Fijadores g3 Final

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE
FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS, ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO
DE EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.
UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
CATEDRA DE:
TCNICAS HISTOLGICAS
DOCENTE:
LIC. IVN PEAFIEL
TEMA:
FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE
PENETRACIN, VELOCIDAD DE FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN,
VENTAJAS Y DESVENTAJAS, ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.
GRUPO N 3
TERCER SEMESTRE
PERIODO ACADMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016
Grupo N-3
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1

RIOBAMBA ECUADOR
GRUPO N-3
INTEGRANTES:
N1
2
3
APELLIDOS Y NOMBRES
Collaguazo Enrquez Erika Gabriela
Molina Ortiz Jhonnatan Paul
Valarezo Flores Stefanye Anah
TEMA:
FIJADORES
DE
TEJIDOS:
FIJADORES
CON
SIN
FORMOL,
VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE FIJACIN, USO DE

ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS, ACCIN EN
LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE
LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.
N1
25%
Grupo N-3
50%
75%
PARTICIPACIN
100%
Observacin
100%
Trabajo correctamente, y
colaboro en todo lo
necesario.
100%
Colaboro con todas las
necesidades requeridas,
para la elaboracin del
presente trabajo
100%
Su colaboracin fue clave
para la correcta
elaboracin del trabajo.
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2
Cal. Docente

INTRODUCCIN
El Laboratorio de Anatoma Patolgica es un rea donde se trabaja como mucha precaucin y sobre
todo sin cometer errores ya que estos conllevaran un resultado que perjudicara al paciente y en si al
mismo profesional.
En el rea de anatoma patolgica se subdivide en fases que son:
La fase pre
analtica-analtica-post analtica.
Dentro de la fase analtica se encuentra la sub rea fijacin la cual indicaremos cuales son los tipos
de fijadores con o sin formol con sus respectivas caractersticas utilizados en distintas muestras de
rganos.
Antes de la fijacin tisular debemos de obtener la muestra. La extraccin de esta constituye la
primera parte del estudio histolgico; es el Antomo Patlogo el que se pone en contacto con el
rgano que se vaya a estudiar. A ser posible se debe efectuar la extraccin tomando un fragmento de
la lesin y una toma de los tejidos subyacentes. Su grosor no debe sobrepasar los 5 mm.
La fijacin tisular consiste en interrumpir los procesos degradativos que a parecen tras la muerte
celular es decir evitar la autolisis, tratando de conservar la morfologa y composicin de los tejidos
lo ms prxima a la normalidad. La fijacin debe ser inmediata (dentro del minuto que sigue a la
extraccin del tejido).
La fijacin proporciona una imagen esttica:
Imagen real: es la imagen que tena el tejido cuando estaba vivoImagen equivalente: es el que se obtiene despus de la manipulacin y comprende la
fijacin, inclusin, corte y coloracin.
Se distinguen dos tipos de fijadores:
La fijacin inicial o primaria: realizada de forma inmediata sobre el tejido fresco.
La refijacion o fijacin secundaria: se realiza con un segundo fijador para algunas

estructuras especiales o simplemente para intensificar la fijacin inicial.
Grupo N-3
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OBJETIVO GENERAL:
Dar a conocer los tipos de fijadores utilizados en distintos rganos dentro del laboratorio de
anatoma patolgica
OBJETIVO ESPECFICOS:
Conocer e identificar las caractersticas de los fijadores con o sin formol.
Identificar las ventajas y desventajas que producen estos fijadores.
Dar a conocer el uso de los fijadores de acuerdo al espcimen.
Conocer el tiempo de exposicin del personal de anatoma patolgica a estos fijadores.
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DESARROLLO
La Fijacin
Los fijadores adems de conservar intacta la estructura durante un espacio de tiempo ms o menos
largo, paralizan todos los procesos orgnicos.
La fijacin ideal se realiza entre 0C y 4C porque aunque el fro retarda la accin del fijador al
contraer la pieza, tambin paraliza la autolisis del tejido que ser ms o menos rpida dependiendo
por ejemplo los tejidos ricos en enzimas digestivas como el pncreas o aquellos que tienen gran
cantidad de grmenes sufran la autolisis con mayor intensidad.
Las soluciones fijadoras tienen por objeto precipitar las protenas, aumentar la consistencia de los
tejidos, inactivar las enzimas proteolticas e inhibir el crecimiento bacteriano y por lo tanto,
preservar la constitucin qumica y la morfologa de los componentes titulares.
Cuando las piezas quirrgicas son pequeas o las muestras son obtenidas por aspiracin y de no
existir indicaciones de realizar improntas, frotis para citologa, estudios inmunohistoqumicos o
de microscopa electrnica que requieran fijacin especial se colocarn inmediatamente en
formol buferado al 10% en una relacin de 10 a 1 fijador/muestra. Para una mejor fijacin las piezas
no deben exceder de un espesor de 3 mm y un tamao de 3 x 2 cm
Principios generales de la fijacin.
No existe un mtodo universal de fijacin, por lo que un agente fijador para un tejido no
tiene porque ser adecuado para otro.
No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido, porque fijacin no equivale a
conservacin tisular.
Un defecto en la fijacin nunca puede ser corregido.
Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con grandes defectos de fijacin.
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FIJADOR IDEAL CARACTERSTICAS:

Prevenir la autlisis
Preparar el tejido para el procesado posterior
Prevenir el dao osmtico
Preparar al tejido para la tincin posterior
Endurecer el tejido para facilitar su fcil seccin
Prevenir al tejido de retraccin y de rotura
Hacer que los componentes tisulares resistan la extraccin por el agua y los solventes
orgnicos
Preservar el tejido en un estado similar al estado vivo.
CRITERIOS PARA OBTENER UNA BUENA FIJACIN.

a) Eleccin del fijador
La solucin fijadora a utilizar depende del estudio que se quiere realizar. Para las preparaciones de
tejidos y rganos, en las que interesan un estudio topogrfico de los mismos, deben usarse fijadores
con un buen poder de penetracin y de difusin. Para estos casos se recomienda utilizar los lquidos
de Zenker, Boin o Helly: En caso contrario se emplear la solucin de formol al 10% 15% que
permite obtener resultados satisfactorios. Lquido considerado como el fijador universal pues
facilita el empleo posterior de cualquier otro fijador (postfijacin) capaz de complementar su
accin. se emplear la solucin de formol al 10% 15% que permite obtener resultados
satisfactorios. Lquido considerado como el fijador universal pues facilita el empleo posterior de
cualquier otro fijador (postfijacin) capaz de complementar su accin.
b) Tamao de las muestras.

El tamao y grosor de las muestras deben ser pequeas y delgadas, de 1cm2 a 2 cm2 y con un
espesor de 2 mm a 5 mm, especialmente si se emplean fijadores con escaso poder de penetracin y
de difusin. c) Volumen del fijador. Una proporcin que es necesario emplear ser de 1 a 20
(muestra fijador). Ser la ms adecuada para garantizar una buena fijacin
d) Tiempo de fijacin.
El tiempo en la fijacin es importante en dos aspectos.
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I.
El intervalo que media entre la interrupcin del aporte sanguneo y la inmersin de las
muestras en la solucin fijadora. Lo deseable es que las muestras se fijen inmediatamente
despus de obtenidas mediante una biopsia o que la necropsia se efecte al poco tiempo de
producida la muerte. Mientras ms largo es este lapso, los procesos autolticos que sufran
los tejidos sern ms evidentes.
II.
Debe tenerse en cuenta el tiempo que permanecern las muestras sumergidas en los
fijadores. Este tiempo vara con relacin al tipo de fijador que se utiliza; al tamao y la
naturaleza de la muestra y la temperatura de fijacin. Por lo tanto los lapsos de fijacin
varan en rangos muy amplios. En cualquier circunstancia, siempre deben respetarse los
tiempos recomendados para cada tipo de fijador para garantizar la conservacin de una
buena estructura celular y tisular de los tejidos.
e) Temperatura de la fijacin.
Es recomendable efectuar la fijacin a bajas temperaturas ( 4o C.) dentro de un refrigerador y con
la solucin fijadora enfriada previamente. Este procedimiento retardar el tiempo de fijacin pero
disminuir de manera notable la autlisis de los tejidos.
f) Almacenamiento de las muestras.

En ciertos casos los tejidos fijados no necesitan ser procesados inmediatamente para aplicarles
otros pasos de la tcnica histolgica. Por lo tanto es conveniente almacenar y conservar los tejidos
fijados para un uso posterior. Despus de eliminar el fijador mediante un lavado, se guardan en
una solucin de alcohol al 70%. As los tejidos pueden guardarse por un tiempo bastante largo sin
que sufran modificaciones morfolgicas notorias.
g) Lavado de las muestras fijadas.

Al concluir la fijacin, el fijador debe ser eliminado de las muestras. Para tal fin se procede al
lavado de los tejidos mediante agua o alcohol. Se evita, as, que los tejidos se endurezcan
demasiado o que ciertos componentes del fijador introduzcan modificaciones en los tejidos e
impidan una adecuada obtencin de secciones delgadas o la coloracin correcta de sus componentes
celulares.
TIPOS DE FIJADORES
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Clases de fijadores segn su mecanismo de accin

FSICOS
Congelacin: Se utiliza como mtodo para la fijacin el enfriamiento por congelacin del tejido es
el mtodo de eleccin para realizar estudios morfolgicos o funcionales en los que se requiere
conservar intacta la estructura antgena del tejido o su contenido enzimtico. La clave para una
correcta fijacin por congelacin del tejido es que su realizacin sea instantnea porque un
enfriamiento lento provoca la formacin de micro cristales titulares de hielo que pueden agregarse
con el paso del tiempo produciendo roturas titulares que dificulten el diagnosticoEl procedimiento idneo para fijar tejidos por congelacin consiste en utilizar ISOPENTANO a
menos de 50C como agente de congelacin y realizar una fragmentacin suficiente de la muestra
que se vaya a congelar.
Normalmente se preparan bloques de no ms de 3 cm. cuadrados de superficie y 3 mm de espesor
de modo que el proceso de congelacin instantnea no requiera ms de 10 segundos. El
mantenimiento continuo de isopentano debe realizarse en un congelador programado a -70C para
que quede compensado la subida inmediata de la temperatura que se produce al extraer el lquido
del congelador.
Al enfriar tanto no actan bacterias ni enzimas y el tejido se endurece para cortar estos tejidos
utilizamos el micrtomo de congelacin o un aparato ms evolucionado o criostato el cual tiene
como ventajas que la temperatura se mantiene ms baja y se pueden realizar cortes ms finos entre
2 y 15 micras.
Criodesecacin o filiacin: Consiste en someter al tejido a dos procesos el primero es la fijacin
instantnea por congelacin en Nitrgeno lquido y el segundo desecacin por sublimacin directa
del agua confiada a vapor en una bomba de vaco es un proceso complicado y costoso pero tiene
una ventaja muy importante y es que al eliminar totalmente el agua tisular, paraliza la autolisis y
produce una conservacin indefinida, adems evita que se produzcan enlaces qumicos entre el
tejido y el fijador, conservando asila estructura antignica tisular.
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Criosustitucin: es la sustitucin lenta y progresiva del agua congelada de un tejido por un lquido
fijador que en ocasiones puede actuar simultneamente como medio de inclusin. Tras la
congelacin instantnea del tejido con nitrgeno liquido o isopentano a -50C se coloca el tejido
congelado en el medio de sustitucin, este medio est formado por una mezcla de alcohol etlico,
acetona y propiln- glicol. Enfriado a -40C, el intercambio del agua tisular por el lquido de
sustitucin, se realiza dentro de un congelador y debe procurarse que la temperatura no disminuya
del punto de congelacin del lquido de sustitucin.
QUMICOS
FIJADORES QUE ACTAN POR RETICULARIZACIN DE LAS PROTENAS
El proceso que denominamos reticularizacin de las protenas sobreviene cuando la
desnaturalizacin de stas molculas de se produce no por precipitacin, sino porque el agente que
provoca el fenmeno induce la rotura masiva de los puentes de Hidrgeno determinantes de la
estructura helicoidal de las molculas proteicas, con la formacin posterior de una malla reticular
polipeptdica por asociacin qumica entre los grupos activos desenmascarados por el lquido
fijador.
Entre los principales fijadores tenemos:
Formaldehdo o formol: Es gaseoso en estado puro, se vuelve
txico y con un olor caracterstico. Se disuelve fcilmente en agua y
liquido
en
ste
21C,
es
estado
en
concentraciones entre 35-40% y estabilizado con metanol se
denomina
formalina pura o formol con la accin del fro la formalina pura
tiende a precipitar
y esta situacin suele ser reversible aadiendo unas gotas de
NaOH
concentrando la mezcla. Como agente fijador el formaldehdo
se emplea a una
concentracin del 4% pero como se parte de una solucin de formalina sta concentracin se
obtiene diluyendo una parte de sta de la formalina en 9 de agua en formacin salina o tampn.
Ventajas: Es el fijador ms barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos de rutina
en Anatoma patolgica.
Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la estructura tisular.
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Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un medio ptimo
para conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas.
Provoca escasa retraccin tisular
Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del sublimado
Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la coloracin
tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas quirrgicas.
Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea como agente
de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de cualquier impregnacin
argntica.
El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes
modificando la temperatura, as a temperatura ambiente se consigue un fijador completa a
partir de las 36 horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a 55C en solo 3 horas. Por este motivo la
formalina es un fijador de eleccin cuando se emplean hornos de microondas en tcnicas de
histotecnologa.
Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente en
Anatoma patolgica.
Inconvenientes:
Produce abundantes vapores de carcter irritante sobre la conjuntiva y mucosa nasal.
Por accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en cido
frmico y sta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la cromatina nuclear por
eso con el paso del tiempo los ncleos celulares adoptan un aspecto fantasma para evitar
este inconveniente el formol debe guardarse en frascos opacos o emplearse en forma de
solucin neutra o tamponado.
Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que contienen
hierro y los derivados de la bilirrubina, a stos ltimos les da una coloracin verdosa.
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Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que se convierte en cido frmico

confiere a las piezas un tinte grisceo y en tejidos que tienen mucha sangre da origen a un
pigmento formlico que es negro o pardo oscuro que precipita en aglomeraciones irregulares
sobre estructuras preexistentes. Este pigmento se puede eliminar sumergiendo los cortes en
alcohol absoluto saturado con acido pcrico compuesta por 10, 12 gramos de pcrico en
alcohol etlico al 95-100% durante 5 minutos. O bien podemos sumergirlo en alcohol
amonacal que es el de 1 a 5 partes de hidrxido amnico en 95 a 99 de alcohol etlico al
70%. En este caso se tratan los cortes durante 15 minutos, seguidos de dos baos de agua
destilada y despus otro de alcohol al 70% de 5 minutos de duracin cada uno.
Soluciones fijadoras simples que contienen formol: hay 4 tipos:
Formol salino: Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el empleo de disoluciones
de formaldehdo en agua destilada y se prepara disolviendo 9 gramos de cloruro sdico en 1000
mililitros de formalina al 10%.
Formalina neutra: Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 10% una pequea cantidad
de carbonato clcico insoluble que queda depositado en el fondo del recipiente neutraliza esta sal el
exceso de acido frmico que se produce y aunque puede utilizarse todava para la formacin de
tejidos en la prctica ha sido desplazada por las soluciones tamponadas.
Formol tamponado: Es la solucin ms empleada hoy en da para prevenir el choque osmtico que
provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de pigmento formlico que
ocurre a un pH inferior a 6. Se prepara de la siguiente manera, como amortiguador se emplea el
tapn fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la siguiente frmula:
FORMALINA PURA..100.0 ml.
FOSFATO SDICO MONOBSICO.4.0 gr.
FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**)...6.5 gr.
AGUA DESTILADA....900.0 gr.
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Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas tcnicas de

impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico glacial a 9 partes de
formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2.
* 4gr: no tiene agua, cogemos 3.5gramos si no pone nada en el bote cogemos 4 gramos.
Formol clcico o solucin de Baker: Se emplea como fijador de eleccin en algunas tcnicas de
histoenzimologa y se prepara aadiendo cloruro clcico al 1% a una solucin de formalina neutra o
tamponada al 10%
LQUIDOS FIJADORES SIMPLES
Dependiendo del mecanismo de actuacin sobre los tejidos podemos clasificar los lquidos fijos
simples en 4 apartados:
Fijadores por deshidratacin tisular: Alcohol etlico y acetona. Son sustancias altamente
higroscpicas es decir absorben agua actan eliminando tanto el agua libre como el agua ligada a
las protenas de forma que estas ltimas precipitan y disminuyen su solubilidad. Este cambio
proteico es conocido con el nombre de desnaturalizacin y provoca importantes alteraciones en la
organizacin y estructura celular y tisular, por tanto estos agentes fijadores inducen grandes
cambios en la morfologa orgnica sobre todo si se emplean como agentes fijadores aislados.
Alguno de ellos como por ejemplo la acetona, altera poco la estructura antignica tisular y ello se
debe a que estos fenomenitos inducidos son reversibles en parte tras la rehidratacin. El fundamento
molecular de la accin deshidratante de los alcoholes y la acetona, est en la competicin que
establecen con las protenas por las molculas de agua cuando se encuentra en soluciones
concentrada, los principales agentes fijadores por deshidratacin son alcoholes metlico y etlico,
acetona y cloroformo.
Los nicos que se utilizan como fijadores simples son el alcohol etlico y la acetona.
El alcohol metlico se emplea exclusivamente para la fijacin de extensiones hematolgicas.
Alcohol etlico: lquido claro, transparente o incoloro, voltil, inflamable y de olor agradable. En el
comercio se puede encontrar puro en cuyo caso tiene fuertes gravmenes tributarios para evitar su
utilizacin clandestina para evitar la fabricacin de bebidas alcohlicas, o bien lo tenemos
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desnaturalizado diluido al 90 o 70 %. Como fijador nico utilizaremos alcohol a unas

concentraciones entre el 70 y 90% y se obtiene cogiendo de 70-90 ml de alcohol puro y se lleva
hasta 100 con agua destilada. La fijacin mas potente va a corresponder a las soluciones ms
concentradas pero a altas concentraciones la capa externa del tejido se endurece en exceso, lo que
impide la penetracin del fijador a la parte interna de la pieza.
El tiempo de fijacin correspondiente a una pieza de 5mm de espesor es dos a cuatro horas
renovando unas 3 veces el lquido.
Es un fijador que preserva el glucgeno y la actividad de ciertas
enzimas
titulares, fija los pigmentos y se emplea en las extensiones
citolgicas.
Como altera escasamente la estructura antignica de los tejidos es
un
buen
agente fijador para inmuno histoqumica.

Entre las ventajas del alcohol estn:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo
Posee una gran velocidad de penetracin
Precipita muy rpidamente las protenas y el glucgeno lo que unido a la anterior propiedad
aporta extraordinariamente el tiempo de fijacin es un notable agente bactericida y por tanto
un buen conservante.
Entre sus inconvenientes tenemos los siguientes:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo: es incompatible con muchos fijadores: KCr2 o el
OsO3 lo que limita su participacin en muchas mezclas fijadoras.
No fija adecuadamente la cromatina porque disuelve los cidos nucledos y adems disuelve
parcialmente los lpidos.
Endurece y contrae excesivamente los tejidos.
A medida que realiza la fijacin se va diluyendo al incorporar el agua que extrae de los
tejidos por lo cual pierde actividad progresivamente
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Prepara mas la tincin porque carece de efecto mordiente

Puede dar origen a fenmenos de desplazamiento de sustancias.
Acetona: es un lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor dulzor. Des hidrata
rpidamente y considerable el tejido por lo que es poco utilizable. El tiempo de fijacin nunca
exceder de dos horas y en piezas delgadas son recomendables 20 minutos. Su uso como fijador
est prcticamente limitado a los mtodos e inmuno histoqumicos porque conserva muy bien la
estructura antignica y la actividad enzimtica, a veces tambin se utiliza en microscopia
electrnica para la fijacin del material que se va a incluir en resinas acrlicas. Se emplea
generalmente sin diluir a 4C, entre sus inconvenientes mas notables provocan una gran contraccin
tisular y por tanto grandes artefactos que suelen hacer intil su empleo en el microscopio ptico
convencional otro de sus inconvenientes es que debido a su rapidez de accin y a su capacidad de
endurecimiento es imprescindible controlar el tiempo de fijacin.
Todos los fijadores de este grupo son de carcter cido y se emplean formando parte de mezclas
fijadores. Poseen adems una gran velocidad d penetracin en los tejidos y algn poder de
descalificacin.
cido actico: Lquido transparente y fuerte olor avinagrado. Sus vapores son muy inflamables en
estado puro se denomina: c. Actico glacial. Cuando la temperatura ambiente disminuye o
aumenta, disminuye por debajo de los 10C tiende a solidificarse en forma de agujas cristalizadas
muy custicas. Se utiliza diluido en concentraciones entre el 1 y 5 % formando parte de mezclas
fijadores o de soluciones decalcificantes. Entre las ventajas que tiene es el fijador ideal para ncleo
protenas y acido nucleicos y otra es precipitar protenas sin sustraer el agua de los tejidos porque
no es giroscpico y produce cierto edema intersticial que
compensa
excesiva refraccin pausado por otros agentes fijadores. Entre
los
inconvenientes es mal fijador de citoplasma y membranas
celular
la
y
destruye mitocondrias.
cido tricloroactico: Son cristales incoloros custicos, solubles en agua en solucin al 5 % fija
los nervios de 8 a 20 horas. Nunca se lavan el tejido despus de usar ste cido porque el edema que
produce es excesivo y de lugar a muchos artefactos. Al 2.5 % se usa mezclado con otras sustancias.
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cido sulfosaliclico: Se usa al 5% es buen fijador porque permite casi todas las coloraciones
endurece ptimamente los tejidos pero no los contrae despus hay que lavar el tejido con agua pero
la fijacin debe hacerse en la oscuridad de 6 a 24 horas.
cido crmico: Se emplea en disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras, se utiliza
bastante en microscopia electrnica.
Entre las ventajas que tiene:
Excelente fijador estructural y acta como mordiente en tinciones que emplean colorantes
bsicos, entre los colorantes que tiene es que incompatible con fijadores habituales como el
formol y alcohol.
Escasa velocidad de penetracin en trozos pequeos tarde varios das en penetrar en la pieza
Impregna de coloracin verdosa los tejidos por lo que hay que lavarlos abundantemente en
agua destilada tras el uso de ese acido, los tejidos quedan excesivamente blandos.
FIJADORES POR FORMACIN DE SALES CON LOS TEJIDOS
En estos casos el fijador es un catin metlico fundamentalmente cromo o mercurio o un derivado
orgnico como el cido pcrico que son susceptibles de formar con los tejidos sales denominados
protenatos metlicos o picratos por lo general todos los agentes d este grupo poseen gran velocidad
de penetracin y fijacin porque la formacin de la sal, se produce instantneamente.
Cloruro de mercurio o sublimado: es un polvo cristalino blanco y venenoso y hay que usarlo bajo
campana se usa en soluciones del 5-6%. El efecto fijador se consigue por la combinacin de los
iones de Mercurio con los grupos cidos de las protenas especialmente con los de carcter
carboxlico, hidroxlico, sulfidrilo y con los residuos fosfricos de las nucleoprotenas.
Entre sus ventajas tenemos:
Es un excelente fijador de los caracteres morfolgicos celulares por lo que es el de eleccin
para patologas hematopoyticas y renales, donde el diagnostico se apoya normalmente en la
observacin de finos detallesnucleares y citoplasmticos.
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Es un excelente mordiente por lo que produce intensa y brillante coloracin nuclear y

citoplasmtica.
Inconvenientes:
No es un buen bactericida por lo que no es un buen lquido conservante tiene escasa
capacidad de penetracin por lo que requiere fraccionamiento cuidadoso del tejido.
Si se prolonga demasiado tiempo de actuacin contrae y endurece los tejidos hasta dificultar
el corte en el micrtomo, por eso nunca deben sobrepasarse las 4 horas de fijacin. Tras
haber cumplido esta y comn paso previo a la inclusin, los tejidos pueden conservarse
indefinidamente en alcohol etlico al 70%.
Dicromato Potsico: es un polvo amarillento que reacciona con las protenas para formar
cromatos, se utiliza en disolucin acuosa al 1-2%, fija las protenas por lo que las mitocondrias
quedan perfectamente conversadas y da un aspecto homogneo al ncleo despus de la fijacin del
dicromato deben lavarse abundantemente con agua.
Ventajas:
Es que tiene un fuerte efecto mordiente excelente fijador
para
lapidar complejos para mielina, mitocondrias y aparato de
Golgi que
los contienen en abundancia. Su utilizacin es

indispensable para tcnicas de impregnacin argntica
de
las
clulas del sistema nervioso central.

Inconvenientes:
El primero de ellos es incompatible con alcohol y formol, posee baja velocidad de
penetracin y endurece escasamente los tejidos lo que puede dificultar el corte en el
microtomo.
Los tejidos han de ser lavados despus de fijados en una solucin salina o tamponada para
evitar el depsito de pigmento verde que puede producirse en el curso de la inclusin o
coloracin posterior.
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cido Pcrico: En el comercio se encuentra en forma de agujas cristalizadas de color amarillo muy
txicas de carcter explosivo.
Acta coagulando las protenas a travs de la formacin de picratos que las confieren gran apetencia
por colorantes cidos. Se utiliza en solucin saturada al 2%, es un excelente fijador estructural que
conserva adecuadamente la composicin proteica de los tejidos. Controlando adecuadamente el
tiempo de fijacin produce una ptima contraccin de los tejidos que favorece su procesamiento
histolgico.
Aunque tiene penetracin algo lenta posee buena velocidad de fijacin no disuelve el glicgeno ni
los lpidos es el fijador de eleccin para estas sustancias.
Posee una leve accin decalcificante por lo cual puede
emplearse
como fijador par a las muestras de tejido seo.

Inconvenientes:
En estado puro el cido pcrico es explosivo si se somete a color hay que mantenerlo alejado
de fuentes de color.
Deben dejarse evaporar sus disoluciones para evitar la formacin de precipitados. Si se
prolonga el efecto de fijacin que es de 4-18 horas dependiendo de tamao pieza aparecen
inconvenientes por una excesiva retraccin tisular. Sobre todo si la pieza ha sido
inadecuadamente lavado en agua y luego deshidratada.
Tie los tejidos de color amarillo y si no se elimina completamente antes de la inclusin en
parafina provoca un continuo deterioro de la estructura tisular que pueda hacer imposible su
estudio histopatolgico algunas semanas despus del procesamiento.
La eliminacin se realiza mediante lavados sucesivos en alcohol etlico al 70-80% o en una
solucin saturada de LiCO4 en alcohol de 70 es incompatible en la inclusin en celoidina.
Acetato de uranilo: Es una sal soluble en agua, cristalizado de color amarillo, se descompone con
la luz, no endurece los tejidos, se usa en soluciones al 2-3% normalmente mezclado con OsO3 y
despus de la fijacin hay que lavar el tejido abundantemente con agua.
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MEZCLAS FIJADORAS
Tenemos dos tipos:
Glutaraldehido: lquido oleoso en comercios se
encuentra
en disolucin al 25%. Mecanismo de actuacin es
el
mismo
que el formaldehdo y como fijador se emplea en

concentraciones entre el 1 y el 3%.
Ventajas:
Es el primer fijador de eleccin para microscopa electrnica porque tienen una excepcional
capacidad para preservar la morfologa celular.
Se emplea para fijacin de animales por perfusin en patologa experimental.
Inconvenientes:
Tiene velocidad de penetracin muy baja por lo que los fragmentos de tejido no pueden
tener volumen superior a unos pocos milmetros cbicos.
Posee gran capacidad de retraccin y endurecimiento tisular que impide prolongar el tiempo
de fijacin por encima de las 3 horas.
Tiene osmolaridad muy baja por lo que hay que emplearlo disuelta en soluciones
amortiguadoras.
Tetraxido de Osmio: OsO4: En el comercio se encuentra en forma de cristales amarillentos
solubles en agua, muy voltiles y txicas. Acta igual que el formol y se prepara como agente
fijador al 1% en tampn fosfato.
Ventajas:
Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa electrnica
especficamente como 2 fijador.
Grupo N-3
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Inconvenientes
Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo en recipientes
opacos y oscuridad.
Aunque sea soluble en agua es difcil preparar disoluciones acuosas con las que se trabaja
Muy txico y en estado cristalino emite vapores que irritan la crnea mucosa respiratoria. Su
manipulacin es obligatoria en una campana de extraccin de gases para prevenir la
aparicin de queratitis.
Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben tener muy
poco volumen.
Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar
abundantemente los tejidos tras utilizarlo.
La combinacin de diversos fijadores simples formando soluciones, complejas llamadas mezclas
fijadoras pretende sumar las ventajas de cada una de ellas amortiguando sus inconvenientes. Desde
un punto de vista general se clasifican en dos grupos:
AQUELLAS QUE CONTIENEN FORMOL
Liquido
de Bouin:
Solucin
muy usada
como
formalina cuando queremos fijar ciertos Tejidos como

endocrinos, testculos y tejido embrionario en general.
no est fijado para la fijacin de biopsias renales sobre
provoca una severa distorsin.
Se prepara de la siguiente manera:
SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO
(C. PCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA)..750.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.50.0 ml.
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alternativo a la
piel rganos
Sin
los
embargo
cuales

PH. FINAL2.2
TIEMPO DE FIJACIN..2 a 24 horas
Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del lquido de
Bouin
especialmente indicado para la fijacin de los cilindros de
biopsia
mdula sea cuando no es posible controlar el tiempo de
fijacin de
la muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso
conservar
de
las 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.

ACETATO NEUTRO DE COBRE.
2.5 gr.
C. PCRICO..4.0 gr.
FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml.
AGUA DESTILADA..100.0 ml.

Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego se aade el
cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido actico glacial.
Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijacin oscila entre
48-72 horas y sigue las mismas precauciones que el lquido de Bouin
Bouin alcohlico (fijador de Dubosq-Brasil): Es una alternativa de lquido de Bouin cuando la
pieza que se debe fijar es relativamente voluminosa porque posee una velocidad de penetracin
mucho ms elevada. Se utiliza tambin cuando se precisa una fijacin especfica de sustancias
hidrosolubles como el glucgeno ya que evita su disolucin.
ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml.
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C. PCRICO0.5 gr.
FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml.
Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en torno a 5
milmetros es de 2 a 3 horas.
Liquido de Gendre: Es una variacin que est especialmente diseada para la fijacin del
glucgeno y pigmentos derivados de la hemoglobina. Se prepara por:
SOLUCIN SATRUADA DE C. PCRICO
EN ALCOHOL ETLICO AL 70%.....................................80.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...15.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.7.5 ml.
El tiempo de fijacin oscila entre 1 y 4 horas. Tras acabar el proceso debe realizarse sucesivamente
2 lavados cortos en etanol al 80, 95 y 100
Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico con la
adicin de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los fijadores
de Orth y de Zenker. Lo que llamamos solucin madre. Est compuesta de:
DICROMATO POTASICO2.5gr.
SULFATO SDICO..1.0 gr.
AGUA DESTILADA 100.0 ml.
Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar abundantemente en agua corriente
durante unas horas.
Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de tejido
nervios. Se prepara de la siguiente manera:
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Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.

Solucin de trabajo: en el momento de su uso se mezclan:
SOLUCIN STOCK..90.0 ml.
FORMULINA CONCENTRADA.10.0 ml.
El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de fijacin los tejidos han
de ser lavados abundantemente en agua y almacenados en alcohol etlico al 70%
Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly): Ambas mezclas son en esencia casi
idnticas. La denominacin B5 corresponde en realidad a una modificacin de la de Zenker.
La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico. La mayor utilidad de
estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, de hecho la fijacin en una
mezcla que contenga sublimado es hoy da prcticamente imprescindible para el diagnstico
morfolgico en las patologas del sistema linfoide y hematopoytico. Adems estas soluciones B5
zenker formol son los fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo y para
fibrina.
Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor conservacin
de la cromatina nuclear y de la estructura antignica tisular.
Solucin de 35:
*Solucin stock de B5: Esta mezcla es estable durante bastante tiempo pero concentrado en frasco
opaco y oscuridad.
CLORURO MERCRICO... 12.0 gr.
ACETATO SDICO....2.5 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P.200 ml.
Solucin de trabajo de B5: Esta solucin es inestable debido a que el formaldehdo reduce el
sublimado a cloruro mercurioso y mercurio metlico que se depositan en forma de un precipitado
blanco grisceo, por este motivo y por el elevado ndice de endurecimiento que posee el sublimado,
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el tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas. Adems el espesor mximo de las muestras no
debe superar los 4 mm debido al escaso poder de penetracin de la mezcla fijadora. Debido a la
aparicin de precipitados mercricos sobre los tejidos las secciones histolgicas antes de ser
coloreados. Han de ser sometidas a un tratamiento especfico mediante soluciones que eliminan
estos depsitos. Tras la fijacin los tejidos se pueden conservar indefinidamente en alcohol etlico al
70-80%
SOLUCIN STOCK DE B520.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA .2.0 ml.
Solucin de Zenker-Formol Eliminacin del pigmento mercrico:
*Solucin stock de Zenker:
CLORURO MERCRICO5gr.
DICROMATO POTSICO...2.5 gr.
-SULFATO SDICO 1 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P. ....100.0 ml.
* Solucin de trabajo: en el momento de su uso mezclamos:
SOLUCIN STOCK DE ZENKER..95 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...5 ml.
Tanto para la solucin almacenada como para la de trabajo deben guardarse las mismas
precauciones que para la de B5
Eliminacin del pigmento mercrico o deszenkerizacin:
Se realiza tratando las secciones histolgicas antes de su coloracin con soluciones yodadas y
utilizamos:
*Solucin de LUGOL:
YODURO POTSICO..2gr.
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CRISTALES DE YODO ..1gr.

ALCOHOL ETLICO 70-80%................................................100 ml.
*Solucin de tiosulfato sdico:
TIOSULFATO SDICO..5gr.
AGUA DESTILADA...100ml.
Despus de la desparafinacin hay que tratar los cortes durante diez minutos con la solucin yodada
a continuacin lavar bien en agua destilada despus decolorar durante dos minutos en la solucin en
agua corriente durante 10 minutos antes de realizar la coloracin.
AQUELLAS QUE NO CONTIENEN FORMOL
Lquido de Zenker: Trata de combinar los efectos
sublimado y del dicromato potsico. En la prctica habitual
favorables
ha
del
sido
sustituido por B5. Su empleo ha quedado prcticamente
restringido
al proceso de refinacin-decalcificacin a que son
sometidas
las biopsias de mdula sea cuando se realiza una fijacin
inicial con
B5.
Se prepara de la siguiente manera.
SOLUCIN STOCK DE ZENKER95.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.. 5.0 ml.
El cido actico reacciona con el dicromato y hace que la solucin se oscurezca progresivamente,
por lo que debe recomponerse antes de su uso.
El tiempo de fijacin puede ser ms prolongada que con la solucin de b5 porque el cido actico
que contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben sobrepasar las 48 horas. Tras
la fijacin el material debe ser tratado con sulfato sdico al 5% durante 1-2 horas.
Liquido de Carnoy: Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para los hidratos
de carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su accin fijadora es
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extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo produce una excesiva
retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos as como una pobre conservacin
estructural del ADN. Est compuesta por:
ETANOL ABOSLUTO..60.0 ml.
CLOROFORMO.30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL..10.0 ml.
El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse directamente
a alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al prolongar demasiado la
deshidratacin en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol en la
composicin de lquido fijador, que adems provoca menor retraccin tisular, y para conservar la
pieza se deposita en alcohol etlico absoluto.
Lavado postfijacin.
Es el aclarado que se realiza despus del proceso de fijacin para eliminar los residuos del agente
fijador, con el fin de limitar el tiempo de contacto entre el fijador y el tejido o impedir el contacto
del fijador con los medios de inclusin utilizados, para proseguir el tratamiento de la muestra, a
veces algunos colorantes alteran su efecto si la pieza contiene restos de determinados fijadores,
como es el caso por ejemplo del cido pcrico. No todos los fijadores deben lavarse igual:
Las piezas fijadoras en formalina se lavan con agua prolongadamente.
Fijadas por cido pcrico hay que introducir las piezas hasta quitar color amarillo.
Fijadas por tricloroactico hay que introducirlas en alcohol de 90%.
Conservacin de tejidos.
Cuando se practica un estudio histolgico, solo se incluyen una pequea porcin del material
remitido para el anlisis. El resto se guarda de reserva para estudios complementarios. Casi nunca
es posible conservar el tejido en el mismo lquido utilizado para la fijacin.
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La solucin conservante ms indicada en la mayor parte de los casos es el alcohol etlico al 70% en
l adems de iniciarse la deshidratacin, el tejido una vez fijado puede conservarse durante meses
sin apenas sufrir cambios, como alternativa ms simple y siempre que no se desee preservar el
tejido para posteriores estudios inmunohistoqumicos, pueden usarse como conservante una
solucin de formalina neutra o tamponada al 10%.
Cuando lo que se produce exclusivamente es derramar la intrusin del tejido en parafina sobre todo
para pequeas muestras delicadas se puede realizar la deshidratacin completa en alcoholes
crecientes y conservarlos en butanol que permite una conservacin indefinida y mejora la textura
tisular.
Cuando se deseen conservar rganos completos procedentes de necropsias podemos utilizar las
soluciones de JORES.
JORES I:
SULFATO SDICO.22 gr.
SULFATO POTSICO..1 gr.
CLORURO SDICO..9 gr.
BICARBONATO SDICO..18 gr.
FORMOL 10%.............................................................................................50 ml.
SOLUCION ACUOSA SATURADA DE HIDRATO DE CLORAL.50 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P.1000 ml.
JORES II:
ACETATO POTSICO300 gr.
GLICERINA.600 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P. ..1000 ml.
En recipiente bien cerrado se conserva hasta aos.
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Resultados de la fijacin y su interpretacin.

Durante la fijacin se producen procesos que modifican la estructura tisular; se producen desgarros
en tejidos que siendo de distinta estructura estn en contacto, por ejemplo la muscular y la
submucosa y al exponerlos a cambios bruscos, como tienen distintos contenidos, en agua se
contraen ms que otros. Tambin se producen grietas por la misma causa que los desgarros, pero
son pequeas aberturas que pueden dar lugar a error porque parecen naturales, son muy difciles de
evitar y son ms frecuentes cuando la fijacin se hace en tejidos que ya han comenzado su
descomposicin.
Estas deformaciones de los tejidos que no corresponden con la realidad y son producidas por la
agresividad de los fijadores se denominan artefactos y varan de un fijador a otro debido a las
caractersticas propias de cada uno.
CONCLUSIONES
Se determin que el correcto conocimiento de los fijadores con o sin formol ayudara a un
procedimiento de fijacin en distintas muestras de rganos.

El conocer las ventajas y desventajas que producen estos fijadores ayudara a tener las
debidas precauciones al momento de utilizados en muestras.

El conocimiento adecuado de la composicin de los fijadores ayudara a identificar la
capacidad de fijacin de estos en distintas muestras.

Se concluy que se debe tener en cuenta el tiempo de exposicin del personal del
Laboratorio de Anatoma Patolgica ante los fijadores ya que son txicos y esto puede ser
perjudicial para la salud del personal que labora en esta rea.
RECOMENDACIONES
Debe tenerse en cuenta el tiempo especfico de fijacin de acuerdo al fijador que estemos
usando, para evitar se dae la muestra.
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El lquido fijador debe ser colocado con rapidez en la muestra.

Deber elegirse el fijador ms conveniente de acuerdo a la muestra que tengamos.
Es recomendable efectuar la fijacin a bajas temperaturas.
Despus de terminado el proceso de fijacin, se deber lavar la muestra, evitando as que los
tejidos se endurezcan.
BIBLIOGRAFA
Google Books, (2015). Tecnico Especialista en Anatomia Patologica Del Servicio Gallego
de Salud.volumen i Ebook. [online]Disponible en: https://books.google.com.ec/books?
id=r7hL2GosWjYC&printsec=frontcover&dq=fijadores+histologicos+pdf&hl=es&sa=X&v
ed=0ahUKEwia2fehq7zJAhXF4SYKHVA-CYQQ6AEIIjAB#v=onepage&q&f=false
[Accessed 3 Dec. 2015].
TEJIDOS,
P.
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PROCESAMIENTO
DE
TEJIDOS.
[online]
Nancycepedablogs.blogspot.com. Disponible en: http://nancycepedablogs.blogspot.com/
[Accessed 3 Dec. 2015].
Anon, (2015). [online] Available at:
http://www.seapcongresos.com/2011/SEAP/19_mayo_jueves/Anfiteatro/08.00/Dolores_Isab
el.pdf [Accessed 3 Dec. 2015].
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Fijadores g3 Final

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FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE

VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE FIJACIN, USO DE

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE

Se distinguen dos tipos de fijadores:

La fijacin inicial o primaria: realizada de forma inmediata sobre el tejido fresco.

La refijacion o fijacin secundaria: se realiza con un segundo fijador para algunas

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FIJADOR IDEAL CARACTERSTICAS:

CRITERIOS PARA OBTENER UNA BUENA FIJACIN.

b) Tamao de las muestras.

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f) Almacenamiento de las muestras.

g) Lavado de las muestras fijadas.

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Clases de fijadores segn su mecanismo de accin

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concentraciones entre 35-40% y estabilizado con metanol se

formalina pura o formol con la accin del fro la formalina pura

y esta situacin suele ser reversible aadiendo unas gotas de

concentrando la mezcla. Como agente fijador el formaldehdo

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Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que se convierte en cido frmico

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Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas tcnicas de

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desnaturalizado diluido al 90 o 70 %. Como fijador nico utilizaremos alcohol a unas

titulares, fija los pigmentos y se emplea en las extensiones

Como altera escasamente la estructura antignica de los tejidos es

agente fijador para inmuno histoqumica.

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Prepara mas la tincin porque carece de efecto mordiente

excesiva refraccin pausado por otros agentes fijadores. Entre

inconvenientes es mal fijador de citoplasma y membranas

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Es un excelente mordiente por lo que produce intensa y brillante coloracin nuclear y

lapidar complejos para mielina, mitocondrias y aparato de

los contienen en abundancia. Su utilizacin es

clulas del sistema nervioso central.

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como fijador par a las muestras de tejido seo.

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en disolucin al 25%. Mecanismo de actuacin es

que el formaldehdo y como fijador se emplea en

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formalina cuando queremos fijar ciertos Tejidos como

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Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del lquido de

especialmente indicado para la fijacin de los cilindros de

mdula sea cuando no es posible controlar el tiempo de

la muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso

las 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.

FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml.

AGUA DESTILADA..100.0 ml.

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Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.

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