PROTOCOLO DE EXTRACCIN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS.

TCNICA DE LA PUNCIN VENOSA:

Etapa 1 Acopio de material
Etapa 2 Identificacin y preparacin del paciente

Presntese ante el paciente y pregntele su nombre y apellido(s).

Pregunte al paciente si tiene alergias, fobias o si se ha desmayado alguna vez en
alguna inyeccin o extraccin de sangre previa.
Si el paciente est nervioso o asustado, tranquilcelo y pregntele qu puede hacer
para ayudarlo a sentirse ms cmodo.
Haga que el paciente se sienta cmodo colocndolo en decbito supino (si fuera
posible).
Coloque un papel o una toallita limpia debajo del brazo del paciente.
Hblele del anlisis que se har e informarle sobre el procedimiento a que va a ser
sometido
Se ha de colocar adecuadamente al paciente, segn ste se encuentre sentado, o en
decbito prono, para tener acceso fcil y cmodo a la fosa antecubital.

Etapa 3 Limpieza de manos y colocacin de guantes

Lmpiese las manos: lvese las manos con agua y jabn y squelas con una toalla
para uso nico; osi las manos no estn visiblemente sucias, lmpielas con un
preparado a base de alcohol: vierta 3 ml del preparado alcohlico en la palma de la
mano y frtese con l las yemas de los dedos, el dorso de las manos y el resto de
ambas manos hasta que se evapore.
Luego de limpiarse las manos, pngase un par de guantes no estriles del tamao
adecuado.

Etapa 4 Eleccin del lugar

Extienda el brazo del paciente y examine el pliegue del codo o antebrazo.

Localice una vena de tamao adecuado que sea visible, derecha y clara.
Aplique el torniquete a unos 4 5 dedos de distancia por encima de la zona de
venopuncin elegida y vuelva a examinar la vena. Afloje el torniquete.

Etapa 5 Desinfeccin del lugar de acceso

Limpie el lugar con una gasa con alcohol al 70% y djelo secar.

Aplique una presin firme, pero suave. Comience desde el centro del lugar de la
puncin venosa y proceda radialmente hacia afuera de forma de cubrir una zona de
2 cm o ms durante 30 segundos. Si el tiempo de contacto es insuficiente el riesgo
de contaminacin aumentar.
Deje secar la zona por lo menos durante 30 segundos.
NO toque el lugar desinfectado, y sobre todo: NO ponga el dedo sobre la vena para
guiar el eje de la aguja expuesta. Si ha tocado el lugar, repita la desinfeccin.

Etapa 6 Extraccin de sangre

Aplique el torniquete a unos 4 5 dedos de distancia por encima de la zona de

venopuncin elegida y vuelva a examinar la vena.
Sujete la vena sosteniendo el brazo del paciente con el pulgar colocado por
DEBAJO del lugar de la puncin venosa.
Pida al paciente que cierre el puo para que la vena se dilate.
Pinche la vena rpidamente con el bisel hacia arriba a un ngulo de 30 o menor y a
continuacin introduzca la aguja en la vena con el ngulo de ingreso ms fcil.La
pared superior de la vena debe ser puncionada y el bisel debe quedar en el interior
de la vena.
Cuando la aguja est asegurada se conecta el primer tubo o se aspira para que la
sangre fluya; una vez que empiece a salir soltar el torniquete.
Retire la aguja con delicadeza y presione el lugar ligeramente con una gasa limpia o
una torunda seca de algodn hidrfilo. Pida al paciente que sostenga la gasa o el
algodn hidrfilo en el lugar, con el brazo extendido y levantado. Dgale que NO
doble el brazo, pues eso puede provocar un hematoma.
Se mezclan los tubos con el anticoagulante.
Se comprobar el estado del paciente; por ejemplo, si se ha mareado y si la
hemorragia est controlada.
Se elimina el material contaminado: agujas, jeringas, algodones, etc.
Se marcan las etiquetas y se registra la hora en que se extrajeron las muestras.

Etapa 7 Preparacin y transporte de muestras.

Transportar las muestras a temperaturas entre 2 y 8C, las muestras no deben entrar
en contacto directo con el medio refrigerante.
Evitar que las muestras se calienten por encima de la temperatura ambiente.
Las muestras de sangre total no deben permanecer ms de 4 horas a temperaturas
entre 2 y 8C.

El medio de transporte debe ser resistente a golpes y cumplir con las normas de
bioseguridad.

Bibliografa:
1. Carpeta de material sobre seguridad de las inyecciones y los procedimientos
conexos. Organizacin Mundial de la Salud, 2011.
2. Recomendaciones de la Sociedad Brasilea de Patologa Clnica/Medicina
Laboratorial para la extraccin de sangre venosa. 2. ed. Baruerira, 2010, SP Minha
Editora, 2010.

ANEXO 3.
PROTOCOLO PARA OBTENCIN DE PLASMA
1. Extraer sangre recogindola en un tubo de extraccin sangunea para hematologa
(con EDTA-K3) identificado.
2. Inmediatamente tras la extraccin invertir suavemente el tubo para favorecer que la
sangre se mezcle bien con el anticoagulante EDTA-K3E/K2E.
3. Transportarla al laboratorio para su procesado lo antes posible en un cooler
debidamente refrigerado y protegido.
4. Preparar 3 crioviales para el almacenaje del plasma, fraccin de leucocitos y
eritrocitos, debidamente etiquetados e identificados.
5. Centrifugar los tubos de sangre (con anticoagulante) a 1500g durante 15 minutos o
2000g por 10 minutos. Tras la centrifugacin observaremos tres capas:
La fraccin superior o sobrenadante tras la centrifugacin de aspecto claro y
transparente, y de un color amarillo plido corresponde al plasma sanguneo.
La segunda fraccin o intermedia es fina y de color gris-blanco, y representa la
fraccin de leucocitos.
La tercera fraccin o inferior es de un color rojo oscuro y corresponde a los
eritrocitos o hemates.
6. Cuidadosamente aspirar el sobrenadante y alicuotar el plasma sanguneo (fase
superior) obtenido, fraccin de leucocitos y eritrocitos, en cada uno de los
crioviales debidamente etiquetados e identificados.
7. Seguidamente almacenar los crioviales en cajas de crio almacenaje y guardarlas en
un congelador de -80C.
BILIOGRAFA:
1. Assay Max human Creactive Protein ELISA Kit, ASSAYPRO, Catalog No.
EC1001-1
2. Obtencin, procesado y almacenaje de muestras de plasma sanguneo,
Meritxell Arqu, Centro de investigacin biomdica en red enfermedades
respiratorias.2009.

PROTOCOLO DE DESCONGELAMIENTO DE BUFFY COAT.

1. El mismo da de la extraccin sacar la muestra de -80C a -20C hasta que se
elimine el Freeze. ( tiempo aproximado 2 horas).
2. Sacar la muestra de -20C a 4C (congelador de la refrigerado por 2 horas y
media).
3. sacar al ambiente la muestra por 30min.

ANEXO 4.
PROTOCOLO DE 300ul PARA EXTRACCIN DE ADN
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Aadir 900 L de Cell Lysis Solution en un tubo de 1.5mL.

Aadir 500 L de muestra al tubo que contiene el Cell Lysis Solution y mezclar
gentilmente 5-6 veces.
Incubar por 10 min a temperatura ambiente (moviendo gentilmente de dos a tres
veces) para lisar los glbulos rojos y centrifugar a 6000 rpm por 20 min.
Remueva y deseche tanto sobrenadante como sea posible (residuo de 20 L es
aceptable).
Si el pellet que queda es muy obscuro repetir el proceso desde el paso 1 a 4 y
continuar.
Vortex el tubo hasta que se resuspendan los glbulos blancos (15 seg).
Aadir la Nuclei Lysis Solution 300 L al tubo. Pipetear la solucin 5-6 veces para
lisar los glbulos blancos hasta que no hayan grumos.
Aadir la Protein Precipitation Solution 100 L para lisar los ncleos y vortex por
10 seg. Se formaran coagulos de protena.
Centrifugar a 7200 gravedades por 10min. Un pellet caf se formar. Si el
sobrenadante sigue obscuro repetir desde el paso 6 (Nuclei Lysis Solution) usando
la mitad de las soluciones que se indica en estos pasos.
Transferir el sobrenadante a un tubo limpio de 1.5 mL que contenga 300 L de
isopropanol.
Mezclar la solucin gentilmente hasta que se formen los hilos de DNA.
Centrifugar a 7200 gravedades por 5min. El DNA se ver como un pellet pequeo.
Desechar el sobrenadante y aadir 300 L de etanol grado molecular.
Mezclar gentilmente lavando las paredes del tubo y el pellet.
Centrifugar a 7200 gravedades por 5 minutos.
Aspirar cuidadosamente el etanol y dejar secar por 10-15 minutos.

15 Aadir el DNA Rehydration Solution 100 L e incubar la solucin a 4 C por una

noche.
16 Almacenar el DNA a 2C -8C.