Mtodo Isocrtico: Cuando, durante toda la separacin, se utiliza siempre el mismo solvente,

se denomina isocrtica, sin embargo es normal realizar un gradiente de composicin del

solvente a lo largo de la cromatografa para mejorar la eficiencia y acortar la duracin del
proceso. Estos gradientes de solvente tambin son realizados en forma automtica por las
bombas.
Mtodo de Gradiente de Elucin: Es un trmino que se utiliza para describir el proceso
mendiante el cual se cambia la composicin de la fase mvil. Pueden efectuarse de dos
maneras:

A baja presin

A alta presin

Cuando se desarrolla un anlisis usando el mtodo de gradiente se debe tener presente dos
objetivos:

Obtener la mejor resolucin de los componentes de la muestra en el menor tiempo

posible.

Asegurar alta precisin y exactitud.

Para obtener buenos resultados con el mtodo de gradiente debemos seguir cinco pasos
fundamentales:

Determinar la composicin inicial y final del solvente.

Ajustar el tiempo del gradiente.

Determinar la forma del gradiente (lineal, cncava o convexa).

Ajustar la velocidad del flujo para mejorar la resolucin.

Regresar a las condiciones iniciales la columna.

La bomba enva el solvente a travs de caos de dimetro pequeo, generalmente de acero

inoxidable, hacia la vlvula inyectora. Esta consiste en una vlvula de varias vas que permite
introducir en el flujo de solvente, la muestra contenida en un aro o loop de volumen calibrado.
Luego de que se produzca la separacin en la columna, los componentes de la mezcla pasan
por el detector. Este produce una seal elctrica proporcional a la cantidad de materia y esa
seal es enviada al registrador que realiza un grfico de intensidad en funcin del tiempo
(cromatograma). Idealmente, se trata de picos gaussianos y cada pico corresponde a un

componente de la muestra original. El integrador calcula adems el rea correspondiente a

cada pico, la cual es proporcional a la cantidad de sustancia.
Dado que los detectores de HPLC son no destructivos, es posible recuperar los productos que
salen de l. De esta manera, dependiendo del tamao del loop de inyeccin, de la columna, y
del tipo de bomba, es posible realizar adems de separaciones analticas, cromatografas
preparativas.
Criterios para la eleccin del solvente:

Disponible comercialmente

Precio

Pureza y Estabilidad. En la actualidad contamos con productos de calidad de pureza

cromatogrfica. Bajo contenido de impurezas.

Disolver la muestra

Misible con otros solventes para formar mezclas tiles

No degradar o disolver la fase estacionaria

Tener baja viscosidad para reducir las cadas de presin

Ser compatible con el detector utilizado. Transparencia ptica (cuando se usan

detectores UV)

Filtracin y Desgasificacin de solventes

Tema: Seleccin y uso de Solventes en cromatografa HPLC

Fecha: 30-Ago-2006 Fuente: QuimiNet

http://www.quiminet.com/articulos/seleccion-y-uso-de-solventes-encromatografia-hplc-14775.htm

Lmparas de deuterio e hidrgeno. La excitacin elctrica del deuterio o

hidrgeno a baja presin
(aproximadamente 0.2 a 0.5torr) produce un espectro continuo en la regin
ultravioleta. El mecanismo por el
cual se produce el espectro continuo requiere la formacin inicial
de una especie molecular excitada seguida de
la disociacin de la molcula excitada para dar dos especies atmicas ms un
fotn ultravioleta. Las reacciones

para el deuterio son

D2 + Ee
D2* D' + D'' + h
donde Ee
es la energa elctrica absorbida por la molcula y D2* es la molcula de deute
rio excitada. La energa
del proceso global puede representarse mediante la ecuacin
Ee
= ED2* = ED' + ED'' + h
Aqu, ED2* es la energa cuantizada fija de D2* mientras ED'
y ED'' son las energas cinticas de los dos tomos de
deuterio. La suma de las dos ltimas puede variar continuamente desde
cero hasta ED2*. Por ello, la energa y la
frecuencia del fotn tambin puede variar continuamente. Es decir, cuando las
energas cinticas son pequeas
h ser grande, y viceversa. La consecuencia es un verdadero espectro
continuo desde aproximadamente
160nm hasta el comienzo de la regin visible.
Las lmparas ms modernas de este tipo contienen deuterio y son de bajo
voltaje, en ellas se forma un arco
entre un filamento caliente recubierto de xido y un electrodo metlico. El
filamento caliente suministra
electrones para mantener una corriente continua cuando se aplica un potencial
de aprox. 40V CD; para
intensidades contantes es necesario una fuente de alimentacin estabilizada.
Una caracterstica importante de las lmparas de deuterio es que produce una
esfera de radiacin intensa algo
mas grande que la del hidrgeno entre los dos electrodos, lo cual intensifica el
brillo de tres a cinco veces, esto
justifica el extenso uso de las lmparas de deuterio. Ambas lmparas producen
un espectro continuo til para la

regin comprendida entre 160 y 360nm. A longitudes de onda ms largas

(>380nm), las lmparas producen
lneas de emisin que se superponen sobre el espectro continuo. Estas lneas
pueden ser un problema para
algunas aplicaciones (mediciones en el visible) pero resultan tiles para calibra
r los instrumentos.
Lmparas de filamento de wolframio o de filamento incandescente. La fuente
ms comn de radiacin visible y del
infrarrojo (350 a 2,500 nm) es la lmpara de filamento de wolframio. La
distribucin de energa de esta fuente
se aproxima a la del cuerpo negro y, por ello, depende de la temperatura. En
esas lmparas se calienta un
filamento del alambre hasta la incandescencia por medio de corriente elctrica.
El filamento se encuentra en un
bulbo de vidrio hermticamente sellado al
vaco o con gas inerte. Los filamentos generalmente se enrollan para
aumentar su emisividad, eficacia y luminancia media. Las lmparas
incandescentes son unidades robustas, de
bajo costo y lo suficientemente brillantes para casi todos los trabajos de
absorcin en las regiones visible y del
ultravioleta cercano.
Las lmparas de wolframio y halgeno representan una clase especial de
lmparas incandescentes que
contienen todo aadido a los gases normales de relleno. En la envolvente se
utiliza el cuarzo para tolerar las
altas temperaturas de operacin de la lmpara (2850 K). El yodo se combina
qumicamente en las paredes del
bulbo con el wolframio sublimado desde el filamento. El diyoduro de wolframio
(WI2) resultante regresa al
filamento caliente, en donde se descompone redepositando wolframio
elemental. El ciclo es continuamente
repetido manteniendo limpio el bulbo. Estas lmparas conservan ms del 90%
de su luz inicial a lo largo de su

vida til. La lmpara de wolframio emite mucha de su energa en el infrarrojo

cercano, con un mximo en
1000nm, y cae rpidamente en la regin ultravioleta a 1/100 de ese valor a
300nm. Slo 15% de la energa
radiante cae en la regin visible. A menudo se inserta un filtro endotrmico o
un espejo dicroico fro entre la
lmpara y el portamuestra para eliminar la radiacin infrarroja sin disminuir
notablemente la energa radiante
de menor longitud de onda. las lmparas incandescentes son fuentes muy
importantes para aplicaciones
espectromtricas debido a su excelente estabilidad, ms que debido a su radia
ncia espectral.
Fuente: D. A. Skoog, F. J. Holler, S. R. Crouch, Principios de anlisisinstrumental,
6ta edicin, Cengage Learning, Mxico, 2008.