Revista Brasileira de Zootecnia

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

ISSN impresso: 1516-3598
ISSN on-line: 1806-9290
www.sbz.org.br

R. Bras. Zootec., v.36, n.3, p.526-531, 2007

Criopreservao do smen de curimba (Prochilodus lineatus) mediante adio

de diferentes diluidores, ativadores e crioprotetores1
Luis David Solis Murgas2, Alssio Batista Miliorini2, Rilke Tadeu Fonseca de Freitas3, Gilmara
Junqueira Machado Pereira2
1

Apoio: Companhia Energtica de Minas Gerais - CEMIG.

Depto. Medicina Veterinria - Universidade Federal de Lavras, Caixa Postal 37, CEP: 37200-000.
3 Depto. Zootecnia - Universidade Federal de Lavras, Caixa Postal 37, CEP: 37200-000.
2

RESUMO - Amostras de smen de cinco espcimes de Prochilodus lineatus (Valencienes, 1847) foram utilizadas para
avaliao dos efeitos txicos e crioprotetores de seis solues base de BTS (Beltsville Thawing Solution ) 4,5% enriquecidas
com metanol e DMSO nas concentraes de 10% (A = BTS 4,5% + Metanol 10%; B = BTS 4,5% + DMSO 10%; C = BTS 4,5%
+ KCl 0,072% + metanol 10%; D = BTS 4,5% + KCl 0,072% + DMSO 10%; E = BTS 4,5% + KI 0,036% + metanol 10%; e
F = BTS 4,5% + KI 0,036% + DMSO 10%). Foram avaliadas ainda trs solues ativadoras (gua destilada, NaHCO3 60 mM
e NaHCO 3 119 mM), antes e aps o congelamento. Estudaram-se a taxa e a durao da motilidade espermtica. No
houve diferena significativa entre as solues crioprotetoras utilizadas. O smen ativado por NaHCO3 60 e 119 mM apresentou
as maiores taxas de motilidade espermtica. A ativao por NaHCO3 119 mM possibilitou as maiores duraes de motilidade
no smen de P. lineatus.
Palavras-chave: bicarbonato, congelamento, curimbat, DMSO, espermatozides, metanol

Cryopreservation of curimba (Prochilodus lineatus) semen after addition of

different diluters, activators and cryoprotectants
ABSTRACT - Semen samples of five specimens of Prochilodus lineatus (Valencienes, 1847) were used to test the
toxic and cryoprotectants effects of six solutions based on BTS (Beltsville Thawing Solution ) 4.5%: A - BTS 4.5% +
Methanol 10%; B - BTS 4.5% + DMSO 10%; C - BTS 4.5% + KCl 0.072% + Methanol 10%; D - BTS 4.5% + KCl 0.072%
+ DMSO 10%; E - BTS 4.5% + KI 0.036% + Methanol 10% and F - BTS 4.5% + KI 0.036% + DMSO 10%). The effect of
other three activator solutions (Distillated Water, NaHCO3 60 mM and NaHCO3 119 mM) on the rate and duration of sperm
motility were also evaluated before and after freezing. No significant differences were observed among the cryoprotectant
solutions. Sperm motility rates for P. lineatus were higher for semen activated by NaHCO3 60mM and NaHCO3 119mM,
which propitiated the highest sperm motility duration.
Key Words: bicarbonate, curimbat, DMSO, freezing, methanol, spermatozoids

Introduo
A capacidade tcnica para preservao de gametas e
embries de peixes e de invertebrados aquticos tem se
expandido rapidamente nos ltimos anos, impulsionada
primariamente pela indstria aqcola (Carolsfeld et al.,
2003). A criopreservao uma tcnica importante no
controle reprodutivo de muitas espcies e sua aplicao em
peixes est em amplo desenvolvimento. Envolve procedimentos que permitem o armazenamento de espermatozides
em nitrognio lquido, mantendo-se a viabilidade dos
gametas por tempo indefinido. Mins et al. (2000) verificaram
que a porcentagem de espermatozides mveis contidos no
smen criopreservado de esturjo no diminuiu ao longo de
Correspondncias devem ser enviadas para: lsmurgas@ufla.br

cinco anos de armazenamento. A criopreservao constitui

tcnica importante na rotina da reproduo induzida e na
melhoria gentica de espcies de peixe por aumentar as
chances de se desenvolverem pesquisas, sobretudo no
campo gentico, sendo indicada para minimizar a assincronia
na maturao dos gametas, no uso seletivo de reprodutores
ou mesmo no transporte de gametas (Godinho, 2000). A
criopreservao de clulas ganhou impulso quando pesquisas relataram que o glicerol possui capacidade de
proteg-las contra efeitos deletrios do congelamento.
Desde ento, vrias substncias vm sendo testadas com
esse objetivo (Godinho, 2000). Segundo Harvey (1993), o
metanol a substncia que mais facilmente permeia a
membrana celular, sendo, entretanto, considerado a mais

Murgas et al.

txica, exceto para o smen de tilpia (Oreochromus

niloticus). Bedore (1999) relatou elevada toxicidade do
dimetilsulfxido (DMSO) para o smen de peixes, porm,
alguns autores, como Miliorini et al. (2002), no encontraram diferenas entre as concentraes de 5 e 10% de DMSO
em at 72 horas de resfriamento (4C) do smen de pacu
(Piaractus mesopotamicus) inclusive, as maiores taxas de
motilidade at 96 horas ocorreram na maior concentrao.
Outros autores observaram que o DMSO um dos melhores
crioprotetores para espcies de peixes de gua doce (Bedore,
1999) e de gua salgada (Ritar, 1999) e que sua toxicidade
pode ser suprida pela adio de carboidratos (Leung &
Jamielson, 1991).
Do mesmo modo que a utilizao de crioprotetores
importante no sucesso de preservao criognica de smen
de peixes, a incorporao de solues diluidoras fundamental para proporcionar meio osmtico e nutricionalmente
ideal aos espermatozides durante a aplicao da
biotecnologia. O BTS (Beltsville Thawing Solution ) um
diluidor desenvolvido e preconizado para conservao do
smen suno. Entretanto, vrios autores (Franciscatto et al.,
2002; Miliorini et al., 2002; Murgas et al., 2002; Maria et al.,
2004; Miliorini et al., 2004) tm utilizado com sucesso esse
diluidor em pesquisas com peixes de piracema. O BTS
possui em sua frmula componentes que, alm de nutrirem
clulas espermticas e proporcionarem um microambiente
osmoticamente favorvel, protegem a face intracelular da
membrana citoplasmtica durante o congelamento.
Entre as solues ativadoras da motilidade espermtica,
merecem destaque a gua destilada e as solues salinas de
bicarbonato de sdio, NaCl e KCl em diferentes concentraes, dependendo da espcie (Ravinder et al., 1997).
Lahnesteiner et al. (1995) verificaram no smen de curimat
(Prochilodus argentus) que, em relao gua destilada,
solues de NaCl, utilizadas como ativadoras da motilidade
espermtica, aumentaram o vigor espermtico, apesar de
reduzirem sua durao. Para o smen de pacu (P.
mesopotamicus), Fogli da Silveira et al. (1995), citados
por Cruz (2001), estimaram os parmetros de motilidade
utilizando soluo de NaHCO 3, ao passo que Miliorini et al.
(2004) utilizaram NaCl (30 e 60 mM) e NaHCO3 (30 e 60 mM)
como solues ativadoras do smen de P. lineatus
resfriado. Nestes trabalhos, as solues com as concentraes mais elevadas dos sais proporcionaram taxas de
motilidade espermtica tambm superiores.
A espcie P. lineatus muito apreciada na culinria
nordestina e sua comercializao tem sido promissora,
sobretudo no Nordeste do Brasil. Considerando o grande
impacto que a biotecnologia de criopreservao de gametas

527

exerce sobre inmeros aspectos (reprodutivo, ecolgico,

social e econmico) e a escassez de trabalhos sobre a
reproduo de espcies de piracema, realizou-se este estudo
com o objetivo de estudar os efeitos da utilizao de
diferentes diluidores, crioprotetores e solues ativadoras
sobre as caractersticas de motilidade espermtica aps o
processo de criopreservao do smen de P. lineatus.

Material e Mtodos
Foram utilizados cinco machos de P. lineatus com
concentrao espermtica mdia de 27,3625,322 x 109
espermatozides.mL-1 e 1.160,0487,8 g de peso vivo, capturados do leito do Rio Grande, no municpio de Itutinga,
MG, s margens da usina hidroeltrica de Camargos. Os
animais foram mantidos como parte do plantel da Unidade
Ambiental da Companhia Energtica de Minas Gerais
(CEMIG), localizada no mesmo municpio, sendo selecionados segundo as caractersticas: colorao eritematosa e
aspecto edemaciado da papila urogenital e eliminao de
smen em resposta massagem manual sobre a parede
celomtica. Os exemplares foram transportados at o laboratrio de reproduo, onde foram pesados, dimensionados
e acondicionados em tanques de tratamento para isolamento
de fmeas e de exemplares de outras espcies.
Os animais utilizados receberam duas injees
intramusculares de extrato bruto de hipfise de carpa (EBHC),
nas doses de 0,4 e 4,0 mg/kg de peso corporal, em intervalo
de aproximadamente 12 horas. A ltima dose, por seu turno,
antecedeu 9 a 10 horas o perodo da coleta.
Para coleta individual do ejaculado, utilizou-se um pu
para a emerso dos animais, que foram contidos por uma
toalha de algodo umedecida. Os olhos foram vendados e
a papila urogenital foi limpa e seca com toalha de papel.
Efetuaram-se compresses manuais da parede celomtica,
no sentido crnio-caudal. O smen foi obtido livre de fezes,
urina, sangue ou gua. Quando ativado precocemente, o
smen foi descartado. Os ejaculados foram coletados em
tubos de ensaio opacos, sendo acondicionados e imersos
em gelo, ao abrigo da luz, para posterior anlise laboratorial.
A anlise da qualidade do smen fresco (e demais
anlises subseqentes) de cada macho utilizado foi realizada
em uma pequena gota depositada sobre lmina de
microscopia e observada ao microscpio de luz, previamente
focalizado em aumento de 400X. A observao dos
espermatozides imveis permitiu avaliar a pureza do
smen. A seguir, o smen foi ativado mediante adio de
gua do prprio tanque para avaliao de sua qualidade e
viabilidade para ser criopreservado. Todos os ejaculados
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528

Criopreservao do smen de curimba (Prochilodus lineatus) mediante adio de diferentes diluidores, ativadores e crioprotetores

utilizados se mostraram completamente (100% de

espermatozides mveis) aptos ao congelamento. Foram
aferidas a taxa (%) e a durao (segundos) da motilidade
espermtica. A durao da motilidade foi considerada desde
a ativao at que apenas 10% das clulas espermticas
apresentassem motilidade.
Dois experimentos foram conduzidos para avaliao
dos componentes do protocolo de criopreservao. No
experimento 1, procedeu-se avaliao da toxicidade dos
crioprotetores e diluidores mediante ativao espermtica
por diferentes ativadores. Foram adicionadas lentamente
s amostras seis solues (na proporo de uma parte de
smen para quatro partes de soluo), cada uma previamente
preparada (estabilizada) e composta do seguinte modo:
Soluo A: BTS (TAB.1) 4,5% + Metanol 10% (concentrao final);
Soluo B: BTS 4,5% + DMSO 10% (concentrao
final);
Soluo C: BTS 4,5% + KCl 0,072% (concentrao
final) + Metanol 10%;
Soluo D: BTS 4,5% + KCl 0,072% + DMSO 10%;
Soluo E: BTS 4,5% + KI 0,036% (concentrao
final) + Metanol 10%; e
Soluo F: BTS 4,5% + KI 0,036% + DMSO 10%
A razo da adio de solutos (KCl e KI, nas concentraes finais indicadas) s solues C a F justificada em
trabalhos anteriores, realizados por Franciscatto et al.
(2002), Miliorini et al. (2002) e Murgas et al. (2002). De
acordo com esses autores, o diluidor BTS deve ser acrescido de ons e seu uso no resultou em ativao dos
espermatozides quando do resfriamento do smen de
pacu (P. mesopotamicus) e piapara (Leporinus obtusidens).
Em uma lmina de microscopia, previamente focalizada,
colocou-se uma alquota de aproximadamente 1 L da mistura homogeneizada smen fresco + solues (A a F). A
seguir, procedeu-se ativao da motilidade testando-se
trs solues ativadoras (gua destilada; NaHCO3 60 mM;
e NaHCO3 119 mM) por meio da adio de 6 L de soluo
ativadora. Aps a homogeneizao da mistura, foram determinadas a taxa e a durao da motilidade espermtica. Todo
o procedimento foi conduzido em temperatura ambiente
(23oC) simulando condies de campo.
O experimento 2 consistiu da avaliao do efeito das
solues A a F sobre a motilidade espermtica aps congelamento. Imediatamente aps a diluio, as amostras foram
envasadas em palhetas de 0,5 mL de capacidade, gerando
um total de quatro palhetas/amostra de smen. As palhetas
foram transferidas para um botijo de vapor de nitrognio

Tabela 1 - Composio qumica do diluidor Beltsville Thawing

Solution - BTS (100 g)
Chemical composition of Beltsville Thawing Solution - BTS
(100 g)

Table 1 -

Constituinte

Quantidade (g)

Constituent

Amount

Glicose (Glucose)
Citrato de sdio (Sodium citrate)
EDTA
Bicarbonato de sdio (Sodium bicarbonate)
Cloreto de potssio (Potassium chlorate)
Sulfato de gentamicina (Gentamicyn sulphate)
MINITB

79,90
12,71
2,65
2,65
1,59
0,50

ABFLL-UND LABORTECHNIK Gmbh & Co.KG.

lquido (Taylor-Wharton, modelo CP 300, tipo dry shipper)

e mantidas em posio vertical. Vinte e quatro horas depois,
foram submersas em nitrognio lquido em botijo de
armazenamento (Cryometal, modelo DS-18) a uma temperatura estvel de -96oC. O descongelamento das amostras de
smen foi feito aps perodo igual ou superior a 1 hora de
congelamento. O descongelamento envolveu a retirada das
palhetas do botijo e sua imerso em gua a 60oC por oito
segundos. A seguir, procederam-se s anlises da taxa e
durao da motilidade espermtica segundo o procedimento
descrito para o experimento 1.
Para a anlise da concentrao espermtica, diluiu-se
uma alquota de 1 L de smen em 1 mL de soluo de formol
citrato. O nmero de espermatozides.mL-1 foi estimado
por meio de exame direto em cmara hematimtrica.
Os experimentos foram conduzidos em delineamento
em blocos casualizados (DBC), com os tratamentos em
arranjo fatorial 3 x 2 x 3 (diluidores x crioprotetores x
solues ativadoras) com seis repeties (blocos), em que
o peixe constituiu o bloco.
Os dados obtidos foram submetidos anlise estatstica
por meio do Sistema de Anlise de Varincia - SISVAR
(Ferreira, 1999), de acordo com o seguinte modelo:
Yijkl = + Bl + D i + C j +Ak + DCij + DAik + CAjk +
DCAijk + E ijkl
em que Yijkl = observao l obtida para o diluidor i,
crioprotetor j e soluo ativadora k; = constante associada a cada observao; B l = efeito do bloco l, l = 1, 2,...,
6; Di = efeito do diluidor i, i = 1, 2 e 3; Cj = efeito do
crioprotetor j, j = 1 e 2; A k = efeito da soluo ativadora k,
k = 1, 2 e 3; DC ij = efeito da interao diluidor i
crioprotetor j; DAik = efeito da interao diluidor i
soluo ativadora k; CAjk = efeito da interao crioprotetor
j soluo ativadora k; DCAijk = efeito da interao
diluidor i crioprotetor j soluo ativadora k; E ijkl = erro
associado a cada observao, que, por pressuposio,
NID (0,2).
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Murgas et al.

As mdias foram comparadas pelo teste de StudentNewman-Keuls (nvel mnimo de significncia = 0,01).

Resultados e Discusso
A anlise de toxicidade (experimento 1) comprovou no
haver diferenas significativas entre as solues contendo
os diferentes crioprotetores (P>0,05). Como demonstrado
nas Tabelas 2 e 3, todas as solues utilizadas possibilitaram
taxas e duraes semelhantes depois de acrescentadas ao
smen.

529

Silva (2000) utilizou DMSO 10% e gema de ovo como

crioprotetores para o smen da mesma espcie, contudo,
apesar de a taxa de motilidade pr-congelamento ter sido
superior a 80% aps 2 horas de congelamento, a uma
temperatura de descongelamento de 26oC por 10 segundos,
tanto a taxa como a durao da motilidade espermtica se
mostraram nulas, indicando mortalidade total dos
espermatozides. Os resultados encontrados neste estudo
foram semelhantes aos verificados por Miliorini et al. (2004),
que verificaram que o DMSO apresentou toxicidade para o
smen de P. lineatus similar ao metanol e ao etilenoglicol

Tabela 2 - Taxas de motilidade (%) do smen de P. lineatus diludo em diferentes solues antes do congelamento
Table 2 -

Spermatic motility rates (%) of P. lineatus semen diluted in different solutions before freezing

Soluo

Ativador

Mdia

Solution

Activator

Mean

gua destilada
Distillated water

BTS 4,5% + Metanol 10%

Bicarbonato de sdio
60 mM

Bicarbonato de sdio
119 mM

Sodium bicarbonate

Sodium bicarbonate

8511,18

944,18

932,73

907,76 a

7319,23

8610,83

8124,59

8018,51 a

7023,45

935,70

9210,36

8517,82 a

6422,19

8810,36

928,36

8118,84 a

7028,50

8113,41

8511,18

7819,03 a

718,94

9011,72

9213,03

8414,37 a

7219,41

8810,08

8913,07

8316,57

BTS 4.5% + Methanol 10%

BTS 4,5% + DMSO 10%

BTS 4.5% + DMSO 10%

BTS 4,5% + KCl 0,072% + Metanol 10%

BTS 4.5%+ KCl 0.072% + Methanol 10%

BTS 4,5% + KCl 0,072% + DMSO 10%

BTS 4.5%+ KCl 0.072% + DMSO 10%

BTS 4,5% + KI 0,036% + Metanol 10%

BTS 4.5%+ KCl 0.036% + Methanol 10%

BTS 4,5% + KI 0,036% + DMSO 10%

BTS 4.5%+ KCl 0.036% + DMSO 10%

Mdia
Average
a

Mdias no diferem (P>0,05) pelo teste Student-Newman-Keuls.

Averages followed by the same letters do not differ (P>0.05) by Student Newman-Keuls test.

Tabela 3 - Durao da motilidade (segundos) do smen de P. lineatus diludo em diferentes solues antes do congelamento
Table 3 -

Duration of spermatic motility (seconds) of P. lineatus semen diluted in different solutions before freezing

Soluo

Ativador

Mdia

Solution

Activator

Mean

gua destilada

Bicarbonato de sdio
60 mM

Bicarbonato de sdio
119 mM

Sodium bicarbonate

Sodium bicarbonate

378,30

159102,20

13163,67

10991,08 a

3714,38

161153,78

10954,84

10192,16 a

339,73

7232,60

141126,21

8263,79 a

2916,72

5122,61

12457,62

6854,02 a

3319,94

7210,82

171101,55

9279,42 a

293,78

8234,93

184130,38

9888,22 a

3312,52

9983,74

142108,66

9277,24

Distillated water

BTS 4,5% + Metanol 10%

BTS 4.5% + Methanol 10%

BTS 4,5% + DMSO 10%

BTS 4.5% + DMSO 10%

BTS 4,5% + KCl 0,072% + Metanol 10%

BTS 4.5% + KCl 0.072% + Methanol 10%

BTS 4,5% + KCl 0,072% + DMSO 10%

BTS 4.5%+ KCl 0.072% + DMSO 10%

BTS 4,5% + KI 0,036% + Metanol 10%

BTS 4.5%+ KCl 0.036% + Methanol 10%

BTS 4,5% + KI 0,036% + DMSO 10%

BTS 4.5%+ KCl 0.036% + DMSO 10%

Mdia
Mean
a

Mdias no diferem (P>0,05) pelo teste Student-Newman-Keuls.

Averages followed by the same letters do not differ (P>0.05) by Student Newman-Keuls test.

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Criopreservao do smen de curimba (Prochilodus lineatus) mediante adio de diferentes diluidores, ativadores e crioprotetores

na concentrao de 10,0% aps 6 horas de resfriamento a

4oC. Entretanto, o DMSO propiciou reduo na motilidade
significativamente superior obtida com o metanol nas 42
horas seguintes. Segundo Bedore (1999), concentraes
ou perodos de estabilizao elevados de DMSO podem
provocar reduo significativa na qualidade do smen de
peixes.
Cruz (2001) tambm verificou que as amostras acrescidas de DMSO apresentaram durao mdia de motilidade
superior daquelas acrescidas de etilenoglicol e propanodiol,
sendo a concentrao de 15,0% (104 segundos) a menos
txica em comparao s concentraes de 5,0 (67 segundos)
e 10,0% (84 segundos). O NaHCO3 tem sido utilizado com
sucesso na ativao da motilidade do smen de peixes.
Miliorini et al. (2002) e Murgas et al. (2002) observaram,
respectivamente, que as amostras de smen de P.
mesopotamicus e L. obtusidens ativadas com NaHCO3 119
mM e acrescidas de DMSO 10,0% apresentaram taxas e
duraes mdias da motilidade superiores s das amostras
ativadas por gua destilada e acrescidas de DMSO 5,0%.
Aparentemente, amostras de smen in natura ou resfriadas
ativadas por concentraes inferiores de NaHCO3 no
respondem com a mesma qualidade mtil.
No foi observada diferena significativa entre as
solues crioprotetoras testadas quanto s caractersticas
estudadas no smen descongelado (P>0,05). Porm, a
ativao por NaHCO3 60 mM e 119 mM propiciou
(Tabela 4) as maiores taxas de motilidade espermtica
(P<0,01). A ativao por meio de NaHCO 3 119 mM possibilitou (Tabela 5) as maiores duraes de motilidade
espermtica em comparao utilizao das solues de
NaHCO3 60 mM e gua destilada (P<0,01). A comparao
aos estudos de Cruz (2001) e Franciscatto et al. (2002), alm

da observao em outras espcies como P. mesopotamicus

(Miliorini et al., 2002) e L. obtusidens (Murgas et al., 2002),
permite sugerir melhor desempenho do ativador NaHCO3
119 mM medida que se alteram as temperaturas e/ou se
prolonguem os perodos de estocagem do smen de
P. lineatus. Alm disso, possvel que o NaHCO3 119 mM
tenha proporcionado um meio com menor diferena
osmtica em relao ao citoplasma, preservando a integridade da membrana citoplasmtica dos espermatozides de
P. lineatus. Entretanto, necessrio conhecer se a taxa de
motilidade proporcionada pelo NaHCO3 119 mM aps o
descongelamento tambm reflete em elevadas taxas de
fertilizao e se esse ativador no exerce toxidez sobre os
ocitos. Portanto, a aplicabilidade desses resultados deve
ser comprovada mediante a realizao de ensaios que
estimem o potencial fertilizante e de eclodibilidade do
smen de P. lineatus congelado sob os protocolos testados neste trabalho.
O BTS apresenta glicose em sua formulao (Tabela 1),
que, por sua vez, atua como crioprotetor externo membrana
citoplasmtica dos espermatozides e serve de substrato
para a sntese de ATP. Segundo Cosson et al. (1999), a
fosforilao oxidativa mitocondrial altamente requerida
para produo de energia durante o batimento flagelar dos
espermatozides, de modo que a insuficincia de ATP
constitui uma das principais causas da reduo da motilidade
espermtica. Lahnsteiner et al. (1993) verificaram que o
espermatozide de O. mykiss utiliza triglicerdeos e
glicose como fontes primrias de energia. possvel que o
smen de P. lineatus apresente metabolismo semelhante e
que a concentrao de glicose exgena utilizada neste
estudo (em torno de 3,0%, aps a diluio do smen) tenha
sido suficiente para suprir as necessidades metablicas das

Tabela 4 - Taxas de motilidade (%) do smen de P. lineatus

ativado com diferentes solues antes e aps o
congelamento

Tabela 5 - Durao da motilidade (segundos) do smen de

P. lineatus ativado em diferentes solues antes e
aps o congelamento

Table 4 -

Table 5 -

Spermatic motility rates (%) of P. lineatus semen activated in

different solutions after and before freezing

Ativador

Congelamento

Ativador

Congelamento

Freezing

Activator

Freezing

Activator

gua destilada

Antes

Aps

Antes

Aps

Before

After

Before

After

7219,41

5025,30b

3312,52

188,25 b

9983,74

4823,38b

142108,66

7341,02 a

8810,08

7415,01 a

Bicarbonato de sdio 60 mM
Sodium bicarbonate

Sodium bicarbonate

Bicarbonato de sdio 119 mM

gua destilada
Distillated water

Distillated water

Bicarbonato de sdio 60 mM

Duration of spermatic motility (seconds) of P. lineatus semen

activated in different solutions before and after freezing

8913,07

7416,59 a

Sodium bicarbonate
a,b

Mdias seguidas de mesma letra no diferem (P>0,05) pelo teste

Student-Newman-Keuls.

a,b

Averages followed by the same letters do not differ (P>0.05) by Student Newman-Keuls
test.

Bicarbonato de sdio 119 mM

Sodium bicarbonate
a,b

Mdias seguidas de mesma letra no diferem (P>0,05) pelo teste

Student-Newman-Keuls.

a,b

Averages followed by the same letters do not differ (P>0.05) by Student Newman-Keuls
test.

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

Murgas et al.

clulas espermticas. A utilizao do diluidor BTS,

portanto, no demanda definitivamente a adio de KCl
ou KI se incrementado dos crioprotetores internos
Metanol 10% e DMSO 10%, tendo em vista o fato de no
ativarem precocemente a motilidade espermtica antes do
congelamento.

Concluses
A metodologia utilizada neste trabalho para
criopreservao do smen de P. lineatus foi adequada,
pois permitiu a obteno de taxas de motilidade espermtica
ps-descongelamento superiores a 70%.
A soluo de NaHCO3 119 mM pode ser usada como
ativador da motilidade do smen de P. lineatus aps
descongelamento.
O diluidor BTS pode ser utilizado satisfatoriamente, na
concentrao final de 4,5% para a criopreservao do
smen de P. lineatus se, concomitantemente, for enriquecido com os crioprotetores intracelulares metanol ou
DMSO em concentraes finais de 10%.

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Recebido: 22/08/06
Aprovado: 06/12/06

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia