Exercices complmentaires (section 6)

Solutions

6.1. Le poids molculaire du mthanol est 32. 100 ml de mthanol dissout dans 40
litres de fluides donne une concentration de:

[MeOH ] =

100 ml x 0,79 g/ml

= 0,062 M
32 g/mol x 40 litres

EtOH sera un inhibiteur comptitif du mthanol sur la LADH. En absence et en

prsence d'inhibiteur, on aura des vitesses v et vi telles que:

v=

Vmax [S]
et vi =
Km + [S]

Vmax [S]
[I]
1+
Km + [S]
Ki

o [S] = [MeOH] et Km = 0,01 M.

Ce que l'on veut obtenir c'est que vi soit 5% de v. Autrement dit:

vi (avec inhibiteur)
= 0,05 =
v (sans inhibiteur
)

Km + [MeOH]
[I]
1+
Km + [MeOH ]
Ki

En substituant les valeurs, on obtient:

0,05 =

0,01 + [0,062]
[I]
d'o 1 +
= 138
[I]
Ki
1+
0,01 + [0,062]
Ki

On voit que [I] sera gal 137 Ki soit 137 x 1 x 10-3 (... le Km pour EtOH). Ainsi la

quantit d'thanol devant tre ingurgite devra donner une concentration finale de
0,137 M.

Le nombre de moles d'thanol correspondant sera 0,137 M x 40 litres = 5,48 moles. Le

poids molculaire de l'thanol tant de 46, notre empoisonn devra prendre 46 x 5,48
= 252 g d'thanol.
une densit de 0,79 g/ml, cela quivaut 252/0,79 = 319 ml. Puisque le whiskey
contient 50% v/v d'thanol, il ne reste notre bonhomme qu' en avaler rapidement
638 ml (presque toute une bouteille).

6.2. Le trac en double rciproque des donnes du problme donne:

1.4
1.2

sans inhibiteur
avec 10 mM inhib. A
avec 10 mM inhib. B

1/v (M

-1

s)

1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.5

0.0
1/[S] (mM

0.5

-1

1.0

a) En absence d'inhibiteur, on trouve -1/Km sur l'intercept de l'axe des 1/[S] une

valeur de -0,3. Donc Km = 1/0,3 mM = 3,3 mM. La valeur de 1/Vmax est donne par
l'intercept sur l'axe des 1/v = 0,1 M-1/s. Donc, Vmax = 10 M/s.

b) En prsence de l'inhibiteur A, la droite intersecte l'axe des 1/v au mme endroit

que la droite obtenue sans inhibiteur. Il s'agit donc d'une inhibition comptitive. La
valeur apparente du Km en prsence de l'inhibiteur A est de -1/Kmapp. = -0,13 M-1 .
Cela correspond Kmapp. = 7,7 mM. En fait, cette valeur de Kmapp. = Km (1+[I]/Ki).
On trouve donc que:

7,7 mM = 1 +

[I]
3,3 mM
Ki

et que 1 +

[I]
= 2,33
Ki

Sachant que [I] = 10 mM, on solutionne pour Ki = 7,5 mM.

En prsence de l'inhibiteur B, la double rciproque intercepte celle qui est obtenue

sans inhibiteur la mme valeur de 1/Km sur l'axe des 1/[S]. Il s'agit donc d'une

inhibition non-comptitive. Dans ce cas-ci, c'est la valeur de V max seulement qui est
modifie. La valeur apparente de 1/Vmax sur l'axe des 1/v est 3 M-1 s, soit
Vmaxapp. = 3,3 M/s. Cette valeur est en fait:

3,3 M/s =
qui se solutionne pour Ki = 5 mM.

Vmax
[I]
1+
Ki

10 M/s
[10 mM]
1+
Ki

c) Le nombre enzymatique est donn par Vmax/e. Il faudrait connatre la

concentration totale de l'enzyme, e, pour trouver le "turnover number".

d) L'expression de la vitesse d'une enzyme michalienne est donne par:

v=

k e [S]
Vmax [S]
soit: k[ES] =
Km + [S]
Km + [S]
alors

[ES]

soit: [ES] =

e [S]

Km + [S]

[S]
Km + [S]

En absence d'inhibiteur et pour [S] = 5 mM, on aura:

[ES]

[S]
5 mM
=
= 0,6
Km + [S] 3,3 + 5 mM

Dans les mmes conditions mais en prsence de 10 mM d'inhibiteur comptitif, cette

expression devient:

[ES]

Km

[S]
[5 mM]
=
= 0,39
[I]
[10 mM]
1+
+ [S]
3,3 mM 1 +
+ [5 mM]
Ki
7,5 mM

Dans le cas de l'inhibiteur non-comptitif, l'quation devient:

[ES]

[S]

Km 1 +

[I]
[I]
+ [S] 1 +
Ki
Ki

[5 mM]

3,3 mM + [5 mM] 1 + 10 mM
5 mM

= 0,20

6.3. Parce-que l'inhibition par in inhibiteur comptitf peut toujours tre leve en
prsence d'une concentration leve de susbtrat, ce qui n'est pas le cas des inhibitions
de type incomptitif ou non-comptitif.

6.4. La reprsentation en double rciproque des donnes exprimentales a l'allure

suivante:
8

1/v

sans PEB
[PEB] = 0,033 mM
[PEB] = 0,1 mM

1/Km
1/Km app.

1/Vmax

0
-0.4

-0.2

0.0

0.2

0.4

1/[hipp.] (mM

-1

0.6

0.8

1.0

Il est clair qu'il s'agit d'une inhibition comptitive o V max est indpendant de la
prsence de l'inhibiteur. L'intercept sur l'axe des 1/[hippurate] a des valeurs de -0,45
sans inhibiteur, -0,27 en prsence de 0,033 mM de PEB et -0,15 en prsence de 0,1 mM
de PEB.
De la premire de ces valeurs, on trouve Km = 2,22 mM.
Les valeurs de Km apparentes en prsence de 0,033 et 0,1 mM de PEB sont, quant
elles de 3,64 et 6,67 mM, respectivement. Ces Km apparents sont en fait:

[I]
[I] K
1+
alors on trouve: Ki = app m
Kapp
=
K
m
m
Ki
K -K
m

Ki =

0,033 x 2,22
=
3,64 - 2,22

0,051 mM

0,1 x 2,22
6,67 - 2,22

6.5.

a) Pour l'inhibition incomptitive, la pente de la double rciproque ne change

pas; Km et Vmax sont modifis par le mme facteur. Par contre, dans l'inhibition noncomptitive, la pente augment, Vmax est modifi mais Km ne change pas. C'est donc
le trac II qui correspond au non-comptitif et I l'incomptitif.
b) L'intercept de la ligne II sur l'axe des 1/[S] donnera donc 1/K m = 5000, soit un Km
= 2 x 10-4 M. Par ailleurs, la droite qui reprsenterait la vitesse de raction sans
inhibiteur serait parallle la droite II et aurait le mme intercept sur l'axe des 1/[S]
que la droite I. En la traant, elle interceptera l'axe des 1/v la valeur de 1/V max =
0,13 . On aura donc Vmax = 7,69.

c) Dans l'inhibition non-comptitive, la valeur apparente de Vmax est donne par:

Vmax soit 1 = 7,69

Vapp
max =
[I]
0,247 1+ 1 mM
1+
Ki
Ki

qui donne, aprs calcul Ki = 1,1 mM.

Dans l'inhibition incomptitive, la modification de Vmax est la mme et on a:

Vmax soit 1 = 7,69

Vapp
max =
[I]
0,21 1+ 1 mM
1+
Ki
Ki

qui donne, aprs calcul Ki = 1,64 mM.

6.6. En prsence d'un inhibiteur comptitif la vitesse de raction est donne par:
v=

Km

Vmax [S]
55 x 2 x 10-4
=
-3
[I]
1+
+ [S] 2 x 10-4 1 + [2,5 x 10 ] + [2,5 x 10-4 ]
Ki
2,5 x 10-3
= 18,35 M/min

En fait, quand [S] = Km et [I] = Ki, la vitesse est 1/3 Vmax (dans l'inhibition
comptitive)

6.7. Mme si la valeur de Vmax nous chappe, on peut arriver une solution quand
mme. En effet, en absence d'inhibiteur, la vitesse sera donne par:

Vmax [S]
[S]
soit v =
Km + [S]
Vmax Km + [S]
[10-4 ]
et v =
= 0,0323
Vmax 3 x 10-3 + [10-4 ]
v=

50% d'inhibition, la vitesse en prsence de l'inhibiteur ( vi) sera 0,5 x v (la vitesse en
absence de l'inhibiteur) soit: 0,0323/2 = 0,0162 V max. On aura alors cette vitesse en
prsence de l'inhibiteur comptitif qui sera donne par:

v=

et

Km

Vmax [S]
[S]
soit v =
[I]
Vmax
[I]
1+
+ [S]
Km 1 +
+ [S]
Ki
Ki

v =
Vmax

3 x 10-3

[10-4 ]
= 0,0162
[I]
-4
1+
+ [10 ]
2 x 10-5

qui se solutionne pour [I] = 2,05 x 10-5 M.

6.8.

En absence et et prsence d'un inhibiteur non-comptitif, les vitesses de

ractions sont donnes respectivement par:

Vmax [S]
[I]
1+
V [S]
Ki
v = max
et vi =
Km + [S]
Km + [S]

65% d'inhibition, le rapport des vitesses en prsence et en absence de l'inhibiteur

sera donn par vi/v = 0,35 de sorte que:

Vmax [S]
[I]
1+
Ki
vi = Km + [S] = 0,35 = Ki
v
Vmax [S]
Ki + [I]
Km + [S]

Avec Ki = 2 x 10-5 M, cette expression se solutionne pour [I] = 7,43 x 10-6 M.