INTRODUCCION

El trmino cintica enzimtica implica el estudio de la velocidad de una reaccin

catalizada por una enzima y los efectos que pueden tener factores como los
inhibidores. Uno de los principales estudios que se realizan en una enzima es medir
el efecto en la velocidad de la reaccin cuando se modifican las concentraciones del
sustrato y se mantienen constantes la concentracin de enzima, el pH, la fuerza
inica del medio, la temperatura, entre otros.
Se evala la influencia de estos factores en la reaccin catalizada por enzimas con la
finalidad de determinar los intermediarios en una reaccin y el papel que juegan en la
reaccin enzimtica, es decir, para predecir mecanismos de reaccin. Es esencial
entender estos mecanismos para desarrollar nuevas herramientas moleculares, por
ejemplo, para combatir enfermedades en las que se conoce a la enzima que la
produce. Tambin es usual medir la actividad enzimtica con diferentes sustratos
para entender su especificidad o bien, medir la actividad de la enzima de diferentes
tejidos u organismos para entender cmo las diferencias en actividad estn
relacionadas con la funcin y/o la fisiologa del organismo del que proceden.

OBJETIVOS

Comprobar la reaccin sobre el perxido de hidrgeno por accin de la

enzima catalasa, presente en tejidos animales y vegetales determinando los
productos de reaccin.

Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimtica, como la

temperatura, el pH, la concentracin del sustrato y de la enzima y la presencia
de inhibidores.

Confrontar los conocimientos tericos adquiridos en clases con las actividades

experimentales en el laboratorio.

MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensayo

Vasos de precipitado de 250 ml

Estufa

Agitadores

Papel tornasol o indicador de pH

cido clorhdrico 0.1 N

Hidrxido de sodio 0.1 N

Mortero y mango

Hgado de res

Papa cruda

Cuchilla

Solucin de perxido de hidrgeno

Cebada en remojo

Hielo

Almidn

MARCO TEORICO
Los enzimas son biomolculas especializadas en la catlisis de las reacciones
qumicas que tienen lugar en la clula. Son muy eficaces como catalizadores ya que
son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones qumicas mucho ms que
cualquier catalizador artificial conocido, y adems son altamente especficos ya que
cada uno de ellos induce la transformacin de un slo tipo de sustancia y no de otras
que se puedan encontrar en el medio de reaccin.
FACTORES QUE AFECTAN A LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Diferentes factores ambientales pueden afectar a la actividad enzimtica.
Destacaremos dos: el pH y la temperatura.
EFECTO DEL pH: El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica, debido
a que el pH influye en la ionizacin de los grupos funcionales de los aminocidos que
forman la protena enzimtica. Cada enzima realiza su accin dentro de un
determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH ptimo donde la
actividad enzimtica ser mxima. Por debajo del pH mnimo o por encima del pH
mximo el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la mayora de las enzimas
el pH ptimo est prximo a la neutralidad, aunque hay excepciones.
La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el cual su actividad es
mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente.
Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que
otras protenas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH vara ms all de
unos lmites estrechos. De ah la conocida importancia biolgica de los sistemas
tampn.

En la mayor parte de los casos el pH ptimo est prximo a la neutralidad, en

consonancia con el pH intracelular, pero existen enzimas con pH ptimo muy diverso
segn sea el pH del medio en el que habitualmente actan (los enzimas proteolticos
del jugo gstrico tienen pHs ptimos prximos a 2 ya que este es el pH de dicho
jugo). Por ltimo existen algunos enzimas a los que el pH no afecta en absoluto.
EFECTO DE LA TEMPERATURA: Al igual que ocurre con la mayora de las
reacciones qumicas, la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se
incrementa con la temperatura. La variacin de la actividad enzimtica con la
temperatura es diferente de unos enzimas a otros en funcin de la barrera de energa
de activacin de la reaccin catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en
otras reacciones qumicas, en las reacciones catalizadas por enzimas se produce un
brusco descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crtica. Este
efecto no es ms que un reflejo de la desnaturalizacin trmica del enzima cuando
se alcanza dicha temperatura.
La Temperatura influye en la actividad enzimtica. En general por cada 10C que
aumente la temperatura la velocidad de la reaccin aumenta de 2 a 4 veces. Esta
regla se cumple hasta que la temperatura alcanza un valor mximo (T ptima)
donde la actividad es mxima. Esto se debe a que al aumentar la T aumenta el
movimiento de las molculas y, por tanto aumenta la probabilidad de encuentro entre
el S y el E.
Si la T aumenta por encima de la T ptima, disminuye e incluso cesa la actividad
enzimtica debido a que la enzima se desnaturaliza. Cada enzima posee una T
ptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37C. Los animales
poiquilotermos debido a que carecen de mecanismos para regular la T corporal, se
ven obligados a hibernar en la estacin fra pues la actividad de sus enzimas debido
a las bajas temperaturas es muy baja.

INHIBIDORES: Son compuestos qumicos que se unen al enzima, en distintos

puntos del mismo y disminuyen o incluso impiden su actividad. Estos compuestos
pueden ser de distintos tipos: iones, molculas orgnicas y a veces el producto final
de la reaccin. A la accin que realizan se la denomina inhibicin. La inhibicin puede
ser:
Inhibicin irreversible: Cuando el inhibidor impide permanentemente la actividad
enzimtica, bien porque se une de forma permanente con grupos funcionales
importantes del centro activo o bien porque altera su estructura. A estos inhibidores
se les denomina venenos y a la inhibicin que realizan se la denomina
envenenamiento del enzima. Ej. La penicilina que inhibe las enzimas que sintetizan
la pared bacteriana. El in cianuro acta sobre la citocromo oxidasa (enzima
respiratorio).
Inhibicin reversible: El inhibidor se une al enzima de forma temporal mediante
enlaces dbiles e impide el normal funcionamiento del mism, pero no la inutiliza
permanentemente.
Puede ser de dos tipos:
Competitiva: El inhibidor es similar al sustrato y se puede unir al centro activo del
enzima impidiendo que lo haga el sustrato. Es decir ambos, inhibidor y sustrato
compiten por unirse al centro activo del enzima. La accin suele anularse
aumentando la concentracin del sustrato
No competitiva: El inhibidor no compite con el sustrato, puede actuar de 2 formas:
-Sobre el enzima, unindose a el en un lugar diferente al centro activo y modificando
su estructura lo que dificulta que el enzima se pueda unir con el sustrato.
-Sobre el complejo E-S unindose a l y dificultando su desintegracin y por lo tanto
la formacin de los productos.

PROCEDIMIENTO
1.
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Tubo 1: 5 ml de Extracto de
papa e hgado + 3 ml de
Perxido de hidrgeno al 3%
Accin de la temperatura en la
catalasa de la papa e hgado:
Macerar un trozo de papa en 15
ml de agua y recoger el extracto.

Tubo 2: 5 ml de Extracto de
papa e hgado +
hielo=
temperatura de 5c+ 3 ml de
Perxido de hidrgeno al 3%
Tubo 3: 5 ml de Extracto de
papa e hgado + Ebullir= 84c +
3 ml de Perxido de hidrgeno
al 3%

Repetir el procedimiento anterior

reemplazando la papa por
hgado.
Realizar
las
respectivas y
resultados.

anotaciones
analizar los

2.
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Influencia del pH en la accin

de la catalasa de la papa:
Macerar un trozo de papa en 15
ml de agua y recoger el extracto.

Tubo 1: 5 ml de Extracto de
papa + 2 ml de cido clorhdrico
al 0.1N + 3 ml de Perxido de
hidrgeno al 3%
Tubo 2: 5 ml de Extracto de
papa + 2 ml de solucin de
hidrxido de sodio + 3 ml de
Perxido de hidrgeno al 3%
Tubo 3: 5 ml de Extracto de
papa + 3 ml de Perxido de
hidrgeno al 3%

Realizar
las
anotaciones
respectivas a la toma de pH con
papel indicador y analizar los
resultados.

3.

INFLUENCIA DE LA SUPERFICIE DE LA MUESTRA DEL HGADO EN SU

ACCIN ENZIMTICA

Porcin de hgado 1: Macerar +

3 ml de Perxido de hidrgeno
Porcin de hgado 2: Dividir en
trozos + 3 ml de Perxido de
hidrgeno

Comparar las reacciones de los

dos montajes.

RESULTADOS

1. ACCIN DE LA TEMPERATURA EN LA ACCIN DE LA CATALASA:

1.1 Accin de la temperatura en la accin de la catalasa de la papa:
Tubo 1: En esta parte se observ una reaccin abundante de la enzima catalasa o
peroxidasa y se evidenci por la produccin de burbujas de aire en la superficie del
tubo, la temperatura estaba en 28C.
Tubo 2: En este tubo la reaccin fue muy lenta, casi nula, no se evidenci gran
produccin de burbujas de aire, la temperatura estaba en 4C.
Tubo 3: Igualmente en este tubo no se present reaccin enzimtica evidente, la
temperatura estaba en 92C.

1.2 Accin de la temperatura en la accin de la catalasa del hgado:

Los resultados
similares

obtenidos en el ensayo realizado con el hgado de res fueron

los

obtenidos

con

la

papa,

aunque

un

poco

disminuidos

proporcionalmente, debido a la interferencia que puede darse entre las reacciones

enzimticas con otros componentes celulares presentes en el tejido animal.

2. INFLUENCIA DEL PH EN LA ACCIN DE LA CATALASA DE LA PAPA:

Con referencia a la accin que tiene el pH en la actividad de las enzimas se pudo
constatar que en los rangos de pHs cidos y bsicos trabajados en el experimento,
segn la adicin de cido clorhdrico e hidrxido de sodio, respectivamente, se
observ una disminucin en la reaccin enzimtica con muy poca actividad de la
catalasa, lo que se demuestra con la baja produccin de burbujas de oxgeno,

producto de la degradacin del perxido de hidrgeno adicionado para revelar dicha

reaccin.

3. INFLUENCIA DE LA SUPERFICIE DE LA MUESTRA DEL HGADO EN SU

ACCIN ENZIMTICA
En este experimento se pudo observar que ocurre una reaccin enzimtica mayor,
con abundante produccin de burbujeo en el pedazo de hgado que fue macerado,
mientras en los pedazos cortados en trozos grandes fue inferior, notndose slo
reaccin superficial en las partes expuestas al perxido de hidrgeno.

ANALISIS DE RESULTADOS.

1.1 En este experimento del efecto de la temperatura sobre la accin de la amilasa

de la papa, se mide la actividad enzimtica a diferentes temperaturas, en las cuales
se mostraron reacciones diferentes.
Las temperaturas de 90C y 4C, son temperaturas extremas en las cuales las
enzimas, y en particular las amilasas disminuyen su accin y se inhiben totalmente,
debido a la desnaturalizacin de la molcula proteica, de la cual estn conformadas
las enzimas.
A 28C y temperaturas cercanas a la temperatura ambiental y corporal las enzimas
presentan su mejor funcionamiento, es decir, se encuentran en un rango ptimo de
temperaturas.

Esto era de esperarse, ya que cada enzima tiene un rango de temperatura ptima y,
en el caso de la amilasa, al encontrarse sta en el cuerpo humano y animales (que
siempre tienen una temperatura de 37 C), se supone que a temperatura ambiente
no va a perder su actividad, pero s disminuirla, ya que los choques intermoleculares
van a ser menores.
Sin embargo, al disminuir demasiado la temperatura, los choques entre las molculas
disminuyen tambin, por lo que la actividad enzimtica baja hasta el punto en el que
no se puede ver en el experimento. Por el contrario, al aumentar la temperatura de
incubacin a 90 C, los choques entre las molculas se van a acrecentar de tal forma
que la enzima se va a desnaturalizar. Es por ello que se presume que no se
observaron cambios en el tubo.

1.2 Las burbujas que se producen en este tipo de reacciones enzimticas son
bsicamente oxgeno que se desprende de la reaccin entre las molculas de
perxido de hidrgeno y la enzima catalasa, que la degrada en agua y oxgeno
molecular que se libera en forma de gas.

2. Por su accin, la amilasa es sensible a una acidez elevada y se vuelve inactiva a

pH 3,3 o a pH menor a 0C por 15 min. El pH ptimo de accin est dentro del rango
5-7, siendo de 6,5 para la alfa-amilasa bacteriana y pancretica. La enzima es
resistente al calor, pues a 70C conserva un 70% de su actividad. Acta sobre
almidones crudos y gelatinizados.
3. Estos resultados se deben a que en el hgado macerado existe una mayor
superficie de contacto entre las enzimas y el sustrato correspondiente, es decir, el
perxido de hidrgeno agregado, y adems las enzimas catalasas del tejido se
hacen ms abundantes con el macerado, pues se extraen del interior de los tejidos y

contactan mejor y en mayor nmero con el perxido, haciendo ms evidente la

reaccin enzimtica.

CONCLUSIONES

Como producto del anlisis de los resultados del experimento realizado en el

laboratorio, se pueden extraer las siguientes conclusiones:

La temperatura es un factor determinante en las reacciones enzimticas porque

acelera o retarda la accin de las enzimas, lo que se evidencia con la produccin
de burbujas.

Para que la catalasa funcione correctamente debe tener un ph neutro y

temperatura ambiente.

BIBLIOGRAFIA

AGUIRRE OBANDO, O.A.; MORALES LVAREZ, E.D.: Reconocimiento de

carbohidratos. Visitar Web: Universidad de Quindio, Facultad de Educacin.
Consulta 27 de julio de 2010.

ANNIMO (1988): Fehling (Germn). Enciclopedia Universal Ilustrada EuropeoAmericana, 23, 560. Madrid, Espasa-Calpe.

BABRET, A. CHAVEZ, C. Biologa. Editorial Prentice Hall. New Jersey.1992

VILLEE, Claude A. Biologa. McGraw-Hill. 1988.
http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma01/sec01/c1_003.htm
http://www.iqb.es/CBasicas/Farma/Farma01/Sec01/C1_003.htm
http://www.biosci.uga.edu/almanac/bio_103/notes/may_13.html.
http://www.arrakis.es/~lluengo/transporte.html

ANEXOS

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

CAMILO ANDRES CARDENAS

CARLOS JOSE PINEDA
YOHANDRY RUIZ

DOCENTE:
DILIA GALVAN BORJA

UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD DE EDUCACIN Y CIENCIAS
PROGRAMA DE BIOLOGIA
LABORATORIO DE BIOLOGIA
OCTUBRE 11 2013