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Cita: Blood

Cancer

Diario (2014) 4,

E211; doi:

10.1038

bcj.2014.30

Publicado en Internet el 09 de mayo 2014

CLULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS EN HEMATOLOGA:


ACTUAL Y LAS FUTURAS APLICACIONES
D Focosi
1.

Pisa, Italia

1, 6, G Amabile 2, 3, 6, A Di Ruscio 2, 3,

P Quaranta

4, Tenen DG 2, 5

Divisin de Medicina Transfusional y Trasplante Biologa, Azienda Ospedaliero-Universitaria Pisana, de

2.

Escuela de Medicina de Harvard, Boston, MA, EE.UU.

3.

de Harvard Stem Cell Institute, Boston, MA, EE.UU.

4.

y M Pistello

4
Retrovirus Centro y en la Seccin de Virologa del Departamento de Investigacin Traslacional de la
Universidad de Pisa, Pisa, Italia

5.

Instituto de Ciencia de Cncer de la Universidad Nacional de Singapur, Singapur, Singapur

Correspondencia: Dr. D Focosi, Divisin de Medicina Transfusional y Biologa de Trasplante, Azienda


Ospedaliero-Universitaria Pisana, a travs de Paradisa 2, 56124 Pisa, Italia. E-mail: d.focosi@ao-pisa.toscana.it
6

Estos autores contribuyeron igualmente a este trabajo.

Recibido 03 de marzo 2014; Revisado 26 de marzo 2014; Aceptado 02 de abril 2014

ABSTRACT
Reprogramming somatic cells into induced pluripotent stem (iPS) cells is
nowadays approaching effectiveness and clinical grade. Potential uses of this
technology include predictive toxicology, drug screening, pathogenetic studies
and transplantation. Here, we review the basis of current iPS cell technology
and potential applications in hematology, ranging from disease modeling of
congenital and acquired hemopathies to hematopoietic stem and other blood
cell transplantation.
Celulas madres pluripotentes inducidas
La reprogramacin de clulas somticas en clulas madre pluripotenciales
inducidas (iPS) est logrando actualmente eficacia y grado clnico. Los usos
potenciales de esta tecnologa incluyen la toxicologa predictiva, la deteccin de
drogas, los estudios patognicos y su trasplante. En este artculo examinamos
la base de la tecnologa de clulas iPS actual y aplicaciones potenciales en
hematologa, que van desde el modelado de la enfermedad de hemopatas

congnitas y adquiridas a madre hematopoyticas y otros tipos de trasplante de


clulas de la sangre.
Las clulas madre, generalmente definidas como clulas capaces de
someterse a la auto-renovacin por la divisin celular asimtrica, se pueden
clasificar de acuerdo con su potencia. Las Clulas pluripotentes, capaces de
diferenciarse en cualquiera de las tres capas germinales, se pueden aislar de
los blastocitos (clulas madre embrionarias) o generados por reprogramacin
de clulas somticas adultas (clulas madre pluripotentes inducidas (iPS) .

A pesar de que las clulas ES representan el tipo ms prometedor de las


clulas para aplicaciones cientficas y clnicas, su uso plantea un conjunto de
preocupaciones.

La base de la tecnologa de generacin de clulas iPS consiste en la expresin


ectpica de factores de reprogramacin maestro (FR). Las clulas iPS fueron
generadas por primera vez a partir de fibroblastos murinos en 2006 por
Takahashi y Yamanaka utilizando los factores de transcripcin Oct4, Klf4, Sox2
y

c-Myc

(OKSM). En

2007,

los

equipos

de

Yamanaka y

Thomson reprogramados xito fibroblastos humanos primarios utilizando el


cctel OKSM y Klf4, Oct4, Sox2 y Lin28, respectivamente. Muchos grupos han
sido capaces de evitar el uso de la c-Myc proto-oncogn a causa de la
transformacin se refiere a mediante la sustitucin con genes menos
peligrosos., Con el fin de superar la baja eficiencia de la transfeccin de clulas
primarias, varios retroviral o lentiviral vectores (LVS) se han utilizado para
introducir RFs en las clulas. Sin embargo, la mutagnesis de insercin
asociada con estos vectores todava representa un importante inconveniente
de este tipo de enfoque. El vector de integracin plantea problemas
adicionales relacionados con la permanencia estable de los RFs. La duracin
prolongada e incontrolable de expresin RF, as como el silenciamiento de RF y
la reactivacin espontnea, se han demostrado que afectan a las propiedades
biolgicas de clulas iPS tanto in vivo y in vitro. Por estas razones, se han
hecho muchos esfuerzos para aumentar la seguridad de enfoques de entrega y
para proporcionar fuerza a los sistemas de expresin controlable de RF. Hasta
la fecha, una amplia gama de sistemas de entrega han sido probados desde;
vectores

adeno-asociados

genmicos denominados

cuyos

'puerto

virus

parental

seguro', hacia

integran
vectores

en
virales

sitios
no

integradores (por ejemplo, virus Sendai) y vectores inducibles en el que la


expresin de RF es fuertemente regulada por interruptores externos.
La inmunogenicidad de las clulas somticas derivadas de clulas iPS
Aunque las clulas iPS son ideales para tratamientos adaptados al paciente
para la enfermedad gentica, sus derivados podran utilizarse para tratar
enfermedades en los receptores no histocompatibles. Adems de contener los
desechos necrtico o vasculaturas inducida, los productos de clulas iPS no
contienen clulas que presenten

antgenos donantes, y por lo tanto, en

principio, no seran capaces de inducir alorreconocimiento directa. Esta


propiedad hace inmunognicas a las clulas iPS slo a travs de las clulas
presentadoras de antgeno receptores: una "va indirecta" menor que conduce
a rechazos agudos crnicos, Tan pronto como ms tejidos complejos sean
regenerados, la posibilidad de tener clulas capaces de presentar antgenos se
incrementara significativamente. Hasta ese momento y hasta entonces,

la

compatibilidad con el antgeno leucocitario humano (HLA) sigue siendo un


objetivo adecuado, y la creacin de 'haplobanks' regionales de clulas iPS se
ha llevado a cabo.
Pocos son los tipos de celulas diferenciadas de las celulas IPS que se
presentan menos inmunogenicas que su contraparte nativa, Por ejemplo, las
clulas progenitoras hematopoyticas humanas iPS derivadas de clulas
inducen

la

anergia

de

clulas

T en en

vitro- generada

alorreactivas

CD8 + clulas T, y no son susceptibles a la citotoxicidad de los natural killer


Este supuesto no puede ser considerada universal, como se demuestra
cuando hay un aumento de la inmunogenicidad de los cardiomiocitos
alognicas derivadas in vivo a partir de clulas iPS. Ademas, gracias a la
expresin anormal de genes in diferentes pero especficos tipos de clulas
derivadas de las IPS, es posible de inducir respuesta inmunodependiente de
las clulas T frente a receptores singenicos
A pesar de estos hallazgos, Araki et al., menciona que slo se encuentra una
inmunogenicidad limitada de clulas trasplantadas diferenciadas de iPS y las
clulas madre embrionarias. Por lo tanto, la inmunogenicidad de las clulas

teraputicamente valiosas derivadas de clulas iPS especficas del paciente


debe ser evaluado antes de cu
alquier aplicacin clnica. De hecho, las clulas T-Oct4 especficas se pueden
detectar fcilmente en las clulas T recin aisladas de> 80% de donantes
sanos, 35% de los pacientes con tumores germcell recin diagnosticados y
casi 100% de estos pacientes despus de la quimioterapia.
Modelado de Enfermedades
Modelos de ratones transgenicos han sido generados con el intento de
recapitular el fenotipo de alguna enfermedad; sin embargo muchos de estos
modelos son, en el mejor de los casos, slo similar a la enfermedad humana
ya que a menudo reflejan de forma incompleta los mecanismos patognicos
especficos y relevantes. En particular, como las clulas iPS representan una
etapa temprana de la enfermedad, el establecimiento de

modelos de

diferenciacin in vitro recapitulando la diferenciacin de clulas de tipo


especfico sera relevante para la diseccin de eventos patognicos
responsables de la iniciacin y la progresin de la enfermedad.
Enfermedades que afectan principalmente a la mdula sea (MO) son de
bastante limitada comprensin debido a que los investigadores slo tienen que
confiar principalmente en los leucocitos de sangre perifrica. Hemopatas
especficas en las cuales las muestras de tejido son escasos, por ejemplo,
mielofibrosis idioptica o anemia aplsica, representan un reto importante.
Clulas derivadas iPS de los pacientes son prometedoras para la comprensin
de las vas moleculares implicadas en la enfermedad a travs del
establecimiento de "la enfermedad en un plato.
En lo particular, como las celulas iPS tienen el potencial de diferenciarse en
cada celula del Sistema hematopoyetico, los tipos de celulasrelevantes de una
enfermedad especifica se pueden generar mediante recapitulacion in vitro del
ambiente una enfermedad especifica. Este enfoque podra conducir a la
identificacin de nuevas aberraciones genticas y epigenticas incluyendo
inductores de estrs ambiental que podran representar un evento precipitante
durante inicio de la enfermedad y de otra manera no detectable.

Sndrome de insuficiencia BM Heredado


Son un grupo heterogneo de trastornos genticos caracterizados por la
insuficiencia BM, anomalas congnitas y un mayor riesgo de generar
enfermedades malignas. Las enfermedades ms representativas con la
participacin de todos los linajes hematopoyticos son la anemia de Fanconi y
disqueratosis congnita. La Anemia de Diamond-Blackfan (DBA) es, en cambio,
una enfermedad que afecta exclusivamente el linaje eritroide. Hasta la fecha, la
nica terapia disponible para este tipo de enfermedades est representada por
las clulas madre hematopoyticas alognicas (TPH), a pesar de que la
mayora de los pacientes no tienen donante totalmente con HLA compatible, y
los que todava tienen el riesgo de morbilidad y mortalidad.
La baja eficiencia reprogramacin de fibroblastos de pacientes se ha descrito
en trastornos hereditarios asociados con p53 activada, tales como anemia de
Diamond-Blackfan, anemia Fanconi y ataxia telangiectasia. .
La expresin transgnica de los genes implicados se la ha demostrado para
corregir el fenotipo de las clulas hematopoyticas, pero en muchos casos los
intentos de terapia gnica han fracasado, principalmente debido a la baja
eficiencia de la focalizacin de genes y la seleccin inadecuada de poblacin
real HSC. Alternativamente, la edicin gnica de clulas somticas, seguido de
la reprogramacin de clulas iPS y posterior expansin y re diferenciacin en
HSC puede ser explotado para superar la baja orientacin de genes eficiencia.
Hemoglobinopatas
Hemoglobinopatas son trastornos hereditarios genticos que se originan en la
falta o mal funcionamiento de la protena hemoglobina. La anemia severa
combinada con las complicaciones asociadas con los subtipos ms agresivos
plantea la necesidad de una cura para restaurar la funcin de la hemoglobina.
Terapias de rutina para estas condiciones, tales como, la transfusin y la
quelacin del hierro, han mejorado significativamente la calidad de vida de los
pacientes, a pesar de que el mecanismo patognico de este grupo de la
enfermedad sigue siendo en gran parte desconocido. U}na opcin curativa es
el trasplante de HSC alognico. Sin embargo, este enfoque est limitado tanto

por la disponibilidad de donantes adecuados y por la enfermedad de injerto


contra husped.
La terapia gnica ofrece un enfoque alternativo para curar hemoglobinopatas
por la recuperacin directa de la funcin de la hemoglobina a travs de la
sustitucin de genes de globina. En las ltimas dos dcadas, las herramientas
de transferencia de genes basados en el desarrollo LV se han mejorado
significativamente y ha demostrado ser curativa en varios modelos animales de
la enfermedad de clulas falciformes (ECF) y la talasemia.

24

Las talasemias
Los -talasemias son uno de los trastornos hereditarios ms comunes en todo
el mundo. Son causadas por ms de 200 tipos diferentes de cualquiera de las
mutaciones puntuales o deleciones de nucletidos en el gen de -globina, lo
que resulta en una reduccin de la sntesis anormal o ninguna de las cadenas
de -globina. Los pacientes afectados por beta talasemia tienen anemia severa
y una vida til ms corta. La terapia gnica para la -talasemia es
particularmente difcil dado tanto el requisito para la produccin masiva de
hemoglobina en un linaje de manera especfica y la falta de ventaja selectiva
para las HSC corregidas.
Una cuestin relevante para hemoglobinopatas es si la persistencia de la
hemoglobina fetal o embrionario-fetal puede ocurrir in vivo despus del
trasplante con HSC derivadas de clulas iPS humanas. HSC derivadas de
clulas iPS LV-transfectadas fueron comparados con sus homlogos somticas
isognicas

naturales

LV-transfectadas. En

particular,

los

ratones

inmunodeficientes NSG trasplantados con las clulas corregidas mostraron un


embrin a feto y un parcial de fetal a globina adulto. Este hallazgo sugiere que
la transferencia de genes -globina es probable que sea necesario para la
terapia basada en clulas iPS de los -hemoglobinopatas. Si las CMH se
derivarn con seguridad a partir de clulas iPS, se prev que las clulas iPS
autlogas especficas para un paciente,

tambin sern rutinariamente

generadas para los pacientes afectados por hemoglobinopatas y HSCs


obtenidos por in vitro la diferenciacin. De hecho, las HSC derivadas de clulas
iPS podrn ser corregidas mediante la edicin de genes.

Un examen para evaluar la integracin viral en las zonas cromosmicas,


probablemente se convierta en un paso importante para este tipo de enfoque
menor potencial genotxico. Una alternativa a la transferencia de genes globina podra ser la cada-eritroide especfica de BCL11A por medio de
pequeos ARN de horquilla, forzando de este modo la expresin de -globina y
regulacin de la -globina.
La enfermedad de clulas falciformes
En la mayora de los pacientes de SCD, la mutacin de A> T (tambin conocido
como A a s mutacin) en ambos alelos de los -globina (HBB cambios
genticos) codn 6 de Glu (GAG) para Val (GTG), resultando en una forma
defectuosa de hemoglobina adulta. Una terapia ideal iPS basado en clulas
gen de SCD requerira tanto la correccin precisa de la mutacin causante de
la enfermedad y una conmutacin completa de tipo globina fetal de tipo adulto
globina.
Aunque SCD fue una de las primeras enfermedades moleculares descritas, el
objetivo para el tratamiento de este trastorno monognico utilizando enfoques
de terapia gnica no se ha logrado plenamente en los seres humanos.
La correccin de genes s en las clulas BS de ratones por recombinacin
homloga (HR) has sido previamente reportada. Similarmente, la correccin de
la mutacin s en murina clulas derivadas de un modelo SCD de ratn
humanizado , seguido por un transplante exitoso de clulas hematopoyticas
en ratones isogenicos, se ha aplicado para curar fenotipos de SCD.

31

Zou et

al. demostraron una correccin de genes de sitio especfico del silencio HBB en
clulas iPS de pacientes especficos humanos.

El trasplante de HSC derivadas de clulas genticamente, iPS


HSCs

derivados

de

BM,

el

cordn

umbilical y

movilizado o

no

mobilizados sangre perifrica se han utilizado con xito como una fuente para
la generacin de clulas iPS. Por otro lado, las clulas iPS obtenidas a partir de

diferentes tipos de clulas somticas de seres humanos y primates no


humanos pueden ser re-diferenciada con xito a HSCs

Hasta la fecha, hay por lo menos tres formas eficientes para diferenciar las
HSC a partir de clulas iPS. (1) Coculture con OP9 clulas, una lnea de
clulas madre mesenquimales murino establecidos a partir de B6C3F1 recin
nacido osteopetrtico ratn no calvaria produccin de factor estimulante de
colonias de macrfagos funcional. Coculture de las clulas OP9 con clulas
ES de ratn ha sido utilizado para desarrollar un sistema de induccin de la
diferenciacin preferencial de clulas pluripotentes en clulas hematopoyticas
distintas de los monocitos. Aunque el uso de estroma de ratn proporciona una
barrera para la traduccin clnica, esta barrera podra superarse si se produce
un banco de clulas maestro. (2) Transduccin de clulas iPS con Lhx2, un
factor de transcripcin LIM-homeobox. (3) disociacin de teratoma-generado
por ratones inmunodeficientes. Nuestro grupo demostr recientemente que las
clulas iPS humanas se diferencian dentro de los teratomas generando
mieloide funcional y clulas linfoides. Del mismo modo, las HSC puede ser
aislado de parnquima teratoma y reconstituir un sistema inmune humano
cuando se trasplantan en NOD.Cg-Prkdc (scid) IL2RG (tm1Wjl) / SZJ
inmunocomprometido (GSN) ratones. Suzuki et al. inform que por clulas iPS
humana, HSCs derivados migran de teratomas en el murino BM y su inyeccin

intravenosa en receptores irradiados resultaron en multilinaje a largo plazo y la


reconstitucin del sistema hematolimfopoyetico en las transferencias de
serie. El

uso

de

este sistema

in

vivo

de

generacin,

los

ratones

inmunodeficiencia combinada grave ligada al X pueden ser tratados por las


HSC derivadas de clulas iPS clonales de genes corregida. Tambin hay que
sealar que ni la leucemia ni tumores no se observaron ni la leucemia ni
tumores en los receptores de trasplante de HSC despus de derivados de
clulas iPS.
Otras estrategias que se han implementado con xito con clulas madre
embrionarias, tericamente podran ser adaptadas a las clulas iPS. (1) La
disociacin del cuerpo embrioide humana (EB) en los das 7-10; sin embargo,
HSC derivadas de clulas madre embrionarias humanas haban limitado la
capacidad proliferativa y migratoria en comparacin con las CMH somticas. El
sistema tradicional 'feeder-libre "de mediada por EB diferenciacin de clulas
ES humanas / clulas iPS pueden ser utilizados, aunque tiende a ser ms
variable en la diferenciacin en clulas progenitoras hematopoyticas. Los
mtodos alternativos tales como agregados indiferenciados de clulas madre
embrionarias humanas 'spin-EBS mediante centrifugacin en ausencia de
estroma murino. (2) Coculture con monocapas de clulas derivadas de ratones
aorta-gnadas-mesonefros y el hgado fetal, o con lneas de clulas estromales
derivado de estos tejidos. (3) la expresin ectpica de Cdx4 y HOXB4 (4)
Cultura con medii (medio acondicionado por las clulas HepG2, este es una
lnea celular de hepatocarcinoma humano).
Modernos medicamentos de movilizacin de HSC (factor estimulante de
colonias de granulocitos y antagonistas de CXCR4) hacen que el acceso a este
tipo de clulas particularmente fciles. Desde este punto de vista, la transicin
del estado pluripotente a fin de lograr HSCs, parece ser una complicacin. Sin
embargo, la diferenciacin de HSC a partir de clulas iPS pueden ser
particularmente tiles en la presencia de la configuracin congnita o adquirida,
donde la cosecha HSC es pobre (por ejemplo, mielofibrosis idioptica o anemia
aplsica) o cuando se requiere la expansin hasta grandes nmeros. Como se
dijo anteriormente, aparte de la reconstitucin de la hematopoyesis, derivado
de clulas iPS humanos HSCs tambin retienen la capacidad nica e

interesante para inducir la anergia de clulas T en clulas CD8+ T cells


generadas aloreactivamente
EL TRASPLANTE DE IPS DERIVADAS DE CLULAS AUTLOGAS, LAS
CMH DE INGENIERA GENTICA EN HEMOPATAS GENTICOS
La

ingeniera gentica en hemopatas heredados se puede realizar

directamente en HSCs autlogas, siempre que estn disponibles y sean


propensos a la transfeccin y transduccin. Como ambas condiciones son
difciles de lograr, la tecnologa de clulas iPS puede resultar en una alternativa
valiosa.
La manipulacin gentica que se ha realizado sobre las clulas iPS con varias
tecnologas: (1) la supresin de la expresin, ya sea transitoria o
sostenida, 52de los genes relacionados con la enfermedad en pacientes
especficos iPS clulas mediante ARN de interferencia; (2) eliminacin de
genes; 53 (3) de recursos humanos que se puede utilizar para la correccin
fenotpica de la prdida de funcin de las mutaciones, y la correccin o
sustitucin de las mutaciones que causan enfermedades subyacentes en los
loci endgenos. A diferencia de los enfoques de terapia gnica convencionales,
recursos humanos asegura que el gen corregido se expresar de manera
temporal y especfica de tejido apropiado bajo la regulacin de los
endgenos cis -elementos. HR puede llevarse a cabo con varios y en constante
mejora de mtodos, tales como: (1) nucleasas de dedos de zinc;

(2)

Talens; Talens reconoce de manera eficiente y asevera cualquier secuencia de


ADN dado y, en comparacin con nucleasas de dedos de zinc, exhiben menor
de grado de escisin no especfica, con una citotoxicidad nucleasa asociada
reducida; (3) agrupados espaciados y repeticiones regularmente palindrmicas
cortas (CRISPR) / CRISPR-asociado en bacterias y archea usan ARN corto a la
degradacin directa de nucleico extrao: esta actividad se ha explotado para la
orientacin de genes en las clulas iPS,

incluso en loci mltiples

simultneamente.
Despus de la expansin de HSC en una dosis adecuada y, si procede, ex
vivo o in vivo de seleccin para clulas modificadas, se proceder a un

acondicionamiento pretrasplante apropiado (mielosupresin) del paciente con


el tiempo se pueden aplicar antes de la infusin intravenosa de HSCs.
El trasplante de tipos de clulas sanguneas diferenciadas
Los glbulos rojos son nicos, altamente especializado y las clulas ms
abundantes en los seres humanos. La funcin principal de los glbulos rojos es
el transporte de los gases respiratorios O 2 y CO 2. Mientras tanto, los glbulos
rojos son tambin el principal reservorio de antioxidantes para el cuerpo entero.
La transfusin de sangre es un procedimiento comn en la medicina moderna,
y se practica en todo el mundo; Sin embargo, muchos pases informan de un
menor de suministro de sangre suficiente. Incluso en los pases desarrollados,
donde la oferta est adecuada, datos demogrficos proyectados predicen
insuficiencia en este suministro ya en 2050. Una vez que se produce la
aloinmunizacin, estos pacientes requieren hemates de donantes con una
combinacin de antgenos de grupo sanguneo diferente, por lo que es un reto
para

encontrar

donantes

despus

de

cada

sucesiva

episodio

de

aloinmunizacin.
Hasta ahora sustitutos alternativos de la sangre tales como transportadores de
oxgeno sintticos han resultado infructuosos. Los glbulos rojos derivados de
clulas iPS adolecen de dos limitaciones importantes: la vida media corta y la
necesidad de repetirse, y las transfusiones de vida larga. Sin embargo, los
glbulos rojos derivados de clulas iPS tienen el potencial de aliviar la escasez
y producir glbulos rojos O Rh negativos "donantes universales" libres de
patgenos. Las limitaciones principales para la traduccin de los glbulos rojos
derivados de IPSC en clnica son: (1) la enucleacin ineficiente, (2) dificultad de
llegar a la forma adulta (3) el nmero posiblemente insuperable de glbulos
rojos necesarios para generar una unidad.
Las plaquetas autlogas derivadas de clulas iPS tienen potencial para aliviar
la escasez de suministros debido a la alta demanda y la vida til limitada.
Produccin de plaquetas O (donante universal) libre de patgenos concentra
con ttulos de isoaglutininas insignificantes sera el objetivo ideal. Las plaquetas
derivadas de clulas iPS se han generado y sern pronto probado en ensayos

clnicos (Advanced Cell Technologies). Los mtodos principales son sacos ES


con dos pasos cocultivo estroma o mtodo HB con un solo paso estroma
cocultivo. La principal limitacin es la confianza en el estroma y la ineficiencia y
pobre rendimiento en megacariocitos a paso la diferenciacin de las plaquetas.
Los monocitos, clulas dendrticas derivadas de monocitos (DC) y
macrfagos
Los mtodos actuales para la generacin de macrfagos primarios humanos
varan en el rendimiento de clulas, la pureza y el estado de activacin, a
menudo resultando en resultados contradictorios y difciles de interpretar. Los
monocitos circulantes son heterogneos y varan en tamao, granularidad, la
morfologa y el perfil de expresin de la protena. Varios diferentes
subconjuntos de monocitos se han caracterizado. Adems, el mtodo de
aislamiento influye en las propiedades de los macrfagos diferenciados y DCs
derivadas de monocitos. Los monocitos humanos primarios tienen un potencial
limitado para la proliferacin in vitro y son difciles de transfectar. Por lo tanto, el
desarrollo de nuevos enfoques para producir una poblacin homognea de los
macrfagos es de gran inters. Adems, la actividad fagoctica de estas clulas
limita la capacidad para la manipulacin gentica adicional. Macrfagos
modificados genticamente diferenciadas a partir de clulas iPS humanas
pueden servir como un modelo til para la comprensin de la etiologa de, por
ejemplo, los macrfagos-trpico VIH-1 de la enfermedad, y facilitar el desarrollo
de las intervenciones teraputicas.
Las DCs derivadas de monocitos han sido ampliamente utilizados en la
inmunoterapia del cncer que muestra significativa variabilidad donantedonante y la baja capacidad para la presentacin cruzada de antgenos
asociados a tumores de CD8 + clulas T. Estas propiedades fundamentales
residen slo en CD141 + XCR1 + DC que estn presentes slo en rastro en la
sangre perifrica y por esta razn no son adecuados para la aplicacin clnica.
La capacidad de generar una fuente potencialmente ilimitada de DCs a partir
de clulas iPS ofrece la posibilidad de aprovechar su capacidad de crosspriming linfocitos T citotxicos inducir una respuesta inmune especfica de
tumor.

Suponiendo que las clulas iPS alognicos se utilizar, una vez que un clon de
TAP o 2 m con deficiencia de clulas iPS humanas se establece, una
biblioteca de prefabricados de clones que expresan los distintos tipos de HLA
de clase I pueden ser generados por la introduccin de varios genes HLA de
clase
Linfocitos NK
La esperanza de vida natural para las clulas NK en el cuerpo humano es ~ 2
semanas. Slo unas lneas de clulas NK-como permanentes humanos estn
disponibles para la investigacin, sobre todo deriva de la leucemia o el linfoma
de clulas NK pacientes, y por lo tanto carecen de las caractersticas
importantes de las clulas normales NK. Adems, varias de estas lneas de
clulas NK- como infectados latentemente con el virus de Epstein-Barr (EBV), y
la contribucin de los efectores virales a la proliferacin celular y la
supervivencia an no se ha estudiado.
Linfocitos NK son capaces de matar clulas con falta de auto (es decir, la
expresin de HLA de clase I). Las clulas NK se han generado a partir de
clulas iPS y tienen el potencial de aplicacin tanto en la terapia del cncer y
las enfermedades infecciosas. interleucina-2 se utiliza generalmente para
expandir citotxicos efector clulas T o NK in vitro y in vivo, y tambin
promueve la expansin de clulas T reguladoras que expresan el receptor cadena de interleucina-2 CD25. Como las clulas T reguladoras son capaces
de suprimir directamente las respuestas tanto clulas T y NK, el efecto
teraputico

de

las

clulas

efectoras

es

limitado. Adems,

no

est

completamente aclarado la razn por la inmunoterapia basada en clulas NK


es eficaz para la leucemia mieloide aguda, pero no para otros tumores
malignos hematolgicos o slidos. La ingeniera gentica es difcil de lograr en
las clulas NK de sangre perifrica primarias, mientras que la modificacin
gentica de alta eficiencia es factible de forma rutinaria en las clulas humanas
iPS derivadas de clulas NK que resultan en alta eficacia en modelos animales.
Estrictamente teniendo en cuenta el nmero de clulas, parece factible y
razonable para generar una cantidad significativa de clulas NK derivadas de
clulas iPS humanos para la inmunoterapia adoptiva (~ 10 7 -10 8 NK clulas

por paciente). La limitacin es importante ya que es la dependencia de dos


pasos de cocultivo, y la necesidad de clasificacin de clulas CD34
rara + CD45 + puede dificultar clnicamente un aumento de escala.
El hecho de que las clulas NK expresan todos los componentes de seal a
travs del receptor de clulas T (TCR) las hace particularmente adecuadas
para ser utilizado como una plataforma para utilizar la expresin de TCR
ectpico. Este enfoque parece ser particularmente importante debido a la falta
de competencia por la unin entre TCR endgenas y exgenas / subunidades
beta.
Los linfocitos T
Las clulas iPS, por el rejuvenecimiento de la clula somtica adulta original,
representan una tecnologa interesante para lograr grandes dosis de linfocitos
T autlogas especficos de antgeno funcionales para la inmunoterapia. Si la
especificidad TCR es demasiado raros o ausentes en el paciente, linfocitos
autlogo policlonales finalmente se pueden borrar de su endgeno TCR y luego
transfectadas con un receptor de antgeno quimrico.

Linfocitos B
A pesar de los problemas iniciales, algunos informes se centran en la
generacin de clulas iPS a partir de clulas B se han publicado. En paralelo,
se ha demostrado que las clulas iPS experimentan diferenciacin linfoide

cuando coculturizan con clulas del estroma OP9 o a travs de la linfopoyesis


intra-teratoma.
Las grandes colecciones de lneas de clulas B EBV (EBV inmortalizado-B) de
pacientes afectados por diversas enfermedades se han mantenido en un gran
nmero de instituciones. Estas clulas EBV-B pueden ser un excelente recurso
para iPS especficas de la enfermedad de generacin de clulas y la banca
para una variedad de enfermedades humanas, especialmente para los
pacientes con enfermedades raras cuyos tejidos ya no estn disponibles,
excepto como clulas conservadas B y transformadas con EBV.
Las clulas madre mesenquimales (MSC)
MSCs han sido considerada seguras ya que no muestran formacion de tumors
despues de algun transplante y se ha probado ampliamente y de forma eficaz
ese studios clinicos y preclinicos en enfermedades autodegenerativas y
cardiovasculares tales como la enfermedad de injerto contra husped y
enfermedad autoinmune Administraciones sistmicas de MSC alognicas (por
ejemplo, Prochymal o MultiStem) no causan efectos adversos, en parte debido
a los efectos inmunomoduladores. Genticamente MSCs manipuladas tambin
pueden servir como agentes teraputicos celulares ya que estas clulas se
pueden usar como vehculos de administracin de frmacos dirigidos.
MSC de diferentes tejidos representan una fuente interesante para la
generacin de clulas iPS. Por otro lado, las MSC se han derivado de las
clulas

iPS

inmunomodulador funciones.

muestran
Identificacin

conservado
y

utilizacin

regenerativo y
de

las

MSC

genticamente modificados, con una integracin de "puerto seguro", est


restringido debido a la limitada vida til de las MSC primarias in vitro. El
envejecimiento, por otra parte, reduce significativamente la supervivencia y la
diferenciacin potencial de BM-MSC. Por el contrario, el uso de clulas madre
pluripotentes humanas (clulas embrionarias humanas o clulas iPS) puede
generar MSC indefinidamente frescas. Adems, los clones MSC genticamente
modificados podran ser generados a partir de clulas iPS despus de una
deteccin precisa para un sitios de integracin de vectores y clulas con
integraciones de puerto seguro potencialmente expandido casi indefinidamente.

CONCLUSIONES
El advenimiento de la tecnologa de clulas iPS produjo un hito importante en
hematologa. La disponibilidad de clulas madre pluripotentes especficas del
paciente, sin duda, va a mejorar la modelizacin de enfermedades, desarrollo
de frmacos y allanar el camino para la terapia celular autloga para muchas
enfermedades monognicas y adquiridas. Muchas empresas de biotecnologa
se centran en la actualidad en las clulas iPS con el fin de generar nuevas
molculas

teraputicas

eficaces. En

la

actualidad,

las

empresas

de

biotecnologa ya estn participando e invirtieron en el desarrollo y


comercializacin de clulas iPS significativamente. Se ha estimado que el
mercado de clulas iPS se prev que crezca a US $ 1 mil millones para el
2016. autoridades reguladoras prestados no se plantean lmites a la
investigacin con clulas iPS, la creciente participacin de todas las empresas
farmacuticas parece hoy un paso crucial para la traduccin de iPS clulas del
banco a la cama en los prximos aos.

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