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PROYECTO DE TESIS
INDIC
1
I.
METODOLOGA DE LA INVESTIGACIN.............40
I.
El inters de este problema radica en que la poblacin est inmersa a sufrir enfermedades
diarreicas agudas debido al mal tratamiento del agua de consumo humano, asimismo el
efecto de la presencia de coliformes termo tolerantes y totales en agua de consumo
humano, en la morbilidad de la poblacin del distrito de tamburco, la magnitud del
problema de contaminacin del agua, conflictos socioeconmicos, y polticas de sanidad y
saneamiento, son unos de los problema a tratar. Cada vez, la calidad del agua es ms baja,
lo que puede contribuir a trasmitir gran cantidad de enfermedades diarreicas agudas (EDA)
(Balcells, 1999).
Estas constituyen uno de los principales problemas de salud en la poblacin infantil porque
representan la primera causa de muerte en nios de 1 a 5 aos de edad, en quienes
ocasionan 3,2 millones de defunciones anuales en el mundo (Allen, 1996). En un estudio
realizado por la organizacin Panamericana de la Salud en 1984, se determin que
aproximadamente 75% de los sistemas de aguas locales y municipales en Amrica Latina
estaban mal desinfectados o carecan de sistemas de desinfeccin. Cabe destacar que el
monitoreo de la calidad del agua potable, pone al alcance de las autoridades sanitarias
informacin sistemtica.
El proyecto busca el mejoramiento de la calidad de vida de los pobladores de Distrito de
Tamburco, y tambin mejorar la calidad del agua que se consume diariamente en la
poblacin. Generalizando todas las caractersticas del presente proyecto de investigacin,
la finalidad del mismo tiene como objetivos fundamentales evitar que los habitantes de
distrito de Tamburco sigan consumiendo agua contaminada, identificar factores de riesgo
como son la presencia de conexiones de agua en mal estado, falta de tratamiento del agua
por ausencia de una Planta potabilizadora, presencia de desechos infecciosos cerca de las
vertientes o forma de manejo inadecuado del agua y si existe la presencia enfermedades
diarreicas agudas relacionadas a este problema en los hogares ha investigarse, para lo cual
existe la buena predisposicin del investigador y de la poblacin mencionada.
1.2. OBJETIVOS
1.3.1. Objetivo general
Determinar la prevalencia de disenteras debido a la contaminacin del agua por
coliformes totales y termotolerantes en el distrito de Tamburco, Abancay, Apurmac, 2016.
1.3.1. Objetivos especficos
61 UFC/ml. de microorganismos
el
promedio
para
de
Fecales, superiores
553,000
10,000
a lo permisible
(0UFC/100
UFC/100 ml y valores
ml),
en
un
para Enterococos,
lo que
se concluye que
Gonzales (2010), muestra el nmero ms probable de coliformes totales y fecales del agua
en los tanques de los edificios sector 5 de la Urb. El Per. Se observ en el primer muestreo
la presencia de coliformes totales en el agua de los tanques I, III, IV,V (16 NMP/ml ), cifra
que excede el valor de referencia OMS . De igual manera se observ la presencia de
coliformes fecales fuera de lo establecido en todas las muestras, en todas las muestra con
ausencia de Escherichia coli en las mismas.
Mora (2002), los resultados indican que cinco brotes (22.7%) se clasifican en la categora
1, es decir, el agua tuvo un 100% de responsabilidad en la transmisin del agente
etiolgico; ya que este se aisl tanto en las heces de los pacientes como en el agua para
consumo de las poblaciones respectivas. Dos brotes se ubicaron en la categora 11 (9.1 %);
en este caso, aunque se aislaron los mismos gneros bacterianos en las heces y el agua,
diferan en la especie o en alguna otra caracterstica. En diez brotes no se logr aislar el
agente patgeno en el agua de consumo (45.0%); sin embargo, las poblaciones afectadas
utilizaban agua de calidad no potable, por eso se sitan en la categora III. En la categora
IV se clasific solo un brote (4.5%), ya que no se pudo comprobar la presencia del agente
patgeno en el agua de consumo y esta no presentaba contaminacin fecal (catalogada
como potable), pero se aislaron bacterias patgenas oportunistas en las fuentes de
abastecimiento.
Chiluiza (2015), Determinacin de coliformes fecales en el agua de consumo humano y su
relacin con enfermedades diarreicas agudas en los hogares de la parroquia de pasa del
cantn ambato en el perodo diciembre 2014. Encontr resultados en la investigacin se
realiz la recoleccin de datos, mediante encuestas a 100 hogares de la Parroquia Pasa,
distribuidos proporcionalmente a las 10 comunidades, en la cual se investig a 111
habitantes, analizando la forma de captacin y uso de del agua que llega a sus hogares,
adems se indago si presentaron episodios de enfermedad diarreica aguda, en el lapso de 6
meses de estudio, de igual forma se tom muestras de agua de cada uno de los hogares
investigados en total de 87, as como de muestras de heces a los casos de EDA positivos
en un total de 50, los cuales se establecieron como muestras de anlisis.
Torres (,2004),Impacto en la Incidencia de las Enfermedades Diarreicas Agudas de una
intervencin sanitaria en el tratamiento del agua de consumo humano en el casero de
Monte encontrndose: el abastecimiento de agua es a travs de la red pblica, que el
10
11
2.2.
MARCO TERICO
2.2.1. El agua
Es un elemento natural indispensable para el desarrollo de la vida y de todas las
actividades del ser humano.
En nuestro planeta cubre el 75% de la superficie, pero toda esta cantidad de agua no se
encuentra en condiciones aptas para el consumo humano. El97.5% es agua salada, el
2.5% es agua dulce que se encuentra en lagos, ros arroyos, vertientes, embalses, esta
mnima proporcin es la que podemos utilizar con ms facilidad (Van Pelt ,2010).
Agua potable
Se llama agua potable al agua dulce que tras ser sometida a un proceso de potabilizacin se
convierte en agua apta para el consumo humano, pudiendo consumirla sin ningn tipo de
restricciones, debiendo pasar primero por un control de calidad y aprobando las rigurosas
normas establecidas a nivel nacional e internacional (Emapa, 2011).
Desinfeccin. Para asegurar an ms la potabilidad del agua, se le agrega cloro que
elimina el exceso de bacterias y lo que es muy importante,su desarrollo en el recorrido
hasta las viviendas.
Calidad del Agua
El Concepto de Calidad del Agua, encierra un conjunto de caractersticas fsicas, qumicas
y biolgicas que hacen que el agua sea apropiada para el consumo humano y se relaciona
con los procesos de abastecimiento, disponibilidad y sistemas de purificacin aplicados
(Emapa, 2011).
Parmetros que determinan la calidad del agua
Existen gran cantidad de parmetros que son de utilidad para medir el grado de
contaminacin y calidad del agua, y son categorizados dentro de los siguientes grupos:
caractersticas fsicas, qumicas, biolgicas y radiolgicas.
Cloro residual
El cloro es el agente ms utilizado en el mundo como desinfectante en el agua de
12
La cloracin del agua para suministro y residual sirve principalmente para destruir o
desactivar los microorganismos causantes de enfermedades. Una segunda ventaja
principalmente en el tratamiento de agua de bebida, reside en la mejora general de su
calidad, como
consecuencia
de
clnica.
Bacilos entricos
Los coliformes son bacterias que tiene forma de bastoncillos, que no forman
esporas, y son Gram negativos aerobias y anaerobias facultativas, su caracterstica
principal es que fermenta la lactosa con formacin de gases al cabo de 48 horas a una
temperatura de 35 a 37C, donde los coliformes Fecales se diferencian de estas por ser
termo tolerantes y resistentes a temperaturas de 44 a 46 (Murray, 2006).
Morfologa y caractersticas de los coliformes. Son pequeos, tiene forma de
bastoncillos (0,5 um por 3 um), no forman esporas, pueden ser mviles y formar cadenas
(Murray, 2006).
2.2.5. Coliformes
Cuadro N 01. Clasificacin taxonmica de las bacterias coliformes
Bacterias coliformes
Clasificacin cientfica
Reino:
Bacteria
Filo:
Proteobacteria
Clase:
Gamma Proteobacteria
Orden:
Enterobacteriales
Familia:
Enterobacteriaceae
Gneros
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
Citrobacter
Coliformes totales
Estas bacterias se define como
el grupo
pueden
que
los
cadena interrelacionada
con
el
factores
Estacionales,
medio
laboral,
socioeconmico
(vivienda,
saneamiento,
poseen
vas de desarrollo o a los que viajan a estas zonas. El inoculo para esta enfermedad ha de
ser grande, por lo que las infecciones se adquieren fundamentalmente a travs del consumo
de alimentos o de agua contaminada con restos fecales. No se produce transmisin de una
persona a otra. ECET sintetiza dos clases de enterotoxinas: toxinas termolbiles (LT-1, LTII) y toxinas termoestables (STa y STb) (Murray ,2006).
Mientras que la LT-II no se asocia a enfermedad en el ser humano, LT-I es funcional y
estructuralmente semejante a la toxina del clera y se asocia a enfermedad en el ser
humano.
La diarrea secretora producida por ECET se manifiesta tras un perodo de incubacin de 1
a 2 das, y se prolonga a lo largo de un perodo medio comprendido entre 3 y 4 das.
Los sntomas, espasmos abdominales, nuseas, vmitos (raro) y diarrea acuosa son
semejantes a los del clera, pero ms leves (Murray ,2006).
No se observan cambios histolgicos ni inflamacin de la mucosa intestinal. La
enfermedad causada por la toxina termolbil no se distingue de la provocada por la
toxina termoestable.
La sntesis de toxinas no se asocia a ningn sero grupo en particular, por lo que es preciso
emplear una combinacin de cultivos con inmuno ensayos para la deteccin de las toxinas
termolbiles y termoestables.
E. coli enterohemorrgica (ECEH)
Las cepas de E. coli enterohemorrgica son las cepas que causan con mayor frecuencia
enfermedad en los pases desarrollados.
Se estima que estas bacterias producen 73.000 infecciones y 60 muertes al ao en EE.UU.
La ingestin de un inoculo que contenga menos de 100 bacterias puede producir la
enfermedad. La gravedad de la enfermedad producida por ECEH vara desde una
diarrea leve y no complicada hasta una colitis hemorrgica con dolor abdominal grave,
diarrea sanguinolenta, sin fiebre o con febrcula. Se han aislado ms de 50 sero grupos de
ECEH; sin embargo, se cree que la mayora de los causantes de enfermedad en el ser
humano en EE.UU. pertenecen al serotipo 0157:H7 (Murray ,2006).
El sndrome hemoltico urmico (SHU), un trastorno que se caracteriza por insuficiencia
renal aguda, trombopenia y anemia hemoltica microangioptica, es una complicacin que
afecta a una proporcin comprendida entre el 5% y el 10% de los nios menores de 10
21
aos.
La enfermedad por ECEH es ms frecuente en los meses clidos, y su mayor
incidencia se registra en los nios menores de 5 aos. La mayora de los casos de esta
enfermedad se ha atribuido al consumo de carne de vaca o de otros productos crnicos
poco cocinados, agua, leche no pasteurizada o zumos de frutas (p. ej., sidra elaborada a
partir de manzanas contaminadas por heces de ganado), verduras crudas y frutas (Murray ,
2006).
Inicialmente se desarrolla en los pacientes, tras un perodo de incubacin de 3 a 4 das, una
diarrea no sanguinolenta con dolor abdominal. Se observan vmitos en la mitad de los
pacientes.
Tras
das
de
evolucin,
sanguinolenta con dolor abdominal grave en el 30% al 65% de los afectados (Murray ,
2006).
La resolucin de los sntomas suele tener lugar entre el cuarto y el noveno da en la
mayora de los pacientes que no reciben tratamiento; sin embargo, el SHU es una
complicacin grave de esta entidad, en especial en los nios pequeos.
La muerte puede ocurrir en el 3% al 5% de los pacientes aquejados de SHU, y
pueden quedar secuelas graves (p. ej., insuficiencia renal, hipertensin, manifestaciones
del SNC) en hasta el 30% de los pacientes (Murray, 2006).
E. coli enteroinvasiva (ECEI)
Las cepas de E. coli entero invasiva son infrecuentes tanto en EE.UU. como en los pases
en vas de desarrollo. Las cepas patognicas se asocian fundamentalmente a un nmero
limitado de serotipos 0: 0124, 0143 y 0164. Las cepas presentan una estrecha relacin con
las propiedades fenotpicas y patognicas de Shigella. Las bacterias son capaces de invadir
y destruir el epitelio colnico para producir una enfermedad que se caracteriza
inicialmente por diarrea acuosa. Una minora de pacientes evoluciona a la forma
disentrica de la enfermedad, la cual debuta con fiebre, espasmos abdominales y
presencia de sangre y leucocitos en las heces (Murray, 2006).
Este proceso de destruccin de las clulas epiteliales con infiltracin inflamatoria puede
dar lugar a una ulceracin colnica.
E. coli enteroagregativa (ECEA)
Las cepas de E. coli enteroagregativo se han visto implicadas en una diarrea acuosa,
22
se
han
llamado
especies
los
numerosos
serotipos
mayores de 60 aos, que se infectan durante los meses de verano y otoo cuando los
alimentos contaminados se consumen en reuniones sociales al aire libre (Murray, 2006).
La gastroenteritis es la forma ms frecuente de salmonelosis. Los sntomas suelen
aparecer entre las 6 y las 48 horas siguientes a la ingestin de alimentos o agua
contaminada, con una sintomatologa inicial de nuseas, vmitos y diarrea no
sanguinolenta.
Son tambin frecuentes la fiebre, los espasmos abdominales, las mialgias y la cefalea. En
la forma aguda de la enfermedad se puede demostrar la afectacin colnica.
Los sntomas pueden persistir entre 2 das y 1 semana antes de la resolucin espontnea.
Shigella
Se han descrito cuatro especies con ms de 45 serogrupos basados en el antigeno O: S.
dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydi y Shigella sonnei.
S. sonnei es la causa ms frecuente de shigelosis en las naciones industrializadas, y S.
flexneri es la causa ms comn en los pases en vas de desarrollo.
No obstante, los anlisis de ADN han determinado que estas cuatro especies constituyen,
en realidad, bio grupos de E. coli que difieren a nivel serolgico (Murray, 2006).
Patogenia e inmunidad
Shigella causa la enfermedad al invadir y replicarse en las clulas que tapizan la mucosa
colnica. Las protenas de los genes estructurales intervienen en la adherencia de los
microorganismos a las clulas, as como en su invasin, replicacin intracelular y
diseminacin de una clula a otra.
Las especies de Shigella parecen incapaces de unirse a las clulas mucosas diferenciadas;
en lugar de ello, parece que se unen en primer lugar e invaden a las clulas M de las
placas de Peyer. El sistema de secrecin de tipo III interviene en la secrecin de cuatro
protenas (IpaA, IpaB, IpaC, IpaD) hacia las clulas epiteliales y en los macrfagos.
Estas protenas hacen que se ondulen las membranas de las clulas diana, lo que
permite que las bacterias sean engullidas (Murray, 2006).
Las shigelas sobreviven a la fagocitosis al inducir la muerte celular programada
(apoptosis). Este proceso comporta, igualmente, la liberacin de IL-lb, lo que atrae a los
leucocitos polimorfonucleares hacia los tejidos infectados, desestabiliza la integridad de
la pared intestinal y permite que las bacterias lleguen hasta las clulas epiteliales ms
24
bacterias
puede producir
la
la
respuesta
inflamatoria
son
27
y flora
saprofita
2004).
Produccin de citotoxinas. stas producen dao celular directo por inhibicin de la sntesis de
protena.
Produccin de enterotoxinas. Da lugar a trastornos del balance de agua y sodio y mantienen la
morfologa celular sin alteraciones.
Adherencia. A la superficie de la mucosa. Esto da por resultado el aplanamiento de la
microvellosidad y la destruccin de la funcin celular normal. En la adherencia celular
intervienen factores como: pelos o vellos, glicoprotenas u otras protenas que permiten la
colonizacin bacteriana del intestino.
La presencia de uno o varios de estos factores que se unen a receptores especficos en la superficie
del enterocito, tiene gran importancia en la adhesin, que constituye la primera fase de la
infeccin (Nelson, 2004).
Clasificacin clnica de la diarrea
Diarrea aguda.- Se manifiesta por la prdida diaria de tres o ms evacuaciones intestinales
lquidas o semilquidas sin sangre visible, que pueden acompaarse de vmitos, fiebre baja,
disminucin del apetito e irritabilidad; el cuadro se inicia agudamente y tarda menos de catorce
das, aunque la mayora se resuelve en menos de siete (Nelson, 2004).
Diarrea persistente.- Este tipo de enfermedad diarreica se inicia como un episodio agudo de
diarrea lquida, pero persiste por ms de 14 o ms das. En estos casos ocurre frecuentemente
prdida marcada de peso. El volumen de la prdida fecal puede ser grande, pudiendo causar
deshidratacin (Nelson, 2004).
Diarrea crnica.- Diarrea de tipo recurrente o de larga duracin, es de causa no infecciosa, tal
como sensibilidad al gluten o desrdenes metablicos hereditarios. Puede considerarse cuando el
proceso diarreico dura ms de 21 das (Nelson, 2004).
Disentera.- Diarrea con presencia de sangre, moco y/o pus en heces, independientemente de
su duracin. Entre los efectos que produce incluye anorexia, prdida de peso rpida y dao a la
mucosa intestinal causado por agentes invasores (Nelson, 2004).
Clasificacin funcional de la diarrea
En funcin de las alteraciones fisiolgicas que provocan en el organismo, las diarreas se
clasifican en cuatro grupos:
Diarrea osmtica.- Se presentan cuando existen solutos en la luz intestinal, las cuales
tienen actividad osmtica e inducen el movimiento de lquidos y electrlitos del enterocito hacia
la luz intestinal, superando la capacidad de absorcin de la mucosa. En proporcin, se pierde
una cantidad mayor de agua que de sodio, lo que incrementa las concentraciones de este ion en la
sangre, aunque el colon intenta conservar agua y sodio no retiene potasio, que se pierde en
las heces (Nelson, 2004).
El efecto final es un agotamiento de agua y potasio. Las evacuaciones son cidas y las causas
ms
comunes
son
la
deficiencia
de
de existir Una
infecciosa
La diarrea acuosa a su vez puede ser secretora u osmtica y la diarrea con sangre puede ser
invasiva o no invasiva.
Diarrea secretora
Se define como un cuadro diarreico, aqul que es el resultado del movimiento neto de agua y
electrlitos desde la mucosa intestinal hasta el lumen, y cuyo volumen excede los 10 mL/kg/da y
cuya osmolaridad es similar al plasma (Nelson, 2004).
La diarrea secretora es una diarrea acuosa abundante que produce deshidratacin con trastornos
del equilibrio hidroelectroltico y cido bsico y es producida principalmente por el Vibrio
cholerae y la Echerichia coli enterotoxignica (ECET), aunque otras bacterias como la Shigella
spp, la Yersinia enterocoltica y las Aeromonas tambin pueden producirla (Nelson, 2004).
Diarrea osmtica
La diarrea osmtica es aqulla que se produce por un incremento de carbohidratos en el lumen
intestinal, como consecuencia de lesiones en forma de parches en las vellosidades intestinales y
por la invasin de los enterocitos de la vellosidad y la posterior aglutinacin de las vellosidades
afectadas (Nelson, 2004).
La necrosis de la porcin superior (pex) de las vellosidades da lugar a que en un perodo de 12 a
40 horas, los enterocitos de las criptas, que son enterocitos secretores, cubran totalmente la
vellosidad y den lugar a reas donde hay secrecin de lquidos y la absorcin est disminuida o
ausente. En la medida que las lesiones se hacen ms extensas tendr lugar una menor
absorcin
se
aumentar
la
secrecin.
Este
mecanismo
de produccin de diarrea
osmtica es el que provocan los agentes virales, principalmente los rotavirus (Nelson, 2004).
Otro mecanismo de produccin de diarrea osmtica es el que ocurre por la adhesin de algunos
protozoos al "borde en cepillo" del enterocito que bloquean la entrada de agua, electrlitos y
micronutrientes lo que produce un exceso de carbohidratos a nivel del lumen intestinal, que
son atacados por las bacterias con produccin de cido lctico, lo cual da lugar a una diarrea
cida que se traduce clnicamente por un marcado eritema perianal. Los parsitos que con
mayor frecuencia presentan este tipo de diarrea con acentuada mal absorcin a los carbohidratos
son
la
Giardia
lamblia,Cryptosporidium
Microsporidios,aunque
los
pacientes
parvum,
Ciclospora
inmunosuprimidos
presentan
cayetanensis
un
componente
los
de
hipersecrecin.
Tambin puede producirse una diarrea osmtica cuando se ingiere una sustancia osmticamente
activa de pobre absorcin, esto puede suceder cuando se administran purgantes como el sulfato
de magnesio. Si la sustancia es ingerida con una solucin isotnica, el agua y los solutos pasan
por el intestino sin adsorberse, y esto da lugar a la diarrea osmtica. Este tipo de diarrea se
puede observar en los pacientes con mal absorcin a los disacridos (lactosa) y en lactantes
alimentados con el seno materno (exceso de lactosa) o cuando se administran grandes cantidades
de leche animal o leches muy concentradas.
Diarrea con sangre
La diarrea con sangre se presenta con una elevada frecuencia en nios menores de 5 aos.
Constituye un problema de salud en los pases subdesarrollados y
manifestaciones clnicas severas que pueden llevar al paciente a la muerte y, en otras ocasiones, su
cuadro clnico es ms benigno por tener sus agentes causales una vida auto limitada (Nelson,
2004).
Diarrea con sangre invasiva
La diarrea con sangre invasiva tiene como prototipo a la Shigella, aunque tambin puede ser
producida por otros agentes bacterianos entero patgenos como son: Escherichia coli
enteroinvasiva,
Salmonella,
Campylobacter
jejuni,
Yersinia
enterocoltica
Vibrio
abastecimiento de agua potable. Surge como alternativa eficiente para eliminar las enfermedades
infecciosas transmitidas por el agua; aunque pueda resultar extrao y a la vez sorprendente, la
cloracin ha sido responsable en gran parte del 50% de aumento de expectativa de vida en los
pases desarrollados durante el siglo XX. (Prada, 1990).
3.3.4. Contaminacin del agua
La contaminacin de las aguas puede proceder de fuentes naturales
o de actividades
presentes en una
Coliformes fecales: bacterias que forman parte del total del grupo coliformes y son
definidas como bacilos Gram negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con produccin
de cido y gas a 44.5 0.2 C dentro de las 24 2 horas. La mayor especie en el grupo de
coliformes fecales es la Escherichia coli y en menor grado las especies de Klebsiella, Enterobacter
y Citrobacter (D.S N 31-2010-SA).
3.3.1.3 Nmero ms probable (NMP): clculo de la densidad probable de bacterias coliformes
basadas en la combinacin de resultados positivos y negativos obtenidos en cada dilucin. La
precisin de cada prueba depende del nmero de tubos utilizados. Tres diluciones son necesarias
para la obtencin del cdigo del NMP (D.S N 31-2010-SA).
Las tablas de NMP se basan en la hiptesis de una distribucin de Poisson (dispersin aleatoria).
La densidad bacteriana se obtiene a travs de tablas en los que se presenta el lmite de confianza
de 95% para cada valor determinado y se expresa como NMP de coliformes/100 mL.
3.3.13 Calidad del agua
La calidad del agua es el conjunto de caractersticas fsicas, qumicas y bacteriolgicas que
presenta el agua, tal y como se encuentra en la naturaleza (Teixeira 1996). Se considera
contaminada cuando est alterada en composicin o condicin, lo que incluye cambios en
cualquiera de sus propiedades fsicas, qumicas y/o biolgicas (Conama, 2005).
3.3.14. Monitoreo.- Seguimiento y
verificacin
de
parmetros fsicos,
qumicos,
agua
suministrada
por
el
proveedor,
de
acuerdo
los
requisitos
fsicos,
alternativas,
2010-SA).
3.3.17. Agua apta para el consumo humano
Es toda agua inocua para la salud que cumple los requisitos de calidad establecidos en el
presente Reglamento (D.S N 31-2010-SA).
3.3.18. Microbiolgicos
Bacterias heterotrficas; Virus; Huevos y larvas de helmintos, quistes y ooquistes de
protozoarios patgenos; y Organismos de vida libre, como algas, protozoarios, coppedos,
rotferos y nemtodos en todos sus estadios evolutivos (D.S N 31-2010-SA).
3.3.19. Sistema de tratamiento de agua
El Ministerio de Salud a travs de la DIGESA emitir la norma sanitaria que regula las
condiciones que debe presentar un sistema de tratamiento de agua para consumo humano
en concordancia con las normas tcnicas de diseo del MVCS, tanto para el mbito urbano
II.
HIPOTESIS Y VARIABLES
3.1. Formulacin de hiptesis
3.1.1. Hiptesis general
Existe una moderada prevalencia de disenteras debido a la contaminacin del agua por coliformes
totales y termotolerantes en el distrito de Tamburco, Abancay, Apurmac, 2016.
3.1.2. Hiptesis especficas
Los casos de disenteras son ocasionados por contaminacin del agua con coliformes totales y
termotolerantes en el distrito de Tamburco, Abancay, Apurmac, 2016.
Indicadores
Coliformes /100 ml
Coliformes /100 ml
mg/l
Por el tipo de la investigacin, el presente estudio rene las condiciones metodolgicas de una
investigacin: Observacional, no habr intervencin del investigador solo observara de forma constante los
valores de coliformes totales y termotolerantes; Prospectivo, los datos con los que se trabajaran sern
planeados y obtenidos a travs de registros de anlisis de control de resultados de muestreo; trasversal
porque se va hacer en una sola ocaciones ; Analtico, debido al estudio de ms de dos variables de anlisis
entre coliformes fecales y termotolerantes con relacin a casos de disenterias.
Temperatura: 14C.
Condicin: nublado.
Humedad: 62%.
Viento: 15 km/h N.
Lmites: El Distrito de Tamburco limita con:
Nor Oeste : Huanipaca.
Nor Este
: San Pedro Cachora.
Este
: Curahuasi.
Sur
: Abancay.
Sur Oeste
: Abancay.
Divisin geogrfica: EL distrito de Tamburco est conformado por 16 sectores que son:
Ccanabamba, San jorge Chillihua, Ccorhuani, Kerapata, Mosoccpampa, Soccoshuaycco,
Bancapata, Antabamba Alta y Baja, Sahunay, Maucacalle, San Antonio, Colcaqui, Nueva Rioja,
Miraflores, Vctor Acosta Segunda Etapa, Vctor Acosta y Juan Pablo II Primera Etapa, Nueva
Granja y Tamburco Alto y Bajo.
4.3.
Cl residual, T ,Coliformes
Muestra Compuesta
Individuales.
Caldo EC
Caldo EC MUG
Agua de dilucin
Tiosulfato de sodio al 3%
Equipos y Materiales.
Incubadora a 35 0,5 C.
Dilucin de la muestra.
El nmero de diluciones a realizar depender del tipo de muestra; si es agua superficial o residual.
Homogenizar el frasco que contiene la dilucin (10-1), con una nueva pipeta estril transferir 10
mL a un nuevo frasco de dilucin, obteniendo as la segunda dilucin (10 -2). Continuar con este
proceso hasta realizar todas las diluciones del caso, dependiendo del grado de contaminacin de la
muestra.
Prueba presuntiva
Colocar los tubos en gradillas y codificarlos anotando el nmero asignado a la muestra y dilucin a
inocular.
Para agua de consumo humano utilizar 10 tubos de 10 mL de CLT a doble concentracin, agitar el
frasco de la muestra vigorosamente unas 25 veces, inocular 10 mL de muestra en cada uno de los
tubos y agitar suavemente antes de incubar.
Para otros tipos de agua, utilizar serie de 5 tubos conteniendo 10 mLCLT de concentracin doble
y series de 5 tubos con 10 mL de CLT de concentracin simple para cada dilucin. El nmero de
serie de tubos depender del nmero de diluciones que se haya determinado para cada muestra.
Agitar vigorosamente por unas 25 veces los frascos con las diluciones ctuadas y con una pipeta
estril transferir 1 mL comenzando de la dilucin ms alta, en cada uno de los tubos con CLT de
concentracin simple correspondiente a dicha dilucin, para ello se puede utilizar la misma
pipeta.
Incubar los tubos inoculados a 35 0.5 C. Despus de 24 2 horas examinar y separar los tubos
con CLT positivos, aquellos que presentan formacin de gas en el tubo Durham (fermentacin) y
turbiedad. Anotar los resultados. Todos los tubos positivos deben pasar a la siguiente fase, la
prueba confirmativa.
Reincubar los tubos negativos por 24 horas ms. Realizar la segunda lectura a las 48 horas.
Nuevamente separar y anotar los resultados de los tubos positivos y pasarlos a la prueba
confirmativa y descartar los tubos negativos.
Prueba confirmativa
Coliformes totales
Agitar los tubos positivos de la prueba presuntiva antes de ser inoculados en los tubos de caldo
BRILLA.
Con el asa de siembra estril, transferir una o mas asadas de un cultivo positivo de CLT a un tubo
con caldo BRILLA. Repetir el procedimiento para todos los tubos presuntivos.
Despus de 24 3 horas de incubacin, retirar los tubos, agitarlos y observar la produccin de gas,
proceder a realizar la lectura considerando positiva toda formacin de gas en los tubos Durham
(Fermentacin) y turbiedad en los tubos. Anotar los resultados. Reincubar los tubos negativos por
otras 24 3 horas.
A las 48 horas, retirar los tubos, agitarlos y observar la produccin de gas, proceder a realizar la
lectura considerando positiva toda formacin de gas en los tubos Durham (Fermentacin) y
turbiedad en los tubos. Anotar los resultados.
Con las lecturas obtenidas a las 24 y 48 horas calcular el NMP de acuerdo a la frmula y las
porciones y combinaciones empleadas (vase anexo 2 o 3).
Coliformes fecales
Antes de inocular en los tubos estos deben estar a temperatura ambiente.
Agitar los tubos positivos de la prueba presuntiva antes de ser inoculados en los tubos de caldo
EC.
Con el asa de siembra estril, transferir una o mas asadas de un cultivo positivo de CLT a un tubo
con caldo EC. Repetir el procedimiento para todos los tubos presuntivos.
Incubar los tubos inoculados a 44.5 0.2 C en Bao Mara por 24 2 horas.
Luego de la incubacin, retirar los tubos, observar la produccin de gas y proceder a realizar la
lectura, considerando positiva toda formacin de gas en los tubos Durham (Fermentacin) y
turbiedad en los tubos. Anotar los resultados.
Con las lecturas obtenidos calcular el NMP de acuerdo a las porciones y combinaciones
empleadas .
Escherichia coli
Con el asa de siembra estril, transferir una o ms asadas de un cultivo positivo de CLT a un tubo
con caldo EC con MUG. Repetir el procedimiento para todos los tubos presuntivos.
Incubar los tubos inoculados a 44.5 0.2 C en Bao Mara por 24 2 horas.
Los tubos positivos (que presenten gas y turbiedad), se exponen a una lmpara de luz UV de 365
nm, la presencia de una fluorescencia azul se considera como una reaccin positiva para E. coli.
Anotar los resultados.
cepa de E.
coli (MUG positiva), un control negativo cepa termotolerante de Klebsiella pneumoniae (MUG
negativa) y un medio de cultivo sin inocular.
Anotar los resultados obtenidos y calcular el NMP de acuerdo a la frmula y las porciones y
combinaciones empleadas.
Determinacin del Nmero Ms probable (NMP)
El clculo de la densidad probable de bacterias Coliformes totales, fecales y E. coli est basado en
la combinacin de los resultados positivos y negativos obtenidos en cada dilucin. La densidad de
coliformes se expresa como NMP de coliformes por 100 mL y se obtiene a travs de la tabla en la
que se presenta el lmite de confianza de 95% para cada valor de NMP determinado.
Los valores de NMP, para una variedad de combinaciones de tubos positivos y negativos.
Los valores de NMP presentados en el anexo 2 se refieren especficamente a la combinacin de
resultados positivos obtenidos cuando son inoculados una serie de 10 tubos con volmenes de 10
mL de muestra.
Los valores de NMP presentados en el anexo 3 se refieren especficamente a la combinacin de
resultados positivos obtenidos cuando son inoculados series de 5 tubos con volmenes de 10 mL, 1
mL, 0,1 mL de muestra.
Cuando se inoculan ms de tres series de diluciones decimales, seleccionar las tres diluciones
segn los ejemplos que se detallan.
Como primer nmero del cdigo seleccionar la lectura correspondiente a la dilucin ms alta que
de resultados positivo en los 5 tubos y la lectura de las dos diluciones subsiguientes para completar
el cdigo.
Si la dilucin ms baja examinada tiene menos de cinco porciones con resultados positivos,
seleccinela y las siguientes dos diluciones mayores.
Cuando ocurra un resultado positivo en una dilucin ms alta que en las tres seleccionadas de
acuerdo con las reglas aqu dadas, cambie la seleccin a la dilucin ms baja que tenga menos de
cinco resultados positivos y las siguientes dos diluciones mayores.
Cuando todas las reglas de seleccin dadas aqu hayan dejado sin seleccionar cualquier dilucin
mayor con resultados positivos, aada el resultado de aquellas diluciones mayores con resultados
positivos al resultado de la dilucin anterior.
Composicin y preparacin de los medios de cultivos y reactivos.
1. Caldo lauril triptosa.
Composicin:
Tryptosa
Lactosa
20.
0g
5,0
g
2,7
K2HPO4
Potasio dihidrogeno fosfato,
5g
2,7
KH2PO4
Cloruro de sodio
5g
5,0
g
0,1
g
1L
Preparacin:
Disolver 35.6 g del medio deshidratado por litro de agua destilada (caldo
simple). Ajustar el pH a 6.8 0.2 y distribuir 10 mL del medio en tubos de
ensayo de 16 18 x 150 mm provisto en su interior con un tubo de
fermentacin invertido (Durham), tapar y esterilizar a 121C durante 15
minutos. Para caldo de doble concentracin, (vase el cuadro 1) disolver 71.2
g del medio deshidratado por litro de agua destilada. Ajustar el pH a 6.8 0.2
Distribuir 10 mL Del medio en tubos de ensayo de 20 x 150 mm provistos
Tubos con
Volumen de
Concentracin del
CLT
CLT
Muestra mL
Medio
g/L
mL
10
0.1 a 1.0
1 x (simple)
35.6
2 x (doble)
71.2
10
10
10,0 g Lactosa
10,0 g Oxgall
20,0 g
Verde brillante 1 L.
Preparacin:
Disolver 40 g de medio BRILLA en un litro de agua destilada. Distribuir 10 mL.
En tubos de ensayo provisto con tubos Durham invertidos. Esterilizar en
autoclave durante 15 minutos a 121 C.
3. Caldo EC
Composicin:
Triptosa o tripticasa
20,
0g
5,0
Lactosa
Mezcla de sales biliares N 3
g
1,5
g
2,7
K2HPO4
Potasio dihidrogeno fosfato,
5g
2,7
KH2PO4
5g
Cloruro de sodio
5,0
g
1L
Agua destilada
Preparacin:
20,0 g
5,0 g
5,0 g
1L
Preparacin:
Disolver 37 g de medio EC - MUG en un litro de agua destilada. Distribuir 10
mL En tubos de ensayo provisto con tubos Durham invertidos. Esterilizar en
autoclave durante 15 minutos a 121 C.
Agua de dilucin
Para el agua de dilucin, es necesaria la preparacin de soluciones Stock A y
B.
Solucin Stock A: Disolver 34 g de fosfato monopotsico (KH2PO4) en 500 mL.
De agua destilada, al ajustar el pH a 7.2 0.5 con hidrxido de sodio (NaOH
1N), y completar el volumen a un litro con agua destilada. Autoclavar por 15
minutos a 121C.
Solucin Stock B: Disolver 81.1 g de cloruro de magnesio (MgCl26H2O) en un
litro de agua destilada. Autoclavar por 15 minutos a 121C.
Agregar 1.25 mL. De la dilucin Stock A y 5 mL de la solucin Stock B a un
litro de agua destilada. Distribuir en frascos en cantidades que aseguren,
V.
5.1.
Cronograma de actividades
2015
JulActividad
Nov-
Ene-
Mar-
May-
Jul-
Dic
Feb
Abr
Jun
Ago
Set-Oct
Ago
Elaboracin
2016
del
X
proyecto
Aprobacin
del
X
proyecto
Coordinaciones en
campo
Ejecucin
del
X
proyecto
Anlisis estadstico
Redaccin
Presentacin
de
X
informe
Publicacin
5.2.
CANTIDAD
P.
TOTAL
UNITARIO
Recursos materiales
S/.
02 millares
S/. 26.00
52.00
Fichas.
02 cientos
S/. 8.00
16.00
Impresin
------------
S/. 0.10
300.00
Pasajes.
Gastos diversos.
01 Aprox.
01 Aprox.
-------------------
1000.00
500.00
Bibliografa
-------------
------------
500.00
Internet
20
10
200.00
tiles de escritorio
---------
---------
100.00
Empastado
Fotografas.
Reportera digital
Cmara fotografa digital
Cmara firmadora digital
CDs
Recursos humanos
Digitador
encuestador
5 Unidades
Aproximados
01 Unidad
01 Unidad
01 Unidad
01 Ciento
S/. 16.00
S/. 0.60
S/. 200.00
S/. 800.00
S/. 2,000.00
S/. 80.00
01
01
TOTAL
-----------------
80.00
100.00
200.00
800.00
2,000.00
80.00
100.00
400.00
S/. 8,438.00
16. Conagua, (2010). carpeta informativa para la discuin sobre el proyecto de arcediano. mxico.
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Ambato INTE INEN 108 (2011). Norma tcnica Ecuatoriana de Agua Potable
VI.
ANEXOS
ANEXO N 01
CADENA DE CUSTODIA
CO
D
LA
B
L
O
C
AL
ID
A
D
DIS
TRI
TO
ORIGE
N DE
FUENT
E
NOMB
RE
DEL
SISTE
MA
A.S. A.S
T.
1
SAP.
2
SAP.
3
SAP.
PU
NT
O
DE
MU
EST
RE
O
FECHA Y
FECHA Y
HORA DE L HORA DE
MUESTRE ENTREGA
O
RESIDUAL
CLORO
TIPO DE ANALISIS
FISIC
O
QUIMI
CO
/ /
Hora
Hora
Hora
Hora
META BAC
LES
TERI
AS
/ /
Hora
/ /
Hora
MUESTRA RECUIBIDA
A.- condicin de recipiente
Buena (
) malo(
)
OBSERVACIONES:
Leyenda: (AS) agua superficial (AST) agua subterrnea (AR) agua rio (AL) agua de lago
(ARC) agua de canal de riego (AT) aguas termales.
Entregado por
VB Jefe Inmediato
recibido por
FECH
A
HO
RA
NOMBR
E DEL
SISTEM
A
PUNTO
DE
MUESTR
EO
NOMBRE
DE
USUARI
O
POBLACIN USUARIA:________________
DIRECCI
N
prueba de cloro
residual
5.00
ppm/l
it
5.00
ppm/l
it
Mues
tra
micro
b N
MES:
continuida Firma Y
d
DNI del
hora/dias Usuario
1
2
5
6
OBSERVACIONES: llenar esta ficha en forma mensual por cada sistema de agua y remitirlo
a DESA punto de muestreo: desde el reservorio hasta las conexiones domiciliarias (Pileta
Domiciliaria)
10 ml
Caldo Brilla
Doble
Concentra
do
10 ml
10 ml
Caldo Brilla
Simple
Concentra
do
Gas (-)
24
horas
Gas (+)
24
horas
Reincubar 24
Horas
Gas (+) 48
horas: Prueba
positiva para
Gas (+)
24
horas
Prueba confirmativa
positiva para
Coliforme
Termotolerante
Gas (-)
24
hora
s
Prueba negativa
Filtro de
celulosa
estril de 45
m
Agua
destilada
estril
+ 0,5 g
de TTC
Solucin TTC
al 0,5 %
estril
Agar Cuenta
Colonias
PCA + TTC
0,5%
1 ml
9 ml de H2o
Peptonada
1 ml
1 ml
Agar Cuenta
colonias PCA
+ TTC al 0,5
% 1520 ml
1 ml
10
-1
1
ml
1 ml
10
2
-3
10
N de tubos positivos
de 10 tubos
ndice de NMP/100
mL
Bajo
Alto
< 1,1
----
3,4
1,1
0,051
5,9
2,2
0,37
8,2
3,6
0,91
9,7
5,1
1,6
13
6,9
2,5
15
9,2
3,3
19
12
4,8
24
16
5,8
34
23
8,1
53
10
> 23
13
----
(volumen de 10 mL c/u)
0
1.8
1.8
3.6
3.7
5.5
5.6
2
4
6
4
6.1
8.1
6.1
8.2
8.3
10
10
4.5
6.8
9.1
Lmite de
Confiabilidad
Bajo
Alto
0.09
0.09
0.7
0.7
1.8
1.8
0.1
0.7
1.8
0.71
1.8
3.4
1.8
3.4
3.4
3.5
3.5
0.79
1.8
3.4
Combinaci NMP /
n de
100
positivos
mL
6.8
403
6.8
6.9
10
10
15
15
10
10
15
12
15
22
15
22
22
22
22
15
15
22
410
411
412
413
420
421
422
423
430
431
432
440
441
442
450
451
500
501
502
503
25
17
21
26
31
22
26
32
38
27
33
39
34
40
47
41
48
23
31
43
58
Lmite de Confiabilidad
Bajo
Alto
9.8
6
70
40
6.8
9.8
10
6.8
9.8
10
14
9.9
10
14
14
14
15
14
15
6.8
10
14
22
42
70
70
50
70
70
100
70
70
100
100
100
120
100
120
70
70
100
150
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
4
1
1
1
2
2
2
3
3
4
0
0
0
1
1
1
2
2
2
3
3
3
4
4
5
0
0
1
2
0
1
2
0
1
0
0
1
2
0
1
2
0
1
2
0
1
2
0
1
0
0
6.8
9.2
12
9.3
12
14
12
14
15
7.8
11
13
11
14
17
14
17
20
17
21
24
21
24
25
13
1.8
3.4
4.1
3.4
4.1
5.9
4.1
5.9
5.9
2.1
3.5
5.6
3.5
5.6
6
5.7
6.8
6.8
6.8
6.8
9.8
6.8
9.8
9.8
4.1
17
22
26
22
26
36
26
36
36
22
23
35
26
36
36
36
40
40
40
40
70
40
70
70
35
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
1
1
1
1
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
4
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
0
1
2
3
0
1
2
3
4
0
1
2
3
4
0
1
2
3
4
5
0
1
2
3
4
401
17
5.9
36
555
402
21
6.8
40
33
46
63
84
49
70
94
120
150
79
110
140
170
210
130
170
220
280
350
430
240
350
540
920
160
0
>160
0
10
14
22
34
15
22
34
36
58
22
34
52
70
70
36
58
70
100
100
150
70
100
150
220
400
700
Unidad de
medida
Lmite mximo
permisible
UFC/100 mL a 35C
0 (*)
2. E. Coli
UFC/100 mL a 44,5C
0 (*)
3. Bactrias Coliformes
UFC/100 mL a 44,5C
0 (*)
UFC/mL a 35C
500
UFC/100 mL
Termotolerantes o Fecales.
4. Bactrias Heterotrficas
100
120
150
220
150
170
230
250
400
220
250
400
400
400
400
400
440
710
710
1100
710
1100
1700
2600
4600
ooquistes
de
protozoarios patgenos.
6. Vrus
7. Organismos de vida libre,
como algas, protozoarios,
coppodos, rotferos,
nemtodos
UFC / mL
0
N org/L
M/F
Procedencia: -------------------------Fecha: -----------------------------------1) De dnde proviene el agua que utiliza para consumo.
a) EMUSAP (Potable)
b) JASS.
c) Municipio.
d) Otro.
e) no sabe.
2) Cmo llega el agua a su casa.
a) Tubera
b) Tanquero
c) Tubera y Tanquero
d) Otro
e) Ninguno
3) El agua est disponible:
a) Permanente
b) Racionada
4) Realiza algn proceso adicional de tratamiento del agua
a) Clorada
b) Hervida
c) La filtra
d) Expone al sol
e) Ninguna
5) De donde utiliza el agua para beber o cocinar
a) Directo de la Llave
b) Del lugar de almacenamiento
c) Otro
d) Ninguno
6) Alguna vez le han capacitado sobre cmo tratar el agua de manera casera:
Si / No
7) En los ltimos 6 meses, cuantas veces se ha enfermado con diarrea
a) 14
b) 46
c) 69
d) +10
8) Cuantos das ha durado con la diarrea
a) Menos de 4 semanas
b) Ms de 4 semanas