Biosintess de

Metabolitos Primarios
y Secundarios
Dra. Sully Cruz V.
Fitoqumica

Biognesis y Biosntesis

Biognesis: Sntesis de cualquier sustancia,

sin importar si se requiere o no energa.

Biosntesis: Lo reservan para definir la

produccin de molculas mediante un
proceso endoergnico.

Importancia del estudio de

los procesos biosintticos

Quimiotaxonoma
Determinacin de estructuras orgnicas.
El estudio de mecanismos de reacciones
orgnicas.
Cultivo de tejidos y rganos para producir
metabolitos en gran escala.
Elaborar productos naturales a partir de los
intermediarios.
Sntesis de frmacos.

Enzimas

Muchas reacciones que tienen lugar

en la clula son enzimo-dependientes.
Catalizadores orgnicos.
Suelen actuar slo sobre una
sustancia o clase de sustancias, ya que es especfica para un grupo o
enlace determinado.
Influyen en la velocidad de una reaccin sin cambiar el punto de
equilibrio.
Lipasa cataliza la sntesis e hidrlisis de los glicridos formados por el
glicerol y cidos grasos.
-glucosidasa (prunasa) sntesis e hidrlisis de -glucsidos.
En las plantas, estas reacciones son reversibles, segn las diferentes
condiciones que dan lugar a variaciones diarias y estacionales de la
acumulacin de metabolitos.

Enzimas

Son de naturaleza coloidal, se componen de

protena.
Son solubles en agua como en soluciones salinas
diluidas y precipitan por el alcohol o la acetona.
Son inactivadas mediante calor, luz UV y rayos X.
Son biocatalizadores (qumica analtico o clnica) o
para efectuar transformaciones qumicas
especficas.
La actividad se ve afectada por la reaccin del medio
y la presencia de sustancias (sales).
Sus pesos moleculares son elevados.
Pueden inactivarse la parte proteica purificada
(apoenzima).

Coenzimas

Molculas orgnicas constituidas por

steres del cido fosfrico y diversos nuclesidos.
Sirven para transportar energa en forma de
enlaces fosfato de alta energa.
ATP (adenosin trifosfato) y ADP aporta energa.
NAD y NADP intervienen en los sistemas de
oxidoreduccin con enzimas apropiadas.
CoA (coenzima A) participa en el transporte de
grupos acetilo y acilo.
Acetil-CoA desempea un papel central en el
metabolismo vegetal y animal.

Clasificacin de las enzimas

Oxidoreductasas (sustancias fenlicas
quinonas)
Transferasas
Hidrolasas (hidrlisis de steres, glicridos)
Liasas
Isomerasas
Ligasas (Sintetasas)

Enzimas ms importantes

Aminocido-descarboxilasas:

Acido glutmico
cido glutmico
descarboxilasa

Acido gama-amino
butrico

Amino-transferasas:
H
R- C-COOH Aminotransferasa R-CO-COOH + NH3
NH2

Las aminotransferasas o transaminasas

son un conjunto de enzimas del grupo de
las transferasas, pues transfieren grupos
amino desde un metabolito a otro,
generalmente aminocidos

Metil-transferasas:
Metil-transferasa
Acido nicotnico
Trigonelina
COOH

-COOH

N-CH3

Hidroxilasas aromticas:
Fenilalanina-hidroxilasa
Fenilalanina
Tirosina

Estearasas:
Estearasa
Tropina + Ac. Trpico

Atropina + H2O

Fotosntesis

Proceso de conversin de la energa luminosa

solar en energa qumica. La energa qumica as
obtenida hace posible la sntesis de las molculas
orgnicas. Proceso de xido-reduccin.
El dixido de carbono es convertido en azcares
por las plantas verdes.
CO2 + H2O (CH2O) + O2
Tiene lugar en los cloroplastos.
Produccin de ATP a partir de ADP y fosfato y
descomposicin de agua por la energa de la luz.
Se distinguen dos fases:
La fase lumnica.
La fase oscura.

Metabolismo Vegetal
En los organismos vivos los compuestos
qumicos son sintetizados y degradados por
una serie de reacciones qumicas, muchas
de ellas mediadas por un enzima.
Ese proceso es conocido colectivamente
como metabolismo, e incluye el catabolismo
(degradacin) y el anabolismo (biosntesis).
Tipos:
Primario y Secundario

Metabolismo Primario

El metabolismo primario conjunto de aquellas

vas de sntesis y de utilizacin de los compuestos
esenciales para la supervivencia y el desarrollo
correcto de los organismos, que son
denominados metabolitos primarios.
Todos los organismos poseen caminos
metablicos similares con los que sintetizan y
utilizan para ello un cierto nmero de sustancias
qumicas: azcares, aminocidos, cidos grasos
comunes, nucletidos y los polmeros derivados
de ellos (polisacridos, protenas, lpidos, ARN,
ADN, etctera).

Metabolismo Primario

El metabolismo primario comprende los procesos qumicos

que cada planta debe realizar cada da para sobrevivir y
reproducirse
Fotosntesis
Gliclisis
Ciclo del cido ctrico
Sntesis de aminocidos
Transaminacin
Sntesis de protenas y enzimas
Sntesis de coenzimas
Sntesis de materiales estructurales
Duplicacin de material gentico
Reproduccin celular (crecimiento)
Absorcin de nutrientes

Metabolismo Secundario

Los metabolitos secundarios y las vas para su

sntesis y utilizacin constituyen el metabolismo
secundario.
Esas rutas metablicas son debidas a la informacin
gentica especfica del organismo, en mayor grado
que las rutas del metabolismo primario.
Son activadas durante estados particulares del
crecimiento o durante perodos de condiciones
adversas (dficit hdrico y nutricional, ataque,
etctera).
Aunque entre esos organismos se encuentran
bacterias, hongos, levaduras y animales, los vegetales
son los organismos con mayor actividad y riqueza de
metabolismo secundario.

Metabolitos Secundarios
No son esenciales para la clula vegetal.
Su deteccin contribuye a efectuar
caracterizaciones quimio-taxonmicas.
Ej: alcaloides, glicsidos, aceites
esenciales, resinas, taninos, esteroides,
saponinas. Aminocidos escasos en el
reino vegetal y que no forman
protenas: cido pipeclico,
hipoglicinas, cido stizoblico, betaurasil-3-alanina.

Factores que afectan produccin

de metabolitos secundarios:
Factores extrnsecos:
Clima y temperatura.
Agua de lluvia y humedad
atmosfrica.
Condiciones del suelo: condiciones
fsicas: tamao de las partculas,
humedad y temperatura.
Condiciones qumicas: pH, iones.
Condiciones microbiolgicas.

Factores que afectan

produccin de metabolitos
secundarios:
Factores intrnsecos:
Genticos.

Metabolismo Primario y Secundario

Clasificacin

Los productos naturales de origen vegetal se

clasifican en grandes categoras qumicas:
Glcidos.
Lpidos.
Aminocidos, aminas y protenas.
Compuestos fenlicos.
Terpenoides (isoprenoides).
Alcaloides.

Glcidos

Los componentes glucdicos del reino vegetal son

muy diversos y son los ms abundantes.
La celulosa es el compuesto orgnico ms
sintetizado.
Los glcidos pueden ser:
Monosacridos.
Oligosacridos.
Polisacridos.
Hetersidos.

Acido orselinico

fenilpirona

Antrona

Polictidos
Est presente en bacterias, hongos y en
plantas.
Sirve nicamente para la produccin de
metabolitos secundarios.
arte del malonil-CoA que forma el primer
paso en la sntesis de cidos grasos.
Ejemplos:
Griseofulvina (antibitico producido por
Penicillium griseofulvum)
Aflatoxinas (toxinas producidas por
Aspergillus flavus y por A. parasiticus)
Ocratoxinas (toxinas producidas por
algunos tipos de Aspergillus y de
Penicillium)
Lovastatina (producida por A. terreus).

Terpenos (Terpenoides)
Se inician a partir del Acetil-CoA.
Produce tanto metabolitos primarios
(carotenos, esteroles) como secundarios.
Ejemplos:
Ciertos carotenos.
Toxinas como la toxina T2 y los
tricotecenos (producidos por alguna especie
de Fusarium).

Terpenos (Terpenoides)

Grupo de compuestos lipdicos diverso y

numeroso:
formado por alrededor de 30,000 compuestos
insolubles a parcialmente miscibles en agua
son biosintetizados a partir del acetil-CoA o
intermediarios de la gliclisis
Compuestos derivados de la unin de unidades
isopreno de 5-carbonos (C5H8)
los terpenos se conocen tambin como isoprenos
o isoprenoides
Tambin se conocen como terpenoides si se
encuentran presentes otros elementos
(especialmente oxigeno)

Terpenos (Terpenoides)

Ruta del cido mevalnico: 3 molculas de acetilCoA se unen para formar cido mevalnico
El cido mevalnico es un intermediario de 6carbonos -fosforilado con 2 grupos fosfato
(pirofosfato) -descarboxilado y deshidratado para
producir isopentenil pirofosfato (isopentenil
difosfato) - IPP
Ruta independiente del mevalonato: utiliza
intermediarios de la gliclisis para sintetizar IPP

Biosntesis de terpenos

La biosntesis de los terpenos depende de

un nmero variable de condensaciones
consecutivas de los dos monmeros
activos

La principal funcin de los esteroles

en plantas es formar parte de las
membranas y determinar su
viscosidad y su estabilidad.
Algunos esteroles tienen funciones
protectoras frente a insectos como en
el caso de la ecdisona aislada del
helecho comn

cidos grasos y derivados

cidos grasos: cidos monocarboxlicos
de cadena carbonada lineal, de nmero
par de tomos de C. Saturados e
Insaturados.
Metabolitos derivados de los cidos
grasos naturales: Triglicridos,
Poliacetilenos, Eicosanoides.

Sntesis de cidos grasos

Compuestos Fenlicos

El elevado nmero de compuestos fenlicos puede

formarse gracias a una biosntesis muy compleja,
pero perfectamente regulada.
Se conocen tres vas que pueden llevar a la
formacin de compuestos aromticos:
Acetato-mevalonato: puede producir anillos
aromticos con grupos hidroxilo en algunos casos,
pero los compuestos formados son terpenos.
Acetato-malonato: produce el anillo A de los
flavonoides.
cido shiqumico: es la va principal de formacin
de compuestos fenlicos.

Sntesis de Fenoles: Va del

Acetato-Malonato

En algunas plantas el ciclo bencnico se forma

mediante la ciclacin de cadenas policetnicas.
stas se forman por condensacin de grupos acetato
que proceden del cido malnico.
La condensacin de tres molculas de malonil CoA
se produce mediante una descarboxilacin
simultnea, con lo cual se forma el anillo bencnico.
A partir del cual se puede formar el anillo A de los
flavonoides o el 6-metil-salcilico, importantsmo
como seal sistmica de defensa de la planta.

Sntesis de Fenoles: Va del

cido Shiqumico

El cido trans-cinmico es precursor de las cumarinas

y furocumarinas.
El cido p-cumrico es precursor de: lignanos y
ligninas.
El cido dihidroxi-shiqumico, precursor inmediato del
cido shiqumico forma compuestos fenol-carboxlicos
(C6-C1).
El cido dihidroxiqunico, segundo precursor inmediato
del cido shiqumico, (se mantiene en equilibrio con el
cido qunico) se une el cido protocatquico (un
fenol-carboxlico) cido glico.
El cido glico y sus derivados constituyen los taninos
hidrolizables por esterificacin con monosacridos.

Sntesis de Fenoles: Origen

Mixto

Generalmente, los fenoles se forman mediante la

incorporacin de uno, dos o tres residuos acetatos
(procedentes cada uno de ellos de un malonil CoA)
a un cido cinmico (o a alguno de sus
derivados).
Esta cadena lateral as formada, con frecuencia
sufre una ciclacin, con lo cual se obtienen muy
diversos compuestos qumicos.
Un grupo lo constituyen los derivados
estilbnicos. Algunos se comportan como
fitoalexinas, sustancias de defensa vegetal, con
actividad antifngica y antibacteriana.

Sntesis de Fenoles: Origen

Mixto

El grupo ms numeroso e importante lo constituyen los

flavonoides, que presentan dos anillos (A y B) unidos por
una cadena de tres tomos de carbono
Con frecuencia entre ambos anillos (A y B) se sita un
heterociclo que, en parte, es responsable de la gran
diversidad de flavonoides identificados en el reino vegetal.
Suelen encontrarse en forma de O-hetersidos, aunque
tambin hay C-hetersidos.

Sntesis de Fenoles

El ncleo de chalcona es el precursor de todos los

flavonoides.
Este ncleo se forma en los cloroplastos, a partir de
cinamoil-CoA, que procede del retculo endoplasmtico.
Los grupos acetato proceden de tres malonil-CoA.
La chalcona sintetasa (eliminndose tres molculas de
CoA y tres CO2) incorpora una cadena poliacetilnica,
formndose la chalcona

Sntesis de Fenoles

A partir de las
chalconas se
forman, por
reacciones
catalizadas
mediante enzimas
especficos, los
distintos grupos y
compuestos de
flavonoides y
afines

La ruta del cido malnico es una fuente importante

de fenoles en hongos y bacterias, pero es poco
empleada en plantas superiores.
La ruta del cido siqumico es responsable de la
biosntesis de la mayora de los compuestos fenlicos
de plantas. Esta ruta est presente en plantas, hongos
y bacterias, pero no en animales.
La fenilalanina y el triptfano se encuentran entre
los aminocidos esenciales para los animales que
se incorporan en la dieta.
La tirosina no es esencial en el sentido de que los
animales pueden sintetizarla por hidroxilacin de
fenilalanina.

Biosntesis de alcaloides

Estructuras complejas, muchos pasos biosinteticos

se encuentran como mezclas de compuestos
estructuralmente relacionados (ej. alcaloides
triterpnicos de la papa)
las rutas biosintticas comienzan con una
descarboxilacin
Pueden incluir otros componentes (ej) vinblastina,
(terpenoide indlico dimrico); solanidina (alcaloide
tripterpnico de la papa)
sntesis y almacenamiento rgano especficos
(cortezas, races, flores)
secuestrados en clulas y estructuras especiales
(vacuolas, vesculas de ltex, epidermis)

Biosntesis de alcaloides

La sntesis de alcaloides est relacionada con la

evolucin de las plantas. As, se hallan en
muchas Angiospermas, sobre todo
Dicotiledneas, siendo raras en las
Monocotiledneas (a excepcin de las Liliceas).
Raramente se encuentran alcaloides en las
Gimnospermas, las Pteridofitas y las Talofitas.
Algunos alcaloides son peculiares de un gnero
(como la aconitina del Acnito), mientras que
otros, como la cafena, se pueden localizar en
numerosas plantas filogenticamente muy
alejadas: Rubiceas, Esterculiceas,
Sapindceas, Lilicceas...

Aminocidos esenciales como

precursores biosintticos

Biosntesis de Alcaloides
AMINOCIDOS
BSICOS:
Ornitina, arginina:
Pirrolidnicos (nicotina).
Tropnicos (hiosciamina).
Pirrolizidnicos (retronecina).
Lisina:
Piperidnicos (anabasina, sedamina, lobelina,
espartena, lupinina).
Alcaloides del Lycopodium.
AROMTICOS:
Fenil-alanina:
(Efedrina, taxol, lunarina).

Biosntesis de Alcaloides
- Tirosina:
Feniletilaminas (tiramina, hordenina).
Isoquinolnicos (peyotina, lofoforina).
Benzilisoquinolnicos: Derivados de la reticulina (morfina, berberina,
papaverina, narcotina).
- Otros.
Isoquinolnicos derivados de la norbelladina (Amaryllidaceae).
(Colchicina).
(Emetina y relacionados).
Betalainas (Cariofilales).
Triptfano:
Bases simples (triptamina, bufotenina, psilocina,estricnina).
Derinados de la carbolina (harmanina).
Ergolina: (ergotamina).
Triptfano-monoterpenos.

Vas de sntesis simplificadas

de algunos alcaloides

Tipos de reacciones
involucradas en los procesos
biosintticos

Formacin de la base de Schiff: es la condensacin

de un grupo amino con un grupo carbonilo
C=O + NH2-R` C=N-R` + H2O

Condensacin aldlica entre compuestos que

contienen el grupo amino
H-N=CH-CH2 + -CH2-CH=N- NH-CH-CH2-CH-CH=N-

Tipos de reacciones
involucradas en los procesos
biosintticos

Condensacin de la carbinolamina
N-C-OH + HC-X N-C-C-X + H2O

Oxidaciones
-CH2OH
NAD+

NADH + H+

-C=O
H

Tipos de reacciones
involucradas en los procesos
biosintticos
Transaminaciones
CH3
CH3
C=O
H-C-NH2
COCH
COOH
Reduccin de los grupos carbonilos y de
dobles enlaces conjugados
-CH=CH-C=O -CH2-CH2-CH2OH

Mtodos para el estudio

de las Rutas Biosintticas

Marcaje con Istopos:

Se utilizan istopos marcados (C, H, N) con el
objeto de rastrear el metabolismo de las
sustancias.
Se pueden hacer crecer las plantas en una
atmsfera de CO2 marcado con C14.
Se analizan los tejidos a determinados intervalos
para establecer cmo van apareciendo los nuevos
compuestos formados.

Mtodos para el estudio

de las Rutas Biosintticas
Secuencia Precursor-Productos
Un probable precursor de la molcula se
administra ya marcado a la planta.
Se separa el producto, se purifica y se
determina su radioactividad la cual se
compara con la de la molcula del
producto esperado.

Mtodos para el estudio

de las Rutas Biosintticas

Mtodos para la introduccin del precursor a la

planta:
Por inyeccin directa de soluciones radioactivas a la
planta.
A travs del cultivo de la planta en una solucin del
metabolito.
Esparciendo sobre las hojas una solucin del
metabolito.
Infiltrando la solucin radioactiva a travs del tallo.
Mediante el cultivo de rganos aislados, con lo cual se
elimina la interferencia de otros rganos que puedan
producir cambios en los metabolitos.

Cultivo de tejidos

Cultivos en medio slido:

Consiste en germinar las semillas aspticamente y
cuando se hayan desarrollado suficientemente se
separa una raz, un tallo, o una hoja en
condiciones estriles y se coloca sobre el medio de
cultivo.
La esterilizacin puede hacerse tratando la planta
con una solucin de hipoclorito de sodio o calcio al
0.8-2.5% durante 5 a 30 min. Luego el tejido se
lava varias veces con agua destilada.

Cultivo de tejidos

Cultivos en Medio Lquido

Se limita a rganos en suspensin. La raz es el
rgano ms comnmente cultivado.
Para ello se transfiere tejidos de callus a un medio
lquido, luego que ste se ha dispersado, se transfiere
peridicamente a otro medio (agua de coco, levadura
o casena).
El cultivo de tejidos permite conocer los reguladores
del crecimiento de las plantas, lo cual ha llevado a
optimizar la produccin de plantas medicinales,
comestibles y ornamentales.

Los estudios de cultivo de tejidos

vegetales han permitido entender y
descubrir los reguladores de
crecimiento de las plantas, lo que ha
llevado a optimizar la produccin de
plantas medicinales, comestibles y
ornamentales.

Micropropagacin de
especies medicinales y
aromticas
Se define como el conjunto de
tcnicas que permiten el cultivo en
condiciones aspticas de rganos,
tejidos,
clulas
y
organelas,
empleando medios de cultivo
artificiales (Pierik, 1991).

Etapas de la micropropagacin
para la regeneracin de especies

Coleccin de germoplasma
Establecimiento de un huerto clonal
Marcha fitoqumica
Seleccin de material elite
Establecimiento de un protocolo de asepcia
Seleccin del explante
Evaluacin de medios de cultivo
Iniciacin
Multiplicacin
Enraizamiento
Endurecimiento y aclimatacin
Adaptacin en campo

La clula vegetal como unidad

fundamental

Subcultivos bajo cmara de flujo

laminar

Test de viabilidad y estabilidad

celular

Regeneracin in vitro de
especies

Cultivo de clulas en suspensin

para produccin de bioactivos
ETAPAS

Seleccin del explante elite procedente de plntulas

micropropagadas
Evaluacin de las condiciones de cultivo para induccin de
callognesis
Multiplicacin de los callos
Transferencia y disgregacin de los callos en medios sumergidos
(a nivel de matraces)
Evaluacin de las condiciones (fsico-qumicas y biolgicas) de
cultivo para el mantenimiento y multiplicacin de biomasa
Tamizaje y produccin de un inculo adecuado para llevar a
condiciones de un biorreactor
Evaluacin de condiciones de cultivo (fisicos-qumicos y
biolgicos) bajo condiciones automatizadas de un biorreactor
de laboratorio

Secuencia del proceso para

produccin de callo friable

Multiplicacin de callos

Transferencia y disgregacin de
callos en medio sumergido

Establecimiento de clulas en
suspensin

Cultivo de clulas en
suspensin

Evaluacin de condiciones de cultivo bajo

condiciones automatizadas de un
biorreactor de laboratorio

Parmetros a evaluar
Fsicoqumicos
Luz: presencia o ausencia; fotoperodo, intensidad y calidad
Agitacin
Temperatura
Concentracin de gases (O2 y CO2)
Composicin qumica del medio de cultivo
pH
Biolgicos
Estado fisiolgico celular
Viabilidad
Estabilidad celular
Inmovilizacin celular
Monitoreo de elicitores biolgicos

Monitoreo del ciclo celular

Curva de cintica celular

Algunos de los productos generados por

plantas
Alcaloides
Alergenos
Antraquinonas
Agentes antileucmicos
Agentes antitumorales
Agentes antivirales
Agentes antibiticos
Agentes insecticidas
Agentes molusquicidas
Aromas
Perfumes
Saborizantes
Pigmentos
Aceites esenciales
Benzoquinonas
Carbohidratos
Chalconas
Diantronas
Furanocumarinas
Hormonas
Vitaminas

Lpidos
Naftoquinonas
Acidos nuclicos
Nucletidos
Inhibidores enzimticos
Opiaceos
Acidos rganicos
Protenas
Pptidos
Fenoles
Hormonas
Reguladores de crecimiento
Esteroides
Reserpina
Glicsidos cardacos
Esteroides derivados
Azcares
Taninos
Flavones y flavonoides
Terpenos y terpenoides

Fuente: Fundamentals of Food Technology, 1996

Algunos de los productos

comercializados en la
actualidad
Producto
Shikonin

Fuente de clulas
Lithospermum
erythrorhizon

Berberine

Thalictrum minus,
Coptis japonica

Saponinas de
Ginseng
Taxol

Panax ginseng

Sanguinarine

Papaver somniferum

Taxus brevifolia

Fuente: Smith, 1995

Biorreactor
Batch culture
Sistma en dos
etapas
Batch culture y
en produccin
continua en
biorreactores
de turbina
Cultivo de
clulas y raices
Biorreactor de
turbinas
Biorreactor
Airlift

Volumen
750 litros

4000 litros

20.000
litros
75.000
litros
300 litros

Comparacin de la produccin de clulas

vegetales en biorreactores, con respecto a
los cultivos naturales
Producto

Especie

Produccin en %
Peso
cultivos
seco
celulares
Cultivo
natural
16
10
4
0.3
24
1.5

Relacin
de
produccin
Cultivo/Planta

Antociania

Vitis sp
Euphorbia milli
Perilla
frutescens

Antraquino
na
Berberina

Morinda
citrifolia
Coptis japonica
Thalictrum
minor

18

2.2

8.2

13
10

4
0.01

3.3
1000

Acido
rosmarnic
o

Coleus blumei

27

Shikonina

Lythospermum
erythrorhizon

14

1.5

3.3

Fuente: Zhong et al., 1995.

1.6
13.3
16

Secuencia del proceso para

produccin de metabolitos en
biorreactores Mhlbach, 1998.
1. Seleccin de la fuente vegetal
2. Induccin de callos in vitro en medios slidos
3. Seleccin de lneas celulares altamente productoras
4. Cultivo de clulas en suspensin en medios lquidos a nivel de matrax
5. Optimizacin del cultivo y seleccin
6. Produccin de un buen inculo para llevar a biorreactor
7. Transferencia a biorreactor a escala de 100 litros
8. Transferencia a biorreactor a escala de 10.000 litros o ms
9. Procesos de separacin celular y de producto
10. Procesos de recuperacin: Separacin y purificacin (Down-stream
processing)

Bioproductos de las nuevas

bioindustrias