Prctica N 3

Cintica Enzimtica
I.-Objetivos:
-Producir la hidrlisis del almidn utilizando el mismo sustrato problema
que es el almidn sometiendo la amilasa salival a distintas condiciones
de trabajo para finalmente entender el concepto de cintica enzimtica
II.-Resultados:
VRX vs. Concentracin de enzima
Tubo 1/10
1ml amilasa
+ 9 ml agua
dest.

Tubo 1/20
1ml tubo
1/10 + 9ml
agua dest.

Tubo 1/40
1ml tubo
1/20 + 9ml
agua dest.

Tubo 1/10
Tubo 1/20
1ml tubo
1ml tubo
1/10 + 4ml
1/20 + 4ml
almidn +
almidn+
B.M 38C
B.M 38C
Tomar alcuota cada 10 min.

5
10
15
20
25
30
50
70
90

VRX VS. T:

Tubo 1/10
----+
+
++
++
-----------------

Tubo 1/40
1ml tubo
1/40 + 4ml
almidn+
B.M 38C
Y comprobar si

Tubo 1/20
----------------------+
---------------

Tubo 1/80
1ml tubo
1/40 + 9ml
agua dest.

Tubo 1/160
1ml tubo
1/80 + 9ml
agua dest.

Tubo 1/80
1ml tubo
1/80 + 4ml
almidn+
B.M 38C
ha hidrolizado

Tubo 1/40
----------------------------+
---------

Tubo 1/80
-----------------------------+
------

Tubo 1/160
1ml tubo
1/160 + 4ml
almidn+
B.M 38C

Tubo 1/160
-----------------------------+

Tubo N1
1 ML amilasa + B.M.
hirv. x 5 + 4 ml
almidn + B.M 38C x
15

Tubo N2
1 ML amilasa + + 4 ml
almidn + B.M 38C x
15

Tubo N3
1 ML amilasa + B.hielo
x 5 + 4 ml almidn +
B.hielo x 5

Tubo N1:
En este tubo le pusimos lugol para saber si hidrolizo. El resultado fue
hidrolisis negativa , ya que en primera instancia la amilasa se puso en
B.M lo cual desnaturalizo a la enzima y luego se le coloc el sustrato
problema lo que significa que en el tubo ya est sin la enzima porque
se desnaturaliz y perdi toda actividad cataltica
Tubo N2:
En este tubo resulto con hidrlisis total, Ya que la amilasa tiene una
temperatura ptima y est concentrada , es decir la enzima tiene
todas las condiciones ptimas para trabajar eficientemente.
Tubo N3:
Despus de agregarle lugol dio como resultado una hidrlisis negativa
ya que la enzima en este caso la amilasa se puso a un B.hielo; lo cual
produjo la inhibicin de la enzima es decir detuvimos la accin
cataltica.

VRX vs PH:
Tubo N1
1 ml amilasa + 0,5 ml
HCl 10% + 4ml
almidn

Tubo N2
1 ml amilasa + 4ml
almidn

Tubo N3
1 ml amilasa + 0,5 ml
NaOH 10% + 4ml
almidn

PH amilasa: 7
Tubo N1:
El PH de la amilasa acidificada dio 1 ; un PH por debajo del ptimo lo
que significa que hubo una desnaturalizacin, por ende la amilasa
pierde su actividad cataltica y el almidn queda intacto por eso el tubo
se tie de azul.
Tubo N2:
El PH result 7 , el cual es un PH ptimo en el cual el rango ptimo
se encuentra entre 6,7 - 7,2 en este PH la amilasa trabajo
eficientemente, por lo cual el tubo dio un color caramelo lo que
significa una hidrlisis total

Tubo N3:
El PH result de 14, el cual es un PH alejado por encima de un PH
ptimo y esto produjo que la amilasa se desnaturalice perdiendo la
actividad cataltica y quedando su almidn intacto. En este tubo se
aprecia el color blanco por la formacin del NaOH por eso el sistema
permanece incoloro, mas no significa que el almidn se halla hidrolizado.

III.-Conclusiones
-

Hay tres factores que afectan a la accin catalizadora de la

enzima , los cuales son : la concentracin de la enzima, la
temperatura y el PH
A mayor concentracin de enzima el tiempo requerido fue menor;
es decir tiene una relacin inversamente proporcional
A 100C la amilasa pierde toda actividad cataltica
La temperatura baja inhibe la enzima, no la desnaturaliza.

IV.-Observaciones:
-

Tenemos que elegir un voluntario para que de su amilasa y

podamos trabajar.
En la parte de concentracin de enzima, tenemos que esperar
cada 10 min y tomar de los tubos madres una alcuota( es
solo una pequea cantidad de la muestra) y ver si sale color azul
( hidrlisis negativa), violceo (hidrolisis parcial ) y caramelo
(hidrolisis total) hasta que todos los sistemas hidrolicen.
En la parte de temperatura; el tubo N3 toda la reaccin se
tiene que hacer dentro del refrigerador para que se inhiba la
enzima ya que si lo trabajamos afuera le vamos a dar calor y la
enzima recuperara su actividad, por lo cual no queremos que
pase eso .

V.-Comentarios.:
-

Hubo un poco de desorden en la manipulacin de pipetas , por

lo cual el experimento con respecto a la concentracin de
enzimas no dio los resultados que se esperaban y tuvimos que
hacerlo de nuevo , en el cual tuvimos xito.
Se tuvo que lavar todos los instrumentos para no tener
ninguna contaminacin.
Al principio se tuvo que poner el agua en la cocinilla para que
ebulla ya que lo necesitbamos hirviendo para poder realizar las
prcticas

VI.- Crticas:
-

Esta vez tambin el lugol fue concentrado por lo cual tambin

tuvimos que diluirlo.
Hubo en desorden en la manipulacin de pipetas .