Inserir o nome do

Procedimento Operacional Padro

Laboratrio

BILIRRUBINA

Pgina 1 de 4
POPBIO xxx/xx

BILIRRUBINA
INDICAO MDICA DO EXAME
A determinao da bilirrubina em amostras de sangue til na avaliao de doenas hepatobiliares e
hematolgicas que cursam com alterao no metabolismo da bilirrubina. Sua dosagem no lquido
amnitico auxilia na avaliao da eritroblastose fetal.
PRINCPIO
A bilirrubina dosada por diazotizao e formao de azobilirrubina vermelha com absoro mxima em
525 nm. A bilirrubina direta (diglicurnide) dosada em meio aquoso, enquanto que a total (direta e
indireta) dosada por ao de potente solubilizador de ao catalisadora.
AMOSTRA
Preparo do paciente
Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas.
Tipos de amostra
Usar soro ou plasma (Heparina, EDTA) e lquido amnitico.
Armazenamento e estabilidade da amostra
Quando protegido da luz, o analito estvel 4 dias entre 2 8 C e 3 meses a 20 C negativos.
Volume mnimo
(Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise)
Volume ideal
(Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise)
Critrios para rejeio da amostra
Presena de hemlise (ver Precaues e Cuidados Especiais).
Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material.
PRODUTO UTILIZADO
Bilirrubina, Catlogo 31
ANVISA - 10009010022
Labtest Diagnstica
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600
Lagoa Santa, MG, 33400-000
Acelerador: Armazenar entre 15 25 C.
Contm cafena 130 mmol/L, benzoato de sdio 260 mmol/L, acetato de sdio 460 mmol/L e surfactante.
cido sulfanlico: Armazenar entre 15 25 C.
Contm cido sulfanlico 5,75 mmol/L e estabilizador.
Nitrato de sdio: Armazenar entre 15 25 C.
Contm nitrito de sdio 72,5 mmol/L e estabilizador.
Precaues e cuidados especiais
1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer
referncia ao manual ou POP de segurana.
2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a
data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos
contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da
estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais.
EQUIPAMENTOS
Procedimento manual
1. Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 525 nm ou filtro verde (500 a 540 nm).
2. Pipetas para medir amostras e reagentes.
3. Cronmetro.
Procedimento automatizado
Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual
ou POP de procedimentos do mesmo.
Procedimento alternativo
Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as
diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados.

Inserir o nome do

Procedimento Operacional Padro

Laboratrio

BILIRRUBINA

Pgina 2 de 4
POPBIO xxx/xx

CONTROLE DA QUALIDADE
Materiais
Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo),
instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos.
Limites de tolerncia
Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do
mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de
valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos
materiais de controle.
Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes
Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes.
Gerenciamento dos dados
Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados.
Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade.
PROCEDIMENTO
Preparo do Diazo Reagente: Adicionar 0,010 mL de Nitrito de Sdio (n 3) a 0,3 mL do cido Sulfanlico
(n 2). Misturar e usar no dia da preparao.
Procedimento manual
Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:
gua destilada ou deionizada
Acelerador (n 1)
cido sulfanlico (n 2)
Diazo reagente
Soro ou plasma

Branco
1,0 mL
----0,1 mL
----0,05 mL

Direta
1,0 mL
--------0,1 mL
0,05 mL

Total
----1,0 mL
----0,1 mL
0,05 mL

Misturar e esperar 5 minutos. Determinar as absorbncias das bilirrubinas direta e total em 525 nm ou
filtro verde (500 a 540 nm), acertando o zero com o branco. A cor estvel por 30 minutos.
Precaues e cuidados especiais
1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas
de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.
2. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade
dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de
limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais.
3. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para
preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou
condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos 0,1 mg/L (gua tipo II). Para o
enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou
condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna
deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com
liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo
que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de
modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade
da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente.
4. Para a dosagem da bilirrubina no lquido amnitico, utilizar 1,8 mL do acelerador nos tubos
branco e total e 3,0 mL do lquido amnitico para cada tubo. Usar 0,5 mL do reagente
sulfanlico no tubo branco e 0,5 mL do diazo reagente no tubo total. O resultado obtido deve
ser dividido por 10.
CLCULOS
Ver linearidade.
Obter os valores em mg/dL para as bilirrubinas direta e total utilizando o fator de calibrao obtido com o
Padro de Bilirrubina (Labtest Cat. 32).
Absorbncia do teste

Bilirrubina (mg/dL) =

x 10
Absorbncia do padro

Inserir o nome do

Procedimento Operacional Padro

Laboratrio

BILIRRUBINA

Pgina 3 de 4
POPBIO xxx/xx

Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a metodologia, o mtodo do fator pode ser
empregado.
10
Fator de calibrao =
Absorbncia do padro
Bilirrubina (mg/dL) = Absorbncia do teste x Fator
A bilirrubina indireta obtida pela diferena das bilirrubinas total e direta.
RESULTADOS
Unidade de medida
mg/dL
Converso de mg/dL para Unidade SI: mol/L = mg/dL x 17,1
Intervalo de Referncia

Recm-nascidos
Bilirrubina Direta: at 0,4 mg/dL
Bilirrubina Total: 1 dia: at 5,1 mg/dL
1 a 2 dias: at 7,2 mg/dL
3 a 5 dias: at 10,3 mg/dL
Crianas, Adolescentes e Adultos
Bilirrubina Direta:
at 0,4 mg/dL
Bilirrubina Total:
at 1,2 mg/dL
Lquido amnitico:
Idade gestacional (semanas)
15
25
40
0,13 mg/dL
0,14 mg/dL
0,04 mg/dL
Valores crticos
Soro: > 15,0 mg/dL em recm-nascidos a termo.
10 - 15 mg/dL em recm-nascidos pr-termo.
Incluir o procedimento a ser adotado diante de um resultado crtico.
LIMITAES DO PROCEDIMENTO
Linearidade
A medio linear at 25 mg/dL. Para valores maiores, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L, (0,85%)
e repetir a determinao. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio.
Indicar o procedimento de diluio utilizado no laboratrio.
Interferncias
1- Valores de Hemoglobina at 30 mg/dL e Triglicrides at 170 mg/dL no produzem interferncias
significativas.
Valores de Triglicrides entre 170 e 3500 mg/dL produzem resultados falsamente diminudos.
Valores de Hemoglobina entre 30 e 180 mg/dL produzem resultados falsamente elevados na
determinao da Bilirrubina Total e falsamente diminudos na determinao da Bilirrubina Direta.
2- Para uma reviso das fontes fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na
metodologia, sugere-se consultar Clin Chem 1975;21:1D-432D.
SIGNIFICADO CLNICO
As causas mais comuns de aumento da bilirrubina direta so as doenas hepato-celulares e das vias
biliares, tais como, hepatites, colangites, colecistites, neoplasias, cirrose, alcoolismo, obstruo biliar
intra ou extra-heptica, mononucleose infecciosa. A bilirrubina direta solvel em gua e, quando sua
concentrao encontra-se elevada no soro, esta torna-se positiva na urina.

Inserir o nome do

Procedimento Operacional Padro

Laboratrio

BILIRRUBINA

Pgina 4 de 4
POPBIO xxx/xx

O aumento da bilirrubina indireta indica: (1) aumento da produo (hemlise); (2) diminuio do
transporte (anticorpos e medicamentos); (3) defeito da captao (deficincia ou bloqueio das ligandinas)
e (4) defeito da conjugao (doena de Gilbert, entre outras).
REFERNCIAS
1. Martineck RG. Clin Chem Acta 1966; 13: 161.
2. Malloy HT, Evelyn KA. J Biol Chem 1937; 119: 481.
3. Sims FH, Horn C. Am J Clin Path 1958; 28: 412.
4. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981; 27: 493-501.
5. Bilirrubina, Instrues de uso, Labtest Diagnstica.
Nome

Assinatura

Elaborado por:
Aprovado por:
Implantado por:
Substitui POP:
Revisado por:
Revisado por:
Revisado por:
Desativado por:
Razo:

___/___/___
___/___/___
___/___/___
___/___/___
Nmero

Cpias

Data
___/___/___
___/___/___
___/___/___

Destino