PRUEBAS RPIDAS CON LECTURA EN MENOS DE 6 HORAS

1. LA HIDRLISIS DEL HIPURATO:

a) FUNDAMENTO:
Detectar la capacidad del la bacteria de hidrolizar el hipurato mediante
la
enzima
hipuricasa.
La hidrlisis del hipurato dar como resultado glicina, que reaccionar
con la Ninhidrina provocando un cambio de color.
Mtodo:
- Realizar una suspensin bacteriana en 0.01 ml de agua destilada
- Aadir un disco de hipurato
- Incubar durante 2 horas a 37C
- Revelar la suspensin aadiendo II gotas de Ninhidrina para detectar la
formacin de
glicina
- Incubar durante 30 minutos a 37C
b) INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS:
La aparicin de un color prpura intenso pondr de manifiesto la
presencia de glicina, dando como resultado una prueba positiva.
Si el hipurato no se hidroliza a glicina, tras la adicin del reactivo de
Ninhidrina no habr cambio de color dando como resultado una prueba
negativa.
Esta prueba se utiliza en la identificacin de Campylobacter
jejuni, Listeria monocytogenes, Gardnerella vaginalis y
Streptococcus agalactiae.
2. -GALACTOSIDASA
a) FUNDAMENTO
Esta prueba demuestra la presencia de la enzima beta-galactosidasa en
algunos
microorganismos.
Hay bacterias que a pesar de poseer enzimas hidrolizantes de la lactosa
(beta-galactosidasas), no pueden actuar sobre ella porque les faltan las
enzimas extracelulares apropiadas (permeasas). A estas bacterias se les
denomina
mutantes
crpticos.
Para conocer si un microorganismo es productor de betagalactosidasa,
basta
aadir
el
compuesto
orgnico
O-nitrofenil-beta-Dgalactopiransido (ONPG) que es incoloro. Si la bacteria posee las
enzimas hidrolizantes (beta-galactosidasa), el compuesto se transforma
en ortonitrofenol, un derivado cromognico de color amarillo.

Todas las bacterias fermentadoras lentas de la lactosa son

-galactosidasa positivas.
b) Interpretacin de los resultados
Si el microorganismo es productor de beta-galactosidasa, el lquido
se volver de color amarillo. Si queda incoloro, indicar que el
microorganismo no posee la enzima.
3. AMINOPEPTIDASA
a) Fundamento:
PYR. La Lpirrolidonil--naftilamida sirve como sustrato para la
deteccin de pirrolidonil peptidasa. Se utiliza principalmente en la
identificacin de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp.
Tambien en la diferenciacion de Staphylococcus lugdunensis de
otros estafilocos coagulasa negativa.
4. LAP
a. Fundamento:
Se utiliza para la deteccion de la enzima leucina aminopeptidasa
(LAP) y es una de las pruebas para la identificacion de cocos
grampositivos catalasa negativa; diferencia especficamente los
generos
Aerococcus
y
Leuconostoc
de
Streptococcus,
Enterococcus, Lactococcus, y Pediococcus.
b. Interpretacin de resultados:
Agregar dos gotas de reactivo cinamaldehdo y dejar a
temperatura ambiente hasta 5 minutos.
Observar el color desarrollado:
Positivo:
presencia
de
actividad
enzimtica
leucinoaminopeptidasa: disco color rosado a rojo.
Negativo:
ausencia
de
actividad
enzimtica
leucinoaminopeptidasa: disco y/o solucin color amarillo o
incoloro.
5. UREASA
a. Fundamento:
Algunas bacterias son capaces de emplear la urea como nica
fuente de nitrgeno. En tal caso la bacteria ha de poseer un
enzima, la ureasa, capaz de atacar la urea. Al descomponerse se
libera amoniaco que alcaliniza el medio.
Esta actividad enzimtica es caracterstica de todas las especies de
Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este gnero de otras
enterobacterias que dan negativo o positivo retardado. La prueba

tambin se utiliza para diferenciar Physobacter phenylpyruvicus de

7 Moraxella spp. Helicobacter pylori y Brucella spp. tambin
hidrolizan la urea. Esta prueba puede ayudar en la identificacin
de Cryptococcus spp. que produce un resultado positivo despus
de una incubacin prolongada.
El medio de cultivo posee un indicador de pH que vira a un color
rosa intenso cuando dicho pH se hace bsico; de esta forma
podemos detectar la produccin de amoniaco y, en ltima
instancia, la presencia del enzima ureasa. El medio de cultivo a
emplear es el agar urea.
b. Interpretacin de resultados:
Microorganismos que hidrolizan la urea: el medio de cultivo
es de color rosado-rojizo.
Microorganismos que no hidrolizan la urea: el medio de
cultivo permanece de color amarillo.
6. INDOL
a. Fundamento:
Mediante esta prueba se detecta la liberacin de indol en un
cultivo bacteriano. Dicha liberacin se debe a la degradacin del
aminocido triptfano mediante el enzima triptofanasa.
Es necesario el crecimiento previo del microorganismo en estudio
en medios de cultivo con alto contenido de L-triptofano, como sen
los medios semislidos SIM Medio y MIO Medio o el medio lquido
Agua Triptona.
Al agregar el reactivo de Ehrlich al medio de cultivo, el indol
generado se combina con el grupo aldehdo del p-dimetilamino
benzaldehido del reactivo incorporado y se forma un complejo de
color rojo.
b. Interpretacin de resultados:
Observar el color desarrollado al agregar el reactivo revelador:
Positivo: color rojo en la interface del reactivo y el medio de
cultivo.
Negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloroamarillento.