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CRIPTOSPORIDIOSIS o CRIPTOSPORIDIASIS - Recursos en Parasitologa - UNAM

CRIPTOSPORIDIOSIS o CRIPTOSPORIDIASIS

5/29/15, 19:05

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Dra. Teresa Uribarren Berrueta


Departamento de Microbiologa y Parasitologa, Facultad de Medicina, UNAM
Correo electrnico: berrueta@unam.mx
Introduccin.
Cryptosporidium, Cyclospora y Cystoisospora son coccidios intestinales del Phylum Apicomplexa
(de la taxonoma tradicional), que se caracterizan por la eliminacin de ooquistes con la materia
fecal de los hospederos.
Cryptosporidium es un parsito intracelular obligado, monoxeno, con varias especies. Es un
patgeno emergente e importante agente etiolgico no viral de diarrea en humanos y animales a
nivel mundial.
Los grupos especficos con mayor riesgo de adquirir la parasitosis son nios, individuos
desnutridos, pacientes con algn tipo de inmunocompromiso, humoral o celular (SIDA, entre otros);
tambin es una causa de importante de "diarrea del viajero" y de brotes epidmicos.
El protozoo fue descubierto en ratones por Tizzer (1907); a raz de ese hallazgo fu reportado en un
amplio rango de animales vertebrados, domsticos y silvestres, muchos de ellos neonatos. Su
importancia como patgeno humano se reconoci en 1976, cuando se diagnostic en 2 pacientes
con diarrea acuosa. A partir de entonces, se identific con mayor frecuencia, particularmente en
sujetos inmunodeprimidos y en brotes epidmicos por ingesta de agua contaminada (esta forma de
diseminacin cobr relevancia despus del brote detectado en Milwaukee, EUA, con 403 000 casos
detectados). La infeccin crnica ha sido relacionada principalmente con el sndrome de
inmunodeficiencia adquirida, pero las infecciones en sujetos inmunocompetentes han aumentado de
manera muy importante.
Tanto Giardia duodenalis como Cryptosporidium spp. fueron incluidos dentro de la iniciativa de
"enfermedades tropicales olvidadas" (Neglected Tropical Diseases - NTD) de la OMS, desde 2004.
Epidemiologa.
El impacto global de las enfermedades diarreicas se estima en unos 62 millones de aos de vida
ajustados por discapacidad (DALYs). Aunque el peso de los diferentes patgenos que contribuyen a
esta cifra es difcil de evaluar, la criptosporidiosis se considera una de las causas ms frecuentes de
diarrea en pases que cuentan con datos epidemiolgicos confiables.
(Karanis et al., 2007).
La criptosporidiosis es una enfermedad cosmopolita, con mayor en zonas con clima tropical o
templado, y se presenta con frecuencia en pacientes con SIDA. En pases en desarrollo, en los que
prevalece una sanidad deficiente y hacinamiento, constituye una zoonosis de mayor importancia.
La transmisin es fecal-oral, por contacto directo de hospedador-hospedador ya travs de alimentos
o agua contaminados con ooquistes, infectantes en el momento de ser eliminados con la materia
fecal del hospedero. Cabe mencionar que la criptosporidiosis se ha identificado en brotes
epidmicos debidos a fuentes de agua contaminada, de redes de agua potable, de superficie o
recreativas.
Los ooquistes de Cryptosporidium permanecen viables en agua de mar durante 1 ao. Tambin se
ha documentado su concentracin en moluscos bivalvos. La prevalencia de la enfermedad en pases
industrializados oscila entre 0.1 y 27.1%, con una media de 4.9%, mientras que en pases en
desarrollo los resultados varan entre 0.1 a 31.5% con una media de 7.9%, excluyendo los brotes
epidmicos especficos y a los sujetos con SIDA.
Gracias a su pared gruesa, los ooquistes de Cryptosporidium resisten los tratamientos qumicos
usuales: no sufren alteracin despus de ser expuestos a 80 ppm de cloro/30 min, e incluso pueden
tolerar 24 h en el cloro utilizado para blanqueado de ropa. A concentraciones de 10 ppm, los
ooquistes pueden permanecer infectantes durante 48 horas. (Dillingham et al. 2002).
El empleo de ozono (1 ppm x 5 min), la congelacin o calentamiento (>72 C durante 1 min o 45
C por 10 - 20 min) son mtodos ms efectivos. Permanecen viables al cabo de una semana en la
mayora de los congeladores caseros. Debido a su tamao, nicamente los filtros capaces de
remover partculas de 1 m resultan confiables.
Morfologa. Clasificacin.
Los diferente autores reconocen entre 19 y 22 especies de Cryptosporidium spp., y se han
identificado alrededor de 61 genotipos de especie incierta, con base en la secuencias de ssrRNA. La
utilizacin de herramientas moleculares para el anlisis gentico, varias pruebas con PCR y el
estudio de los microsatlites han confirmado la autenticidad de especies y la existencia de genotipos
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dentro de ellas. La taxonoma de este organismo est en rpida evolucin; as, por ejemplo,
Cryptosporidium pestis, antes el genotipo bovino de C. parvum, ha sido aceptado, de acuerdo al
International Code of Zoological Nomenclature aunque an existe debate al respecto. (Chalmers et
al., 2010; Fayer. 2010; lapeta. 2011; Xiao et al., 2012).
La enfermedad en el humano se atribuye con mayor frecuencia a 8 de dichas especies, aunque
existen reportes incidentales de infeccin por otros criptosporidios. (Chalmers, et al. 2010).

Modificado de: Chalmer RM, Davies AP. Clinical cryptosporidiosis. Ex. Parasitol,
Jan 2010.

La mayora de los ooquistes, esfricos o elpticos, miden entre 4 - 6 m y las caractersticas


morfolgicas ayudan poco en la diferenciacin de especies; se requiere de morfometra, tcnicas
moleculares y el conocimiento de especificidad de hospedero para la identificacin correcta.
Ciclo biolgico.
Los ooquistes de Cryptosporidium, con pared doble y 4 esporozotos desnudos en su interior,
sobreviven en el ambiente por largos periodos de tiempo (entre 20 - 30 C, durante semanas/meses).
Una vez en tracto digestivo, principalmente a nivel de intestino delgado, los esporozotos (forma
invasiva) son liberados a travs de una ranura en los ooquistes en disolucin.

Esquema. Morfologa general.Modficado de: BIODIDAC

Los esporozotos poseen un complejo apical, auxiliar en la adhesin a la membrana celular del
hospedero, que envuelve las formas invasivas del parsito y da lugar a una vacuola parasitfora.
Esta vacuola, que engloba al esporozoto en un nicho protector especial, intracelular pero
extracitoplsmico (epicelular), presenta una regin electrodensa en la base, denominada organelo de
alimentacin.

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El desarrollo ulterior comprende la transformacin del esporozoto en trofozoto y la reproduccin


de manera asexual, por merogonia (la divisin celular es por endopoligenia: formacin de clulas
hijas por gemacin), que da lugar a merontes de dos tipos: merontes I con 8 merozotos, que
invaden otras clulas, con repeticin del ciclo y formacin de otros merontes I, o merontes II, con 4
merozotos; estos ltimos dan origen a estadios sexuales y la reproduccin sexual ocurre por
gametogonia, con micro y macrogametos. Los cigotos resultantes pasan por una ltima fase de
desarrollo ( esporogonia), que culmina con la produccin de ooquistes infectantes, de pared gruesa,
con 4 esporozotos desnudos (sin esporoquiste) y su eliminacin con las heces fecales.

SEM. Cryptosporidium sp. Organelo de alimentacin


expuesto. S.J. Upton, Kansas University

Cryptosporidium sp. en clulas epiteliales de vescula.


CDC/Dr. E. Ewing Jr

Las 3 fases de reproduccin abarcan unas 12 - 24 h, con una nueva generacin de parsitos y formas
autoinfectantes en cada ocasin. Ante tal nmero de organismos no es de extraar que en sujetos
inmunocomprometidos las formas parasitarias puedan extenderse hasta conductos biliares y
pancreticos, estmago y tracto respiratorio.
La autoinfeccin interna e infeccin crnica se explican por la sucesin de ciclos esquizognicos.
Sin embargo, la duracin de la infeccin depende de varios factores, los ms importantes asociados
a la inmunocompetencia, edad y nutricin de los hospederos.
Espectro clnico.
Se contemplan:
- Estado de portador, asintomtico.
- La enfermedad en sujetos inmunocompetentes, autolimitada, con duracin entre 2 - 14 das,
aunque puede prolongarse hasta 1 mes. Incluye diarrea acuosa , que puede ser de tipo coleriforme,
ocasionalmente explosiva y ftida, dolor abdominal, flatulencia, vmito, anorexia, prdida de peso.
- En menores de 2 aos es ms frecuente un cuadro severo, que incluye evacuaciones acuosas,
ocasionalmente con moco, sin sangre, con deshidratacin y desequilibrio electroltico. Se ha
asociado tambin a retardo en el crecimiento.
- La parasitosis en personas con algn tipo de inmunocompromiso, con diarrea de tipo coleriforme
que puede representar la prdida de varios litros (se han mencionado casos extremos con hasta 25
litros/24 h). Es una enfermedad asociada con frecuencia a pacientes con SIDA, quienes pueden
presentar diarrea crnica de manera intermitente, con episodios hasta de 30 das y recurrencias. El
desequilibrio hidroelectroltico puede ser muy importante. Desarrollan sobre todo la parasitosis
fulminante aquellos sujetos con cuentas de linfocitos CD4 menores a 50-100/L con un sndrome
de malabsorcin ms importante. La enfermedad extraintestinal (vescula biliar, tracto respiratorio,
hgado, pncreas) conlleva morbilidad y mortalidad mayores. Se ha reportado una mortalidad de
aproximadamente el 50% en los 6 meses posteriores al inicio de la infeccin en estos sujetos.
Cualquiera de los cuadros asociado a signos y sntomas puede ser causa de malabsorcin intestinal.
Respuesta inmune y Patogenia.
Es importante explicar los mecanismos que dan lugar a la diarrea osmtica, inflamatoria y
secretora que se presenta en esta enfermedad, particularmente en sujetos inmunodeprimidos;
sin embargo, hacen falta estudios. Se considera que el origen es multifactorial: estn
involucrados tanto el parsito como sus productos, la respuesta inmune del hospedero, que
dan lugar a deficiencias en la absorcin a nivel de intestino delgado y aumento en la
secrecin.
Adhesin. Entre otros factores se contemplan lectinas y glucoprotenas semejantes a la
mucina, receptores de adherencia del esporozoto.
Las clulas T, principalmente los linfocitos CD4+ son fundamentales en la respuesta inmune
contra los criptosporidios, y al mismo tiempo, la atrofia de vellosidades y la hiperplasia de las
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criptas son cambios patolgicos asociados a las clulas T. (Chalmers et al. 2010).
Apoptosis. La cascada de seales pro-apoptosis predominan a las 24 - 48 horas postinfeccin.
Estudios in vitro.
Dao celular - Producido por el parsito. Productos del esporozoto estn involucrados en la
desorganizacin de las uniones celulares, prdida de la funcin de barrera, liberacin de
lactato-dehidrogenasa e incremento en la muerte celular. Fosfolipasas, proteasas, son
molculas que potencialmente pueden causar el dao tisular. (Borowski et al. 2008; OrtegaPierres et al. 2009; Stark et al. 2010).
Histopatologa.
Los cambios histopatolgicos asociados a este organismo incluyen: diferentes grados de atrofia de
las microvellosidades, edema de la submucosa, infiltrado inflamatorio mononuclear e hiperplasia de
las criptas. Los estadios del parsito se observan en la zona apical de la membrana del enterocito.
Diagnstico.
Es importante el diagnstico diferencial con patologas causadas por Cyclospora e Cystoisospora, y
otros patgenos intestinales que producen cuadros clnicos similares.

Cryptosporidium sp. Ooquistes. Examen en fresco y Tincin cido alcohol.


Chiang Mai University, Thailand y CDC.

Los ooquistes se recobran en materia fecal. Cuando se sospecha compromiso extraintestinal, es


prudente buscarlos en bilis o esputo. La recuperacin rutinaria se realiza por tcnicas de
concentracin/flotacin, entre ellas la tcnica de Sheather (con sacarosa a una densidad de 1.27), el
posterior extendido y tincin cida mediante los mtodos de Kinyoun en fro o caliente o ZiehlNeelsen modificado (con ambos se obtienen ooquistes teidos de color rojo).
Otra tincin de utilidad en los sitios donde se encuentra disponible es Acrifluor, que tie bien
coccidios intestinales y micobacterias.
La observacin de la muestra con microscopa de contraste de fase permite observar los ooquistes
como cuerpos birrefringentes con uno o varios grnulos oscuros.
El material histolgico obtenido por biopsia o durante la autopsia, previa fijacin, se tie con
hematoxilina-eosina o Giemsa, dadas las caractersticas basfilas de los estadios de desarrollo de
Cryptosporidium. Esta tcnica se utiliza principalmente en estudios patolgicos.
En algunos lugares se efecta la filtracin de grandes volmenes de agua con filtros de
policarbonato con poros menores a 1 m para la obtencin y marcaje posterior de ooquistes.

Cryptosporidium sp. Ooquistes infectantes.


Contraste de fase. CDC

IFA. Quistes Giardia y ooquistes Cryptosporidium. CDC

Tambin se utilizan kits (ELISA) para la identificacin de coproantgenos e inmunofluorescencia


(IFA).
Se han desarrollado diferentes tcnicas de PCR para la deteccin y diferenciacin de
Cryptosporidium spp. a nivel de especie/genotipo y subtipos.
Recientemente se ha descrito el empleo de una tcnica de PCR en una plataforma robtica, para la
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identificacin simultnea de Cryptosporidium spp. y otros patgenos concomitantes en materia


fecal. (Fletcher et al., 2012).

C. parvum . Tcnica DIC. Lindquist HDA, EPA, EEUU.

C. parvum . Tcnica DAPI (tincin vital que se basa en la


absorcin de fluorocromos especficos). Lindquist HDA, EPA,
EEUU.

Ooquistes de Cryptosporidium parvum y quistes de Giardia lamblia .


Microscopia confocal. Lindquist HDA, EPA, EEUU.

Epidemiologa.
El impacto global de las enfermedades diarreicas se estima en unos 62 millones de aos de vida
ajustados por discapacidad (DALYs). Aunque el peso de los diferentes patgenos que contribuyen a
esta cifra es difcil de evaluar, la criptosporidiosis se considera una de las causas ms frecuentes de
diarrea en pases que cuentan con datos epidemiolgicos confiables.
(Karanis et al., 2007).
La criptosporidiosis es una enfermedad cosmopolita, con mayor en zonas con clima tropical o
templado, que se presenta con frecuencia en pacientes con SIDA. En pases en desarrollo, en los
que prevalece una sanidad deficiente y hacinamiento, es ms frecuente la transmisin oral-fecal,
directa o indirecta, con brotes a nivel familiar o institucional, sin olvidar factores significativos
como la ingesta de agua no potable.
La prevalencia de la enfermedad en pases industrializados oscila entre 0.1 y 27.1%, con una media
de 4.9%, mientras que en pases en desarrollo los resultados varan entre 0.1 a 31.5% con una media
de 7.9%, excluyendo los brotes epidmicos especficos y a los sujetos con SIDA. An cuando los
estudios epidemiolgicos han demostrado que la parasitosis est ms difundida de lo que
anteriormente se pensaba, es difcil determinar la extensin del problema, tanto a nivel veterinario
como mdico.
En pases con mayor desarrollo, la parasitosis se presenta principalmente en la forma de brotes
epidmicos debidos a fuentes de agua contaminada, ya sea redes de agua potable, de superficie o
recreativas. Los ooquistes de Cryptosporidium permanecen viables en agua de mar durante 1 ao.
Tambin se ha documentado su concentracin en moluscos bivalvos.
Gracias a su pared gruesa, los ooquistes de Cryptosporidium resisten los tratamientos qumicos
usuales: no sufren alteracin despus de ser expuestos a 80 ppm de cloro/30 min, e incluso pueden
tolerar 24 h en el cloro utilizado para blanqueado de ropa.
El empleo de ozono (1 ppm x 5 min), la congelacin o calentamiento (>72 C durante 1 min 45
C por 10 min despus de iniciada la ebullucin) son mtodos ms efectivos. Permanecen viables al
cabo de una semana en la mayora de los congeladores caseros. Debido a su tamao, nicamente los
filtros capaces de remover partculas de 1 m resultan confiables.
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Se considera una cloracin adecuada del agua cuando se confirma una concentracin de cloro
residual de 0.5 mg/l (0.5 p.p.m).
Tratamiento.
Es necesario mantener el equilibrio hidroelectroltico tanto en sujetos inmunocompetentes como
inmunodeprimidos. En algunos pacientes es necesaria la alimentacin parenteral.
Fundamentalmente, el tratamiento consiste en medidas de sostn. Algunos autores sugieren
suspender los frmacos citotxicos temporalmente.
Se han utilizado ciertos frmacos con resultados muy variables. En algunos pacientes la
paromomicina aparentemente disminuye la intensidad de la infeccin. Las dinitroanilinas tienen
potencial (A. Armson, Murdoch University, Western Australia). Se sugiere que la nitazoxanida
puede ser benfica bajo ciertas circunstancias (L. Favennec, Hospital Charles Nicolle, Rouen,
France), aunque los resultados del meta-anlisis realizado por la Biblioteca Cochrane Plus indican
que el beneficio derivado del frmaco se hace evidente en sujetos inmunocompetentes; concluye el
estudio con la aseveracin de que se carece de un tratamiento efectivo para esta parasitosis.
Deteccin en agua.
Actualmente, la EPA (EEUU) y otras organizaciones de salud con metodologa de vanguardia,
utilizan la separacin inmunomagntica para deteccin y aislamiento de protozoos en agua y la
tincin con anticuerpos especficos fluorescentes. Otras tcnicas que pueden ser utilizadas con el
objetivo de purificacin de quistes y ooquistes de protozoos incluyen gradientes de densidad,
centrifugacin de flujo, filtracin continua de flujo, citometra de flujo. Tambin se han desarrollado
mtodos moleculares, prometedores para la deteccin efectiva y simultnea de protozoos en agua,
de acuerdo a varios autores, en comparacin con los limitados resultados de la tincin convencional
y microscopa, un punto de gran importancia en el campo de la salud pblica. (Fletcher et al., 2012).
En Mxico existe la legislacin para regular los sistemas pblicos operadores de agua para
consumo. La NOM-127-SSA1-1994; NOM-179-SSA1-1998 incluye la determinacin, en muestras
de agua, de bacterias coliformes totales, E. coli, coliformes fecales, y la presencia de bacterias
termotolerantes, como Citrobacter y Enterobacter. Los organismos deben estar ausentes. Sin
embargo, existe cierta confusin debido a los contenidos del Proyecto de Norma Oficial mexicana
NOM-000-SSA1-2010. Y no existe la legislacin clara para otros organismos, como los protozoos
Cryptosporidium parvum y Giardia lamblia. (Olivas-Enrquez et al., 2013).
Mxico. Lmites mximos permisibles de
microorganismos en agua
Lmite
PARMETRO Unidad
mximo
permisible
Colifagos
Fago/L
Ausente/1 L
E. coli o
Coliformes
<1,1
fecales u
NMP/100 mL
NMP/100
organismos
mL
termotolerantes
1

Giardia
lamblia

UFC/100 mL

0 UFC/100
mL

Ausencia/Presencia/100mL

Ausente/100
mL

Quistes/L

0/20 L

1 Los mtodos son excluyentes, las unidades de medida debern reportarse de


acuerdo a la metodologa empleada. En: PROYECTO de Norma Oficial Mexicana
NOM-000-SSA1-2010, Agua para uso y consumo humano.
Tanto en el caso de G. lamblia como de Cryptsporidium parvum, se considera
infectante una dosis de 10 quistes/ooquistes. (Balderrama et al., 2012).

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