Les enzymes

1) La L-homosrine dsaminase purifie du foie de rat catalyse les ractions suivantes :

L-homosrine <-> 2-oxobutyrate + NH3
L-cystine + H2O <-> H2S + pyruvate + NH3
Laction dun effecteur, la D-cystine, est tudie sur ces deux activits. Les mesures
de vitesses initiales pour diffrentes concentrations en substrat, en absence ou en
prsence de D-cystine, sont portes dans les tableaux suivants :
[L-homosrine] (M)
5,00 10-2
4,00 10-2
2,50 10-2
2,00 10-2
1,25 10-2
1,00 10-2
[L-cystine] (M)
10,00 10-2
2,50 10-2
2,00 10-2
1,25 10-2

[D-cystine] = 0 M
Vi (mol.mL-1.h-1)
417
384
317
286
220
190

[D-cystine] = 1,25 10-2 M

Vi (mol.mL-1.h-1)
263
247
204
182
140
121

[D-cystine] = 0 M
Vi (mol.mL-1.h-1)
48,5
32,8
29,4
22,6

[D-cystine] = 2 10-2 M
Vi (mol.mL-1.h-1)
41,5
22,6
19,0
13,9

Dduisez de lanalyse graphique des rsultats exprimentaux :

- Les valeurs des paramtres cintiques de lenzyme pour les deux substrats
considrs ( !!! vous exprimerez lactivit enzymatique en U/l).
-

Les diffrents types daction de leffecteur D-cystine.

2) Est-il vrai que les enzymes :

sont des molcules catalytiques possdant un site particulier appel site actif ;
sont des catalyseurs biologiques capables de modifier les quilibres ractionnels ;
ont toutes la mme structure mais selon les conditions du milieu (pH, temprature),
c'est une partie diffrente de la molcule qui donne le site spcifique ;
fonctionnent avec la mme efficacit, tous les pH, pourvu qu'ils ne soient pas trop
extrmes,
sont spcifiques de leurs substrats.
3) Est-il vrai que la phosphorylation dune enzyme est un mcanisme de rgulation de
lactivit enzymatique qui est irrversible ?

4) En prsence de son substrat spcifique, une prparation de succino-deshydrognase a

fourni les rsultats cintiques suivants :
[S] (M)
1 x 10-3
2 x 10-3
4 x 10-3
8 x 10-3

Quantit de S transform par minute (M/min)

3,3
5,0
6,6
8,0

Dterminez, par une reprsentation graphique approprie, le Km et le Vmax de

lenzyme pour son substrat.
5) Le cytochrome aa3 est une protine transporteuse dlectrons. La forme oxyde agit
sur un substrat incolore et loxyde en un compos color. Lapparition de ce dernier
est suivie par dosage spectrophotomtrique. Le cytochrome aa3 nabsorbe pas la
longueur donde choisie.
La cintique de la raction est tudie en labsence deffecteur. Les rsultats obtenus
figurent dans le tableau suivant :
A/5 min
0,080
0,122
0,182
0,213

[S] (M)
1 x 10-4
2 x 10-4
5 x 10-4
10 x 10-4

La cintique de la raction est tudie en prsence dions CN-. Les rsultats

obtenus figurent dans le tableau ci-aprs :
A/5 min
0,083
0,101
0,114
0,123

[S] (M)
2 x 10-4
3 x 10-4
4 x 10-4
5 x 10-4

Prcisez le rle (justifiez votre rponse !) des ions CN- vis--vis du cytochrome aa3
et calculez les paramtres cintiques de lenzyme avec et sans ces ions.
6) Une enzyme catalyse la raction : S -----> P.
Les vitesses initiales ont t dtermines pour chacune des concentrations initiales en
substrat suivantes :
[S] (M)
vi (nmol/l.min)

10-2
76

10-3
74,9

10-4
60

7,5 10-5
56,25

A) Vrifier que la cintique est michaelienne.

B) Si [S] = 2,5.10-5M, quelle est la vitesse initiale ?
C) Si [S] = 9.10-2 M, quelle est la vitesse initiale si la quantit d'enzyme est double ?
D) Si [S] = 0,4 M, quelle est la concentration en P aprs 3 min ?

7) L'activit d'une enzyme est mesure en fonction de la concentration en substrat, en

absence et en prsence d'un inhibiteur (2 x 10-3 M). On trouve les rsultats suivants :

A) Dterminer VM et KM en absence et en prsence d'inhibiteur.

B) Quel est le type d'inhibition ? Calculer le KI :
8) Le propofol, molcule anesthsique, est un inhibiteur de la fatty acide amide hydrolase
(FAAH). Dans la reprsentation de Lineweaver-Burk, les droites obtenues en
labsence et en prsence de linhibiteur convergent en un mme point de laxe des
ordonnes. En prsence de propofol (25.10-6M), la valeur du KM de lenzyme varie de
1,5 mM 4,5 mM. Dans la liste suivante, relever la (les) proposition(s) exacte(s) :
-

Le propofol est un inhibiteur comptitif ;

La valeur du ki est gale 12,5 10-6 M ;
Le propofol possde une homologie de structure avec le substrat naturel de
lenzyme ;
Le propofol augmente laffinit de lenzyme pour son substrat ;
Le propofol ne modifie pas la valeur de Vmax de lenzyme.

9) La phosphatase alcaline catalyse l'hydrolyse des esters de l'acide ortho-phosphorique.

Pour suivre l'activit enzymatique, on utilise un substrat synthtique, le
paranitrophnol-phosphate (M.M. = 371 g.mol-1) qui libre du paranitrophnol qui
absorbe 410 nm avec un coefficient d'extinction molaire: eM = 17514 M-1.cm-1.
Chaque raction est effectue dans un volume ractionnel de 10 ml contenant 0,2 ml
d'enzyme une concentration initiale de 10 mg/ml. On obtient les rsultats suivants
(longueur du trajet optique = 1 cm):
[S0] (mg/tube)
vi (unit DO.min-1)

0
0

0,26
0,147

0,39
0,167

0,65
0,190

1,50
0,212

1,95 3,80
0,231 0,238

A) Dterminer les valeurs des paramtres cintiques de cette enzyme vis--vis de ce

substrat (Vmax sera exprim en M.min-1 et KM en M).
B) Calculer l'activit spcifique de l'enzyme en mU.mg-1 (sachant que U = moles.min-1)

10) Lactivit de la 6-phosphogluconate dshydrognase sur son substrat 6phosphogluconate est tudie deux pH diffrents. La vitesse de la raction
est exprime en units arbitraires.
Concentration en mmol/L

Vi en units arbitraires
pH = 7,6

pH = 9,0

0,0174

0,074

0,0034

0,0266

0,085

0,0047

0,0526

0,098

0,0075

0,1666

0,114

0,0128

0,4000

0,120

0,0167

a) Dterminer Km et Vmax pour chaque pH.

b) Prciser le pH pour lequel lactivit de lenzyme est la plus grande et le
pH pour lequel son affinit pour le 6-P-gluconate est la plus grande.
11) En prsence dun inhibiteur non comptitif,
o
o
o
o
o

Le Km de lenzyme augmente ;
Laffinit de lenzyme pour son substrat ne change pas ;
Le Km de lenzyme diminue ;
La vitesse maximale de la raction ne peut tre atteinte ;
La vitesse maximale de la raction peut tre atteinte.

12) La vitesse initiale de la raction catalyse par la phosphatase alcaline a t

dtermine pour diffrentes concentrations en substrat, temprature, pH et
concentration en enzyme constants. Les rsultats sont reports dans le tableau
ci-dessous :
[S] (mol/L)
1,00 x 10-4
1,25 x 10-4
2,00 x 10-4
4,00 x 10-4

Vitesse initiale (mol. L-1. Min-1)

1,54 x 10-3
1,77 x 10-3
2,34 x 10-3
3,23 x 10-3

a) Dterminer les paramtres cintiques de lenzyme :

Rponses
1) L-homosrine : VMAX = 9800 U/L et KM = 2,1 10-2 M -> I non comptitif
L-cystine : VMAX = 980 U/L et KM = 2,1 10-2 M -> I comptitif
2)
sont des molcules catalytiques possdant un site particulier appel site actif ;
sont des catalyseurs biologiques capables de modifier les quilibres ractionnels ;
ont toutes la mme structure mais selon les conditions du milieu (pH, temprature),
c'est une partie diffrente de la molcule qui donne le site spcifique ;
fonctionnent avec la mme efficacit, tous les pH, pourvu qu'ils ne soient pas trop
extrmes,
sont spcifiques de leurs substrats.
3) Faux, cest un mcanisme rversible, car une phosphatase peut enlever le groupement
phosphate.
4) VMAX = 10 M/min et KM = 2 10-3 M
5) Sans CN- : VMAX = 0,26 A/5 min et KM = 2,2 10-4 M
Avec CN- : VMAX = 0,17 A/5 min et KM = 2,2 10-4 M -> I non comptitif
6) A) Il faut vrifier quon a une droite si on fait le graphe 1/v en fonction de 1/[S] et
cest bien le cas.
B) v = 36,74 nmol/l.min
C) v = 153,8 nmol/l.min
D) [P] = 230,7 nmol/l
7) Sans inhibiteur : VMAX = 44,6 moles/min et KM = 9,9971 10-6 M
Avec inhibiteur : VMAX = 45,1 moles/min et KM = 3,01 10-5 M -> I comptitif
KI = 10-3 M
8) Le propofol est un inhibiteur comptitif ;
La valeur du ki est gale 12,5 10-6 M ;
Le propofol possde une homologie de structure avec le substrat naturel de lenzyme ;
Le propofol ne modifie pas la valeur de Vmax de lenzyme.
9) A) VMAX = 13,9 moles/l.min et KM = 45,8 M
B) 69,5 mU/mg
10) A) pH = 7,6 : Vmax = 0,12 ua et Km = 0,011 mmol/l
pH = 9 : Vmax = 0,0194 ua et Km = 0,0822 mmol/l
B) Lactivit est la plus grande pH = 7,6, car cest ce pH que Vmax est la plus
grande ; laffinit de E pour S est la plus grande pH = 7,6, car cest ce pH que Km
est le plus petit.
11) Laffinit de lenzyme pour son substrat ne change pas.

La vitesse maximale de la raction ne peut tre atteinte.

12) Vmax = 5,04 10-3 mol/l.min et Km = 0,0002 M