Modificado de Marchesini, Piasentini y Occelli 2011.

Laboratorio de Enseanza de la Ciencia y la

Tecnologa-FCEFyN UNC

Actividad
Problema:
Un barrio ha sido escenario de varios robos de bicicletas recientes. Una
bicicleta de montaa ha sido robada y dos sospechosos han sido identificados.
Afortunadamente, un cabello se encuentra en la cadena de la bicicleta rota en
la escena del crimen.
Para resolver esta situacin se requiere en primer lugar extraer el ADN de la
muestra biolgica (cabello).
Extraccin de ADN
A continuacin se detallan los materiales y procedimientos que seguimos en el
trabajo prctico de laboratorio desarrollado en clase.
Materiales:
-1 tazas o vaso de plstico
-Una cuchara plstica para medir y mezclar
-2 filtros de papel de caf N 2 (conos) y 1 embudo.
-20 ml de agua destilada
-Detergente
-Muestra vegetal: manzanas, bananas, kiwis y frutillas
-Sal de mesa
-1 pipeta de transferencia plstica o un gotero mdico
-1 tubo de ensayo sellado que contenga 95% de etanol (o 91% de alcohol
isoproplico)
-1 conservadora con hielo para enfriar los tubos con alcohol
-1 varilla de vidrio
Procedimiento para la extraccin del ADN
Preparar una solucin de manzana/banana/kiwi/frutilla mediante los siguientes
pasos:
1. En una licuadora, mezclar la fruta por taza de agua destilada (150ml).
2. Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solucin se mezcle.

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3. En una taza, preparar una solucin consistente en una cucharadita de t

de detergente y dos pizcas de sal.
4. Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada.
5. Disolver la sal y el detergente revolviendo lentamente con la cuchara de
plstico evitando formar espuma.
6. A la solucin preparada en el paso 3, agregar tres cucharaditas de la
mezcla de fruta del paso 1.
7. Mezclar la solucin con la cuchara por 5-10 minutos.
8. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la solucin de fruta, otro
miembro pondr el filtro N 2 de caf dentro de otra taza de plstico.
Doblar el borde del filtro alrededor de la taza para que el filtro no toque
el fondo de la taza.
9. Filtrar la mezcla vertindola dentro del filtro y dejar que la solucin
drene por algunos minutos (si es necesario pasar la mezcla de fruta 2
veces por el papel de filtro) hasta que sean 5 ml aproximadamente de
filtrado para testear.
10. Colocar la solucin de fruta filtrada en un tubo de ensayo.
11.Tomar el alcohol fro y agregarlo a la solucin de fruta.
Nota: El ADN no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol se agrega a la
mezcla, los componentes, excepto el ADN, permanecen en la solucin
mientras el ADN precipita en la capa de alcohol.
12.Dejar la solucin reposar por 2 a 3 minutos sin mover. Es importante la
preparacin. Se puede observar el ADN blanco el cual precipita en la
capa de alcohol.
Nota: Cuando se obtienen buenos resultados, habr suficiente ADN para
levantar con una varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la varilla). El ADN
tiene la apariencia de mucus blanco y fibroso.

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Para continuar con la situacin problemtica planteada al principio

utilizaremos un laboratorio virtual para llevar a cabo una experiencia de
laboratorio que implica la realizacin de una electroforesis en gel.
Ingresar al sitio:
http://www.classzone.com/books/hs/ca/sc/bio_07/virtual_labs/virt
ualLabs.html
Hacer clic en Lab Virtual y luego clic en Gel Electrophoresis. Una vez abierta la
simulacin, debern seguir los pasos que a continuacin se detallan para tratar
de resolver el problema antes mencionado.
Este laboratorio se encuentra en ingls, es por ello que a continuacin
presentamos una traduccin para evitar que el idioma sea una limitante para la
realizacin de esta actividad.
Problema:
Un barrio ha sido escenario de varios robos de bicicletas recientes. Una
bicicleta de montaa ha sido robada y dos sospechosos han sido identificados.
Afortunadamente, un cabello se encuentra en la cadena de la bicicleta rota en
la escena del crimen.
Para esta investigacin, se va a utilizar la electroforesis en gel para hacer una
muestra de ADN de cada sospechoso, el propietario de la bicicleta y el ADN de
las clulas en el cabello. A continuacin, vamos a comparar las muestras de
ADN para determinar a quin pertenece el pelo.
1-Explor el laboratorio para aprender lo que est disponible para tu
investigacin. Debs hacer clic en cada elemento de la lista. Una vez que est
listo para continuar, hac clic en PROCEDIMIENTO.
TIPS PARA PIPETAS: Use un tip limpio antes de la
transferencia de las muestras de tincin o de ADN para
evitar la contaminacin de las muestras.
GEL DE AGAROSA: utilizar los pozos de siembra
en el gel de agarosa para cargar las muestras de
ADN. Pequeos fragmentos de ADN viajan a
travs del gel ms fcilmente que aquellos
fragmentos ms grandes, durante un cierto
periodo de tiempo, y van a viajar ms lejos.

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MUESTRAS DE ADN digerido: Las muestras de ADN ya han

sido cortadas en fragmentos por las enzimas de restriccin.

BANDEJA de TINCIN del GEL: Utilice la

bandeja de tincin del gel para mantener el gel de
agarosa y para la tincin de los fragmentos de ADN
despus
de
haber
sido
separados
por
electroforesis.
AZUL DE BROMOFENOL: Utilice el azul de bromofenol para ver
hasta qu punto las muestras de ADN se han movido. El azul de
bromofenol es un colorante que se desplaza con las muestras de ADN
en el gel.
AGUA DESIONIZADA: Utilice el agua destilada para enjuagar el gel
despus de que se tie con bromuro de etidio.

CAJA DE LUZ ULTRAVIOLETA: Utilice el aparato

de luz ultravioleta para ayudar a leer el gel
despus de que se tieron con bromuro de etidio

MARCADORES DE ADN: son fragmentos de ADN con una longitud

conocida.
BROMURO DE ETIDIO: El bromuro de etidio es un colorante
fluorescente utilizado para la tincin de ADN

BUFFER TBE: Utilcelo para ayudar a transportar una corriente

elctrica. Se aade en la cubeta con el gel.

FUENTE DE ALIMENTACIN: Use la fuente de

alimentacin para producir una corriente elctrica en la
cmara de electroforesis.

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CMARA
DE
ELECTROFORESIS:
La
electroforesis se lleva a cabo en la cmara de
electroforesis.

MICROPIPETA: Use la micropipeta para transferir muestras de

colorantes y ADN.

PROCEDIMIENTO:
PASO 1: En este laboratorio, se analizar una muestra de ADN de clulas de
un cabello encontrado en la escena del crimen. Se compararn: la muestra de
ADN de la evidencia, el ADN de la vctima, el ADN del sospechoso 1 y el ADN
del sospechoso 2.
Abr el bloc de notas y explic cmo crees que comparar muestras de ADN
puede ayudar a identificar a una persona que ha cometido un delito.
Cuaderno de prcticas: Explica cmo la comparacin de muestras de ADN te
pueden ayudar a identificar quin es el autor de un delito?
Rta:

Una vez que hayas escrito tu explicacin, hac clic en la flecha para avanzar al
paso 2.
PASO 2: El gel de agarosa se encuentra en la cmara de electroforesis. Hac
clic en el bffer de TBA para cubrir la superficie del gel con el buffer. Una vez
que hayas cubierto el gel con el buffer, hac clic en la flecha para avanzar al
paso 3.
PASO 3: Hac clic en la micropipeta para cargar, teir y mezclar los
marcadores de ADN con el colorante azul de bromofenol. La mezcla es luego
expulsada en el marcador de ADN tambin. Una vez que hayas llenado el
marcador de ADN, hac clic en la flecha para avanzar al paso 4.
PASO 4: Hac clic en la micropipeta para cargar, teir y mezclar el ADN de la
vctima con el colorante azul de bromofenol. La mezcla es tambin expulsada.

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Una vez que hayas llenado el gel con el ADN de la vctima, hac clic en la
flecha para avanzar al paso 5.
PASO 5: Hac clic en la micropipeta para cargar, teir y mezclar el ADN del
sospechoso 1 con el colorante azul de bromofenol. La mezcla es luego
expulsada. Una vez que hayas llenado el gel con el ADN del sospechoso 1,
hac clic en la flecha para avanzar al paso 6.
PASO 6: Haga clic en la micropipeta para cargar, teir y mezclar el ADN del
sospechoso 2 con el colorante azul de bromofenol. La mezcla es luego
expulsado a los 2 sospechosos tambin. Una vez que hayas llenado el gel con
el ADN del sospechoso 2, hac clic en la flecha para avanzar al paso 7.
PASO 7: Hac clic en la micropipeta para cargar, teir y mezclar las pruebas
de ADN con el colorante azul de bromofenol. La mezcla es luego expulsada en
la evidencia. Una vez que hayas llenado el gel con el ADN de la evidencia, hac
clic en la flecha para avanzar al paso 8.
PASO 8: Hac clic en la fuente de alimentacin para simplemente conectar los
electrodos que producen corriente elctrica por una hora. Ten en cuenta que
el electrodo negativo es el ms cercano a los pozos de siembra, y el electrodo
positivo est ms lejos de los pozos. Una vez que haya pasado una hora, hac
clic en la flecha para avanzar al paso 9.
PASO 9:
-Arrastr el gel de la electroforesis a la bandeja de tincin.
-Hac clic en el frasco de tincin de bromuro de etidio hasta cubrir el gel y
dejela reposar durante 30 minutos.
-Hac clic en la bandeja de tincin para descartar la mancha.
-Una vez que tengas el gel, hac clic en la flecha para avanzar al paso 10.
PASO 10:
-Hac clic en el agua destilada para enjuagar el gel y dejela reposar durante 30
minutos.
-Hac clic en la bandeja de tincin para desechar el agua destilada.
-Una vez que haya aclarado el gel, hac clic en la flecha para avanzar al paso
11
PASO 11:
-Arrastr el gel a la mesa de luz y
-Abr el bloc de notas y registr
Para determinar la longitud de
muestras de ADN de la vctima
marcadores de ADN.

hac clic en el botn para leer el gel.

el tamao estimado de cada banda de ADN.
las pruebas de ADN, debes comparar las
y el ADN de ambos sospechosos, con los

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Actividades obligatorias a entregar

1. Explic, cmo comparar muestras de ADN puede ayudarte a identificar a
una persona que ha cometido un delito.
2.
En la siguiente tabla, registr el tamao estimado de pares de bases
(pb) de los fragmentos de ADN en las muestras de la vctima, los sospechosos
y la evidencia. Estim el nmero de pares de bases, mediante la comparacin
de cada banda con las bandas de los marcadores de ADN.

Banda
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Marcador
ADN (bp)

Tabla de Registros
ADN Victima
ADN
(bp)
Sospechoso 1

ADN
ADN de
Sospechoso 2 Evidencia (bp)

3.

A quin corresponde el ADN del pelo encontrado?

4.

Por qu aparecen en el gel una serie de bandas?

5.
Por qu la banda de fragmentos de ADN ms grande es la ms prxima
al pozo de siembra en el que se coloc?
6.

Por qu hay tantas bandas en el carril del marcador? Para qu sirven?

7.
Por qu la muestra de ADN es ms concluyente cuando se demuestra la
inocencia de una persona y no tanto su culpabilidad?