BIOMASA MICROBIANA

MICROBIOLOGIA ACUTICA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

KARIM MANOSALVA MEDINA

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NDICE
P
g.
1. Introduccin.. 6
2. Las bacterias y su papel en el medio acutico.... 7
3. Picoplancton autotrfico y heterotrfico...9
4. Composicin cuantitativa y cualitativa de las comunidades
microbianas en el ocano......10
5. Biomasa microbiana...11
6. Mtodos de cuantificacin para la determinacin de
Biomasa.....11
6.1.

Mtodo Nefelomtrico..12

6.2.

Mtodo de Cuenta en Placa.13

6.3.

Filtracin de membrana....16

6.4.

Mtodo del NMP..17

6.5.

Mtodo Turbidimtricos...18

6.6.

Otros tipos de cuantificacin..19

7. Ensayos Bioqumicos....20
7.1.

Pared Celular...21

7.2.

Clorofila y pigmentos fotosintticos....22

7.3.

Protenas y Lpidos...23

8. Enfoque fisiolgico de la Determinacin de biomasa..24

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9. La Biomasa y Clculo de volumen de cada

grupo morfolgico..24
10. Carbono Celular promedio.....27
11.Importancia de microorganismos acuticos y de
la biomasa....28
12.

Bibliografa...29

INTRODUCCIN
Aunque la primera bacteria fue descubierta en el agua en 1676,
posteriormente

la

bacteriologa

se

desarroll

gracias

las

necesidades de la medicina y del conocimiento de que muchas

enfermedades eran distribuidas por el agua. Esto dio base a
investigaciones generales de las aguas continentales, descubrindose
que las aguas servidas, provenientes de ciudades y hospitales, eran
fuente de grandes cantidades de bacterias, siendo la primera etapa a
alcanzar, el control de la de la polucin bacteriana del agua. Se
iniciaron as investigaciones sobre sistemtica, fisiologa y ecologa de
las

distintas

especies.

Tambin

recibi

un

gran

impulso

la

bacteriologa del agua a partir de la bacteriologa del suelo y

veterinaria

debido

al

inters

que

suscitara

el

estudio

de

enfermedades de las plantas y animales.

Algunos mtodos de la medicina y la agricultura comenzaron a
aplicarse al medio acutico, aunque surgieron algunos problemas
como por ejemplo los inherentes a los ciclos del azufre, del fsforo,

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del carbono, etc. De esta manera la bacteriologa del agua debi
desarrollarse de forma autnoma, con sus propios problemas y
mtodos de investigacin.
El agua como medio, tiene caractersticas que le son propias, a la vez
que muy variables (pH, T, concentracin qumica, etc.), por otra
parte el principal problema de la bacteriologa del agua no concierne
a las bacterias patgenas sino a las bacterias heterotrficas nativas,
son ellas las que descomponen la materia orgnica (protenas, lpidos,
carbohidratos), y dan destino a los productos de tales composiciones
las cuales fueron y son reconocidas como eslabones bsicos de la
cadena alimentaria, por tanto fue muy importante el desarrollo de
mtodos para determinar el nmero de bacterias y su biomasa
siendo sta la real estimacin de su biovolumen.

BIOMASA MICROBIANA
1. LAS BACTERIAS Y SU PAPEL EN EL MEDIO ACUTICO
Las bacterias heterotrficas son muy importantes en los ciclos de
nutrientes del agua, tal comportamiento fue confirmado en forma
evidente a fines de la dcada del sesenta y principios del setenta
utilizando tcnicas de trazadores radioactivos en base a C14
Pudo comprobarse que los organismos ms pequeos asimilaban la
mayor cantidad de sustancia orgnica disuelta, la materia orgnica
particulada solamente es utilizada por las bacterias si previamente es
hidrolizada a pequeas molculas, lo que las obligar a permanecer
cerca de las algas o bien adheridas a las mismas tratando de utilizar
sus exudados o la materia producida por su lisis, este conocimiento
fue mejorado
biomasa,
adecuado

gracias al desarrollo de mtodos de cuantificacin y

como

colorantes

microscopa

de

fluorescentes
fluorescencia

instrumental

por

luz

ptico

reflejada

permitiendo estimar el biovolumen y por lo tanto la biomasa de las

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poblaciones bacterianas en presencia de otros microorganismos. De
aqu surge la necesidad de conocer la forma en que se establece la
relacin

entre

bacterias

y otros

componentes

del

ecosistema

acutico.
Los nutrientes inorgnicos disueltos (NID), la materia orgnica
disuelta (MOD) y la materia orgnica particulada (MOP), pueden sufrir
modificaciones, como resultado de la accin bacteriana. El fitoplacton
puede proveer a las bacterias, en forma directa de materia orgnica a
travs de la excrecin de la desintegracin de clulas muertas, por
otro lado las bacterias, en su conocido papel mineralizador, provee al
fitoplancton con
Nutrientes que pueden ser suministrados en cantidades limitativas.
En tal caso el crecimiento fitoplanctonico puede ser directamente
dependiente de la actividad bacteriana.
Tambin son importantes las relaciones entre bacterias y zooplancton,
se sabe que es considerable la prdida de carbono disuelto derivado
de la predacin del zooplancton, ste es utilizado por las bacterias
que tambin colonizan la materia fecal excretada,

por otro lado

puede servir como recurso alimentario nico y adicional de muchos

protozoos y metazoos
La MOD a veces en muy bajas concentraciones en el agua se perdera
al no ser consumida por la mayora de habitantes de los ecosistemas
pero las bacterias estn capacitadas para utilizarlas y volverlas a la
cadena trfica como MOP (las propias bacterias).
Otras tcnicas utilizadas para determinar bacterias en el agua es la
Epifluorescencia: donde es utilizado el fluorocromo como: naranja de
acridina y filtro de membrana negro.

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Imagen de bacteria en divisin

coloreada con naranja de acridina,
aumentada 125

LOS PROCARIOTES SON UBICUOS Y COLONIZAN TODO TIPO DE

AMBIENTES DONDE LA VIDA SEA POSIBLE:

2. PICOPLANCTON AUTOTRFICO Y HETEROTRFICO

BACTERIOPLANCTON
PICOCIANOBACTERIAS

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PICOEUCARIOTAS

Las bacterias juegan un rol

importantsimo en el nivel biogeoqumico del
ciclo del carbono, representan la mayor parte de
biomasa del planeta, consumen entre el 30-40%
de la proporcin fitoplanctnica, responsables
de la mayora de la respiracin en el ocano, las
bacteria acuticas son unos de los principales
reservorios vivientes de C,N,P y Fe
Las bacterias fotosnteticas en el ocano producen aproximadamente
la mitad de O2

anual liberado

estos microorganismos marinos

representan la mitad de produccin primaria del planeta por ejemplo:

Synechococcus

103-105 ml

Prochlorococcus

104-105 ml

3. COMPOSICIN CUANTITATIVA Y CUALITATIVA DE LAS

COMUNIDADES MICROBIANAS EN EL OCENO
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Ms de un 99 % de las poblaciones naturales microbianas marinas
estn representadas con formas de bacterias pequeas de formas
cocoides , son estrictamente oligocarboflicas por tanto no crecen en
medios nutritivos utilizados comnmente para los microorganismos
de ambientes terrestres, altamente diversas desde el punto de vista
taxnomico y metablico
Uno de los aspectos ms discutidos en la actualidad por los ecolgos
microbianos marinos es lo referente a las bacterias no cultibables. Es
reconocido que slo una parte de las bacterias marinas han sido
cultivadas. El resto las llamdas no cultibables han sido detectadas e
identificadas mediante el desarrollo de tcnicas moleculares, se dice
que el bacterioplacnton se puede agrupar en :
Bacterias

hetertrofas

cultibables,

bacterias

hetrotrofas

no

cultibables y fotoauttrofas que se desarrollan en las zonas de

suficiente iluminacin.
La microbiota planctnica en aguas oligotrficas y mesotroficas
existen cocos pequeos, bacilos cortos y formas bacilares curvadas,
entre 0.3 y 0.8 m.
En ecosistemas eutrficos las poblaciones son menos diversas y estn
compuestas principalmente por formas bacilares grandes que viven
librevemente, las cuales descomponen sustancias orgnicas .
Su clasificacin ha sido motivo de grandes discusiones, se siguieron
acractersticas como obtencin de energa, utilizacin de carbono
orgnico, carcteristicas morfolgicas y fisiolgicas los esqumas
utilizados son: Torry Researcher Station por Sewhan y Col (1960) y
Yoshimisu y Col (1980) an son tiles para clasificar bacterias marinas
y tambin existen otros modos y esquemas de clasificacin.

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4. BIOMASA MICROBIANA
La biomasa microbiana es una variable ecolgica importante; ya
que se puede expresar como la medicin de la cantidad de
bacterias en un volumen especfico de agua, sedimento , suelo.
Representa la cantidad de enrega almacenadapor un segmento
particular de la comunidad biolgica. Las mediciones de la
biomasa se emplean para determinar la produccin de una
poblacin y la transferencia de energa entre los diferentes niveles
trficos del ecosistema.
Biomasa significa Masa de bacteria viva y puede expresarse en
unidades de peso (gramos) o unidades de enrega (caloras o joul).
Por desgracia, las mediciones directas de la biomasa como
las que se realizan por filtracin o determinacin del peso
seco o mediante la centrifugacin y medicin del volumen
celular, que se practican en cultivos puros, casi nunca son
aplicables a muestras ambientales.
Estas muestras suelen medir partculas minerales y detrticas y
biomasa no microbiana conjuntamente con los microorganismos y
no permiten discriminar

entre los niveles trficos, es decir

productores y consumidores. La determinacin de la biomasa

microbiana suele ser imprecisa por este motivo.
4.1. Mtodos Cuantitativos para la determiancin de la
Biomasa
El crecimiento de poblaciones se mide estimando los cambios en el
nmero de clulas, en la cantidad de algn componente de las
mismas (por ejemplo, protena) o en el peso total seco de las
clulas. Existen varios mtodos de contar el nmero de clulas o
de

determinar

adecuadamente

la
para

masa

celular

diferentes

situaciones.

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(biomasa

organismos

microbiana),
o

diferentes

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La determinacin cuantitativa es la parte central o medular del
proceso de estandarizacin de suspensiones bacterianas con fines
de diagnstico o de experimentacin, cual sea el que se desea
practicar.

Los mtodos cuantitativos para una poblacin de bacterias son:

a. Mtodo Nefelomtrico.
b. Mtodo de Cuenta en Placa.
c. Mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).
d. Mtodo Espectofotomtrico.
a. Mtodo Nefelomtrico
La estandarizacin turbidimtrica se hace manifiesta con el
Nefelmetro de Mc Farland, el cual es un conjunto de 10 tubos de
dilucin

todos

iguales,

con

tapn

de

jebe,

selladas;

que

contemplan en suspensin dos soluciones:

Cloruro de Bario (BaCl2) al 1%: Colocar en el 1 tubo 0.1 ml de
BaCl2 y luego incrementar en 0.1 ml la cantidad del reactivo en los
tubos siguientes de tal manera que el ltimo tubo sea de 10 ml.
cido sulfrico (H2SO4) al 1%: Agregar este reactivo a cada tubo en
cantidad suficiente hasta que el volumen final en cada tubo sea de
10 ml.
Los tubos se deben cerrar hermticamente para prevenir la
contaminacin y la evaporacin. Esto permite tener una mezcla
homognea con grnulos precipitantes de color blanco lechoso
cuya densidad asemeja al nmero bacterias o microorganismos en
suspensin.

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La densidad de la suspensin se incrementar a mayor nmero de
tubos,

dicha

opacidad

corresponder

aproximadamente

al

siguiente nmero de microorganismos en suspensin:

Solucin

Solucin

N de bacterias en

de BaCl2

de H2SO4

de

suspensin/ ml

al 1%
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0

al 1%
9.9
9.8
9.7
9.6
9.5
9.4
9.3
9.2
9.1
9.0

Tubo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

3x108
6x108
9x108
1.2x109
1.5x109
1.8x109
2.1x109
2.4x109
2.7x109
3.0x109

El mtodo no es del 100% exacto, se sabe que consiste en adecuar

el tubo con el cultivo en medio lquido y la turbidez de este se
debe comparar con los tubos del nefelmetro de Mc Farland y as
obtendremos la cantidad de microorganismos en suspensin. Los
estndares ms usados para trabajos experimentales son los tubos
1, 2, 3 y el 4; de los cuales el que se recomienda en diseos
experimentales es el tubo N 03 por dar valor estndar y por su
relativa proximidad con el nmero de microorganismos capaces de
causar septicemia y muerte en un vertebrado experimental.
b. Mtodo de Cuenta en Placa
Recuento en placa o recuento de colonias, este mtodo es muy
utilizado para el recuento de clulas viables, una clula viable se

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define como aquella que es capaz de dividirse y dar lugar a una
descendencia. En este procedimiento se supone que cada clula
viable puede formar una colonia.

Hay dos maneras de realizar un recuento en placa para viables:

b.1. El mtodo de extensin en placa
En este mtodo un cierto volumen de cultivo diluido, que no suele
ser superior a 0.1 ml, se extiende sobre la superficie de una placa
con medio slido utilizando el asa de Drigalsky estril. La placa se
incuba despus hasta que aparecen las colonias y se cuenta su
nmero. Es importante que la superficie del medio est seca de
modo que el lquido de la muestra se absorba. No se suele usar
volmenes mayores de 0.1 ml porque el exceso de lquido no se
absorbe y origina problemas en el recuento al favorecer la
extensin y mezcla de colonias.
b.2.

El

mtodo

de

vertido

en

placa

(siembra

en

profundidad)
En este mtodo se pipetea un volumen conocido (normalmente
0.1-1.0 ml) de cultivo en una placa Petri estril sobre la que se
aade el medio con agar fundido y se mezcla todo con suaves
movimientos de la placa sobre la superficie de la mesa antes de
dejar que se solidifique. Como la muestra se mezcla con el medio
fundido, se pueden usar volmenes de inculo mayores que en el
mtodo de recuento por extensin; sin embrago con este mtodo
el organismo que se cuenta debe ser capaz de resistir la
temperatura del agar fundido a 45C.

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BIOMASA MICROBIANA

Mtodos para el recuento en placa. En cada caso la

muestra se diluye normalmente antes de sembrar.

En los dos mtodos sealados es importante que el nmero de

colonias que aparezcan en las placas no sea demasiado grande,
pues algunas colonias se podran fusionar dando estimaciones
errneas. Tambin es importante que le nmero de colonias no sea
demasiado bajo para que el clculo sea significativo. Por ejemplo,
pueden obtenerse recuentos bajos sino se disgregan los grupos de
clulas y los microorganismos no quedan bien dispersos. Ya que no
es posible estar absolutamente seguros de que cada colonia
proviene de una clula individual, los resultados suelen expresarse
como unidades formadoras de colonias (UFC) y no como
nmero de microorganismos. Los recuentos tambin sern bajos si
el medio slido empleado no permite el crecimiento de todos los
microorganismos viables presentes. Adems el medio slido
caliente empleado para la siembra en profundidad puede daar o
destruir las clulas sensibles; por eso la siembra por extensin a
veces da recuentos ms altos que la siembra en profundidad.
Para obtener el nmero apropiado de colonias casi siempre se
diluye la muestra. Como raramente se sabe de antemano el

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nmero de clulas viables, normalmente se hace ms de una
dilucin. Lo ms frecuente es realizar diluciones decimales de la
muestra, por ejemplo para hacer una dilucin de 10 -1 se mezclan
0.5 ml de la muestra con 4.5 ml de diluyente o 1 ml de la muestra
con 9 ml del diluyente.

Otro mtodo comn de siembra en placa es por filtracin de

membrana. El filtro es colocado sobre un medio slido o sobre una
esponja empapada en medio lquido y es incubado hasta que las
clulas dan lugar a colonias separadas. El recuento de colonias da
el nmero de microorganismos de la muestra filtrada y pueden
usarse

medios

especiales

para

seleccionar

microorganismos

especficos. Esta tcnica es especialmente til para analizar la

pureza del agua.
Tcnica

de

Filtracin

en

membrana.

Se

emplean

membranas con poros de tamao diferente segn los

microorganismos que se desea retener. El tiempo de
incubacin

de

la

membrana

tambin

microorganismo y el medio de cultivo.

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vara

segn

el

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Colonias en los filtros de membrana. Muestras filtradas,

cultivadas

en

diferentes

medios.

(a)

Medio

nutriente

estndar, para recuento total de bacterias. Un indicador da

a las colonias un color rojo para facilitar el recuento. (b)
Medio para coliformes fecales, que da lugar a colonias
azules. (c) Agar wort (mosto de cerveza), para el cultivo
de levaduras y mohos.

Las tcnicas de siembra en placa son simples, sensibles y muy

utilizadas para el recuento de microorganismos viables en
muestras de alimentos, agua y suelo. Sin embargo, pueden
presentar

algunos

problemas

que

dan

lugar

recuentos

imprecisos.
c. Mtodo del Nmero Ms Probable (NMP)
Este nmero es calculado a partir de la observacin del
crecimiento, tanto con la aparicin de turbidez como con

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la

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formacin de gas, en cultivos en caldo duplicados, inoculados con
porciones de 1ml de diluciones decimales de la muestra.
Las cifras que representan resultados positivos con crecimiento en
tres

diluciones

sucesivas,

suelen

denominarse

nmero

significativo, por ejemplo, si tenemos dos tubos positivos en la

muestra directa, uno en la dilucin 10 -1 y otro en la 10-2 se obtiene
el nmero y se coteja con la tabla de Nmero Ms Probable con lo
que resulta un nmero significativo que es 210. El mtodo est
basado en series de diluciones y clculo estadstico del nmero de
bacterias presentes en las diluciones ms altas.
Este mtodo permite diagnosticar el nmero de coliformes totales
de una muestra, esta tcnica se realiza en Caldo Laurel Sulfato
Triptosa incubndolo a 35C, se observa la produccin de gas
(campana de Durham) en caldo lactosa bilis verde BRILLA; aqu
contabilizaremos a posteriori, como los microorganismos bajo la
tcnica anteriormente descrita.
Algunas de las ventajas del NMP son:

La capacidad de estimar tamaos poblacionales basados en

atributos relacionados a un proceso (selectividad); por
ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de
organismos

que

pueden

nodular

leguminosas

en

una

muestra de suelo usando el mtodo de infeccin de plantas.

Provee una recuperacin uniforme de las poblaciones

microbianas de suelos diversificados.

Determina slo organismos vivos y activos metablicamente.

Suele ser ms rpido e igual de confiable que los mtodos

tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre
otros.

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BIOMASA MICROBIANA

d. Mtodos Turbidimtricos
Un mtodo muy rpido y til de obtener estimaciones del nmero de
clulas son las medidas de turbidez (medida indirecta del crecimiento
microbiano). Una suspensin celular aparece turbia a la vista porque
las clulas dispersan la luz que atraviesa la suspensin. Cuantas ms
clulas estn presentes, mayor ser la luz dispersada y por tanto
mayor la turbidez.

Se trata del mtodo ms habitual para el

seguimiento del crecimiento de un cultivo bacteriano. La medicin de

alcuotas o muestras del cultivo a lo largo del tiempo, permite
desarrollar curvas de crecimiento de la poblacin bacteriana. Ello
permitir, a su vez, la comparacin de tasas de crecimiento en
diferentes condiciones, el establecimiento de las condiciones ptimas,
etc.

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BIOMASA MICROBIANA

La turbidez puede medirse con aparatos como el fotmetro o

espectofotmetro que hacen pasar la luz a travs de suspensiones
celulares y detectan la cantidad de luz emergente no dispersada.
El grado de dispersin ser proporcional a la concentracin de
clulas presentes. Podemos medir la cantidad de luz que pasa a
travs de esa dilucin de partculas o cultivo y mediante una
calibracin

saber

el

nmero

de

aproximadamente.
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partculas

de

la

dilucin

BIOMASA MICROBIANA

Por desgracia, las mediciones directas de la biomasa

indicadas

anteriormente,

casi

nunca

son

aplicables

muestras ambientales.
4.2. Otros tipos de Cuantificacin
El nmero total y la biomasa de los microorganismos pueden ser
estimados mediante el conteo total de m.o y la microscopa directa,
con el empleo de filtros de menbrana de acetato de celulosa y como
colorante eritrosina o filtros de policarbonato (Nucleoporo) preteidos
de negro mediante el colorante Sudn Negro para eliminar la
brillantes y posteiormente tratados con colorantes fluorescentes
como el Naranja de Acridina, el 4,6 Diamidino-2-fenilindiol, Hoescht
33825, o la Fluoroscamina, tambin se puede utilizar coloracin de
ADN mediante citometra de flujo.

La biomasa microbiana es uno de los indicadores ms importantes a

determinar en los estudios de ecologa microbiana marina. La
estimacin de sta a partir del nmero total de m.o y el cculo del
biovolumen promedio es uno de los mtodos ms empleados en
estudios de ecologa microbiana ya que es fcil y rpido. Entre otros
tipos de medida tenemos:
1. ENSAYOS BIOQUMICOS
La perspectiva ms prctica para la determinacin de la biomasa
microbiana se basa en pruebas para la deteccin de compuestos
bioqumicos

especficos

que

indiquen

la

presencia

de

microorganismos. Entre estos tenemos:

-

Mediante la determinacin de algn metabolito: En el

estudio de un ecosistema se suele relacionar la cantidad de
seres vivos presentes con la concentracin de un deteminado
metabolito, todo metabolito emplado como indicador de la

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BIOMASA MICROBIANA
biomasa debe mantener un valor relativamente cte en el
interior de los seres vivos, ser una sustancia caracterstica de
los seres vivos y no estar presente en las partculas detrticas y
la proporcin entre el metabolito en cuestin y el carbono debe
-

ser relativamente constante.

Determinacin del trifosfato de Adenosina (ATP): El ATP
presente en los microorganismos puede cuantificarse con gran
presicisn, como el ATP se pierde rpidamente tras la muerte
de las clulas; la medida de la concentracin de ATP puede
usarse para determinar la Biomasa viable, se puede aplicar:
- Prueba de Luciferina-Luciferasa, en esta reaccion se emite
luz

en

una

cantidad

directamente

proporcional

la

concentracin de ATP
- La cromatografa
-

Se han determinado correlaciones empricas entre las

concentraciones

de

ATP

de

Carbono

para

algunos

ecosistemas acuticos. Se aplica un factor de 250-286 para

establecer la conversin de valores de ATP a carbono celular en
-

muestras acuticas.
Una de las desventajas de este metodo es que la concentracin
de ATP puede cambiar substancialmente cuando las condiciones
nutricionales o fisiolgicas se alteran
Metdo bioquimico , presenta la desventaja de determinar la
biomasa del microplancton incluyendo tambin al fitoplacnton
ya que los procedimientos empleados para su separacin son
poco eficientes

Componentes de la Pared Celular: Mediciones del cido

murmico como un componente de la pared celular de
las procariotas.
La relacin especfica entre la murena componente de la pared
celular y la bacteria convierte la cuantificacin de ste
componente en una herramienta til para el clculo de la

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biomasa bacteriana, ya que la mayora de las bacterias poseen
cido murmico en su pared celular.
La prueba del cido murmico se basa en la liberacin del
lactato por parte del cido murmico y en realizar un anlisis
enzimtico o qumico para detrminar la aconcentracin de dicho
lactato.
La conversin de la medida de cido murmico (MA) en
biomasa supone que todas las bacterias Gram positivas
presentan una proprcin de 44 g MA/mg de C y que
todas las Gram negativas tienen 12 g de MA/mg de C.
para el uso adecuado de ste mtodo es necesario calcular la
proprocin de bacterias gram positivas y gram negativas que
stan presentes en la muestra, para evitar errores en el clculo
de la biomasa.Tambin se medir la Biomasa a partir del LPS de
las Gram negativas mediante: El lisado de amebocito de
Limulus;

ste mtodo se realiza utilizando extarcto acuoso

procedente de clulas sangunas de la caracola de las Moluscas

Limulus polypbemus, que reacciona especficamente con el
lipoplisacrido y forma una solucin turbia, el gradiente de
turbidez es directamente proporcional a la concentracin de
LPS, permitiendo determinarse cuantitativamente; es muy
sensible

puede

detectar

concentraciones

inferiores

10

clulas/ml.

Determinacin de Quitina en Hongos: La biomasa fngica

se puede determianr mediante la medicin de quitina presente
en su pared celular; es slo aplicada
para estos microorganismos, ya que es propia de ellos; la
presencia

de

microartrpodos

medicin
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pueden

interferir

es

esta

BIOMASA MICROBIANA

La clorofila y otros pigementos fotosintticos: Es posible

calcular la biomasa de algas y bacterias fotosintticas midiendo
la clorofilau otros pigmentos fotosintticos; la clorofila a,
pigmento fotosinttico dominante en algas y cianobacterias es
una medida til de la biomasa de stos microorganismos, se ha
visto que la biomasa de los microorganismos fotosintticos
calculados a partir de ste mtodo se armoniza adecuadamente
con la biomasa calculada a partir de ATP.
La clorofila a puede extraerse con disolventes, como la acetona,
o el metanol y cuantificarse midiendo su absorbancia en un
espectofotometro a una longitud de onda de 665nm aunque
puede ajustarse al microorganismo estudiado; por ejemplo en
bacterias rojas fotosnteticas se emplea una longitud de onda
de 850 nm, as de sta manera se puede calcular la biomasa de
poblaciones microbianas fotosintticas diferentes en una misma
muestra calculando las diferentes clorofilas que absorben la luz
en diferentes longitudes de onda. Tambin puede calcularse por
Espectrofluorimetra.

ADN:

Las

concentraciones

de

ADN

se

mantienen

en

proporciones relativamente constantes en los microotganismos

y ste puede emplearse como medida para la determinacin de
biomasa

microbiana;

mediante

PCR,

Espectrofluorometra,

colorantes fluorescentes como Bromuro de Etidio o Hoechst

33258, los clculos a partir de esta medicin muestran datos
significativos

Protenas:

Las protenas son fcilmente cuantificable, Las

protenas bacterianas con grupos hemo pueden ser detectadas

mediante quimioluminisencia; una de las limitaciones de ste
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mtodo es que las protenas presentes en el medio sean en
nmero bajas y adems se sabe que los microorganiamos
poseen diferentes cantidades de protenas debiso a esto slo se
usa ste mtodo cuando no hay ms de una poblacin. Tiene
una aplicacin limitada para las muestras ambientales.
-

Lpidos:

Ya que todas

las menbranas de las comunidades

microbianas presentan lpidos ; ste mtodo muestra una gran

ventaja para la caracterizacin in situ de una sociedad
microbiana. El ergosterol acta como un biomarcador de
hongos , el anlisis de fosfolpidos unidos a cidos
grasos se utiliza para la determiancin de biomasa
microbiana y la ambundancia relativa de poblaciones
microbianas especficas, La presencia de lpidos polares
puede definir la presencia de una biomsa viable;

ya que las

clulas para su funcionamiento necesitan tener la menbrana

intacta y dicha menbrana debe presentar lpidos polares. Por
ejemplo; el analsi PLFA ; basandose en el analsis del contenido
de fosfolpidos; Franzmann et al (1996); calcularon que la
biomasa de las clulas bacterianas de muestras de agua estaba
comprendida entre

0,9-7,8 mg de clulas equivalentes

de

E.coli por gramo de peso seco.

5. ENFOQUE FISIOLGICO DE LA DETERMINACIN DE LA

BIOMASA

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Se ha desarrollado algunos mtodos de clculo de la biomasa

microbiana que , con un enfoque fisiolgico se basan en la actividad
respiratoria ; ms aplicado a los microorganismos del suelo; utilizan la
fumigacin con Cloroformo y la posterior medida de CO 2 ; liberado a
consecuencia de la mineralizacin de los microorganismo muertos por
fumigacin por la fumigacin.
6. LA

BIOMASA Y EL

CLCULO DE VOLUMEN DE CADA

GRUPO MORFOLGICO
Los conteos directos indican la cantidad de microorganismos en un
volumen especfico de agua. En muchos casos, especialmente
aquellos que involucran la productividad, la biomasa de las bacterias
debe ser determinada como uno de los componentes de la materia
viva soportada por la masa de agua. La biomasa bacteriana puede ser
calculada a partir de los datos obtenidos de los conteos directos y las
medidas de las clulas es necesaria para determinar el volumen de
cada grupo morfolgico.
Para obtener el volumen de cada tipo de bacteria, estas pueden ser
asimiladas a esferas (cocos) y cilindros (bacilos), utilizando as la
forma del volumen de estas figuras geomtricas, si se opta por este
criterio, se debe recoger el mayor nmero de mediciones posibles y
agruparlas en varios rangos, teniendo en cuenta el nmero de casos,
para obtener el volumen medio. Ejemplo:
Cocos

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El dimetro medio de los cocos utilizados usados para el volumen
medio se expresa como:

Para este ejemplo entonces el volumen medio de los cocos de

acuerdo al volumen de la esfera sera:

Bacilos
Para calcular el volumen de los bacilos se utilizar la frmula del
cilindro:

Por lo tanto:

As de esta manera mediante clculos matemticos se utiliza para

bacilos considerando su ancho medio y largo medio.
Ancho medio
Dividiendo la frmula enunciada en dos partes, en primer lugar se
obtiene el ancho medio, cuyo clculo se realizar igual que los cocos

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Largo medio
Se emplea la media aritmtica

Siguiendo con este ejemplo el volumen medio de los bacilos sera:

Una vez que las dimensiones medias de cada grupo de bacterias ya

fueron determinadas, la biomasa de bacterias puede ser determinada
por medio de los datos del conteo directo. El conteo directo da por
ejemplo 200.000 cocos y 400.000 bacilos en 1 ml de agua. La
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biomasa de las bacterias se determinar en forma separa por cada
grupo.
Clculo de la biomasa de cocos
El volumen medio de los cocos en una masa de agua dada es, de
acuerdo al ejemplo 2,03 m 3. Por lo tanto en un mililitro de agua se
tendrn:

Clculo de la biomasa de los bacilos

El volumen medio de los bacilos, en esta misma masa de agua y de
acuerdo al mismo ejemplo es de 1, 21 m3. Por lo tanto en un mililitro
de agua se tendrn:

Carbono celular promedio

Con el fin de expresar la biomasa bacteriana en gramos por mililitro,
es necesario transformar el volumen obtenido en los conteos
microscpicos

en

carbono

celular.

Hay

varios

valores

en

la

bibliografa, que hacen referencia al contenido de carbono de las

bacterias, siendo uno de los ms usados el factor de Watson (Watson
et al., 1977), que indica que 1 m3 de bacterias contiene 1,21 x 10

-13

g de carbono.
De acuerdo a esto y al ejemplo anterior por regla de tres simple: Si el
volumen promedio de un coco es 2,03 m 3, contendr 2,46 x 10
de carbono o los 4,06 x 10

-13

m3 de los cocos determinados para 1 ml

de muestra, contendr 4,9126 x 10

-8

g de C. Un bacilo de 1,21 m3

promedio contendr 1,46 x 10 - 13 g de C y los 484000 bacilos de 1 ml

contendrn 5,8564 x 10
tendremos 1, 0769 x 10

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-8
-7

g de carbono. En 1 ml de agua entonces

g de carbono aportado por las bacterias.

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La expresin final de crecimiento de una bacteria es la divisin celular
y un incremento en el nmero y biomasa de clulas viables en la
comunidad. Antes de que las clulas se dividan debe haber una
sntesis de componentes celulares nuevos, paredes, membranas,
protenas, ARN y por supuesto ADN. As el crecimiento puede ser
definido como el incremento de un componente particular de la
biomasa de las clulas, que culmina con la divisin celular

7. IMPORTANCIA DE MICROORGANISMOS ACUTICOS Y DE LA

BIOMASA
La importancia ecolgica de los microorganismos reside tanto en su
abundancia y su biodiversidad como en la funcin que desempean
dentro del ecosistema en que se desarrollan. Dentro de los
componentes

del

bacterioplancton,

las

bacterias

heterotrficas

constituyen el grupo ms importante ya que son capaces de degradar

o mineralizar la materia orgnica presente en el medio, transfiriendo
energa

hacia

lo

otros

niveles

trficos

del

ecosistema.

Los

microorganismos son responsables del 70 a 80 % del metabolismo

total y de la produccin en el ambiente marino, para comprender la
funcin de los microorganismos en los ecosistemas marinos es
necesario conocer la estructura vertical de la microbiota , su micro
distribucin,

la biomasa

bacterioplanctnica ,es uno de los

parmetros ms importantes que debe ser considerado como fuente

principal de

alimento para organismos consumidores de los

subsiguientes niveles trficos,

y la participacin de los m.o en la

produccin total , metabolismo y flujo energtico en el ecosistema

marino.

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Las bacterias hetertrofas marinas son muy verstiles ya que pueden
utilizar una amplia gama de fuentes de nitrgeno, fsforo para su
crecimiento como son: aminocidos, protenas y cidos nucleico.
Algunos factores abiticos y biticos como son la cantidad y la calidad
de la materia orgnica, concentracin de nutrientes, depredacin,
temperatura, salinidad, concentracin de O2 disuelto, entre otros,
ejercen

un

control

en

la

abundancia

crecimiento

del

bacterioplancton.
Por otra parte, el estrs al que se encuentran sometidos estos
microorganismos en el ambiente marino hace que estos desarrollen la
capacidad de producir una serie de sustancias que potencialmente
resultan muy tiles, tal es el caso de protenas entre ellas algunas
enzimas, polisacridos, lpidos que presentan actividad antibitica,
antitumoral, tensioactiva, etc.
Estas

sustancias

liberadas

(antimicrobianos)

por

estos

microorganismos al medio previniendo la colonizacin de las especies

adyacentes por competidores, actuando como controles especficos
para mantener la diversidad de especies de ecosistemas microbianos.
Entre las mltiples aplicaciones de los m.o marinos se encuentran la
capacidad de produccin de fuentes de energa (hidrgeno, metano),
tratamientos

de

desechos

hidrocarburos),produccin

de

industriales(metales,

plaguicidas,

aditivos(polmeros,

tensioactiva,

adhesivos).
Adems existen microorganismos marinos que son productores de
gases (H2 y metano)
Y cidos que son empleados en la industria petrolera y biolixiviacin,
entre otros
8. BIBLIOGRAFIA

AQUATEC. (2002) , Miguel Di Siervi, Bacterias, Instituto de

Linnologa, Vol (7):5-14 .

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Watson, S. W., Novitsky, T.J.,Quinby, H.L. (1977). Determinacin

del nmero de bacterias y biomasa en el ambiente marino,
Vol( 33): 940-947.

Instituo de Oceanologa, Gladys Gallardo, Distribucin ,

Relaciones Trficas y Diversidad del Bacterioplacnton de las
aguas Oceanicas de Cuba, La Haban, 14-25.

Rheinheimer.G; Microbiologa de las aguas; Editorial Acribia;

S.A; 2 y 4 Edicin 1987.

Ronald M. Atlas; Richard Bartha, Ecologa Microbiana y

Microbiologa Ambiental, 1 Edicin 2001.

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