UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

UNIDAD CUAJIMALPA

Casa abier ta al tiempo

LABORATORIO DE INGENIERIA II
Licenciatura en Ingeniera Biolgica
XI Trimestre 12--I
Profesora: Dras. Marcia Morales e Irmene Ortiz

I. Ttulo de la prctica: Cuantificacin de azcares por el mtodo

DNS
II. Objetivo:

Recordar y aplicar la tcnica cuantitativa de azcares reductores por un

mtodo colorimtrico y lo aplique para conocer la concentracin de una
muestra.
Elaborar una curva estndar de glucosa para la cuantificacin de azcares.

III . Introduccin.
El mtodo del cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS), el cual se basa en la reduccin del
DNS (de color amarillo) por la glucosa u otro azcar reductor al cido 3-amino-5nitrosaliclico (de color rojo ladrillo), cuya presencia puede detectarse por lectura
de la Absorbancia en la zona de 540-570 nm.

IV Materiales y reactivos

Glucosa
NaOH
Hielo
cido 3,5-dinitrosaliclico
Tartrato doble de sodio y potasio
(sal de Rachelle)
Fenol
Metabisulfito de sodio
Vaso de precipitados de 100 mL
Vaso de precipitados de 25 mL
Vaso de precipitados de 50 mL
Vaso de precipitados de 10 mL
Matraz aforado de 100 mL
Matraz aforado de 10 mL
Esptula
Balanza analtica
Agitador magntico
Parilla con agitacin
1 pipeta automtica de 100 L
1000 L

Laboratorio de Ingeniera II

Caja con puntas de plstico

azules de 100 L 1000 L
1 pipeta automtica de 10 L
100 L
Caja de puntas de plstico
amarillas de 10 L a 100 L
12 Tubos ependorff de 1.5 mL
Vortex
Espectrofotmetro
Gradilla para microtubos
Termmetro
Cronmetro
10 Celdas de plstico de 1 mL
Marcador permanente
Piseta con agua destilada
Guantes de latex

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V. Trabajo pre-laboratorio
Lectura previa de la prctica y clculos

VI. Procedimiento Experimental

VI.1. Preparacin del Reactivo DNS
Fundir el fenol en bao mara a 50 C.
En matraz aforado de 100 ml
70 mL de H2O destilada disuelva 1.4 g de NaOH.
Adicione en este orden:
0.75 g de cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS)
0.54 g de Fenol fundido
21.6 g de Tartrato doble de sodio y potasio (sal de Rachelle).
0.56 g Matasulfito de sodio
Afore a 100 mL con agua.
Almacene el reactivo DNS preparado a 4C protegido de la luz en frasco mbar
para evitar la degradacin del mismo y prdida de capacidad de desarrollo de la
coloracin en la reaccin con azcares reductores.
VI.2. Preparacin de la curva de calibracin
1. Solucin patrn de glucosa 1.0 g/L: Disolver 0.01 g de glucosa o dextrosa en 10
mL de agua destilada.
2. A partir de la solucin patrn de glucosa de 1 g/L y usando agua como solvente
prepare por duplicado las siguientes concentraciones (tabla 1). Etiquetar cada tubo
con tinta indeleble.
Tabla 1. Preparacin la curva estndar de azcares
Tubo
Solucin
Agua
Volumen
glucosa
(mL)
total (mL)
(mL)
Blanco
0
0.5
0.5
1
0.1
0.4
0.5
2
0.2
0.3
0.5
3
0.3
0.2
0.5
4
0.4
0.1
0.5
5
0.5
0
0.5

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Concentracin
(g/L)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1

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VI.3. Procedimiento
1. Se toman 100L de muestra o puntos de la curva de calibracin;
2. Agregar 100L del reactivo DNS.
3. Agitar en un Vortex, el tiempo necesario para obtener una solucin homegnea.
4. Colocar en un bao mara 100C durante 5 min. El tiempo debe ser exacto, as
que se debe usar cronmetro.
5. Inmediantamente despus, situar en hielo 5 min; procurando que la mayor parte
del vial este sumergido en este.
6. Adicionar 1000L de agua destilada.
7. Volver a agitar en Vortex.
8. Leer en en un espectro UV-visible a 540nm, ajustando el cero del espctro con el
blanco.
9. Elaborar una tabla como la que se indica en la Tabla 2 para anotar las lecturas
obtenidas
Tabla 2. Valores de absorbancia obtenidos en el espectrofotmetro
Tubo
Concentracin Absorbancia Absorbancia
(g/L)
A 540 nm
A 540 nm
Blanco
0
1
0.2
2
0.4
3
0.6
4
0.8
5
1
Muestra
X
Normas de seguridad y manejo de residuos
El reactivo de DNS contiene hidrxido de sodio, utilizar guantes, lentes de
seguridad y bata de laboratorio durante su manejo.
Coloque los residuos en el recipiente para soluciones bsicas
Notas del Procedimiento:
Para el tratamiento de muestras
En caso necesario diluir con agua para estar en el mismo rango de curva de
calibracin
Tomar en cuenta el volumen de la muestra y la dilucin para calcular la
concentracin de la muestra problema
No toque con los dedos los lados las celdas por donde pasa el haz de luz.
No utilice las micropipetas fuera del rango de trabajo.
Identifique cada material con un marcador indeleble.

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VII. Cuestionario y clculos

Clculos
1. Calcule la media de las lecturas y grafique la curva estndar
2. Realice la regresin lineal para obtener m, b y r2
3. Obtener la concentracin de la muestra

Cuestionario
1. Describa en 5 lneas el fundamento del mtodo de DNS
2. Qu tipo de reaccin le sucede al DNS durante este ensayo?
3. Para que se usa el metabisulfito de sodio y el fenol
4. Explique por que se deben realizar diluciones cuando la absorbancia es
mayor a 1.
5. Mencione tres reas de estudio donde es importante medir la concentracin
de azcares.
6. Mencione algunos errores/interferencia con el mtodo de DNS y explique
como se puede saber si un compuesto tiene interferencia con el reactivo.
7. Explique otras alternativas para la medicin de azcares
8. Porqu se recomienda realizar una curva estandar cada vez que se realizan
los anlisis
9. Cual es la sensibilidad del mtodo de DNS
10. Explique a que otra longitud de onda podra realizarse el ensayo de
azcares reductores por el mtodo de DNS, justifique su respuesta.

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