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Prctica No 6
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Tincin de Gram
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INTRODUCCIN
La tincin de Gram, tambin conocida como coloracin de Gram, es una tcnica
de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiolgicos de
las bacterias. Fue diseada por Christian Gram, un cientfico dans, en el ao
1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible
diferenciar diferentes grupos de bacterias para as poder estudiarlas y
clasificarlas. La prueba result todo un xito y pronto se convirti en una tcnica
muy til no solo para el estudio de las bacterias, sino tambin para poder
identificarlas rpidamente en una infeccin y seleccionar el antibitico ms
adecuado para tratarla.
La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de
cualquier origen que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los
colorantes tien la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos,
se realiza un lavado del colorante. Despus de eso puede que el colorante
permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso
permanecera el color morado, y se tratara de bacterias Gram positivas y, en el
segundo, la pared tendra un color rosado, y seran Gram negativas.
La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no
tienen pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se podrn identificar, al
igual que los virus. En esos casos la tincin no colorear ningn germen. Otro
aspecto negativo de la prueba es que no puede identificar el tipo exacto de
bacteria responsable de la infeccin. Para ello es necesario realizar un cultivo
microbiolgico que se acompaa siempre de un antibiograma para estudiar de
forma exacta el antibitico ms efectivo.
Materiales y reactivos
Material
Microscopio.
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Portaobjetos y cubreobjetos.
Asa bacteriolgica.
Mechero.
Reactivos
Colorantes de Gram.
Cultivo de la prctica anterior.
Aceite de inmersin.
Metodologa
Preparacin del portaobjeto
Preparacin de la muestra
demasiadas clulas.
Desecacin de la muestra al aire o con un calentamiento suave
Fijacin: adhesin de las bacterias a la superficie del portaobjetos:
Ayudarse de unas pinzas para pasar la cara inferior del portaobjetos por
la llama del mechero. Son suficientes dos o tres pases rpidos.
Tincin de Gram
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PASOS
Colorante
GRANPOSITIVAS
GRAMNEGATIVAS
principal Violeta
Violeta
Violeta
Violeta
cristal violeta
Mordiente: lugol
Decolorante:
alcohol Violeta
Transparente
cetona
Colorante de contraste: Violeta
rojo
safranina
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CUESTIONARIO.
1. Por qu es importante fijar la flama?
Por qu lo que esta operacin pretende es que los microorganismos se
adhieran al portaobjetos por coagulacin de sus protenas plasmticas
mediante calor.
2. Investiga cules son las estructuras celulares o molculas responsables de la
tincin simple realizada. Da ejemplos de otros colorantes que podran utilizarse.
Las estructuras responsables de la tincin simple son: Cloroplastos colorantes:
Clorofila a y c, Carotenos, Xantfilas, (fucoxantina), Ficobilinas
Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tien
con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de
lactofenol).
3. Qu es el aceite de inmersin? Por qu se utiliza?
La funcin del aceite de inmersin es restringir el movimiento de la muestra,
adems de evitar el rozamiento entre el cubreobjetos y el objetivo,
generalmente se utiliza cuando se observa con el objetivo de 100X. otra funcin
del aceite de inmersin es evitar que la luz se desvi, al contrario lo que se
pretende es que la luz llegue concentrada hacia la muestra.
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CONCLUSIONES:
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REFERENCIAS:
Microbiologa clnica aplicada; Pedro Garca Martos, Mara Teresa Fernndez
del Barrio, et al.,1996.
Pruebas mdicas tincin de Gram
(http://www.webconsultas.com/pruebas-
medicas/tincion-de-gram-13399)
http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/tinciones/metodos_tinci
on#__doku_preparacion_del_portaobjetos
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK8385/
http://amrita.vlab.co.in/?sub=3&brch=73&sim=208&cnt=2
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