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Universidad Autnoma del Estado de

Mxico
Facultad de Qumica
Licenciatura: Qumico Farmacutico Bilogo
LABORATORIO DE VIROLOGA
Alumnos:
o Contreras Acua Claudia Josselyn
o Escamilla Durn Juan Manuel
o Huerta Guerrero Jonathan
PRCTICA 1
Constitucin de un laboratorio de virologa
EQUIPO 2
GRUPO 93
2015-B

Prctica 1: Constitucin de un Laboratorio de Virologa de investigacin o


diagnstico.
Objetivo: Conocer e investigar el equipo y caractersticas fundamentales de un laboratorio de
virologa, conocer las diferencias al respecto con otros laboratorios biolgicos.
Fundamento terico:
La esencia de un laboratorio de virologa son el equipo y la asepsia, tanto de las instalaciones como
del aire. El aire se debe de mantener bajo presin positiva, despus de ser pasado por un filtro, esta
presin positiva crear condiciones para que el polvo y los microorganismos sean arrastrados hacia
afuera. Debe de existir un rea para el cultivo de tejidos, instalada en una zona alejada de vas de
paso.
Existen instrumentos en los laboratorios de virologa que son muy parecidos a los de otros
laboratorios, de los cuales se describen a continuacin:
Instrumento
Campana de Flujo laminar

Funcin
Mantener un rea libre de contaminantes, que se consigue
mediante el paso del aire a travs de filtros HEPA (High
Efficiency Particulate Airborne).

Incubadoras de CO2

Estufas cuya funcin es regular la temperatura a 37C,


adems se regula la presin de CO 2 , esto controla en pH que
hay dentro de la incubadora.

Microscopio de contraste de Permite el monitoreo del desarrollo morfolgico del cultivo.


fases invertido
Congeladores
criognia

equipo

de Sistema que permite guardar las clulas durante aos a la


temperatura de nitrgeno lquido (-196C)

Equipo de filtracin

Muchas soluciones y medios de cultivo son esterilizadas por


filtracin debido a su tamao de 0.22 micrmetros de poro.

Equipo de esterilizacin

Sistema que permite la esterilizacin por calor (121C y a 2


atmsferas de presin durante 20 minutos)

Centrfugas

Deben de ser refrigeradas y se deben de instalar lejos de las


campanas de flujo laminar para evitar las turbulencias del aire
que generan.

Contador elctrico de clulas

Instrumento que es capaz de medir y contra partculas en


suspensin, consta de 2 electrodos que transmiten al equipo
de amplificacin y anlisis los cambios de resistencia que
detectan, cada vez que las clulas en suspensin los

atraviesan.
Caractersticas de un laboratorio de Virologa:
o Ubicacin y dimensiones: Depende del nivel de contencin requerido, es recomendable
que este separado fsicamente de otras reas de trabajo de laboratorio, fundamentalmente
por las condiciones de nula contaminacin que se requiere para la manipulacin de clulas.
o Diseo, Instalaciones y Equipo: Deben de cumplir con las caractersticas
correspondientes a su nivel de contencin.
Caractersticas especficas:
- Aire acondicionado especfico para el laboratorio de virologa, adems de contar
con filtros HEPA.
- Contar con las cabinas de seguridad correspondientes a su nivel de contencin.
o Nivel de contencin:
-

Bioseguridad: Principios, tcnicas y prcticas aplicadas con el


fin de evitar la
exposicin no intencional a patgenos y
toxinas; as como su liberacin accidental.
Bioproteccin: Medidas de proteccin de la Institucin y del
personal destinadas a reducir el riesgo de prdida, uso
incorrecto, desviaciones o liberacin intencional a patgenos o
toxinas.

Contencin: Son los mtodos que hacen seguro el manejo del


materiales infecciosos en el laboratorio. Su propsito es reducir al
mnimo la exposicin del personal a agentes infecciosos.
- Contencin primaria: Tambin llamadas barreras primarias;
son aquellas que protegen al trabajador y su entorno inmediato
(por ejemplo equipo de proteccin).
- Contencin secundaria: Se refiere al diseo y construccin de
un laboratorio que contribuya a la proteccin del propio
personal del laboratorio, proporciona una barrera para proteger
a las personas y animales de la comunidad frente a posibles
escapes accidentales o de agentes infecciosos.
Simbologa:

RESIDUO PELIGORO BIOLOGCO


INFECCIOSO

ACCESO RESTRINGIDO

Clasificacin de los niveles de contencin:

Cmo funciona una campana de bioseguridad?

-Es una cabina que se caracteriza por ser totalmente cerrada. Su construccin
es sellada a los gases.
-Esta diseada para trabajar agentes microbiolgicos clasificados en el nivel 4
-Suministra mxima proteccin al trabajador y al ambiente. La ventana es
sellada, no es posible abrirla
-La colocacin de los materiales adentro de la cabina de realiza a travs de una
caja de paso (doble puerta sellada) que puede ser descontaminada entre usos.
-La inyeccin y la extraccin del aire a la cabina se realiza a travs de filtros
HEPA. El aire extrado de la cabina para a travs de dos filtros HEPA o de un
filtro HEPA y un incinerador de aire, andes de ser descargado al exterior.
-El flujo de aire es mantenido a travs de un sistema externo, independiente de
la cabina, que mantiene el interior a una presin negativa aproximadamente
0.5 pulgadas de agua (12.7mm/H2O) comparada con el exterior
-Estas cabinas son adecuadas para trabajas con agentes microbiolgicos que
requieren contenciones/confinamientos de bioseguridad de niveles 1, 2, 3 4

Actividad de evaluacin:
1.- Cules son los usos del tanque de nitrgeno lquido y que
temperatura alcanzan?
El uso del tanque de Nitrgeno en el laboratorio de Virologa es la conservacin
de lneas celulares, la temperatura que alcanza el nitrgeno lquido es (-196C).
2.- Describe las caractersticas de las campanas de flujo laminar.
Existen diferentes clases de campana de flujo laminar:

Clase I
Clase II: Subclases: A1, A2, B1, B2.
Clase III

Caractersticas generales:
Velocidad de ingreso de aire 387 cm/seg.
Sistema de Filtracin HEPA
Puede o no estar acoplado a un sistema de extraccin conectada al
exterior.
Se succiona el aire que circula en el rea de trabajo.
Filtro de aire HEPA que suministra el flujo de aire vertical.
3.
Cules
son
las
diferencias
entre
un
microscopio
epifluorescencia, la luz ordinaria y el invertoscopio?
Microscopio
Epifluorescen
cia:

Principio/ Caractersticas:
*El lente ilumina y recibe la luz emitida
por la muestra.
*Su funcionamiento se basa en la
propiedad
de
fluorescencia
(fluorocromo).
*Cuenta con una lmpara de xenn o
mercurio.
*su funcionamiento se basa en que la
luz de la lmpara atraviesa un primer
filtro que selecciona una longitud de
onda capaz de excitar al fluorocromo
antes de incidir sobre la muestra, esta
luz se refleja en un espejo dicromtico
e incide sobre la muestra excitando al
fluorocromo; el que emite una longitud
de onda mayor que la incidente. La luz
emitida por la misma no se refleja si no
que atraviesa el espejo dicromtico y
llega a un segundo filtro que selecciona
la longitud de onda de emisin del
fluorocromo. Finalmente la luz ingresa
a un fotomultiplicador que la convierte

Imagen

de

en una seal elctrica.

Luz
convencion
al

Invertoscop
io

Es compuesto porque posee dos


sistemas
principales
de
lentes
convergentes (ocular y objetivo), en
cambio los microscopios simples o
lupas, de menor aumento, presentan
un solo sistema de lentes biconvexas o
plano-convexas montadas en una
armadura metlica. La mayora de los
modelos actuales son binoculares,
aunque tambin los hay monoculares.
El
microscopio
compuesto
convencional se denomina "de campo
claro" o "de campo brillante" porque
todo el campo se ilumina con una lente
condensadora comn, a diferencia de
variedades que utilizan luz difractada,
de fondo obscuro. Las muestras que
utiliza
el
microscopio
compuesto
convencional deben ser traslcidas y
estar teidas para entregar contraste.
Lleva el objetivo y el ocular bajo la
platina y la preparacin. Dos espejos
reflejan la imagen hacia el ojo. Sirve
para
observar
cultivos
celulares,
bacterianos o plancton (ubicados en
cpsulas o en frascos de fondo plano),
microdiseccin,
micromanipulacin,
observacin
de
parsitos,
de
aglutinaciones serolgicas, reacciones
de complemento, microprecipitados,
observacin a travs de cmaras al
vaco,
a
baja
temperatura,
a
temperatura alta, en cmara estril, en
caja para substancias radiactivas, en
medio lquido espeso, etc.

4.
Describe las diferencias elementales
ordinaria y una centrifuga refrigerada
Centrifuga ordinaria

entre

una

Centrfuga refrigerada

centrifuga

Mquina que pone en rotacin una


muestra para por fuerza centrfuga
acelerar
la
decantacin
o
la
sedimentacin de sus componentes o
fases (generalmente una slida y una
lquida), segn su densidad.
Es un instrumento ideal para los
hospitales, laboratorios para hacer
anlisis cualitativo al suero, plasma;
radio-inmunidad.
La
centrifugadora
accionada elctricamente modelo 800
de
la
tabla
es
centrifugadora
convencional del laboratorio aplicada
extensamente en la investigacin
cientfica, educacin. departamento de
la biologa, de la qumica y de la
investigacin mdica

Proporciona control de temperatura del


material
biolgico
durante
la
centrifugacin.
El
control
de
temperatura del denominado estante
fro es un mtodo de referencia para
los enzimlogos y bilogos celulares
porque
garantiza
las
condiciones
necesarias para la reproducibilidad de
la etapa de preparacin de muestras.
La ausencia de control de temperatura
en esta etapa puede causar resultados
impredecibles.

Bibliografa
1. Cabinas de Bioseguridad Biolgica Primer Edicin, Organizacin
Mundial de la Salud, 2002
2. Favi Corts M (2003) Gua de Bioseguridad para laboratorios clnicos
Instituto de Salud Pblica de Chile. Chile
3. Manual de bioseguridad en el laboratorio Tercera edicin, Organizacin
Mundial de la Salud, Ginebra, 2015
4. Lara Villegas H, Ayala Nez N, Rodrguez Padilla C., et. al. (2007}
Laboratorios de bioseguridad nivel 3 y 4 Laboratorio de Inmunologa y
Virologa, Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Autnoma de
Nuevo Len. Mxico.

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