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masivamente, seran devorados a su vez por otros seres marinos, y de este modo
volveran a desaparecer. Sin embargo, los devoradores de petrleo de
Chakrabarty nunca se utilizaron en el medio ambiente, porque en aquel momento
no se permitir liberar bacterias manipuladas genticamente.
Fabricacin de un "supermicrobio" (superbug) que puede degradar las sustancias hidrocarbonadas pesadas del petrleo.
En primer lugar.se integr un plsmido que degrada el alcanfor (CAM) en una bacteria que ya contena un plsmido que
degrada el octano (OCT). Ambos plsmidos se fusionaran. De este modo, un plsmido codific enzimas para ambas
rutas de degradacin. Por el contrario, para los plsmidos del xilol (XYL) y la nafta lina (NAH) ocurri de otro modo. En
este caso, ambos plsmidos coexistan en una clula. Finalmente. Chakrabarty junt todos estos plsmidos en una cepa.
sta creci bien en crudo y utiliz alcanfor, xilol, octano y naftalina como fuente de hidrocarburos.
En la avera del petrolero Exxon Valdez, en 1989, frente a las costas de Alaska, se
aspir y se filtr la masa principal del petrleo espeso. Sin embargo, la capa
situada sobre las rocas y en la arena se degrad con bacterias cultivadas
"normales". Aadiendo "abonos" [fosfato y nitrato), el crecimiento de los microbios
mejor considerablemente. Hasta el momento no se permite nada ms.
Sin embargo, las espectaculares catstrofes de petroleros slo causan un
pequeo porcentaje de la contaminacin por el petrleo. Anualmente siguen
vertindose millones de toneladas de petrleo al mar, una cuarta parte de ellas
procedentes de la limpieza ilegal de los tanques vacos en mar abierto, y un tercio
de las aguas residuales que se echan a los ros. Los suelos contaminados con
petrleo (bajo las gasolineras, por ejemplo) son ms complicados: despus de la
reunficacin, en Alemania Oriental hubo un gran auge de la limpieza de los
suelos. Se infectan dos metros de profundidad de suelo con microbios especficos,
se airean y mezclan. A menudo, despus de dos semanas ya se ha eliminado el
90% de las sustancias txicas.
En 1980, el Tribunal Supremo estadounidense dio la razn a Chakrabarty en el
juicio Diamond contraChakrabarty 447 U.S. 303 (1980). En 1971 haba inscrito una
patente para un ser vivo y desde entonces haba estado pleiteando. Su cepa
bacteriana devoradora del petrleo fue el primer ser vivo "creado" de la historia
para el que se concedi una patente en Estados Unidos (Fig. 6,19). De este modo
se cre un precedente para la industria biotecnolgica.
Bases bioqumica de la biorremediacin del petrleo
Por lo tanto:
-
Las reacciones qumicas de las bacterias con el sustrato son mediadas por
enzimas Degradativas, estas le permiten utilizar compuestos orgnicos como
sustrato (alimento).
Los microorganismos no comen petrleo, slo degradan los hidrocarburos para los
cuales existe una ruta metablica, es decir, para los cuales existen las enzimas
necesarias para las reacciones de degradacin necesarias para las reacciones de
degradacin.
Slo cuando hay participacin de microrganismos en la degradacin se llama
biorremediacin, de lo contrario se trata de otra tcnica diferente.
La biorremediacin ocurre slo si: existen microorganismos degradadores, si los
sustratos son biodegradables, si hay nutrientes bsicos y si las condiciones
microambientales son favorables (pH, temperatura, humedad, oxgeno).
Las preparaciones comerciales no tienen las enzimas que llevan a cabo las
reacciones de degradacin de hidrocarburos
MICROORGANISMOS
PETRLEO
INVOLUCRADOS
EN
LA
EXPLORACIN
DEL
Anomalas de radiacin.
Anomalas geotermales e hidrolgicas.
Decoloracin de las capas rojas.
Anomalas geobotnicas.
Alteraciones acsticas, elctricas y
sedimentos.
magnticas
del
suelo y los
DE
PETRLEO
CON
EMPLEO
DE
resistente a 180 g / Lde cloruro de sodio. Esta cepa mostr elevada capacidad
para producir bioemulsificantes, aunque no creci en presencia de hidrocarburos
como fuente de carbono. La produccin de emulsificantes result ptima en
medio con extracto de levadura como fuente de carbono y nitrato de sodio como
fuente de nitrgeno. Estudios de laboratorio demostraron la recuperacin de
petrleo residual en 22 % cuando se emple un tratamiento con la cepa ACO1.
Por otra parte, experimentos en el laboratorio demostraron que el
surfactante producido por Bacillus subtilis20B removi el 30,22 % del petrleo
contenido en una columna empaquetada con arena y petrleo.
Esta bacteria mostr otras cualidades de inters para los procesos de RMP como
crecer a 55 C y tolerar 7 % de cloruro de sodio. La cepa produjo el
surfactante a partir de diversas fuentes de carbono: glucosa, alcohol e
hidrocarburos.
Bacillus amyloliquefaciens LP03, aislado de una muestra de suelo, produjo
un lipopptido con actividades surfactante y emulsificante. Se identific que el
lipopptido, de 1 022,6 Da de masa molecular, lo componen cuatro aminocidos:
glutamina (Glu), leucina (Leu), metionina (Met) y prolina (Pro), organizados en la
secuencia de siete aminocidos siguiente: Glu-LeuMet-Leu-Pro-Leu-Leu y por el
cido graso -hidroxi-C13.
El lipopptido identificado difiri de las surfactinas y se clasific como un nuevo
lipopptido: bamilomicina A.
En la purificacin del lipopptido se usaron mtodos de precipitacin cida,
extraccin por precipitacin en metanol, cromatografa en columna de gel slice y
cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC: High
Pressue Liquid
Cromatography), mientras que, en los anlisis de composicin molecular del
metabolito se utilizaron tcnicas analticas como la espectrometra de masas y
HPLC.25
Serratia marcescens MTCC 86 produjo un lpido con
elevada actividad
emulsificante durante su crecimiento en sucrosa. El lpido compuesto por unidades
de 3-(3-hidroxitetradecanoloxi) y 3-(3-hidroxihexadecanoloxi) result efectivo a
nivel de laboratorio, ya que removi el 90 % del crudo en una columna empacada
con arena y petrleo, hecho que demuestra la potencialidad del producto
microbiano en procesos de RMP. El producto tambin mostr efectividad al
remover petrleo impregnado en las paredes de contenedores de
almacenamiento.
Para los estudios de estructura molecular, se realizaron extracciones con acetona,
cloroformo y metanol y posteriormente, se aplicaron tcnicas analticas tales como
cromatografa en capa delgada, cromatografa gaseosa
acoplada
a
espectrometra de masas y espectroscopia infrarroja.
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11
v.
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13
La Lixiviacin Bacteriana, tambin conocida como Biolixiviacin, Biohidrometalurgia o Biooxidacin de Sulfuros, puede ser definida como un proceso
natural de disolucin que resulta de la accin de un grupo de bacterias principalmente del gnero Thiobacillus - con habilidad de oxidar minerales
sulfurados, permitiendo la liberacin de los valores metlicos contenidos en ellos.
Por mucho tiempo, se pens que la disolucin o lixiviacin de metales era un
proceso netamente qumico, mediado por agua y oxigeno atmosfrico. El
descubrimiento de bacterias acidfilas ferro- y sulfo-oxidantes ha sido primordial
en la definicin de la lixiviacin como un proceso catalizado biolgicamente.
En trminos ms globales, se puede sealar que la biolixiviacin es una
tecnologa que emplea bacterias especficas para lixiviar, o extraer, un metal de
valor como uranio, cobre, zinc, nquel y cobalto presente en las menas o en un
concentrado mineral. El producto final de la biolixiviacin es una solucin cida
que contiene el metal valor en su forma soluble. De otro lado, el trmino
biooxidacin es un utilizado para describir un proceso que emplea bacterias
paradegradar un sulfuro, usualmente pirita o arsenopirita, en la que el oro o la
plata, o ambos, se encuentran encapsulados.
Bacterias asociadas a la lixiviacin de minerales
Microrganismo
Thiobacillus
ferrooxidans
Thiobacillus
thiooxidans
Leptospirillum
ferrooxidans
Sulfolobus
Acidiphilium
cryptum
Th. intermedius
Th. napolitanus
Th. acidophilus
Th. thioparus
Thiobacillus TH2 y
TH3
Metallogenium sp.
Heterotrofos
Fuente
energtica
Fe+2 , U+4 , S0
pH
1.5
Temperat
ura
25 35
S0
2.0
25 35
Fe+2
1.5
25 35
S0, Fe+2, C
orgnico
C orgnico
2.0
> a 60
2.0
25 35
S0, S-2, C
orgnico
S0, S-2
S0, S-2
S0, S-2
Fe+2, S-2
2.5
30
2.8
3.0
3.5
6.0
30
Fe+2
C orgnico
4.5
50
25 40
Thiobacillus ferrooxidans:
Los microorganismos que son responsables de la disolucin de los metales a
partir de minerales son, principalmente, organismos quimiosintticos y autotrficos
pertenecientes al gnero Thiobacillus, sealada en un prrafo y tabla anterior, no
14
(3)
(4)
(5)
15
b) Lixiviacin Directa:
Las bacterias ferrooxidantes tambin pueden lixiviar sulfuros metlicos
directamente sin la participacin del sulfato frrico producido biolgicamente. El
proceso se describe en la siguiente reaccin:
MS + 2 O2 = MSO4
(6)
(7)
(8)
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18
19
Biorecuperacin de Metales
Una tarea importante de la hidrometalurgia es la recuperacin de los metales
presentes en las soluciones, as como el tratamiento de las aguas residuales de
las diferentes industrias, en cumplimiento de las rigurosas normas ambientales.
Existen muchos microorganismos con capacidad para adsorber o precipitar
metales. Algunas de las formas como los microbios recuperan los metales se
detallan a continuacin:
Precipitacin: La precipitacin de metales bajo la forma de sulfuros involucra el
empleo de bacterias sulfato-reductoras para producir H 2 S, que tiene la capacidad
de precipitar prcticamente la totalidad del metal contenido en una solucin.
Debemos hacer notar que el proceso se realiza en ausencia de oxigeno
(anaerobiosis) en contraposicin a la biooxidacin de sulfuros que requiere de
oxigeno (proceso aerbico).
Biosorcin: Las investigaciones sobre las biosorcin de metales a partir de
soluciones sealan que la habilidad de los microorganismos permitira recuperar
hasta el 100% de plomo, mercurio, zinc, cobre, nquel cobalto, etc., a partir de
soluciones diluidas. El empleo de hongos hace posible recuperar entre 96% a 98%
de oro y plata.
Tambin se ha demostrado que cepas de Thiobacillus son capaces de acumular
plata, lo que permitira recuperar este metal a partir de aguas residuales de la
industria fotogrfica. La biosorcin de metales conduce a la acumulacin de estos
en la biomasa. El mecanismo involucra a la pared celular. En los hongos, la
adsorcin de metales se encuentra localizada en las molculas de chitina y
chitosan. De otro lado, el cobre puede ser recuperado a partir de xidos, por
hongos, que producen cidos orgnicos que forman complejos con el cobre.
Reduccin: La reduccin microbial de metales implica una disminucin en la
valencia del metal. En algunos casos, la reduccin es parcial (el metal reducido
an exhibe una carga neta), mientras que en otros el ion metlico es reducido a su
estado libre o metlico.
Microorganismo
Hongos, Levaduras y
Bacterias
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Chitina y Chitosan
Perspectivas futuras
Son numerosas las posibilidades que se presentan para la aplicacin de los
procesos biotecnolgicos en el beneficio de los minerales, algunos de los cuales
researemos brevemente en las siguientes lneas.
Los microorganismos pueden ser utilizados como agentes floculantes o como
colectores en los procesos de flotacin de minerales. La capacidad de muchos
microorganismos de poder adherirse a superficies slidas gracias a la interaccin
existente entre la carga de la pared celular y las condiciones hidrofobicas,
modificando la superficie del mineral permitiendo su flotacin y floculacin
(empleado en la separacin de las fases slida y lquida de una pulpa). Por
ejemplo, se ha reporta que una bacteria hidrofobica es un excelente floculante
para un nmero de sistemas minerales. Los minerales que han podido se
floculados con esta organismo incluye a la hematita, ciertos lodos de fosfatos,
floculacin selectiva de carbn en menas piritosas, entre otras. Igualmente, este
microorganismo es buen colector de hematita, y puede ser empleado en
reemplazo del colector qumico.
Otra rea de enorme inters es el empleo de microorganismos hetertrofos,
generalmente parte de la flora acompaante de Thiobacillus, como herramienta
para la lixiviacin de sistemas no sulfurados. Tal es el caso del empleo de un
esquema de lixiviacin bacterial heterotrfico para menas laterticas de baja ley y
que permitira incrementar enormemente las reservas econmicamente
explotables de nquel. Tambin el empleo de heterotrofos en la lixiviacin de
menas de manganeso, plata y fosfato podra incrementar el nmero de reservas
para estos commodities importantes. Su empleo radica en la enorme ventaja que
significa su rpida velocidad de crecimiento, en comparacin con los auttrofos.
La biodegradacin de compuestos txicos orgnicos representa otro rubro
importante de aplicacin de los procesos biolgicos. Debemos recordar que una
amplia variedad de sustancias, txicas y no txicas, pueden ser descargadas al
medio ambiente como consecuencia de las operaciones mineras. Muchos de
estos compuestos son productos qumicos complejos empleados en flotacin y en
procesos hidrometalurgicos. Otros incluyen a productos derivados del petrleo
empleados de manera diversa en las operaciones mineras. Se reporta la
capacidad de especies de Klebsiella y Pseudomonas en la degradacin de
reactivos de flotacin.
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