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Laboratorio de Microbiologa

Grupo 2- Equipo 5
A01271060- Juan Eduardo Arriaga Gonzlez
A01208272- Brenda Yaaxnic Vzquez Mata
A01350146- Claudia Paola Milln Contreras
Practica 10
Determinacin de Salmonella
Objetivo: Determinar la presencia de Salmonella como un microorganismo patgeno
por medio de la tcnica de enriquecimiento selectivo.
Introduccin
Salmonella spp. es un bacilo Gram-negativo, por lo general mvil, no esporulante,
anaerobio facultativo mesoflico, que pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Las
especies de Salmonella se encuentran dentro de la clasificacin quimioorgantrofas y
tienen la capacidad de metabolizar nutrientes por la va tanto fermentativa, como
respiratoria. Estas bacterias crecen ptimamente a 37C y son capaces de catabolizar
la D-glucosa, as como otros carbohidratos con produccin de cido y gas. Recordando
las tcnicas de identificacin bioqumica de cepas aisladas, estos microorganismos son
oxidasa negativos y catalasa negativos, crecen en citrato como su nica fuente de
carbono, normalmente producen cido sulfhdrico, descarboxilan la lisina y ornitina y no
son capaces de hidrolizan la urea. Sin embargo, se han encontrado biotipos que no
descarboxilan la lisina, e inclusive pueden hidrolizan la urea, producir indol y crecer
rpidamente en KCN. La definicin moderna de una cepa de Salmonella tpica es
quella que produce cido y gas mediante la glucosa disponible en el agar hierro tres
azcares, sin embargo no tiene la habilidad de disponer de lactosa y sacarosa en dicho
medio, o en los siguientes medios slidos selectivos: verde brillante, xilosa lisina
desoxicolato y/o entrico de Hekten. En agar hierro lisina, las especies tpicas de
Salmonella llevan a cabo una reaccin alcalina por la descarboxilacin de la lisina y
generan cadaverina.
El mtodo ms comn para el aislamiento de Salmonella es la tcnica de
enriquecimiento

selectivo.

sta

engloba

las

etapas

de

preenriquecimiento,

enriquecimiento selectivo, aislamiento en medios de cultivos selectivos y diferenciales,


identificacin bioqumica y confirmacin serolgica de los microorganismos. El

preenriquecimiento consta de enriquecer la muestra en un medio nutritivo no selectivo,


con el fin de restaurar las clulas de Salmonella que posiblemente se encuentren
daadas. En el enriquecimiento selectivo se utiliza un medio de cultivo que incrementa
las poblaciones de Salmonella e inhibe el crecimiento de otros microorganismos
presentes en la muestra, es decir, un medio de cultivo selectivo. En la seleccin en
medios slidos, se utilizan medios selectivos que restringen el crecimiento de otros
gneros diferentes a Salmonella y que permiten el reconocimiento visual de colonias
sospechosas. Posteriormente, en la identificacin bioqumica, se determinan los
cultivos de Salmonella y se eliminan falsos-positivos. Por ltimo, se realiza la tcnica
inmunolgica, serotipificacin, para la identificacin especfica de un microorganismo.
(UNAM, s.f.)
Cuestionario
1. Explique el objetivo y fundamento de cada una de las 4 etapas para el aislamiento
e identificacin del genero Salmonella.
Las etapas que comprenden el aislamiento e identificacion del gnero Salmonella
son las siguientes:

Preenriquecimiento: en este paso es donde la muestra es enriquecida en un


medio nutritivo no selectivo, que permite restaurar las clulas de Salmonella
daadas, logrando de esta manera una condicin fisiolgica estable.

Enriquecimiento selectivo: esta etapa se logra a partir de un medio de cultivo


que conjunte dos condiciones; primeramente se debe incrementar las
pobraciones de Salmonella y despus inhibir otros microorganismos presentes
en la muestra.

Aislamiento diferencial en medios slidos selectivos: esta etapa se deriva de la


anterior y se utilizan medios selectivos que restringen el crecimiento de otros
gneros diferentes a Salmonella, los cuales permitirn el reconocimiento visual
caracterstico de colonias sospechosas.

Identificacin bioqumica: esto permite la identificacin genrica de los cultivos


de Salmonella y la eliminacin de cultivos sospechosos falsos.
o Serotipificacin: tcnica inmunolgica (antgeno-anticuerpo) que permite la
identificacin especfica de un microorganismo. Permite tambin determinar
la prevalencia de una serovariedad en distintas zonas geogrficas. Es de

gran utilidad para el estudio de brotes y para concer la fuente de infeccin y


las vas de transmicin.
2. Con respecto al uso de pruebas rpidas para la identificacin de Salmonella,
explica:
a) Cul es la que ofrece un mayor ndice de confiabilidad?
ISO-GRID
Deteccin con sondas DNA
ELISA, Inminofluorescencia
Impedancia
b) Ventajas con respecto al mtodo convencional.
c) Desventajas con respecto al mtodo convencional.
d) Fundamento de la tcnica.
Referencias
UNAM, (s.f.). Mtodo para la determinacin de Salmonella spp. en alimentos.
Recuperado
en
lnea
el
15
de
noviembre
de
2015,
de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Pagogenosnorm.Salmonella_17364.p
df

Resultados de Laboratorio
1.
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4.
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8.

Microorganismo/s determinados.
Nombre de la tcnica/s
Muestra
Medio/s de cultivo
Temperatura y tiempo de incubacin
Caractersticas de cultivo
Resultados obtenidos con imgenes
Recuentos:
1) Rango de diluciones
2) Lecturas de los tubos positivos
3) Resultado
Interpretacin de resultados