IDENTIFICACIN TAXONMICA Y MOLECULAR DEL NEMATODO AGALLADOR FOLIAR

Orrina phyllobia AFECTANDO Solanum elaeagnifolium EN GUANAJUATO, MXICO. [Taxonomic

and molecular identification of foliar-gall nematode Orrina phyllobia affecting Solanum elaeagnifolium
in Guanajuato, Mexico]
Edgar Medina-Gmez1, ngel Ramrez-Surez2, Juventino Cuevas-Ojeda3 y Daniel Martnez-Gmez4. 1 Departamento de
Produccin Agrcola y Animal, Universidad Autnoma Metropolitana. 2CNRF-Direccin General de Sanidad Vegetal,
SENASICA-SAGARPA. 3 Departamento de Parasitologa Agrcola, Universidad Autnoma Chapingo. 4Laboratorio de
Microbiologa, Universidad Autnoma Metropolitana. E-mail: medinage1976@gmail.com

ANTECEDENTES
El trompillo Solanum elaeagnifolium es una planta perene originaria
del noreste de Mxico y el suroeste de EE.UU, considerada como una
planta invasora y distribuida en casi todo el mundo. Entre los enemigos
naturales de esta especie destaca Orrina phyllobia (=Ditylenchus
phyllobius), un nematodo formador de agallas foliares estudiado como
alternativa de control de esta maleza (Nickle, 1991). Sntomas de
deformaciones y agallas foliares en esta planta supone la presencia de
esta especie en nuestro pas. El objetivo de este trabajo fue delimitar la
identidad taxonmica del nematodo afectando a S. elaeagnifolium a
travs de sus caractersticas morfotaxonmicas y moleculares.

MATERIALES Y MTODOS
Se realiz un muestreo dirigido en campo a plantas con sntomas de
agallas en la parte foliar (Fig. 1), en el municipio de San Luis de la Paz,
Guanajuato, Mxico a una altura de 2018 msnm .

Fig. 3 Caractersticas morfolgicas de Orrina phyllobia. A) Capsula ceflica de hembra; B) Espcula y bursa ; C) Campos laterales; D)
Estilete y ndulos pequeos; E) Cola de Macho; F) Saco post-uterino.

La amplificacin de ITS1-5.8S-ITS2 fue un producto de 700 pb (Fig. 4) y para

los segmentos de expansin D2-D3 fue de 900 pb (Fig. 5). El BLASTING
confirmo la identidad de las secuencias, obteniendo homologas del 99% con D.
phyllobius en la regin ITS1-5.8S-ITS2.

Fig. 4. Productos de PCR de DNA de Orryna en S. elaeagnifolium,

utilizando los primers (AB28 & TW81). 1-2; Control (+) Ditylechus
dipsaci. 3-4; Control (-) Agua destilada estril. 5-8; Juvenil (J2).

Fig. 5. Productos de PCR de DNA de Orryna en S. elaeagnifolium,

utilizando los primers (D2A & D3B). 1-2; Control (+) Ditylechus dipsaci.
3-4; Control (-) Agua destilada estril. 5-8; Juvenil (J2).

Fig. 1 Sntomas foliares producidos por anguinidos en plantas de S. elaeagnifolium.

La extraccin de J2, hembras y machos se realiz por incubacin y

diseccin directa de hojas que presentaron distorsin y agallamiento,
montados en agua-agar 2% para el anlisis taxonmico tradicional. Se
amplificaron por PCR y secuenciaron las regiones ITS1-5.8S-ITS2 y los
segmentos de expansin D2-D3 del gen 28S. Se realiz BLASTING
para determinar homologa con secuencias depositadas en el GenbanK y
se determin la inferencia filogentica con MrBayes para ambos
marcadores.

La inferencia filogentica de ambos marcadores moleculares con secuencias de

gneros y especies de anguinidos depositados en el GenBank, indican que existe
una clara afinidad de agrupamiento con D. phyllobius con la regin de ITS15.8S-ITS2 (Fig. 6), sin embargo en los segmentos de expansin se separa en un
subclade distinto (Fig. 7).
100

Anguina funesta.AF396347
Anguina funesta.AF396349
100Anguina funesta.AF396348
59.86Anguina graminis.AF396351
100 Anguina agrostis.AF396339
99.86
100 Anguina agrostis.AF396341
100 Anguina agrostis.AF396340
100Anguina tritici.AF396353
99.98
97.82
Anguina tritici.AF396354
100
100 Anguina australis.AF396334
100 Anguina australis.AF396335
100
100 Anguina woodii.AY307122
100
57.53
100 Anguina microlaenae.AF396333
100 Mesoanguina millefolii.AF396313
99.99
99.99
Mesoanguina millefolii.AF396312
100
Mesoanguina
moxae.AF396314
100
100 Subanguina radicicola.AF396365
99.58
100Subanguina radicicola.AF396366
100
96.08
Mesoanguina picridis.AF396326
100
82.51 Mesoanguina picridis.AF396329
100
99.96 Mesoanguina pharangii.AF396330
100
Mesoanguina mobilis.AF396331
100
Ditylenchus gigas.HQ219231
98.86 100
Ditylenchus gigas.HQ219233
50.89 100
99.98
99.94 Ditylenchus oncogenus.KF612016
100 Ditylenchus oncogenus.AY574302
100Ditylenchus sp.AY574287
99.99
100Ditylenchus sp.AY574288
100 Ditylenchus dipsaci.AF396319
93.68
100Ditylenchus dipsaci.AF396320
100
100 Ditylenchus gallaeformans.JQ429778
100 Ditylenchus gallaeformans.JQ429779
100 Orrina phyllobia ITS.186
100
100 Orrina phyllobia ITS.188
100 Ditylenchus phyllobius.AF363112
Aphelenchoides ritzemabosi.EU186067
0.1
100

RESULTADOS Y DISCUSIN.
Las caractersticas morfologas (Fig 2 y 3) y valores morfomtricos se
encuentran en el rango de valores reportados para Ditylenchus
phyllobius Nickle (1991) y Brzeski (1991).

Fig. 6. Construccin filogentica (MrBayes) a partir de

secuencias de ITS1-5.8S-ITS2 del rDNA de Orrina phyllobia
detectados en S. elaeagnifolium.

100

Ditylenchus dipsaci.FJ707361

100

100

Ditylenchus dipsaci.FJ707362

100

Ditylenchus dipsaci.FJ707360

100

Ditylenchus gigas.HQ219215

91.54

100

Ditylenchus gigas.HQ219216

88.93

100

Ditylenchus oncogenus.KF612015

100Subanguina radicicola.DQ328721
85.37

100

Litylenchus coprosma.GU727547

100
Anguina tritici.DQ328723
98.82
100

Heteroanguina graminophila.DQ328720

99.99
100
100

70.37

Mesoanguina millefolii.DQ328722
Subanguina chilensis.DQ328724

100
99.11
100
100

Ditylenchus gallaeformans.JQ429770
Ditylenchus gallaeformans.JQ429769

100 Ditylenchus gallaeformans.KF494346

100

100

Orrina phillobia 28S 191

100

Orrina phyllobia 28S 192

100
100

Ditylenchus destructor.EU400640

100

Ditylenchus destructor.EU400630
100

100

Ditylenchus destructor.EU400625
Ditylenchus halictus.AY589364
Aphelenchoides fragaria.DQ328683

0.1

Fig. 7. Inferencia filogentica bayesiana (MrBayes) a partir de

secuencias de D2-D3 LSU del rDNA de especmenes de Orrina
phyllobia detectados en S. elaeagnifolium.

Fig. 2 Adultos de Orrina phyllobia detectados en agallas de S. elaeagnifolium. A) Hembra; B) Macho.

CONCLUSIONES.
La combinacin de la morfotaxonoma junto con marcadores moleculares de los
nematodos afectando la maleza S. elaeagnifolium confirma la presencia en
Mxico del nematodo agallador foliar O. phyllobia. La estrategia de
identificacin utilizada ofrece una metodologa para la caracterizacin
morfolgica y molecular para la identificacin de esta especie.

REFERENCIAS: 1.Brzeski, M. W. (1991) Review of the genus Ditylenchus Filipjev, 1936 (Nematoda: Anguinidae). Revue de Nematologie 14, 959; 2. Nickle WR. 1991. Manual of Agricultural Nematology.
Dekker, Inc. 757p.