UNIVERSIDAD NACIONAL TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ESCUELA DE SEGUNDA ESPECIALIDAD

ESPECIALIDAD EN
LABORATORIO DE ANALISIS CLINICO Y BIOLOGICOS

C I T O G E N E T I C A
LUIS RODRIGUEZ DELFIN, MSc. PhD.
Laboratorio de Biologa Molecular y Gentica
Facultad de Ciencias Biolgicas
Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo
lard_20@hotmail.com

TRUJILLO

CULTIVO DE LINFOCITOS
SOLUCIONES
Medio de cultivo
Colchicina al 1%
Solucin hipotnica a 37C:
1 parte de suero
9 partes de agua destilada
Solucin de Carnoy
3 partes de etanol
1 parte de acido actico

PROCEDIMIENTO:
Colocar 15-20 gotas de sangre en 6 ml de medio de cultivo.
Incubar a 37C por 72 horas
Agregar 4-5 gotas de colchicina al 1%
Dejar a 37C por 90 minutos
Centrifugar a 1500 rpm por 10 minutos
Retirar sobrenadante
Adicionar 7 - 10 mililitros de solucin hipotnica
Dejar a 37C por 25 minutos.
Centrifugar a 1500 rpm por 10 minutos.
Retirar sobrenadante.
Adicionar 6 a 7 mililitros de carnoy
Mantener refrigerado por 30 minutos
Centrifugar a 1500 rpm por 10
Retirar sobrenadante. Adicionar carnoy . Realizar goteo en portaobjeto helado.
Teir por 15 minutos en Giemsa.

CARIOTIPO CON BANDAS R

SOLUCIONES
STOCK DE SOLUCIN DE EARLE
Mezclar:
NaCl
KCl
NaH2PO4
MgSO4. 7H2O
Glucosa
Ca2Cl
Agua destilada

6.8 g
0.4 g
0.14 g
0.2 g
1.0 g
0.2 g
1L

Ajustar a pH 4.9-5.0 (con HCl 0.1 N)

PROCEDIMIENTO

Colocar las lminas en solucin de Earle por 40 - 45 minutos, en bao mara a 87C.
Lavar
Colorear con Giemsa por 10 minutos

BANDAS G
SOLUCIONES
Solucin de Tripsina al 1%:
22.5 ml de solucin KH2PO4 0.025M Ph 7.0
22.5 mL de solucin salina
5 ml de tripsina al 1%
Solucin salina fisiolgica
Giemsa al 4%
PROCEDIMIENTO:
Se coloca a bao mara (37 C) la solucin de tripsina al 1%
Se colocan las lminas en la solucin por 10 segundos (si las lminas preparadas son de menos
de una semana; a mayor tiempo de preparacin de lminas se da mayor tiempo en tripsina).
Se enjuaga en solucin salina.
Se tie con solucin de Giemsa entre 6 a 8 minutos.
Lavar con agua de cao.
Secar y observar.

BANDAS C
SOLUCIONES
SOLUCIN 2XSSC:
NaCl2
Citrato trisdico (C6H5Na3O3)
Agua destilada

8,75g
4.412g
500ml

SOLUCIN DE HIDRXIDO DE BARIO:

Hidrxido de Bario
4.75 g
Agua destilada
120 ml
SOLUCIN 0,2 N DE ACIDO CLORHDRICO
24ml de acido clorhdrico 1N (HCl)
96 ml de agua destilada
PROCEDIMIENTO

Colocar las lminas a temperatura ambiente, de preferencia del da anterior.

Colocar las lminas en 0.2N de HCl por 1 hora.
Lavar y dejar secar.
Colocar 20 a 30 segundos en solucin de hidrxido de Bario.
Lavar bien en agua destilada.
Colocar en solucin 2XSSC por una hora a 60C.
Lavar y colorear con solucin de Giemsa

CROMOSOMA 1 - 2

CROMOSOMA 3 - 4

CROMOSOMA 5 - 6

CROMOSOMA 7 - 8

CROMOSOMA 9 - 10

CROMOSOMA 11 - 12

CROMOSOMA 13 - 14

CROMOSOMA 15 - 16

CROMOSOMA 17 - 18

CROMOSOMA 17 - 18

CROMOSOMA 21 - 22

CROMOSOMA 17 - 18

ANALISIS
CONTAJE DE CROMOSOMAS

ANALISIS

ANALISIS