OBSERVACION DE UNA CELULA

Objetivo: Que el alumno pueda observar con diferentes tcnicas o mtodos

una clula ya sea animal o vegetal, utilizando la tincin gram. Azul de metileno
y el fresco, utilizado por muestra mango, saliva y aguas residuales y observar
en el microscopio cada una de las muestras.
Introduccin: La clula es una unidad bsica de la vida. Para su supervivencia
cada una de las clulas debe mantener ciertas condiciones internas que
permiten el desarrollo de sus reacciones bioqumicas esenciales a pesar de los
cambios extracelulares. Estn son generadas en lugares acuosos.
Para poder ver la clula utilizando una pequea muestra de mango, saliva y
aguas residuales se utilizan varias muestras como la tincin gram, el fresco y
azul de metileno, para poder observar la clula y sus caractersticas y al ver
como reaccionan con algunas bacterias.
Marco terico:
Tincin Gram: Esta tincin esta desarrollada por el doctor Christian Gram en
1884, es hoy la ms utilizada en el laboratorio de bacteriologa y permite, de
acuerdo con la estructura y grosor de la pared bacteriana, agrupar las bacterias
en Gram positiva y gram negativa. Las Gram positivas poseen una capa gruesa
de peptidoglicn y carecen de membrana externa, mientras que las Gram
negativas tienen una capa ms delgada de peptidoglicn y poseen una
membrana externa.
Algunas bacterias se clasifican como Gram variables, pues simultneamente
presentan tincin de Gram positiva y de Gram negativa, aun bajo condiciones
ptimas de cultivo. Sin embargo, en su estructura estas bacterias poseen una
pared de Gram positiva, aunque la capa de peptidoglicn es ms delgada que
la mayora de las bacterias Gram positivas.
Esta tincin adems, correlaciona con otras propiedades como endotoxinas,
susceptibilidad a antibiticos, sensibilidad o resistencia a sales biliares, punto
isoelctrico y tincin superficial.
Existen variaciones de esta tcnica, pero en trminos generales, la tincin de
Gram involucra varios pasos:
1. Tincin Inicial: Las clulas se ties con cristal violeta, el cual es el
colorante primario. En este paso todas las clulas se tien morado.
2. Mordente: Se adiciona yoduro (lugol) que reacciona con el cristal violeta
y forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este punto todas las
clulas continan de color morado.
3. Decoloracin: Se adiciona un solvente no polar, el cual acta lavando el
complejo cristal violeta-yoduro de las clulas Gram negativas. De esta
manera las bacterias Gram positivas continan moradas y las gram
negativas quedan incoloras. Este es el paso crtico de esta tincin, pues

si se exagera, decolora las Gram positivas y si se hacen muy dbiles no

decolora a las Gram negativas.
4. Contratincin: Se vuelve a teir con safranina o fucsina, de manera que
las bacterias Gram negativas, que haban sido decoloradas, se tian de
rosado o fucsia segn el colorante empleado; en tanto, las bacterias
Gram positivas no se afectan con la concentracin y permanecen
moradas debido a lo intenso de esta coloracin.
Adems de una excesiva decoloracin, otro factor que puede influir en que
las bacterias Gram positivas se observen parcial o completamente rosadas,
es la edad del cultivo; las clulas viejas tienden a perder su capacidad de
retener el complejo cristal violeta-yoduro y por lo tanto las bacterias se
vern rosadas. Otro factor de variabilidad podra se condiciones de estrs
durante el cultivo de clulas Gram positivas.
Debe prestarse atencin a os lavados que se realizan al ir agregando los
diferentes reactivos, si se deja un exceso de agua en las lminas los
reactivos se diluirn, especialmente el yoduro.
Se han descrito modificaciones de esta tcnica orientadas a resolver
problemas especficos y cuyas variaciones radican en la composicin de los
reactivos, especialmente en la concentracin y preparacin de cristal
violeta, as como en el tipo de solvente orgnico empleado como agente
decolorante; por lo tanto, si se cuenta con varias de estas modificaciones es
importante no confundir los reactivos de cada una, pues los resultados
pueden ser inadecuados.
Aunque esta tcnica parece simple, su realizacin con un alto grado de
confiabilidad requiere prctica y experiencia, por lo que el estudiante tendr
la oportunidad de practicarla en numerosas oportunidades a lo largo del
curso.
Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio - Pgina 63
Material:

Portaobjetos
Cubreobjetos
Mechero de bunce
Cerillos
Microscopio
Saliva
Mango
Aguas residuales
Agua
Jabn
Azul de metileno
Violeta cristal
Solucin yodada
Alcohol

 Safranina aceite especial

Procedimiento:
Colocar una pequea muestra de mango en el porta objetos.
Ya teniendo la muestra en el portaobjetos se le coloca una pequea
gota de agua o solucin salina.
Se coloca en el microscopio para observarla.
En otro portaobjetos se coloca otra pequea muestra de mango y se
fija.
Ya fijada se tie por un minuto con violeta Cristal.
Se lava con agua (pero colocndolo vertical debe ser un poco
inclinada).
Se cubre con una solucin yodada durante un minuto y se lava de
nuevo con agua.
Se decolora la muestra con alcohol etlico o acetona.
Se escurre y se cubre con safranina durante 20 seg..
Se lava y se deja secar.
Se coloca en el microscopio para observarlo.
Se repite el mismo procedimiento con las de ms muestra (saliva y
aguas residuales)
Nota: A la saliva y a el agua residual se les coloca para el fresco un cubre objeto.