UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
CATEDRA DE:
TCNICAS HISTOLGICAS

DOCENTE:
LIC. IVN PEAFIEL
TEMA:
FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL,
VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE FIJACIN, USO DE
ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS, ACCIN EN
LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE
LABORATORIO DE ANATOMIA PATOLGICA.

GRUPO N 3

TERCER SEMESTRE

PERIODO ACADMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016

RIOBAMBA ECUADOR

GRUPO N-3

INTEGRANTES:
N-

APELLIDOS Y NOMBRES

Collaguazo Enrquez Erika Gabriela

Molina Ortiz Jhonnatan Paul

Valarezo Flores Stefanye Anah

TEMA:

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE

PENETRACIN, VELOCIDAD DE FIJACIN, USO DE ACUERDO AL
ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS, ACCIN EN LOS TEJIDOS Y
TIEMPO DE EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE
ANATOMIA PATOLGICA.

PARTICIPACIN
N-

25%

50%

75%

100%

Observacin

100%

Trabajo correctamente, y
colaboro en todo lo
necesario.

100%

Colaboro con todas las

necesidades requeridas,
para la elaboracin del
presente trabajo

100%

Su colaboracin fue clave

para la correcta
elaboracin del trabajo.

INTRODUCCIN
Grupo N-3

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Cal. Docente

El Laboratorio de Anatoma Patolgica es un rea donde se trabaja como mucha

precaucin y sobre todo sin cometer errores ya que estos conllevaran un resultado que
perjudicara al paciente y en si al mismo profesional.
En

el

rea

de

anatoma

patolgica

se

subdivide

en

fases

que

son:

La fase pre analtica-analtica-post analtica.

Dentro de la fase analtica se encuentra la sub rea fijacin la cual indicaremos cuales
son los tipos de fijadores con o sin formol con sus respectivas caractersticas utilizados
en distintas muestras de rganos.
Antes de la fijacin tisular debemos de obtener la muestra. La extraccin de esta
constituye la primera parte del estudio histolgico; es el Antomo Patlogo el que se
pone en contacto con el rgano que se vaya a estudiar. A ser posible se debe efectuar la
extraccin tomando un fragmento de la lesin y una toma de los tejidos subyacentes. Su
grosor no debe sobrepasar los 5 mm.
La fijacin tisular consiste en interrumpir los procesos degradativos que a parecen tras
la muerte celular es decir evitar la autolisis, tratando de conservar la morfologa y
composicin de los tejidos lo ms prxima a la normalidad. La fijacin debe ser
inmediata (dentro del minuto que sigue a la extraccin del tejido).
La fijacin proporciona una imagen esttica:

Imagen real: es la imagen que tena el tejido cuando estaba vivo-

Imagen equivalente: es el que se obtiene despus de la manipulacin y

comprende la fijacin, inclusin, corte y coloracin.

Se distinguen dos tipos de fijadores:

La fijacin inicial o primaria: realizada de forma inmediata sobre el tejido

fresco.

La refijacion o fijacin secundaria: se realiza con un segundo fijador para

algunas estructuras especiales o simplemente para intensificar la fijacin inicial.

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OBJETIVO GENERAL:
Dar a conocer los tipos de fijadores utilizados en distintos rganos dentro del
laboratorio de anatoma patolgica

OBJETIVO ESPECFICOS:
Conocer e identificar las caractersticas de los fijadores con o sin formol.
Identificar las ventajas y desventajas que producen estos fijadores.
Dar a conocer el uso de los fijadores de acuerdo al espcimen.
Conocer el tiempo de exposicin del personal de anatoma patolgica a estos
fijadores.

DESARROLLO
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La Fijacin
Los fijadores adems de conservar intacta la estructura durante un espacio de tiempo
ms o menos largo, paralizan todos los procesos orgnicos.
La fijacin ideal se realiza entre 0C y 4C porque aunque el fro retarda la accin del
fijador al contraer la pieza, tambin paraliza la autolisis del tejido que ser ms o menos
rpida dependiendo por ejemplo los tejidos ricos en enzimas digestivas como el
pncreas o aquellos que tienen gran cantidad de grmenes sufran la autolisis con mayor
intensidad.
Las soluciones fijadoras tienen por objeto precipitar las protenas, aumentar la
consistencia de los tejidos, inactivar las enzimas proteolticas e inhibir el crecimiento
bacteriano y por lo tanto, preservar la constitucin qumica y la morfologa de los
componentes titulares.
Cuando las piezas quirrgicas son pequeas o las muestras son obtenidas por aspiracin
y de no existir indicaciones de realizar improntas, frotis para citologa, estudios
inmunohistoqumicos o de microscopa electrnica que requieran fijacin especial se
colocarn inmediatamente en formol buferado al 10% en una relacin de 10 a 1
fijador/muestra. Para una mejor fijacin las piezas no deben exceder de un espesor de 3
mm y un tamao de 3 x 2 cm
Principios generales de la fijacin.
No existe un mtodo universal de fijacin, por lo que un agente fijador para un
tejido no tiene porque ser adecuado para otro.
No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido, porque fijacin no
equivale a conservacin tisular.
Un defecto en la fijacin nunca puede ser corregido.
Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con grandes defectos
de fijacin.

FIJADOR IDEAL CARACTERSTICAS:

Prevenir la autlisis
Preparar el tejido para el procesado posterior
Prevenir el dao osmtico
Preparar al tejido para la tincin posterior
Endurecer el tejido para facilitar su fcil seccin
Prevenir al tejido de retraccin y de rotura
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Hacer que los componentes tisulares resistan la extraccin por el agua y los
solventes orgnicos
Preservar el tejido en un estado similar al estado vivo.

CRITERIOS PARA OBTENER UNA BUENA FIJACIN.

a) Eleccin del fijador
La solucin fijadora a utilizar depende del estudio que se quiere realizar. Para las
preparaciones de tejidos y rganos, en las que interesan un estudio topogrfico de los
mismos, deben usarse fijadores con un buen poder de penetracin y de difusin. Para
estos casos se recomienda utilizar los lquidos de Zenker, Boin o Helly: En caso
contrario se emplear la solucin de formol al 10% 15% que permite obtener
resultados satisfactorios. Lquido considerado como el fijador universal pues facilita
el empleo posterior de cualquier otro fijador (postfijacin) capaz de complementar su
accin. se emplear la solucin de formol al 10% 15% que permite obtener resultados
satisfactorios. Lquido considerado como el fijador universal pues facilita el empleo
posterior de cualquier otro fijador (postfijacin) capaz de complementar su accin.

b) Tamao de las muestras.

El tamao y grosor de las muestras deben ser pequeas y delgadas, de 1cm2 a 2 cm2 y
con un espesor de 2 mm a 5 mm, especialmente si se emplean fijadores con escaso
poder de penetracin y de difusin. c) Volumen del fijador. Una proporcin que es
necesario emplear ser de 1 a 20 (muestra fijador). Ser la ms adecuada para
garantizar una buena fijacin

d) Tiempo de fijacin.
El tiempo en la fijacin es importante en dos aspectos.
I.

El intervalo que media entre la interrupcin del aporte sanguneo y la inmersin

de las muestras en la solucin fijadora. Lo deseable es que las muestras se fijen
inmediatamente despus de obtenidas mediante una biopsia o que la necropsia
se efecte al poco tiempo de producida la muerte. Mientras ms largo es este
lapso, los procesos autolticos que sufran los tejidos sern ms evidentes.

II.

Debe tenerse en cuenta el tiempo que permanecern las muestras sumergidas

en los fijadores. Este tiempo vara con relacin al tipo de fijador que se utiliza;
al tamao y la naturaleza de la muestra y la temperatura de fijacin. Por lo tanto
los lapsos de fijacin varan en rangos muy amplios. En cualquier circunstancia,

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siempre deben respetarse los tiempos recomendados para cada tipo de fijador
para garantizar la conservacin de una buena estructura celular y tisular de los
tejidos.

e) Temperatura de la fijacin.
Es recomendable efectuar la fijacin a bajas temperaturas ( 4o C.) dentro de un
refrigerador y con la solucin fijadora enfriada previamente. Este procedimiento
retardar el tiempo de fijacin pero disminuir de manera notable la autlisis de los
tejidos.

f) Almacenamiento de las muestras.

En ciertos casos los tejidos fijados no necesitan ser procesados inmediatamente para
aplicarles otros pasos de la tcnica histolgica. Por lo tanto es conveniente almacenar y
conservar los tejidos fijados para un uso posterior. Despus de eliminar el fijador
mediante un lavado, se guardan en una solucin de alcohol al 70%. As los tejidos
pueden guardarse por un tiempo bastante largo sin que sufran modificaciones
morfolgicas notorias.

g) Lavado de las muestras fijadas.

Al concluir la fijacin, el fijador debe ser eliminado de las muestras. Para tal fin se
procede al lavado de los tejidos mediante agua o alcohol. Se evita, as, que los tejidos se
endurezcan

demasiado

que

ciertos

componentes

del

fijador

introduzcan

modificaciones en los tejidos e impidan una adecuada obtencin de secciones delgadas

o la coloracin correcta de sus componentes celulares.
TIPOS DE FIJADORES
Clases de fijadores segn su mecanismo de accin
FSICOS
Congelacin: Se utiliza como mtodo para la fijacin el enfriamiento por congelacin
del tejido es el mtodo de eleccin para realizar estudios morfolgicos o funcionales en
los que se requiere conservar intacta la estructura antgena del tejido o su contenido
enzimtico. La clave para una correcta fijacin por congelacin del tejido es que su
realizacin sea instantnea porque un enfriamiento lento provoca la formacin de micro
cristales titulares de hielo que pueden agregarse con el paso del tiempo produciendo
roturas titulares que dificulten el diagnostico-

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El procedimiento idneo para fijar tejidos por congelacin consiste en utilizar

ISOPENTANO a menos de 50C como agente de congelacin y realizar una
fragmentacin suficiente de la muestra que se vaya a congelar.
Normalmente se preparan bloques de no ms de 3 cm. cuadrados de superficie y 3 mm
de espesor de modo que el proceso de congelacin instantnea no requiera ms de 10
segundos. El mantenimiento continuo de isopentano debe realizarse en un congelador
programado a -70C para que quede compensado la subida inmediata de la temperatura
que se produce al extraer el lquido del congelador.
Al enfriar tanto no actan bacterias ni enzimas y el tejido se endurece para cortar estos
tejidos utilizamos el micrtomo de congelacin o un aparato ms evolucionado o
criostato el cual tiene como ventajas que la temperatura se mantiene ms baja y se
pueden realizar cortes ms finos entre 2 y 15 micras.
Criodesecacin o filiacin: Consiste en someter al tejido a dos procesos el primero es
la fijacin instantnea por congelacin en Nitrgeno lquido y el segundo desecacin
por sublimacin directa del agua confiada a vapor en una bomba de vaco es un proceso
complicado y costoso pero tiene una ventaja muy importante y es que al eliminar
totalmente el agua tisular, paraliza la autolisis y produce una conservacin indefinida,
adems evita que se produzcan enlaces qumicos entre el tejido y el fijador, conservando
asila estructura antignica tisular.
Criosustitucin: es la sustitucin lenta y progresiva del agua congelada de un tejido por
un lquido fijador que en ocasiones puede actuar simultneamente como medio de
inclusin. Tras la congelacin instantnea del tejido con nitrgeno liquido o isopentano
a -50C se coloca el tejido congelado en el medio de sustitucin, este medio est
formado por una mezcla de alcohol etlico, acetona y propiln- glicol. Enfriado a -40C,
el intercambio del agua tisular por el lquido de sustitucin, se realiza dentro de un
congelador y debe procurarse que la temperatura no disminuya del punto de congelacin
del lquido de sustitucin.
QUMICOS
FIJADORES

QUE

ACTAN

POR

RETICULARIZACIN

PROTENAS

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DE

LAS

El proceso que denominamos reticularizacin de las protenas sobreviene cuando la

desnaturalizacin de stas molculas de se produce no por precipitacin, sino porque el
agente que provoca el fenmeno induce la rotura masiva de los puentes de Hidrgeno
determinantes de la estructura helicoidal de las molculas proteicas, con la formacin
posterior de una malla reticular polipeptdica por asociacin qumica entre los grupos
activos desenmascarados por el lquido fijador.
Entre los principales fijadores tenemos:
Formaldehdo o formol: Es gaseoso en estado puro, se
vuelve liquido a 21C, es txico y con un olor
caracterstico. Se disuelve fcilmente en agua y en ste
estado en concentraciones entre 35-40% y estabilizado
con metanol se denomina formalina pura o formol con
la accin del fro la formalina pura tiende a precipitar y
esta situacin suele ser reversible aadiendo unas gotas
de NaOH y concentrando la mezcla. Como agente fijador el formaldehdo se emplea a
una concentracin del 4% pero como se parte de una solucin de formalina sta
concentracin se obtiene diluyendo una parte de sta de la formalina en 9 de agua en
formacin salina o tampn.
Ventajas: Es el fijador ms barato que existe por lo tanto es de eleccin para los
trabajos de rutina en Anatoma patolgica.
Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la
estructura tisular.
Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un
medio ptimo para conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas.
Provoca escasa retraccin tisular
Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del
sublimado
Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la
coloracin tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas
quirrgicas.

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 Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea

como agente de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de
cualquier impregnacin argntica.
El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes
modificando la temperatura, as a temperatura ambiente se consigue un fijador
completa a partir de las 36 horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a 55C en solo 3
horas. Por este motivo la formalina es un fijador de eleccin cuando se emplean
hornos de microondas en tcnicas de histotecnologa.
Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente
en Anatoma patolgica.
Inconvenientes:
Produce abundantes vapores de carcter irritante sobre la conjuntiva y mucosa
nasal.
Por accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en
cido frmico y sta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la
cromatina nuclear por eso con el paso del tiempo los ncleos celulares adoptan
un aspecto fantasma para evitar este inconveniente el formol debe guardarse en
frascos opacos o emplearse en forma de solucin neutra o tamponado.
Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que
contienen hierro y los derivados de la bilirrubina, a stos ltimos les da una
coloracin verdosa.
Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que se convierte en cido
frmico confiere a las piezas un tinte grisceo y en tejidos que tienen mucha
sangre da origen a un pigmento formlico que es negro o pardo oscuro que
precipita en aglomeraciones irregulares sobre estructuras preexistentes. Este
pigmento se puede eliminar sumergiendo los cortes en alcohol absoluto saturado
con acido pcrico compuesta por 10, 12 gramos de pcrico en alcohol etlico al
95-100% durante 5 minutos. O bien podemos sumergirlo en alcohol amonacal
que es el de 1 a 5 partes de hidrxido amnico en 95 a 99 de alcohol etlico al
70%. En este caso se tratan los cortes durante 15 minutos, seguidos de dos baos
de agua destilada y despus otro de alcohol al 70% de 5 minutos de duracin
cada uno.

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Soluciones fijadoras simples que contienen formol: hay 4 tipos:

Formol salino: Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el empleo de
disoluciones de formaldehdo en agua destilada y se prepara disolviendo 9 gramos de
cloruro sdico en 1000 mililitros de formalina al 10%.
Formalina neutra: Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 10% una
pequea cantidad de carbonato clcico insoluble que queda depositado en el fondo del
recipiente neutraliza esta sal el exceso de acido frmico que se produce y aunque puede
utilizarse todava para la formacin de tejidos en la prctica ha sido desplazada por las
soluciones tamponadas.
Formol tamponado: Es la solucin ms empleada hoy en da para prevenir el choque
osmtico que provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de
pigmento formlico que ocurre a un pH inferior a 6. Se prepara de la siguiente manera,
como amortiguador se emplea el tapn fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la
siguiente frmula:
FORMALINA PURA..100.0 ml.
FOSFATO SDICO MONOBSICO.4.0 gr.
FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**)...6.5 gr.
AGUA DESTILADA....900.0 gr.

Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas

tcnicas de impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico
glacial a 9 partes de formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2.
* 4gr: no tiene agua, cogemos 3.5gramos si no pone nada en el bote cogemos 4 gramos.
Formol clcico o solucin de Baker: Se emplea como fijador de eleccin en algunas
tcnicas de histoenzimologa y se prepara aadiendo cloruro clcico al 1% a una
solucin de formalina neutra o tamponada al 10%
LQUIDOS FIJADORES SIMPLES
Dependiendo del mecanismo de actuacin sobre los tejidos podemos clasificar los
lquidos fijos simples en 4 apartados:

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Fijadores por deshidratacin tisular: Alcohol etlico y acetona. Son sustancias

altamente higroscpicas es decir absorben agua actan eliminando tanto el agua libre
como el agua ligada a las protenas de forma que estas ltimas precipitan y disminuyen
su solubilidad. Este cambio proteico es conocido con el nombre de desnaturalizacin y
provoca importantes alteraciones en la organizacin y estructura celular y tisular, por
tanto estos agentes fijadores inducen grandes cambios en la morfologa orgnica sobre
todo si se emplean como agentes fijadores aislados. Alguno de ellos como por ejemplo
la acetona, altera poco la estructura antignica tisular y ello se debe a que estos
fenomenitos inducidos son reversibles en parte tras la rehidratacin. El fundamento
molecular de la accin deshidratante de los alcoholes y la acetona, est en la
competicin que establecen con las protenas por las molculas de agua cuando se
encuentra en soluciones concentrada, los

principales agentes fijadores por

deshidratacin son alcoholes metlico y etlico, acetona y cloroformo.

Los nicos que se utilizan como fijadores simples son el alcohol etlico y la acetona.
El alcohol metlico se emplea exclusivamente para la fijacin de extensiones
hematolgicas.
Alcohol etlico: lquido claro, transparente o incoloro, voltil, inflamable y de olor
agradable. En el comercio se puede encontrar puro en cuyo caso tiene fuertes
gravmenes tributarios para evitar su utilizacin clandestina para evitar la fabricacin de
bebidas alcohlicas, o bien lo tenemos desnaturalizado diluido al 90 o 70 %. Como
fijador nico utilizaremos alcohol a unas concentraciones entre el 70 y 90% y se obtiene
cogiendo de 70-90 ml de alcohol puro y se lleva hasta 100 con agua destilada. La
fijacin mas potente va a corresponder a las soluciones ms concentradas pero a altas
concentraciones la capa externa del tejido se endurece en exceso, lo que impide la
penetracin del fijador a la parte interna de la pieza.
El tiempo de fijacin correspondiente a una pieza de 5mm de espesor es dos a cuatro
horas renovando unas 3 veces el lquido.
Es un fijador que preserva el glucgeno y la actividad de ciertas
enzimas titulares, fija los pigmentos y se emplea en las
extensiones citolgicas. Como altera escasamente la estructura

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antignica de los tejidos es un buen agente fijador para inmuno histoqumica.

Entre las ventajas del alcohol estn:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo
Posee una gran velocidad de penetracin
Precipita muy rpidamente las protenas y el glucgeno lo que unido a la
anterior propiedad aporta extraordinariamente el tiempo de fijacin es un notable
agente bactericida y por tanto un buen conservante.
Entre sus inconvenientes tenemos los siguientes:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo: es incompatible con muchos fijadores:
KCr2 o el OsO3 lo que limita su participacin en muchas mezclas fijadoras.
No fija adecuadamente la cromatina porque disuelve los cidos nucledos y
adems disuelve parcialmente los lpidos.
Endurece y contrae excesivamente los tejidos.
A medida que realiza la fijacin se va diluyendo al incorporar el agua que extrae
de los tejidos por lo cual pierde actividad progresivamente
Prepara mas la tincin porque carece de efecto mordiente
Puede dar origen a fenmenos de desplazamiento de sustancias.
Acetona: es un lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor dulzor. Des
hidrata rpidamente y considerable el tejido por lo que es poco utilizable. El tiempo de
fijacin nunca exceder de dos horas y en piezas delgadas son recomendables 20
minutos. Su uso como fijador est prcticamente limitado a los mtodos e inmuno
histoqumicos porque conserva muy bien la estructura antignica y la actividad
enzimtica, a veces tambin se utiliza en microscopia electrnica para la fijacin del
material que se va a incluir en resinas acrlicas. Se emplea generalmente sin diluir a 4C,
entre sus inconvenientes mas notables provocan una gran contraccin tisular y por tanto
grandes artefactos que suelen hacer intil su empleo en el microscopio ptico
convencional otro de sus inconvenientes es que debido a su rapidez de accin y a su
capacidad de endurecimiento es imprescindible controlar el tiempo de fijacin.
Todos los fijadores de este grupo son de carcter cido y se emplean formando parte de
mezclas fijadores. Poseen adems una gran velocidad d penetracin en los tejidos y
algn poder de descalificacin.

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cido actico: Lquido transparente y fuerte olor avinagrado. Sus vapores son muy
inflamables en estado puro se denomina: c. Actico glacial. Cuando la temperatura
ambiente disminuye o aumenta, disminuye por debajo de los 10C tiende a solidificarse
en forma de agujas cristalizadas muy custicas. Se utiliza diluido en concentraciones
entre el 1 y 5 % formando parte de mezclas fijadores o de soluciones decalcificantes.
Entre las ventajas que tiene es el fijador ideal para ncleo
protenas y acido nucleicos y otra es precipitar protenas
sin sustraer el agua de los tejidos porque no es giroscpico
y produce cierto edema intersticial que compensa la
excesiva refraccin pausado por otros agentes fijadores.
Entre los inconvenientes es mal fijador de citoplasma y
membranas celular y destruye mitocondrias.
cido tricloroactico: Son cristales incoloros custicos, solubles en agua en solucin al
5 % fija los nervios de 8 a 20 horas. Nunca se lavan el tejido despus de usar ste cido
porque el edema que produce es excesivo y de lugar a muchos artefactos. Al 2.5 % se
usa mezclado con otras sustancias.
cido sulfosaliclico: Se usa al 5% es buen fijador porque permite casi todas las
coloraciones endurece ptimamente los tejidos pero no los contrae despus hay que
lavar el tejido con agua pero la fijacin debe hacerse en la oscuridad de 6 a 24 horas.
cido crmico: Se emplea en disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras,
se utiliza bastante en microscopia electrnica.
Entre las ventajas que tiene:
Excelente fijador estructural y acta como mordiente en tinciones que emplean
colorantes bsicos, entre los colorantes que tiene es que incompatible con
fijadores habituales como el formol y alcohol.
Escasa velocidad de penetracin en trozos pequeos tarde varios das en penetrar
en la pieza
Impregna de coloracin verdosa los tejidos por lo que hay que lavarlos
abundantemente en agua destilada tras el uso de ese acido, los tejidos quedan
excesivamente blandos.
FIJADORES POR FORMACIN DE SALES CON LOS TEJIDOS

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En estos casos el fijador es un catin metlico fundamentalmente cromo o mercurio o

un derivado orgnico como el cido pcrico que son susceptibles de formar con los
tejidos sales denominados protenatos metlicos o picratos por lo general todos los
agentes d este grupo poseen gran velocidad de penetracin y fijacin porque la
formacin de la sal, se produce instantneamente.
Cloruro de mercurio o sublimado: es un polvo cristalino blanco y venenoso y hay que
usarlo bajo campana se usa en soluciones del 5-6%. El efecto fijador se consigue por la
combinacin de los iones de Mercurio con los grupos cidos de las protenas
especialmente con los de carcter carboxlico, hidroxlico, sulfidrilo y con los residuos
fosfricos de las nucleoprotenas.
Entre sus ventajas tenemos:
Es un excelente fijador de los caracteres morfolgicos celulares por lo que es el
de eleccin para patologas hematopoyticas y renales, donde el diagnostico se
apoya

normalmente

en la observacin de

finos detallesnucleares

citoplasmticos.
Es un excelente mordiente por lo que produce intensa y brillante coloracin
nuclear y citoplasmtica.
Inconvenientes:
No es un buen bactericida por lo que no es un buen lquido conservante tiene
escasa capacidad de penetracin por lo que requiere fraccionamiento cuidadoso
del tejido.
Si se prolonga demasiado tiempo de actuacin contrae y endurece los tejidos
hasta dificultar el corte en el micrtomo, por eso nunca deben sobrepasarse las 4
horas de fijacin. Tras haber cumplido esta y comn paso previo a la inclusin,
los tejidos pueden conservarse indefinidamente en alcohol etlico al 70%.
Dicromato Potsico: es un polvo amarillento que reacciona con las protenas para
formar cromatos, se utiliza en disolucin acuosa al 1-2%, fija las protenas por lo que
las mitocondrias quedan perfectamente conversadas y da un aspecto homogneo al
ncleo despus de la fijacin del dicromato deben lavarse abundantemente con agua.

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Ventajas:
Es que tiene un fuerte efecto mordiente excelente
fijador para lapidar complejos

para mielina,

mitocondrias y aparato de Golgi que los contienen

en abundancia. Su utilizacin es indispensable para
tcnicas de impregnacin argntica de las clulas del
sistema nervioso central.
Inconvenientes:
El primero de ellos es incompatible con alcohol y formol, posee baja velocidad
de penetracin y endurece escasamente los tejidos lo que puede dificultar el
corte en el microtomo.
Los tejidos han de ser lavados despus de fijados en una solucin salina o
tamponada para evitar el depsito de pigmento verde que puede producirse en el
curso de la inclusin o coloracin posterior.
cido Pcrico: En el comercio se encuentra en forma de agujas cristalizadas de color
amarillo muy txicas de carcter explosivo.
Acta coagulando las protenas a travs de la formacin de picratos que las confieren
gran apetencia por colorantes cidos. Se utiliza en solucin saturada al 2%, es un
excelente fijador estructural que conserva adecuadamente la composicin proteica de
los tejidos. Controlando adecuadamente el tiempo de fijacin produce una ptima
contraccin de los tejidos que favorece su procesamiento histolgico.
Aunque tiene penetracin algo lenta posee buena velocidad de fijacin no disuelve el
glicgeno ni los lpidos es el fijador de eleccin para estas
sustancias.
Posee una leve accin decalcificante por lo cual puede
emplearse como fijador par a las muestras de tejido seo.
Inconvenientes:
En estado puro el cido pcrico es explosivo si se somete a color hay que
mantenerlo alejado de fuentes de color.

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 Deben dejarse evaporar sus disoluciones para evitar la formacin de

precipitados. Si se prolonga el efecto de fijacin que es de 4-18 horas
dependiendo de tamao pieza aparecen inconvenientes por una excesiva
retraccin tisular. Sobre todo si la pieza ha sido inadecuadamente lavado en agua
y luego deshidratada.
Tie los tejidos de color amarillo y si no se elimina completamente antes de la
inclusin en parafina provoca un continuo deterioro de la estructura tisular que
pueda hacer imposible su estudio histopatolgico algunas semanas despus del
procesamiento.
La eliminacin se realiza mediante lavados sucesivos en alcohol etlico al 7080% o en una solucin saturada de LiCO4 en alcohol de 70 es incompatible en
la inclusin en celoidina.
Acetato de uranilo: Es una sal soluble en agua, cristalizado de
color amarillo, se descompone con la luz, no endurece los tejidos,
se usa en soluciones al 2-3% normalmente mezclado con OsO3 y
despus de la fijacin hay que lavar el tejido abundantemente con
agua.
MEZCLAS FIJADORAS
Tenemos dos tipos:
Glutaraldehido: lquido oleoso en comercios
se encuentra en disolucin al 25%. Mecanismo
de actuacin es el mismo que el formaldehdo
y como fijador se emplea en concentraciones
entre el 1 y el 3%.
Ventajas:
Es el primer fijador de eleccin para microscopa electrnica porque tienen una
excepcional capacidad para preservar la morfologa celular.
Se emplea para fijacin de animales por perfusin en patologa experimental.
Inconvenientes:

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 Tiene velocidad de penetracin muy baja por lo que los fragmentos de tejido no
pueden tener volumen superior a unos pocos milmetros cbicos.
Posee gran capacidad de retraccin y endurecimiento tisular que impide
prolongar el tiempo de fijacin por encima de las 3 horas.
Tiene osmolaridad muy baja por lo que hay que emplearlo disuelta en soluciones
amortiguadoras.
Tetraxido de Osmio: OsO4: En el comercio se encuentra en forma de cristales
amarillentos solubles en agua, muy voltiles y txicas. Acta igual que el formol y se
prepara como agente fijador al 1% en tampn fosfato.

Ventajas:
Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa electrnica
especficamente como 2 fijador.
Inconvenientes
Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo en
recipientes opacos y oscuridad.
Aunque sea soluble en agua es difcil preparar disoluciones acuosas con las que
se trabaja
Muy txico y en estado cristalino emite vapores que irritan la crnea mucosa
respiratoria. Su manipulacin es obligatoria en una campana de extraccin de
gases para prevenir la aparicin de queratitis.
Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben
tener muy poco volumen.
Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar
abundantemente los tejidos tras utilizarlo.
La combinacin de diversos fijadores simples formando soluciones, complejas llamadas
mezclas fijadoras pretende sumar las ventajas de cada una de ellas amortiguando sus
inconvenientes. Desde un punto de vista general se clasifican en dos grupos:

Grupo N-3

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AQUELLAS QUE CONTIENEN FORMOL

Liquido de Bouin: Solucin muy usada como
alternativo a la formalina cuando queremos fijar ciertos
Tejidos como piel rganos endocrinos, testculos y
tejido embrionario en general. Sin embargo no est
fijado para la fijacin de biopsias renales sobre los
cuales provoca una severa distorsin.
Se prepara de la siguiente manera:
SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO
(C. PCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA)..750.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.50.0 ml.
PH. FINAL2.2
TIEMPO DE FIJACIN..2 a 24 horas

Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del lquido

de Bouin especialmente indicado para la fijacin de los
cilindros de biopsia de mdula sea cuando no es posible
controlar el tiempo de fijacin de la muestra en ste lquido,
la conservacin, puede incluso conservar las 48 horas sin
que se produzca excesivo endurecimiento.
Se prepara de la siguiente manera:

ACETATO NEUTRO DE COBRE.2.5 gr.

C. PCRICO..4.0 gr.

FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml.

AGUA DESTILADA..100.0 ml.

Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego
se aade el cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido actico glacial.

Grupo N-3

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Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijacin

oscila entre 48-72 horas y sigue las mismas precauciones que el lquido de Bouin
Bouin alcohlico (fijador de Dubosq-Brasil): Es una alternativa de lquido de Bouin
cuando la pieza que se debe fijar es relativamente voluminosa porque posee una
velocidad de penetracin mucho ms elevada. Se utiliza tambin cuando se precisa una
fijacin especfica de sustancias hidrosolubles como el glucgeno ya que evita su
disolucin.
Se prepara de la siguiente manera:
ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml.
C. PCRICO0.5 gr.
FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml.
Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en
torno a 5 milmetros es de 2 a 3 horas.
Liquido de Gendre: Es una variacin que est especialmente diseada para la fijacin
del glucgeno y pigmentos derivados de la hemoglobina. Se prepara por:
SOLUCIN SATRUADA DE C. PCRICO
EN ALCOHOL ETLICO AL 70%.....................................80.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...15.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.7.5 ml.
El tiempo de fijacin oscila entre 1 y 4 horas. Tras acabar el proceso debe realizarse
sucesivamente 2 lavados cortos en etanol al 80, 95 y 100
Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico
con la adicin de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para
fabricar los fijadores de Orth y de Zenker. Lo que llamamos solucin madre. Est
compuesta de:
DICROMATO POTASICO2.5gr.
SULFATO SDICO..1.0 gr.
AGUA DESTILADA 100.0 ml.

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Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar abundantemente en

agua corriente durante unas horas.
Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de
tejido nervios. Se prepara de la siguiente manera:
Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.
Solucin de trabajo: en el momento de su uso se mezclan:
SOLUCIN STOCK..90.0 ml.
FORMULINA CONCENTRADA.10.0 ml.
El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de fijacin los
tejidos han de ser lavados abundantemente en agua y almacenados en alcohol etlico al
70%
Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly): Ambas mezclas son en esencia
casi idnticas. La denominacin B5 corresponde en realidad a una modificacin de la de
Zenker.
La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico. La mayor
utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, de
hecho la fijacin en una mezcla que contenga sublimado es hoy da prcticamente
imprescindible para el diagnstico morfolgico en las patologas del sistema linfoide y
hematopoytico. Adems estas soluciones B5 zenker formol son los fijadores de
eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo y para fibrina.
Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor
conservacin de la cromatina nuclear y de la estructura antignica tisular.
Solucin de 35:
*Solucin stock de B5: Esta mezcla es estable durante bastante tiempo pero concentrado
en frasco opaco y oscuridad.
CLORURO MERCRICO... 12.0 gr.
ACETATO SDICO....2.5 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P.200 ml.
Solucin de trabajo de B5: Esta solucin es inestable debido a que el formaldehdo
reduce el sublimado a cloruro mercurioso y mercurio metlico que se depositan en
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forma de un precipitado blanco grisceo, por este motivo y por el elevado ndice de
endurecimiento que posee el sublimado, el tiempo de fijacin no debe superar las 4
horas. Adems el espesor mximo de las muestras no debe superar los 4 mm debido al
escaso poder de penetracin de la mezcla fijadora. Debido a la aparicin de precipitados
mercricos sobre los tejidos las secciones histolgicas antes de ser coloreados. Han de
ser sometidas a un tratamiento especfico mediante soluciones que eliminan estos
depsitos. Tras la fijacin los tejidos se pueden conservar indefinidamente en alcohol
etlico al 70-80%
SOLUCIN STOCK DE B520.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA .2.0 ml.
Solucin de Zenker-Formol Eliminacin del pigmento mercrico:
*Solucin stock de Zenker:
CLORURO MERCRICO5gr.
DICROMATO POTSICO...2.5 gr.
-SULFATO SDICO 1 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P. ....100.0 ml.
* Solucin de trabajo: en el momento de su uso mezclamos:
SOLUCIN STOCK DE ZENKER..95 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...5 ml.
Tanto para la solucin almacenada como para la de trabajo deben guardarse las mismas
precauciones que para la de B5
Eliminacin del pigmento mercrico o deszenkerizacin:
Se realiza tratando las secciones histolgicas antes de su coloracin con soluciones
yodadas y utilizamos:
*Solucin de LUGOL:
YODURO POTSICO..2gr.
CRISTALES DE YODO ..1gr.
ALCOHOL ETLICO 70-80%................................................100 ml.
*Solucin de tiosulfato sdico:

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 TIOSULFATO SDICO..5gr.
AGUA DESTILADA...100ml.
Despus de la desparafinacin hay que tratar los cortes durante diez minutos con la
solucin yodada a continuacin lavar bien en agua destilada despus decolorar durante
dos minutos en la solucin en agua corriente durante 10 minutos antes de realizar la
coloracin.
AQUELLAS QUE NO CONTIENEN FORMOL
Lquido de Zenker: Trata de combinar los efectos
favorables del sublimado y del dicromato potsico. En la
prctica habitual ha sido sustituido por B5. Su empleo ha
quedado prcticamente restringido al proceso de
refinacin-decalcificacin a que son sometidas las
biopsias de mdula sea cuando se realiza una fijacin
inicial con B5.
Se prepara de la siguiente manera.
SOLUCIN STOCK DE ZENKER95.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.. 5.0 ml.
El cido actico reacciona con el dicromato y hace que la solucin se oscurezca
progresivamente, por lo que debe recomponerse antes de su uso.
El tiempo de fijacin puede ser ms prolongada que con la solucin de b5 porque el
cido actico que contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben
sobrepasar las 48 horas. Tras la fijacin el material debe ser tratado con sulfato sdico al
5% durante 1-2 horas.
Liquido de Carnoy: Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para
los hidratos de carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su
accin fijadora es extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin
embargo produce una excesiva retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos
as como una pobre conservacin estructural del ADN. Est compuesta por:
ETANOL ABOSLUTO..60.0 ml.
CLOROFORMO.30.0 ml.

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 C. ACTICO GLACIAL..10.0 ml.

El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse
directamente a alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al
prolongar demasiado la deshidratacin en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el
etanol por metanol en la composicin de lquido fijador, que adems provoca menor
retraccin tisular, y para conservar la pieza se deposita en alcohol etlico absoluto.
Lavado postfijacin.
Es el aclarado que se realiza despus del proceso de fijacin para eliminar los residuos
del agente fijador, con el fin de limitar el tiempo de contacto entre el fijador y el tejido o
impedir el contacto del fijador con los medios de inclusin utilizados, para proseguir el
tratamiento de la muestra, a veces algunos colorantes alteran su efecto si la pieza
contiene restos de determinados fijadores, como es el caso por ejemplo del cido
pcrico. No todos los fijadores deben lavarse igual:
Las piezas fijadoras en formalina se lavan con agua prolongadamente.
Fijadas por cido pcrico hay que introducir las piezas hasta quitar color
amarillo.
Fijadas por tricloroactico hay que introducirlas en alcohol de 90%.
Conservacin de tejidos.
Cuando se practica un estudio histolgico, solo se incluyen una pequea porcin del
material remitido para el anlisis. El resto se guarda de reserva para estudios
complementarios. Casi nunca es posible conservar el tejido en el mismo lquido
utilizado para la fijacin.
La solucin conservante ms indicada en la mayor parte de los casos es el alcohol
etlico al 70% en l adems de iniciarse la deshidratacin, el tejido una vez fijado puede
conservarse durante meses sin apenas sufrir cambios, como alternativa ms simple y
siempre

que

no

se

desee

preservar

el

tejido

para

posteriores

estudios

inmunohistoqumicos, pueden usarse como conservante una solucin de formalina

neutra o tamponada al 10%.
Cuando lo que se produce exclusivamente es derramar la intrusin del tejido en parafina
sobre todo para pequeas muestras delicadas se puede realizar la deshidratacin

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completa en alcoholes crecientes y conservarlos en butanol que permite una

conservacin indefinida y mejora la textura tisular.
Cuando se deseen conservar rganos completos procedentes de necropsias podemos
utilizar las soluciones de JORES.
JORES I:
SULFATO SDICO.22 gr.
SULFATO POTSICO..1 gr.
CLORURO SDICO..9 gr.
BICARBONATO SDICO..18 gr.
FORMOL 10%.............................................................................................50 ml.
SOLUCION ACUOSA SATURADA DE HIDRATO DE CLORAL.50 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P.1000 ml.
JORES II:
ACETATO POTSICO300 gr.
GLICERINA.600 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P. ..1000 ml.
En recipiente bien cerrado se conserva hasta aos.
Resultados de la fijacin y su interpretacin.
Durante la fijacin se producen procesos que modifican la estructura tisular; se
producen desgarros en tejidos que siendo de distinta estructura estn en contacto, por
ejemplo la muscular y la submucosa y al exponerlos a cambios bruscos, como tienen
distintos contenidos, en agua se contraen ms que otros. Tambin se producen grietas
por la misma causa que los desgarros, pero son pequeas aberturas que pueden dar lugar
a error porque parecen naturales, son muy difciles de evitar y son ms frecuentes
cuando la fijacin se hace en tejidos que ya han comenzado su descomposicin.
Estas deformaciones de los tejidos que no corresponden con la realidad y son
producidas por la agresividad de los fijadores se denominan artefactos y varan de un
fijador a otro debido a las caractersticas propias de cada uno.

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CONCLUSIONES

Se determin que el correcto conocimiento de los fijadores con o sin formol

ayudara a un procedimiento de fijacin en distintas muestras de rganos.

El conocer las ventajas y desventajas que producen estos fijadores ayudara a

tener las debidas precauciones al momento de utilizados en muestras.

El conocimiento adecuado de la composicin de los fijadores ayudara a

identificar la capacidad de fijacin de estos en distintas muestras.

Se concluy que se debe tener en cuenta el tiempo de exposicin del personal

del Laboratorio de Anatoma Patolgica ante los fijadores ya que son txicos y
esto puede ser perjudicial para la salud del personal que labora en esta rea.

RECOMENDACIONES

Debe tenerse en cuenta el tiempo especfico de fijacin de acuerdo al fijador que

estemos usando, para evitar se dae la muestra.

El lquido fijador debe ser colocado con rapidez en la muestra.

Deber elegirse el fijador ms conveniente de acuerdo a la muestra que

tengamos.

Es recomendable efectuar la fijacin a bajas temperaturas.

Despus de terminado el proceso de fijacin, se deber lavar la muestra,

evitando as que los tejidos se endurezcan.

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BIBLIOGRAFA
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