UNIVERSIDAD AUTNOMA DE SAN LUIS POTOS

Facultad de Ingeniera
Ingeniera Ambiental

Reporte 6: Preparacin
de medios de cultivo y
esterilizacin del
material
LABORATORIO DE CIENCIAS AMBIENTALES III
Profesor: Dr. Cristbal Aldama Aguilera

Sal Ortiz Almendriz

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE SAN LUIS POTOS

Laboratorio de Ciencias Ambientales III

INTRODUCCIN
Por su minsculo tamao, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos, sino que es
necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, favorecer su
multiplicacin in Vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de
sus hbitats naturales. En estos ambientes se debe eliminar a todos aquellos microorganismos que
interfieren en el estudio del microorganismo de inters, al que adems de proporcionar los nutrientes
necesarios para su crecimiento multiplicacin.
OBJETIVOS:
1. Seleccionar los mtodos de esterilizacin adecuados para las diversas necesidades del laboratorio de
microbiologa.
2. Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes.
3. Comprobar la efectividad del proceso de esterilizacin.
4. Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de acuerdo al uso que se
les dar.
5. Relacionar la composicin de los diversos medios de cultivo con sus caractersticas y aplicaciones.
6. Lavar, preparar y envolver correctamente el material que se someter a esterilizacin.
MATERIALES Y MTODOS
Preparacin de Medios de cultivo deshidratado
Por regla general los ingredientes de los medios de cultivo se
disuelven por agitacin y calentando ligeramente en agua
destilada. Los medios que contienen agente gelificante se
suelen hervir durante 1 minuto para conseguir su disolucin.
Aunque en la mayor parte de los medios hay que calentar, se
deben evitar sobrecalentamientos innecesarios.
El pH de los medios de cultivo se ajusta durante su fabricacin
a los valores descritos en cada uno de ellos. Sin embargo, la
calidad del agua que se utiliza en su hidratacin, la utilizacin
de medios no recientes, etc., pueden modificar este parmetro
por lo que es aconsejable verificarlo y reajustarlo si fuera
necesario. En algunos casos se puede ajustar el pH despus de
la esterilizacin de forma asptica y utilizando soluciones
cidas (cido Clorhdrico) o bsicas (Sodio Hidrxido)
estriles. En los medios slidos la medida se hace a 45-50C
(el agar todava no ha gelificado) mientras que en los lquidos
se hace a temperatura ambiente. Los medios cidos (pH<5)
Figura 1. Agar Dextrosa
pueden presentar malas gelificaciones debido a la posible
hidrlisis del Agar con la temperatura. Son medios que no es
aconsejable refundirlos y, si es imprescindible, es aconsejable aadirles agar.

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Esterilizacin
En la etiqueta de los productos se indican las condiciones de esterilizacin. El mtodo ms comnmente
utilizado para la esterilizacin es el Autoclavado. Sin embargo, hay ingredientes en algunos medios que
no mantienen sus propiedades si se someten a altas temperaturas.
El vapor a presin o Autoclavado: Exposicin durante 15 minutos a 121C. Con este tratamiento mueren
las clulas vegetativas y las endosporas bacterianas. Sin embargo, los medios que contienen hidratos de
carbono, deben esterilizarse a temperaturas no superiores a los 116-118C, para prevenir su
descomposicin y la posible formacin de compuestos txicos que inhiban el crecimiento bacteriano.

Figura 2. El vapor a presin o autoclavado con cajas de Petri y los matraces con contenido
de Agar.

Conservacin de los medios recin preparados

Lo ms recomendable es preparar el medio cuando se va a emplear, aunque en muchos casos por razones
obvias una parte del medio preparado se consume y el resto se guarda como medio preparado. El tiempo
de vida del medio preparado depender de la propia naturaleza del medio, de la hermeticidad de los
recipientes que lo contienen, de la temperatura de conservacin y de las condiciones medioambientales.
Si la hermeticidad es buena y la temperatura baja, 2-8C, la vida del medio puede llegar a ser de 4 a 6
semanas. De todas formas la refrigeracin favorece la deshidratacin y en algunos casos, como por
ejemplo, los medios para anaerobios, la conservacin es mejor a temperatura ambiente que en frigorfico.
Se deben evitar las condensaciones excesivas ya que el depsito de gotas de agua podr ser causa de una
alteracin del medio. Tampoco deben emplearse medios preparados en los que se observe un efecto de
deshidratacin.

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REPORTE
1. Investigue y describa cules son los mtodos de esterilizacin utilizados en un laboratorio de
microbiologa (Incluir referencias bibliogrficas).
La esterilizacin se puede realizar, como se ha indicado por mecanismos fsicos o qumicos. El
mecanismo fsico ms utilizado es el calor, ya sea hmedo o seco. Sin embargo, cuando estas
metodologas fsicas no son aplicables, por las caractersticas del material o medio a esterilizar, la
filtracin o la radiacin son los mecanismos a elegir. Excepcionalmente y sobre todo en aplicaciones a
material de uso sanitario, donde no se pueden utilizar las metodologas ya reseadas, se utiliza
generalmente algn tipo de esterilizacin fra. La esterilizacin fra se lleva a cabo en dispositivos
cerrados donde se emplea un agente qumico gaseoso, como el xido de etileno, el formaldehdo o
lquidos como el glutaraldehdo.
Agente esterilizante
Calor hmedo

Equipo
Autoclave

Calor seco

Horno Pasteur
Mechero
Filtros membrana
Equipos filtracin
Filtros HEPA
Fuente de rayos gamma
Fuente de rayos X
Cmara
Cmara

Filtracin

Radiacin
Oxido etileno
Glutaraldehido

Tabla 1. Agentes esterilizantes y respectivo equipo

2. Investiga y describa la clasificacin de los medios de cultivo (Incluir referencias bibliogrficas).

SEGN SU ESTADO
FSICO
A. SLIDOS
B. LQUIDOS
C. SEMISLIDOS

SEGN SU USO

Medios

Medios
Medios selectivos
A. Nutrientes (slidos
y nutrientes
Pueden
ser
slidos
o
lquidos
Favorecen el crecimiento de un
lquidos)
Son
aquellos
que
presentan
determinado
los
grupo de bacterias
B. Selectivos (slidos)
nutrientes
mnimos
para
el
La
selectividad
se consigue
C. Diferenciales
crecimiento de los
normalmente con un producto
D.
De
enriquecimiento
microorganismos que no qumico agente, tinta o
(lquidos)
necesitan requerimientos antibitico. Son slidos
D. SEMILQUIDOS
especiales
Medios diferenciales
Medios de enriquecimiento
Slidos o lquidos
Son medios que tienen aditivos
Permite diferenciar un
adicionales para favorecer el
microorganismo de otro segn
crecimiento de determinados
determinadas propiedades de
microorganismos
crecimiento en dichos medios
Son lquidos
Presentan algn indicador Ej:
TSIA, Citrato, etc (T-P de
pruebas bioqumicas)

Tabla 2. Clasificacin de los medios de cultivo.

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3. En un cuadro de tres columnas, enliste medios de cultivos utilizados en microbiologa, la
formulacin y los microorganismos(s) que se pueden cultivar en cada medio. Enfoque el listado a
agentes contaminantes (del agua) y microorganismos utilizados en la bioremediacin).
Medio de cultivo
Agar MacConkey

Agente
contaminante
o
biorremediacion
Agente contaminantes y en
biorremediacion

Agar Lowenstein-Jensen

Agente contaminantes

Agar inclinado de Loeffler

Agar PEA (alcohol feniletlico,
phenylethanol)

Agente contaminantes
Agente contaminantes

Agar sangre con suplementos para

anaerobios

Agente contaminantes

Agar sulfito de bismuto

Agente contaminantes

Caldo para Gram negativos

Agente contaminantes

Caldo selenito F

Agente contaminantes

MacConkey n 2, Agar

Agente contaminantes

de

Microorganismos
Utilizado para la recuperacin
de enterobacterias y bacilos
Gram negativos entricos
relacionados.
Para enriquecimiento selectivo
de micobacterias
Erium diphtheriae
Para el cultivo de
microorganismos anaerobios
que no son inhibidos por el
alcohol.
Permite el desarrollo de gran
cantidad de especies
anaerobias.
Medio para el aislamiento de
Salmonella typhi.
Se emplea como caldo
selectivo para el cultivo de
Salmonella y Shigella
Diseado para el
enriquecimiento de salmonelas.
Se emplea para el
reconocimiento de Enterococos
y no fermentadores de la lactosa en aguas y productos
alimenticios
Medio de cultivo para la
deteccin y recuento de
Clostridium perfringens
y otros anaerobios en
agua,alimentos y otros
materiales.

TSC, Base de Agar

Biorremediacion

TSN, Agar

Biorremediacion

Se emplea para el aislamiento y

recuento de
Clostridium perfringens

Medio de cultivo LB (Luria

Bertani)

Biorremediacion

Medio mnimo llamado MSB y

medio de mineralizacin

Biorremediacion

Medio glucosa/sucrosa

Biorremediacion

Para la producci6n de un
bioinsecticida a partir de
Bacillus thuringiensis var.
aisawai .
Para cultivar Pseudomonas
putida G7 y su mutante no
quimiotctico Pseudomonas
putida G7.Cl
Cultivo de Geotrichum sp,
Aspergillus sp y Penicillium sp.

Tabla 3. Diferentes medios de cultivo utilizados para el estudio de agentes contaminantes y microorganismos usados en la
biorremediacion.

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CONCLUSIONES
Mediante los cultivos y dependiendo de los objetivos de trabajo se pueden cultivar especies con un
potencial para la investigacin en temas de biorremediacion como cepas fngicas por ejemplo
Aspergillus, Geotrichum y Penicillium. Y con ello conocer la cintica para correlacionar el tiempo de
desarrollo ptimo del microorganismo para el consumo de algn contaminante.
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como
mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias
ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las
sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas
que tengan lugar.

Algunos aspectos a considerar durante los cultivos seria:

Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren
productos de calidad.
Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y fisicoqumica adecuada.
Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada.
Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin. Nunca se deben exceder las
condiciones sealadas por el fabricante.

BIBLIOGRAFA
Paginas
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-de-cultivo.pdf
http://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa)
https://es.scribd.com/doc/8614571/Manual-de-Medios-de-Cultivo
Articulos y trabajos
C. A. Camacho; A. M. Jimenez; Bermudez R. Q. RamIrez. OPTIMIZACION DEL PROCESO DE
FERMENTACION PARA PRODUCIR Bacillus thuringiensis Var. Aisawai.
P. Velazco Casal.B BIORREMEDIACIN: BIODISPONIBILIDAD DE XENOBITICOS EN SUELOS.
PAPEL DE LA QUIMIOTAXIS BACTERIANA. TRABAJO REALIZADO DURANTE EL XL CURSO
INTERNACIONAL DE EDAFOLOGA Y BIOLOGA VEGETAL 2003.