UV/Visible CECIL Serie1000(CECIL INSTRUMENTS CAMBRIGE). Usando
celdas de vidrio de 10mm de paso espectral a 690 nm. Las digestiones se realizaron
en una mufla tipo P Selecta (0-1200 C), las operaciones de pesadas se hicieron
en una balanza tipo Sartorius I-1800 (110g 0.1 mg)

3. Resultados y Discusin
El fsforo reacciona con el cido molbdico para formar azul deheteropoliacido
susceptible que puede determinarse espectrofotometricamente a 690 nm. A partir
de la curva tpica de calibracin observ un coeficiente de correlacin de 0.9992,
que explica el 99,84 % de las concentraciones seleccionadas en el rango lineal de
respuesta. El error estndar en la determinacin de la pendiente de la curva de
calibracin es del orden de1.83x10-5 y con P-Valor de 0.612 para la curva P < 0.01.
para la anova respectivamente.

3.1 Control de Calidad

La sensibilidad de la determinacin es
del orden de 4.36 g/l. Una solucin de
50 g/l, reproduce una absorbancia de
(503) x 10-3 los coeficientes de
Variacin en nueve determinaciones
sucesivas correspondieron con ( C.V.=
6.4 ), referidas a en un limite de
confianza del 3.4 x10-3 para una
concentracin de 50 g/l. La figura
1ilustra el comportamiento de una
curva de calibracin tpica para
fsforo en el rango 50-400 g/l.
Figura 1. Curva tpica de Calibracin
para la determinacin de fsforo.
Las condiciones analticas del sistema evaluado permite adelantar determinaciones
mediante adicin de estndar. La figura 2 ilustra la determinacin de fsforo en
una alcuota de 2 ml y sobre un volumen de 50 ml a las cuales se les adicion
solucin estndar de Fsforo en el rango 50-400 g/l. El P-Valor en la pendiente de

la curva por el mtodo de adicin de estndar fue 0.0183 y 0.0082 para el caso de la
pendiente. El coeficiente de correlacin fue 0.9999, para un r2 de 98.36
Tabla 1. Anlisis de Estndares y factores de Recuperacin en la determinacin
espectrofotomtrica de Fsforo

Muestra
n Recuperacin
g/l

D.S

Coeficientes de Variacin

50

101.72

0.003

2.40

100

98.96

0.002

2.65

200

98.75

0.002

2.27

400

100.5

0.002

1.82

n. = Nmero de muestras. D.S. Desviacin Estndar.

Figura 2. Relacin general para un

sistema analtico en la determinacin de
fsforo usando la tcnica de adicin de
estndar.

A partir de los resultados de la tabla 1 se deduce que el mtodo propuesto es

sensible y reproducible, con bajos coeficientes de variacion entre duplicados y con
la opcin de trabajar bajo condiciones de adicin de estndar cuando sea posible y
solamente hasta rangos inferiores a 400 g/l de fsforo.
Las determinaciones espectrofotomtricas finales sobre un peso de miel calcinada a
550 C puede lograrse conforme a la relacin:
P-(mg/Kg)baseHmeda=(1244.93*Log(100/%T)-2.3796* 0.1*FD)/Wm.

Donde Wm Corresponde al peso de la miel en Kg, FD al factor de dilucin final de

la alicuota seleccionada para el anlisis y hasta un volumen neto de 50 ml. %T es la
transmitancia de la disolucin de trabajo y 0.1 el Volumen final de los slidos fijos
disueltos en cido ntrico 2N.

3.3 Determinaciones Analticas

La determinacin del contenido de fsforo en cada una de las muestras de miel
Colombiana estn en funcin del origen geogrfico, factor que incide en la calidad
y composicin final del producto. Los valores promedio en las de la zona de Boyac
son ligeramente superiores a los observados en muestras de la zona de
Cundinamarca y Tolima. Este comportamiento obedece principalmente al tipo de
suelo. Las caractersticas edficas de los suelos de la zona de Tundama, Sugamuxi y
suelos de Boyac en general y con relacin a los de la sabana de Santaf de Bogot
y la zona montaosa del departamento del Tolima al Norte y sur respectivamente,
son ligeramente mayores. El rango en cada caso muestra la naturaleza y las
condiciones de variacin en la composicin de las mieles, lo que presupone fuentes
florales diferentes.
Tabla 2. Parmetros estadsticos sobre algunos anlisis de fsforo en mieles
Colombianas.

Parmetro
Mximo
Mnimo
Promedio
D.S.
Curtosis
C. Asimetra

Boyac Tolima Cundinamarca

113.2

139.1

80.7

20.2

4.95

6.1

66.5

57.3

42.9

23.36

41.47

25.10

0.279

-0.595

0.700

0.064

0.593

0.071

En la tabla 2 se muestran los parmetros estadsticos asociados a las

determinaciones correspondientes sobre la miel de Boyac, Cundinamarca y
Tolima, mientras que la tabla 3 presenta los promedios as como los limites
superior e inferior respecto de los promedios observados en cada grupo. . El error
estndar se determin a partir de la variabilidad de los promedios para cada
grupo. Los intervalos se estimaron conforme al el criterio de mnimas diferencias
significativas de Fisher.al 95%.
Tabla 3. Valores medios para las determinaciones de Fsforo en Algunas mieles
Tropicales Colombianas

Zona

Boyac
Tolima

15

66.52

9.1

53.6

79.4

27

57,3

6.7

47.6

66.9

42.9

14.3

22.4

63.3

48

58.4

Cundinamarca
Total

Promedio Error Estndar Limite Inferior Limite Superior

Desde el punto de vista del anlisis multivaridado y la afinidad entre grupos, el

anlisis Cluster permite establecer diferencias y semejanzas entre los niveles de
fsforo en mieles de diferentes procedencias, conforme a la condiciones
pedoclimticas, geogrfica y apibotanica de las zonas de origen.
La figura 3 muestra el dendograma resultante de las semejanzas y diferencias en
los niveles de fsforo de las mieles analizadas en el trabajo En su construccin se
consider el criterio euclidiano, promedio entre entre grupos, con estandarizacin
de los observables.
El resultado final permite agrupar los niveles de fsforo en cinco Cluster que
coinciden con las caractersticas que se muestran en la tabla 4.
Tabla 4 Caractersticas de los grupos en funcin de los parmetros estadsticos

Cluster n Porcentaje Mnimo Mximo Promedio D.E.

1

17

35.4

61.5

97.2

77.4

9.9

14

29.2

39.2

56.5

47.2

5.4

2.1

12

25

4.9

29.3

15.2

8.6

8.3

126.9

139.1

139.1

5.0

Conclusiones
Se ha implementado un mtodo analtico de con sensibilidad equivalente a 4.36
g/l. Una solucin de 50 g/l, reproduce una absorbancia de (503) x 10-3 3 g P/Kg,

que permite estimar el contenido de fsforo en miel, que admite caracterizaciones

bajo el criterio de las adiciones continuas.
Conforme a la metodologa de anlisis discriminante tipo Cluster, se clasificaron
cinco grupos diferentes en virtud a los niveles de fsforo observados y que
permiten explicar el origen geogrfico botnico conforme a la similitud de la flora
y las condiciones climticas de tres zonas diferentes, la meseta cundiboyacense y la
zona montaosa del Tolima y su rea de influencia.
La consideracin del contenido de slidos totales y el contenido de minerales no
incluidos en este trabajo, permitira incrementar la separacin geogrfico y
botnica de las mieles Tropicales Colombianas.

Figura 3. Cluster resultante del anlisis de fsforo en algunas muestras de miel

tropical Colombiana.

Agradecimientos
Los autores expresan su agradecimiento a la agencia Espaola de Cooperacin y a
Corporacin Universidad Empresa para la Cooperacin e Innovacin Tecnolgica
COINNOVAR, por facilitar la beca soporte al profesor G.Salamanca, de la
Universidad del Tolima.