PRCTICA 1

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERAL

2016
PREPARACIN Y FIJACIN DE FROTIS. TINCIONES SIMPLES Y DE GRAM.
COMPETENCIA.
Identificar a las bacterias (Procariotas) con base a su morfologa y capacidad
tintorial en funcin de la estructura de la pared celular, mediante la realizacin de
tincin diferencial y tinciones simples empleando bacterias especficas de manera
correcta y fundamentada.
CONTEXTUALIZACIN
Las tinciones simples, consisten en el agregado de un colorante para delinear la
morfologa de los microorganismos, en la cual, todas las estructuras adquieren la
misma tonalidad. Por el contrario, las de tipo diferenciales emplean ms de un
colorante en pasos sucesivos y las estructuras teidas se diferencian por el color y
su forma por ejemplo la tincin de GRAM.
La pared celular bacteriana, tiene una importancia practica y directa para los
rnicrobilogos porque, en gran parte es responsable de la reaccin de la tincin de
Gram. sta tincin diferencial divide la mayoria de las bacterias en dos grupos:
bacterias grampositivas y bacterias gramnegativas. En el procedimiento de tincin
de Gram, las clulas se tien con violeta de genciana (cristal violeta), se tratan con
yodo para formar un complejo de violeta de genciana y yodo dentro de la clula,
se lavan con un solvente orgnico (alcohol-acetona 1: 4) y finalmente se tien de
nuevo con el colorante de contraste safranina.
Por su forma las bacterias puede ser ovales o cocoideas, en forma de bastn o de
coma. Encontrndose aisladas, en pares o en cadenas.
INFORMACION SUGERIDA.
Estructura y funcin de la clula procariota y eucariota.
Tipos, tcnicas y fundamentos de tinciones empleadas en el rea de la
microbiologa.
Morfologa bacteriana.

MATERIALES
Gasa
Guantes de ltex
Cubrebocas
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cristal violeta
Lugol
Alcohol- cetona
Safranina
Azul de metileno
Gradilla
Cultivo bacteriano (cocos grampositivos, bacilos Gram negativos, y levaduras) en
agar y caldo.
Aceite de inmersin
Asa bacteriolgica recta y redonda.
Mecheros de gas
EQUIPO
Microscopio compuesto y Autoclave
I. PROCEDIMIENTO PARA LA TINCIN SIMPLE. Sobre un portaobjeto limpio y
seco se coloca una gota de solucin salina fisiolgica estril y mezclar con una
pequea porcin de la colonia bacteriana a observar. Dejar secar al aire libre, fijar
y adicionar una gota del colorante durante 1 min., enjuagar con agua, dejar secar y
observar al microscopio.
II. PROCEDIMIENTO PARA LA TINCIN DE GRAM.
a) Preparacin del frotis bacteriano extensin y fijacin. Sobre un portaobjeto
limpio y seco se coloca una gota de solucin salina fisiolgica estril y mezclar con
una pequea porcin de la colonia bacteriana a observar. Dejar secar al aire y fijar
a la flama del mechero. Finalmente, realizar la tincin de Gram.
b) Tincin de Gram. Una vez fijado el frote, cubrirlo con cristal violeta y dejar en
contacto sin que se seque durante 1 min. Enjuagar el portaobjetos con agua
destilada, dejar escurrir el exceso y adicionar unas gotas de lugol, dejar en
contacto durante 1 min., sin que se seque. Enjuagar el portaobjetos con agua
destilada, lavar con alcohol-acetona, enjuagar con agua destilada y retirar el
exceso. Cubrir el portaobjetos con el colorante de contraste (safranina), dejar en
contacto durante 1 min, sin que se seque. Enjuagar con agua destilada, secar
suavemente con un papel absorbente o al aire. Observar al microscopio.

III. Observacin al microscopio.

Una vez seco el frotis, observar al microscopio partiendo del objetivo de menor
aumento hasta su visualizacin con el objetivo de 100X segn sea el caso.
nicamente el objetivo de 100X requiere el uso de aceite de inmersin.
OBSERVACIONES DURANTE LA PRCTICA.
Diferenca entre la fijacin de un frotis bacteriano proveniente de un medio lquido
respecto a uno proveniente de un medio slido.
Diferencias entre las tinciones realizadas (simples y Gram).
Describe cmo visualizaste cada bacteria segn su tincin, morfologa y
coloracin .
Cita los colorantes empleados por tipo de tincin y la bacteria empleada.
REFERENCIAS
1. Bayle y Scott, Diagnstico microbiolgico. Sptima edicin, Editorial Mdica
Panamericana.
2. Winn, W., Allen, S., Janda, S., Koneman, E., Procop, G., Schrenckenberger, P.
y Woods, G. Diagnstico microbiolgico, 6 ed.; Mdica Panamericana: Argentina,
2008.
3. Romero-Cabello R. Microbiologa y parasitologa humana, 3 ed.; Mdica
Panamericana: Mxico, 2007.
4. Forbes, B. Diagnstico microbiolgico, 12 ed.; Mdica Panamericana: Mxico,
2009.
5. Tortora, G., Funke, B. y Case, C. Introduccin a la microbiologa, 9 ed.; Mdica
panamericana: Mxico, 2007.