Causa y Efecto de Fosforo Total

VALIDACIN, DETERMINACIN DE LA TRAZABILIDAD Y ESTIMACIN DE
LA INCERTIDUMBRE DEL MTODO DEL CIDO ASCRBICO PARA LA

DETERMINACIN DE FSFORO TOTAL Y DISPONIBLE TOTAL EN EL
LABORATORIO DE QUMICA AMBIENTAL DE LA UNIVERSIDAD
TECNOLGICA DE PEREIRA
OSCAR ANDRS CULLAR GARCA
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
PEREIRA
2012

Documento presentado como requisito parcial para optar al ttulo de

QUMICO INDUSTRIAL
Directora
Lina Mara Garca Moreno
Especialista en Gestin de la Calidad y Normalizacin Tcnica
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
PEREIRA
2012
ii
NOTA DE ACEPTACIN DEL TRABAJO DE GRADO

Presentado por:
Los suscritos director y jurado del presente trabajo de grado, una vez
revisada la versin escrita y presenciando la sustentacin oral decidimos
otorgar:
La nota de: _____________________________
Con la connotacin: _____________________
Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy _________________
Director: __________________________
Lina Mara Garca Moreno
Especialista en Gestin de la Calidad y Normalizacin Tcnica
Jurado: ___________________________
Norma Patricia Durn Osorio
Magster en Estadstica e Investigacin Operativa
DEDICATORIA
A mi abuelita, Q.E.P.D, en el Reino de los Cielos, dedico con

profundo sentimiento el logro que hoy he alcanzado, gracias
por tu amor que en mi corazn siempre guardar.
A Santiago y Vernica porque ellos fueron mi inspiracin cada

maana al despertar para alcanzar este peldao que luego nos
traer prosperidad.
A mi padre Oscar y mi madre Gloria Ins, por apoyarme

incondicionalmente para haber continuado mi formacin
profesional.
A mi to Arturo por sus palabras de aliento y apoyo emocional.
Oscar Andrs Cullar Garca

ii
AGRADECIMIENTOS
A Lina por sus consejos y orientacin en los diferentes aspectos durante la

ejecucin del trabajo de grado.
A Clarita por sus observaciones para mejorar cada da.
A Mauricio por estar siempre presto a colaborarme cuando lo necesitaba
Igualmente a todo el personal del Laboratorio de Qumica Ambiental por su

amabilidad para resolver mis inquietudes.
Gracias, Laboratorio de Qumica, por abrirme sus puertas para no slo haber
realizado el proyecto de grado sino tambin por haber contribuido en mi formacin
como profesional integral
A Norma por la revisin y asesora del proyecto de grado.
Oscar Andrs Cullar Garca
iii
TABLA DE CONTENIDO
Pg.
NOTA DE ACEPTACIN DEL TRABAJO DE GRADO
DEDICATORIA
ii
AGRADECIMIENTOS
iii
TABLA DE CONTENIDO
iv
ndice de Tablas
vi
ndice de Figuras
vii
RESUMEN
viii
ABSTRACT
viii
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
2. JUSTIFICACIN
3. OBJETIVOS
3.1 OBJETIVO GENERAL
3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
4. MARCO DE REFERENCIA
4.1 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LAS MEDICIONES
4.2 METROLOGA
4.3 METROLOGA EN QUMICA
4.4 VALIDACIN
4.5 INCERTIDUMBRE
4.6 TRAZABILIDAD
13
4.7 MATRIZ AMEF
16
iv
4.8 IMPORTANCIA DE LA DETERMINACIN DEL FSFORO
17
5. METODOLOGIA
19
6. RESULTADOS
20
CONCLUSIONES
22
RECOMENDACIONES
23
REFERENCIAS
24
ANEXOS
26
GLOSARIO
71
ndice de Tablas
Pg.
Tabla 1. Comparacin entre la metrologa en Fsica y en Qumica
Tabla 2. Parmetros de Calidad de un mtodo
Tabla 3. Magnitudes y unidades de medicin qumica
14
Tabla 4. Resultados validacin del ensayo Fsforo total y

Fsforo Disponible Total
21
Tabla 5. AMEF Fsforo total
27
Tabla 6. Consolidado de datos validacin Fsforo total
34
Tabla 7. Consolidado de datos muestra adicionada validacin Fsforo total
35
Tabla 8. Ensayos lmite de cuantificacin Fsforo total
36
Tabla 9. Datos para la carta de control de Fsforo total
39
Tabla 10. Fuentes de incertidumbre ensayo Fsforo total
41
Tabla 11. Formato para estimar la incertidumbre del ensayo Fsforo total
42
Tabla 12. Curva de calibracin Fsforo total
44
Tabla 13. AMEF Fsforo Disponible Total
51
Tabla 14. Consolidado de datos validacin Fsforo Disponible Total
58
Tabla 15. Consolidado muestra adicionada validacin

59
Tabla 16. Ensayos lmite de cuantificacin Fsforo Disponible Total
60
Tabla 17. Datos para la carta de control Fsforo Disponible Total
63
Tabla 18. Fuentes de incertidumbre ensayo Fsforo Disponible Total
65
Tabla 19. Formato para estimar la incertidumbre del ensayo

Fsforo disponible Total
66
vi
ndice de Figuras
Pg.
Figura 1. Pasos para guiar la estimacin de la incertidumbre
11
Figura 2. Puntos crticos del ensayo del ensayo Fsforo total
26
Figura 3. Rango lineal ensayo Fsforo total
36
Figura 4. Rango de trabajo ensayo Fsforo total
37
Figura 5. Diagrama Causa Efecto ensayo Fsforo total
41
Figura 6. Contribuciones a la incertidumbre del ensayo Fsforo total
47
Figura 7. Esquema del ensayo Fsforo total
48
Figura 8. Puntos crticos del ensayo Fsforo Disponible Total
50
Figura 9. Rango lineal ensayo Fsforo Disponible Total
60
Figura 10. Rango de trabajo ensayo Fsforo Disponible Total
61
Figura 11. Diagrama Causa Efecto ensayo Fsforo Disponible Total
65
Figura 12. Contribuciones a la incertidumbre del ensayo

68
Figura 13. Esquema del ensayo Fsforo Disponible Total
69
vii
RESUMEN
El Laboratorio de Qumica Ambiental (LQA) cuenta con un sistema de gestin de
calidad acreditado, por lo cual surge la necesidad de focalizar el desarrollo del
presente trabajo desde el aseguramiento de la calidad de la medicin, la cual se
fundamenta en la validacin, la incertidumbre y la trazabilidad.
Teniendo en cuenta que el LQA se encuentra acreditado por El Instituto de
Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales (IDEAM), bajo la norma
NTC/ISO/IEC 17025:2005 Requisitos Generales para la Competencia de
Laboratorios de Ensayo y de Calibracin y en coherencia con la filosofa del
mejoramiento continuo adoptada por el laboratorio, se elaboraron estrategias que
permitan incluir en el alcance de la acreditacin los ensayos de Fsforo total y
Fsforo Disponible Total, validando la metodologa mediante la evaluacin de los
parmetros caractersticos del mtodo, para luego mediante la revisin de clculos
asociar una incertidumbre acorde a los resultados que son trazables al SI.
PALABRAS CLAVE: Acreditacin, aseguramiento de la calidad, fsforo total,
Fsforo Disponible Total, incertidumbre, NTC/ISO/IEC 17025:2005, sistema de
gestin de calidad, trazabilidad, validacin.
ABSTRACT
The Environmental Chemistry Laboratory (LQA) has a quality management system
accredited, so there is a need to focus the development of this work from the
quality assurance of measurement, which is based on validation, uncertainty and
traceability.
Considering that the Environmental Chemistry Laboratory is accredited by The
Institute of Hydrology, Meteorology and Environmental Studies (IDEAM), under the
NTC/ISO/IEC 17025:2005 "General Requirements for the Competence of Testing
Laboratories and Calibration" and in coherence with the philosophy of continuous
improvement adopted by the laboratory, strategies were developed for inclusion in
the scope of accreditation tests like Total phosphorus and available Total
phosphorus, validating the methodology by evaluating the characteristic
parameters of the method, and then by reviewing associated uncertainty
calculations according to the results that are traceable to the SI.
KEY WORDS: Accreditation, quality assurance, total phosphorus, available
phosphorus, uncertainty, NTC/ISO/IEC 17025:2005 quality management system,
traceability, validation.
viii
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

El laboratorio de Qumica Ambiental (LQA), de la Universidad Tecnolgica de
Pereira, realiza anlisis que estn enfocados a la caracterizacin de aguas
residuales, superficiales y subterrneas, atendiendo la demanda de los sectores
acadmico, industrial y de la comunidad en general, cumpliendo las exigencias de
un sistema de gestin de calidad basado en la NTC-ISO/IEC 17025:2005.1 Como
decisin estratgica ha decidido incluir en el alcance de la acreditacin los
ensayos de Fsforo Total y Fsforo Disponible Total. Para este propsito se apoya
en la norma ISO citada anteriormente, cuyo objetivo es dar lineamientos a
laboratorios de ensayo y calibracin para generar resultados tcnicamente vlidos.
International Organization for Standardization. Requisitos Generales para la Competencia de los

Laboratorios de Ensayo y Calibracin. NTC-ISO/IEC 17025:2005
2. JUSTIFICACIN
El Laboratorio de Qumica Ambiental (LQA) cuenta con un sistema de gestin de
calidad acreditado, por lo cual surge la necesidad de focalizar el desarrollo del
presente trabajo desde el aseguramiento de la calidad de la medicin, la cual se
fundamenta en la validacin, la incertidumbre y la trazabilidad. Ahora bien, la
actividad analtica hace parte del proceso de medicin en la cual se obtienen
resultados que requieren una alta confiabilidad, por lo cual se hace pertinente la
validacin de los mtodos de ensayo como parte del aseguramiento de la calidad,
adicionalmente los datos producidos deben estar acompaados de una
incertidumbre acorde a los mismos y deben ser trazables a patrones de referencia,
generalmente a las unidades del Sistema Internacional (SI); adems es un
requerimiento indispensable que se debe cumplir teniendo en cuenta que el LQA
se encuentra acreditado por El Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios
Ambientales (IDEAM), bajo la norma NTC/ISO/IEC 17025:2005 Requisitos
Generales para la Competencia de Laboratorios de Ensayo y de Calibracin2 y en
coherencia con la filosofa del mejoramiento continuo adoptada por el laboratorio
se requiere ampliar el alcance de la acreditacin incluyendo los ensayos de
Fsforo Total y Fsforo Disponible Total.
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial. Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios

Ambientales, IDEAM. Resolucin No. 0425 del 28 de Febrero de 2011.
3. OBJETIVOS
3. OBJETIVO GENERAL
Validar, estimar la incertidumbre y determinar la trazabilidad para los ensayos de
Fsforo Total y Fsforo Disponible Total apoyado en los lineamientos de la
NTCISO/IEC 17025:2005 aplicada en el Laboratorio de Qumica Ambiental de la
Universidad Tecnolgica de Pereira.
3.1. OBJETIVOS ESPECIFICOS
3.1.1 Validar el ensayo de Fsforo Total y Fsforo Disponible Total a travs de la
estimacin de los parmetros caractersticos del ensayo como son: Lmite de
deteccin, lmite de cuantificacin, exactitud y precisin bajo condiciones de
repetibilidad y reproducibilidad, rango lineal y de trabajo, sensibilidad y porcentaje
de recuperacin.
3.1.2 Estimar la incertidumbre de medicin asociada a los ensayos validados
3.1.3 Determinar la trazabilidad para los ensayos validados

3.1.4 Generar la documentacin necesaria para dar cumplimiento a los requisitos
establecidos en la NTC-ISO/IEC 17025:2005 en el numeral 5.4.2.
3.1.5 Presentar los resultados del trabajo de grado como base para realizar una
divulgacin cientfica de los mismos.
4. MARCO DE REFERENCIA
4.1 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LAS MEDICIONES
El rol que desempea un laboratorio de ensayo acreditado es producir datos
tcnica y legalmente vlidos con la mayor calidad posible, producto de las
mediciones analticas diarias que se llevan a cabo, es all donde el aseguramiento
de la calidad, cobra importancia puesto que tiene como objetivo optimizar la
confiabilidad del proceso de medicin, por lo que se hace necesario implementar
un programa de aseguramiento de la calidad/control de calidad (Quality
Assurance/Quality Control), QA/QC, por sus siglas en ingls a nivel interno del
laboratorio; QA es un plan que el laboratorio genera donde se especifican las
medidas necesarias para obtener resultados con exactitud y precisin conocida,
mientras que QC es el conjunto de acciones dentro de una metodologa de
anlisis para asegurar que el proceso de medicin est bajo control.
Dentro del QA estn asociados diversos documentos que entre muchos se citan la
declaracin de polticas de calidad, perfil profesional y responsabilidades de los
analistas, procedimientos para recoleccin, preservacin y recepcin de muestras,
documentacin de equipos e instrumentos, referencias de normas utilizadas,
procedimientos estndares de operacin (SOPs), actividades de control de
calidad (QC), procedimientos para la calibracin, verificacin y mantenimiento de
equipos e instrumentos, entre otros; adems es primordial que el personal de
laboratorio comprenda sus roles y responsabilidades para realizar sus actividades
enmarcadas dentro de polticas de calidad.
Un buen programa QC debe incluir por lo menos, demostracin inicial de
capacidad del analista, lmite de deteccin y cuantificacin del mtodo de ensayo,
curvas de calibracin con un coeficiente de correlacin apropiado, un blanco del
mtodo, duplicado de muestras, estndar de control de calidad, muestras
adicionadas, criterios de aceptacin de resultados, clculos y estimaciones
estadsticas, cartas de control y acciones correctivas por lo menos por cada set de
muestras. La evaluacin y el reporte final de los datos son los pasos finales en el
proceso de control de calidad y constituyen una parte esencial del programa de
aseguramiento de la calidad.
Conjuntamente, se debe establecer un plan para la evaluacin de la calidad
(Quality assessment), el cual es un proceso utilizado para garantizar que las
medidas de control de calidad se llevan a cabo de forma pertinente y para verificar

la calidad de las mediciones realizadas en el laboratorio mediante el uso de
muestras de control interno, participacin en pruebas interlaboratorio y auditoras
de calidad internas y externas3.
Un proceso de medicin liga de manera ineludible aspectos tcnicos,
administrativos, estadsticos, instrumentales y de personal, estableciendo en cada
uno de estos sus propios parmetros de control que aseguren la conformidad de
los datos de acuerdo con los criterios de aceptacin establecidos en cada
laboratorio4, por eso la implementacin de un plan de mantenimiento y calibracin
de equipos (conocida tambin como proceso de confirmacin metrolgica) como el
uso de cartas de control son herramientas metrolgicas recomendadas para el
control estadstico de procesos que deben integrarse de forma adecuada en el
sistema de calidad para cerciorarse de que los resultados cumplan con ciertos
requerimientos5,6. Adicionalmente no es suficiente contar con un buen instrumento
de medicin y/o material de referencia, ste debe utilizarse de forma adecuada
para obtener la confiabilidad y mejor capacidad de medicin, lo que implica
seleccionar el mtodo de medicin y/o calibracin ms conveniente una vez
conocida la selectividad/especificidad y robustez del mismo7. La elaboracin de un
informe de resultados es el completo documental y final de un ensayo de
medicin, el cual debe cumplir con ciertos requisitos como lo son: exactos,
precisos (no ambiguos), notificados en forma simplificada, entregados de forma
impresa, con unidades de medida e incertidumbre asociada y dgitos significativos
adecuados; todo lo anterior con el objeto de que el usuario final y/o cliente tenga
una fcil interpretacin y uso del contenido de los resultados8.
4.2 METROLOGIA9
Las actividades metrolgicas de calibracin, medicin y ensayo son
fundamentales para garantizar la calidad de las mediciones y procesos industriales
as como de la calidad de vida. Ello supone la necesidad de contar con resultados
trazables a patrones de referencia. El Reconocimiento de la competencia
3
American Public Health Association, American Water Works Association & Water Environment Federation.
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 22 nd. Washington, D.C., 2012.
4
MetAs & Metrlogos Asociados. El Proceso de Medicin. No. 09 (La Gua MetAs, 2007). Pg. 1 3.
5
MetAs & Metrlogos Asociados. Herramientas de la metrologa en sistemas de calidad. No. 09 (La Gua
MetAs, 2004). Pg. 1 5.
6
MetAs & Metrlogos Asociados. Cartas de control para instrumentos de medicin. No. 06 (La Gua MetAs,
2004). Pg. 1 5.
7
MetAs & Metrlogos Asociados. Capacidad de medicin. No. 03 (La Gua MetAs, 2006). Pg. 2 8.
8
MetAs & Metrlogos Asociados. Expresin e interpretacin de resultados experimentales en metrologa.
No. 05 (La Gua MetAs, 2007). Pg. 1 12.
9
Metrologa Abreviada. 3 Ed. EURAMET, 2008. Pg 13 18.
metrolgica en cada nivel de la cadena de trazabilidad puede establecerse

mediante acuerdos o conciertos de reconocimiento mutuo, as como mediante
acreditacin y revisin por pares.
4.3 METROLOGIA EN QUMICA
En la actualidad el aseguramiento de las mediciones qumicas realizadas en el
rea ambiental, mdica, alimenticia e industrial en trminos de su confiabilidad y
veracidad es un tema de suma importancia para el desarrollo econmico y social
de un pas. La Metrologa se ha desarrollado a partir de las mediciones fsicas y se
encarga de establecer la trazabilidad de los resultados a patrones de referencia
definidos, normalmente al Sistema Internacional de Unidades (SI), con anlisis
completos de las contribuciones a la incertidumbre de medicin para un nivel
declarado de confianza, empleando materiales de referencia y mtodos
normalizados de ensayo. Respecto a las mediciones qumicas la situacin es ms
compleja ya que stas generalmente no se realizan bajo condiciones definidas y
controladas como se observa en la tabla 1. Es importante resaltar que el principal
objetivo de las mediciones qumicas es determinar la cantidad de una entidad
qumica de inters en una matriz dada y no la composicin total de la misma, de
aqu, que el medio donde se realizan las mediciones no puede ser definido y
controlado.
Metrologa en Fsica y
Qumica
Fsica
Qumica
Medicin
Comparando una magnitud. Ej:

Temperatura
Comparando una magnitud. Ej: DDT

en leche
Unidades
m, s, K
Mol/Kg, mg/Kg
Influenciada por
Mediciones directas
Diversos factores que afectan la

calidad la medicin
Principal Impacto
Calibracin de Equipos
Tratamiento Qumico. Ej: extraccin,

digestin, material de referencia
utilizado, calibracin de equipos
Depende de
Generalmente es independiente de
la muestra
Es Fuertemente dependiente de la
muestra
Ejemplo
Longitud de una masa
Concentracin de Pb en una
muestra de agua, suelo.
Tabla 1. Comparacin entre la metrologa en Fsica y en Qumica
Muchas mediciones qumicas son trazables a patrones a mtodos de

referencias, en otros casos las mediciones pueden ser consideradas trazables a
un material de referencia (certificado) ya sea en forma de sustancia pura o de una
matriz de material de referencia, donde la concentracin del analto ha sido
certificada. El grado en el que los materiales de referencia proporcionan una
cadena de trazabilidad al SI dependen de la calidad del vnculo a los valores
obtenidos mediante mediciones de referencia a valores proporcionados por
patrones de referencia.
Es indispensable conocer y aplicar en el Laboratorio el concepto de
aseguramiento de la calidad de las mediciones sobre el cual se fundamenta la
necesidad de desarrollar el presente trabajo, siendo sus pilares la validacin, la
trazabilidad y la incertidumbre.
4.4 VALIDACIN
Partiendo del concepto de validacin como la confirmacin, a travs del examen y
el aporte de evidencias objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares
para un uso especifico previsto10, surgen cuatro motivos por los que se hace
necesario validar: Para cumplir las normativas, optimizar procesos, asegurar la
calidad / mejorar productividad y reducir costos11. Un mtodo debe validarse
cuando se adopta un mtodo estandarizado se modifica una parte de ste y
cuando se desarrolla un nuevo mtodo para un uso especfico.
En el contexto actual de la globalizacin de los mercados, existe una creciente
demanda en cuanto a la comparabilidad de los resultados, esto conlleva a que el
generador del resultado, en este caso el LQA, pueda demostrar documentalmente
que sus resultados son trazables. Estos documentos hacen referencia, entre otros
aspectos a un procedimiento normalizado de ensayo, a un equipo de medida bien
calibrado y al uso de patrones de referencia; por ello el proceso de validacin
cobra importancia al tener un impacto directo sobre la calidad de estos datos12.
10

Laboratorios de Ensayo y Calibracin. NTC-ISO/IEC 17025:2005. Pg. 17.
11
La importancia de la validacin. En: Tcnicas de Laboratorio. No 269 (_____, 2002); p.110 111.
12
GREEN, JM. A Practical Guide to Analytical Method Validation. No. 68 (Analytical Chemistry, 1996).
Pg. 305A - 309A.
Asegurar la trazabilidad de los resultados analticos es una etapa clave para que el
cliente tenga confianza en los resultados proporcionados por el laboratorio13. Sin
embargo, es necesario suministrar un parmetro que proporcione una idea del
grado de confianza de los resultados, por tanto, los analistas deben proporcionar
resultados trazables con una incertidumbre asociada14, es decir, cuanto puede
alejarse un valor del convencionalmente verdadero15; adicionalmente, mientras
ms estrictamente se cumplan los requerimientos, menor ser la incertidumbre del
resultado, lo que indica que existe una relacin inversamente proporcional entre
los requerimientos y la incertidumbre.
Como se aprecia en la tabla 2, los requisitos analticos para un uso especfico,
determinan los parmetros criterios de calidad del mtodo a utilizar para resolver
el problema, estos criterios de calidad, conocidos como performance
characteristics figures of merit, pueden ser de tipo estadstico u
operativo, el laboratorio debe decir cules de esos parmetros necesitan
caracterizarse. Una vez se haya finalizado la validacin, es muy importante no
slo realizar los anlisis estadsticos y estimar la incertidumbre del mesurando con
una trazabilidad asociada sino tambin documentar el procedimiento de forma tal
que el ensayo pueda reproducirse reduciendo en la medida de lo posible cualquier
ambigedad. El uso de SOPs que reflejan los detalles de la metodologa analtica
aseguran que el mtodo se aplica siempre del mismo modo16.
Tipo Estadstico u operativo
Selectividad / Especificidad
Robustez
Intervalo lineal y de trabajo
Lmites de deteccin y cuantificacin
Sensibilidad
Exactitud, Precisin
Recuperacin
Tabla 2. Parmetros de Calidad de un mtodo
13
RIUS, F. Xavier. MAROTO, Alicia. BOQU, Ricard. RIU, Jordi. Exactitud y Trazabilidad. En: Tcnicas
de Laboratorio. No 254 (_____, 2000); p. 591 594.
14
RIUS, F. Xavier. MAROTO, Alicia. BOQU, Ricard. RIU, Jordi. Incertidumbre y Precisin. En: Tcnicas
de Laboratorio. No 266 (_____, 2001); p.834 837.
15
DE BIVRE, P. Measurement results without statements of reliability (uncertainty) should not be taken
seriously. No 6 (Accreditation and Quality Assurance, 1997); p. 269
16
RIUS, F. Xavier. MAROTO, Alicia. BOQU, Ricard. RIU, Jordi. La validacin de Mtodos Analticos.
En: Tcnicas de Laboratorio. No 252 (_____, 2000); Pg. 382 385.
El analista encargado de realizar la validacin del ensayo deber ser tcnicamente

competente y tener suficiente conocimiento sobre el trabajo a realizar con el fin de
que sea capaz de tomar decisiones apropiadas a partir de las observaciones
hechas mientras avanza el estudio, adems en esta actividad se encuentra
implcita la necesidad de evaluar y confirmar que el mtodo en cuestin tiene
capacidades de desempeo consistentes para lo que fue previsto. La validacin
de un mtodo en un laboratorio de ensayo deber incluir por lo menos las
siguientes actividades de acuerdo con la tabla 1, por las siguientes razones17:
- Evaluacin de selectividad y especificidad: Para asegurar que el mtodo
responde exacta y especficamente al analito de inters y no a otras especies
similares.
- Prueba de Robustez: Permite obtener informacin de forma rpida y sistemtica
de los efectos sobre pequeos cambios introducidos en el procedimiento, adems
proporciona una indicacin de confiabilidad durante el uso rutinario del ensayo.
- Intervalo lineal y de trabajo: Es til para determinar el intervalo donde la seal
de respuesta tendr una relacin lineal con la concentracin del analito.
- Lmites de deteccin y cuantificacin: Definen la capacidad de un mtodo de
ensayo para identificar y cuantificar un analito bajo condiciones de exactitud y
precisin previamente establecidas.
- Sensibilidad: La sensibilidad es un parmetro til para usar en frmulas de
cuantificacin.
- Exactitud y Precisin: Indica que tan sesgados estn los resultados y que
dispersin existen entre ellos.
- Recuperacin: Indica la eficiencia del mtodo para cuantificar en su totalidad el
analito de inters en una matriz dada.
4.5 INCERTIDUMBRE
Es muy importante que los resultados analticos entregados en los reportes estn
acompaados de su incertidumbre. La estimacin de la incertidumbre de un
ensayo requiere considerar todas las posibles fuentes de incertidumbre. En la
prctica, puede surgir de la toma de muestras, condiciones de preservacin,
condiciones de medicin, incertidumbres debido a efectos instrumentales y
17
The fitness for purpose of analytical methods: A laboratory guide to method validation and related topics.
Eurcachem. 1998
calibracin de equipos, incertidumbre del material volumtrico, valores de

referencia, preparaciones de patrones, aproximaciones e hiptesis incorporadas
en el mtodo de medicin y procedimiento, la variacin aleatoria entre otras. Para
estimar la incertidumbre combinada es necesario tomar cada fuente y realizar los
clculos por separado a fin de obtener la contribucin de cada una. La
incertidumbre de medicin no implica duda acerca de la validez de la misma, por
el contrario, el conocimiento de la incertidumbre implica una mayor confianza en la
validez de un resultado, que de acuerdo con la definicin del trmino,
incertidumbre es:
parmetro asociado con el resultado de una medicin que caracteriza la
dispersin de los valores que pueden ser atribuidos razonablemente al
mesurando.
Para la mayora de los propsitos en qumica analtica se utiliza la incertidumbre
expandida, U, la cual proporciona un intervalo de confianza determinado donde se
encuentra con alta probabilidad el valor verdadero del mesurando18.
Los pasos para calcular la incertidumbre de un mtodo de ensayo son muy
simples, de forma tal que siguiendo los lineamientos de la figura 1, se puede
estimar fcilmente19:
Definir el mesurando X
Establecer el modelo fsico

Identificar las magnitudes de entrada Xi
Establecer el modelo matemtico
Identificar las fuentes de incertidumbre
Cuantificar cada fuente y

asociarle una distribucin
Calcular la incertidumbre estndar, u(xi)
18
Quantifying uncertainty in analytical measurement. Eurachem / CITAC guide. 2nd Ed. 2000
SCHIMID, Wolfgang. LAZOS, Ruben. Gua para estimar la incertidumbre de la medicin. Centro Nacional
de Metrologa, CENAM. Mxico, 2000.
19
10
Calcular la incertidumbre estndar

combinada, uc(xi)
Determinar el factor de
cobertura, k
Calcular la incertidumbre expandida, U
Expresin de la incertidumbre
Figura 1. Pasos para guiar la estimacin de la incertidumbre

Para definir el mesurando se requiere tanto una declaracin clara e inequvoca de
lo que se est midiendo, y una expresin cuantitativa que relacione el valor del
mesurando con los parmetros de los cuales depende, adems si es posible
incluir las correcciones para los errores sistemticos.
Un modelo fsico de la medicin consiste en el conjunto de suposiciones sobre el
propio mesurando y las variables fsicas qumicas relevantes para la medicin.
Es importante identificar las magnitudes de entrada las variables que estn
directamente relacionadas con el proceso (ensayo). Adems representar el
modelo fsico mediante un modelo descrito por un lenguaje matemtico es
esencial para estimar la incertidumbre, a pesar, de que ste supone
aproximaciones originadas por la representacin imperfecta limitada de las
relaciones entre las variables involucradas.
Una vez determinados el mesurando, el principio, el mtodo y el procedimiento de
medicin, se identifican las posibles fuentes de incertidumbre, las cuales
provienen de los diversos factores involucrados en la medicin. Por lo general es
conveniente empezar con la expresin bsica que se utiliza para calcular el valor
del mesurando, ya que todos los parmetros de esta expresin pueden ser fuentes
potenciales de incertidumbre. No es recomendable desechar alguna de las fuentes
de incertidumbre por la suposicin de que es poco significativa sin una
cuantificacin previa de su contribucin, comparada con las dems y apoyada por
mediciones. No obstante de acuerdo con la experiencia, y conocimiento del
mtodo de ensayo se permitir calificar como irrelevantes algunas fuentes
despus de las debidas consideraciones. El diagrama causa efecto es una de
las diversas formas que ofrece un anlisis adecuado, conveniente y bien
estructurado de listar las posibles fuentes de incertidumbre, el cual consiste en
una representacin grfica sencilla en la que se traza una lnea horizontal que
representa el mesurando. Sobre Este eje se trazan lneas oblicuas que
11
representan las posibles fuentes de contribucin de la incertidumbre en la

medicin del mesurando, a su vez cada una de estas lneas recibe otras lneas
perpendiculares que representan las subfuentes de incertidumbre, lo que conlleva
a observar un grupo conformado una lnea principal y las lneas secundarias que
contribuyen a la incertidumbre.
La cuantificacin de cada fuente de incertidumbre incluye la asignacin de un valor
(tambin conocida como incertidumbre original) y la asignacin del tipo de
distribucin a la cual se refiere este valor. Por una parte existen dos formas
principales para cuantificar las fuentes que son incertidumbre Tipo A e
incertidumbre Tipo B, la primera est basada en un anlisis estadstico de una
serie de mediciones mientras que la segunda comprende toda la informacin
externa u obtenida por experiencia. En cuanto al tipo de distribuciones existen
principalmente de tipo normal, rectangular y triangular.
Al calcular la incertidumbre estndar, lo que se hace es unificar los valores de la
incertidumbre original que tienen diferentes unidades en valores adimensionales y
para ello se calcula la incertidumbre de acuerdo con el tipo de distribucin que le
fue asignado a cada valor.
El resultado de la combinacin de las diferentes fuentes de incertidumbre se
conoce como incertidumbre estndar combinada, que generalmente se calcula a
travs de la ley de propagacin de incertidumbre ya que en la mayora de los
casos una magnitud de entrada est influencia por diversas fuentes. Es posible
encontrar que una pequea variacin de alguna de las fuentes tenga un impacto
importante en el mesurando.
Frecuentemente se elige un factor de cobertura, k, que corresponde a un nivel de
confianza determinado con un porcentaje de probabilidad de encontrar el valor
verdadero del mesurando.
La incertidumbre expandida indica un intervalo de los valores que puede tomar
probablemente el mesurando con un nivel de confianza determinado.
Finalmente, es indispensable comunicar sin ambigedades la manera en que la
incertidumbre est expresada. Cuando se reportan los resultados de los anlisis
de rutina en un laboratorio de ensayo, se recomienda la siguiente forma: (x U)
(unidades), indicando el valor de k. Para la expresin numrica los valores de los
resultados y su incertidumbre no se deben entregar con un nmero excesivo de
dgitos, los resultados deben ser redondeados para ser coherente con la
incertidumbre dada.
12
4.6 TRAZABILIDAD20
Para lograr la comparabilidad de los resultados en el espacio y el tiempo, es
esencial vincular todos los resultados de las mediciones individuales a una
referencia comn estndar de medicin, de manera que puedan compararse a
travs de su relacin con esa referencia. Esta estrategia se denomina
"trazabilidad". El Vocabulario Internacional de trminos bsicos y generales en
Metrologa (VIM) define la trazabilidad como:
"Propiedad del resultado de una medicin o el valor de un patrn tal que pueda ser
relacionado a referencias establecidas, generalmente normas nacionales o
internacionales, a travs de un cadena ininterrumpida de comparaciones, todas
teniendo incertidumbres establecidas ".
Esta definicin implica la necesidad de un esfuerzo a nivel nacional e internacional
para proporcionar estndares de referencia ampliamente aceptados, y a nivel de
cada laboratorio para demostrar los enlaces necesarios a dichas referencias. La
trazabilidad es necesaria pero no suficiente para obtener resultados confiables, se
requiere tambin tener implementado un sistema de control de calidad de las
mediciones. Una caracterstica clave de los buenos resultados es la
comparabilidad, es decir, la capacidad de comparar los resultados de manera
significativa sin importar donde se originen. La comparabilidad est provista, entre
otras, por la trazabilidad a un set de unidades de medicin y escalas consistentes.
Para la mayora de los resultados de las mediciones qumicas se cuenta con el
Sistema Internacional de unidades. Establecer la trazabilidad asegura que los
valores de las magnitudes medidas y los valores de las condiciones especificadas
estn relacionados a estndares apropiados. Esta actividad se logra mediante
calibracin usando estndares de medicin adecuados.
La naturaleza de la sustancia analizada es importante en todas las mediciones
qumicas, se expresen no en moles. En particular, cantidades expresadas como
fraccin msica son adimensionales, el punto es que para establecer la
trazabilidad adecuadamente, cada resultado de la medicin debe ser trazable a
una referencia apropiada para la sustancia en particular, de acuerdo como se
observa en la tabla 3 donde se resumen una seleccin de unidades derivadas
importantes en las mediciones qumicas.
20
Traceability in chemical measurements: A guide to achieving comparable results in chemical

measurements. Eurachem / CITAC guide. 2003. Eurachem / CITAC guide. 2003
13
Magnitud
Unidades
Fraccin molar
mol/mol, %
Fraccin msica
Kg/Kg, %
Fraccin volumtrica
m3/ m3, %
Concentracin molar
mol/ m3
Concentracin msica
Kg/ m3
Concentracin en volumen
m3/ m3
Molalidad
mol/Kg
pH
1 (logaritmo negativo actividad in hidrgeno)
Actividad Enzimtica
Katal (mol*s-1), SI; U (mol/min)
Pureza, es una caracterstica importante de muchos materiales de referencia
expresada en trminos de algunas de las magnitudes referenciadas en la tabla
Tabla 3. Magnitudes y unidades de medicin qumica
Es necesario realizar un conjunto de actividades clave para establecer la
trazabilidad de los resultados de un sistema de medicin en un laboratorio de
ensayo, las cuales son:
i) Especificacin del mensurando, alcance de las mediciones e incertidumbre
requerida: Una medicin significativa requiere una especificacin clara del
mesurando. Adicionalmente es necesario prestar atencin a algunas cuestiones
especficas:
- Identidad del analito: En las mediciones qumicas es necesario diferenciar que
tipo de analito se est cuantificando, por ejemplo diferenciar entre especies
moleculares o elementales.
- Condiciones de medicin: Al establecer la trazabilidad es importante considerar
que tipo de condiciones se aplican para realizar un ensayo ya que stas forman
parte de la definicin formal de mesurando.
- Correccin por recuperacin: Es importante indicar si la magnitud de inters es
una cantidad de material recuperado a partir de una matriz si se trata de una
cantidad total que se cree est presente. Esto es importante porque la correccin
por recuperacin requiere una medida adicional para calcular la correccin y en
general se sumar a los requisitos de trazabilidad.
- Especificacin en trminos de un mtodo: La definicin del mesurando en
trminos de un procedimiento slo conduce a una lista ms larga de parmetros
fijos. Sin embargo ser necesario demostrar que los procedimientos alternativos
brindan resultados equivalentes.
14
ii) Eleccin de un mtodo adecuado: Una vez que el mesurando es conocido y

comprendido, se debe seleccionar el mejor mtodo disponible para trabajar bajo
las condiciones actuales del laboratorio. Dentro del mtodo se debe incluir las
ecuacin para clculo del resultado de la medicin y los controles de calidad
necesarios as como las diferentes magnitudes de influencia (concentracin de
reactivos, tiempo, temperatura, etc.) que sern pertinentes para el propsito de
establecer la trazabilidad, sujeta a la validacin del mtodo de ensayo.
iii) Validacin del mtodo de ensayo: En primer lugar la validacin debe
confirmar que el mtodo y las condiciones de medicin son adecuadas para el uso
propuesto. La segunda consideracin importante es que las referencias que se
utilizan para controlar, calibrar y probar el mtodo durante la validacin son
trazables. La validacin juega un papel clave en el establecimiento de la
trazabilidad, no es un actividad opcional, an cuando se adopta un mtodo
estndar que ha sido validado y probado siempre ser necesario al menos que el
laboratorio compruebe que puede ejecutar el mtodo correctamente realizando la
validacin del mismo aunque sea a un nivel no muy profundo.
iv) Identificacin de la importancia relativa de cada magnitud de influencia:
La importancia de las diferentes magnitudes de influencia est relacionada por su
efecto cuantitativo sobre los resultados de la medicin. Los efectos de las
magnitudes fsicas sobre los resultados son ms fciles de medir y controlar en
comparacin con los efectos qumicos por lo que se hace necesario prestar ms
atencin a estos ltimos. Para decidir si un efecto necesita ser medido e incluido
en las disposiciones de trazabilidad, normalmente es suficiente considerar el peor
de los casos que razonablemente podra dar lugar a un error significativo en la
medicin.
v) Eleccin y aplicacin de estndares de referencia apropiados: La
calibracin junto con los mtodos validados es la clave para la trazabilidad. Sin
embargo, en la prctica no siempre estn disponibles certificados de calibracin y
materiales de referencia certificados por lo que se debe realizar un control
detallado de los estndares de medicin disponibles.
vi) Estimacin de la incertidumbre: El requerimiento de la informacin de la
incertidumbre surge de la necesidad de garantizar que las referencias usadas son
suficientemente precisas para el propsito, y segundo, para proporcionar
informacin similar para el resultado de la medicin. El procedimiento mnimo que
se debe llevar a cabo es: estimar la contribucin de la incertidumbre de cada
fuente, estimar la incertidumbre combinada y expandida del mtodo de ensayo y
confirmar que la incertidumbre expandida cumple los requerimientos de uso final.
15
Ntese que esta lista no implica necesariamente un orden de prioridades entre las
actividades puesto que todas son importantes, lo relevante es que se lleven a
cabo de forma apropiada para el propsito determinado. Adicionalmente estos
lineamientos funcionan adecuadamente slo en un contexto enmarcado por un
aseguramiento de la calidad y control de calidad de las mediciones.
Concluyendo, la evidencia de la trazabilidad se presenta en los certificados de
calibracin estndares de referencia certificados. Por otra parte no es habitual
suministrar detalles de la trazabilidad en los informes de ensayo, sin embargo, de
ser necesario se informar sobre la identidad de los estndares de calibracin
utilizados para controlar las condiciones de medicin.
4.7 MATRIZ AMEF21
AMEF Anlisis de Modo y Efecto de Falla, es una herramienta para la mejora,
utilizada para detectar por anticipado los posibles modos de falla, con el fin de
establecer los controles adecuados que eviten la ocurrencia de defectos. Los
objetivos que se desean alcanzar cuando se desarrolla un AMEF son:
identificarlos modos de falla potenciales, sus posibles causas y el efecto,
determinar las consecuencias de las fallas en el desempeo del sistema e
identificar las acciones que pudieran eliminar o reducir la posibilidad de que ocurra
el modo de falla. Cada vez que haya alguna modificacin en el proceso se debe
actualizar el AMEF.
La elaboracin de una matriz AMEF se puede resumir en 11 pasos:
i) Proceso: Describe de manera breve y concreta el proceso que desea analizar
ii) Modo de falla Potencial: Es la manera en que podra fallar el proceso para
cumplir con los requerimientos previstos.
iii) Causas de falla potencial: Situaciones que podran dar origen al modo de
falla, de modo que las acciones correctivas puedan ser orientadas hacia las
causas pertinentes.
iv) Grado de ocurrencia: Se estima la frecuencia de la causa de falla potencial,
utilizando una escala de 1 a 10, donde 1 indica remota probabilidad de
ocurrencia y 10 muy alta probabilidad de ocurrencia.
21
_____. FMEA. Disponible en lnea: http://www.quality-one.com/fmea. Consultado: Agosto de 2012.
16
v) Efecto de falla potencial: Se describe los efectos del modo de falla en

trminos de lo que el usuario final del producto pueda experimentar.
vi) Grado de severidad: Se estima la gravedad del efecto de falla potencial en el
usuario final, utilizando una escala de 1 a 10, donde 1 indica una consecuencia
sin efecto ocurrencia y 10 una consecuencia muy grave.
vii) Controles: Describe los controles actuales que estn dirigidos a prevenir
detectar el modo de falla potencial.
viii) Deteccin: Se estima la probabilidad de que los controles del proceso
detecten el modo de falla potencial antes de terminar el proceso, utilizando una
escala de 1 a 10, 1 indica alta probabilidad de que la falla se pueda detectar y
10 indica que es improbable de ser detectada.
ix) Nmero de Probabilidad de Riesgo, NPR: Es un valor que establece una
jerarquizacin de los problemas a travs de la multiplicacin del grado de
ocurrencia, severidad y deteccin, ste provee la prioridad con la que debe de
atacarse cada modo de falla. Toma valores de 1 a 1000, para los NPR ms altos
se deben emprender acciones efectivas con el fin de reducir el riesgo de falla.
x) Acciones recomendadas: Es una descripcin de las acciones correctivas
preventivas encaminadas a eliminar disminuir la ocurrencia de la causa de falla
potencial, reducir la severidad del modo de falla y/o incrementar la probabilidad de
deteccin.
xi) Responsable: Se indica el rea proceso y persona responsable de ejecutar
las acciones recomendadas.
4.8 IMPORTANCIA DE LA DETERMINACIN DEL FSFORO22
El fsforo es el undcimo elemento ms abundante sobre la superficie de la tierra
y se encuentra comnmente en forma de fosfato. Desempea un papel importante
en los procesos bioqumicos, es un factor clave en la eutrofizacin de las aguas
superficiales y es un nutriente esencial que estimula el crecimiento de
microorganismos y macroorganismos fotosintticos. La qumica del fsforo
es muy importante en diversos campos, por ejemplo, en el rea mdica y clnica,
la agricultura, la metalurgia y en las ciencias ambientales. En los ltimos aos,
22
NAGENDRAPPA, G; MAHADEVAIAH, M; YOGENDRA KUMAR, M; ABDUL GALIL, M;

SURESHA, M. A Simple spectrophotometric determination of phosphate in sugarcane juices, water and
detergent samples. No. 4 (E-Journal of Chemistry, 2007) Pg. 467 473.
17
grandes cantidades de fosfato han sido utilizados en la elaboracin de bebidas,

detergentes, fertilizantes, pesticidas y tambin en la industria azucarera, por tanto
este analto se puede encontrar en aguas residuales domsticas e industriales as
como en lodos biolgicos en forma orgnica como inorgnica.
18
5. METODOLOGIA
La metodologa que se emple para dar cumplimiento a cada uno de los objetivos
propuestos en el presente documento se describe como una serie de actividades.
5.1 Revisin de metodologas analticas:
5.1.1 Documentacin del ensayo de fsforo tomado del Standard methods for the
examination of water and wastewater. 22nd. 2012. Mtodo 4500 P E.
5.1.2 Procedimiento Estndar de Operacin SOP 3-13. Fsforo total como
ortofosfatos. Mtodo del cido ascrbico. 4500 PE. Laboratorio de Qumica
Ambiental.
5.2 Elaboracin de matriz AMEF (Anlisis de modo y efecto de falla), teniendo en
cuenta que la herramienta fue adaptada por parte del LQA.
5.3 Definicin de los parmetros caractersticos del mtodo:
5.3.1 Evaluacin de la competencia para desarrollar el anlisis y Elaboracin del
plan de validacin de acuerdo con el formato de trabajo que fue aportado por el
LQA.
5.4 Ejecucin de actividades analticas:
5.4.1 Induccin a la actividad analtica, reconocimiento de equipos y puesta a
punto del mtodo.
5.4.2 Recoleccin, preparacin de muestras y ejecucin del plan de validacin.
5.5 Procesamiento de datos:
5.5.1 Desarrollo de clculos y estimaciones estadsticas a los datos recolectados
usando el software ProControl.
5.6 Anlisis de los resultados:
5.6.1 Anlisis de las estimaciones estadsticas acorde al plan de validacin.
5.7 Estimacin de la incertidumbre de medicin, teniendo en cuenta que se hizo la
revisin de los clculos ya existentes en el laboratorio.
5.8 Determinar la trazabilidad del mtodo de ensayo.
5.9 Generacin de la documentacin soporte con los resultados.
5.10 Elaboracin de un borrador para divulgacin con los resultados del trabajo.
19
6. RESULTADOS
De acuerdo con los objetivos trazados para la elaboracin del presente trabajo, se
realiz un cuadro resumen donde se seala el producto obtenido de las
actividades realizadas, materializndose en los diferentes documentos que se
describen en la tabla 4, que se incluirn como anexos.
Objetivo Especfico
Resultado
Validar el ensayo de Fsforo total a

travs de la estimacin de los
parmetros caractersticos del ensayo
como son: Lmite de deteccin, lmite
de cuantificacin, exactitud y precisin
bajo condiciones de repetibilidad y
reproducibilidad, rango lineal y de
trabajo, sensibilidad y porcentaje de
recuperacin.
Ver Anexo A: Puntos crticos del

ensayo Fsforo total
Validar el ensayo de Fsforo Disponible

Total a travs de la estimacin de los
parmetros caractersticos del ensayo
como son: Lmite de deteccin, lmite
de cuantificacin, exactitud y precisin
bajo condiciones de repetibilidad y
reproducibilidad, rango lineal y de
trabajo, sensibilidad y porcentaje de
recuperacin.
Ver Anexo G: Puntos crticos del

ensayo Fsforo Disponible Total
Ver Anexo B: AMEF Fsforo total

Ver Anexo C: Plan de validacin
Fsforo total
Ver Anexo D: Resultados validacin
Fsforo total
Ver Anexo H: AMEF Fsforo Disponible

Total
Ver Anexo I: Plan de validacin Fsforo
Disponible Total
Ver Anexo J: Resultados validacin
Ver Anexo E: Estimacin de la
incertidumbre del ensayo Fsforo total
Estimar la incertidumbre de medicin

Ver Anexo K: Estimacin de la
asociada al ensayo validado
incertidumbre del ensayo Fsforo
Disponible Total
Determinar la trazabilidad
ensayo validado
para
el
Ver Anexo F: Trazabilidad del ensayo

Fsforo total
Ver Anexo L: Trazabilidad del ensayo
20
Generar la documentacin necesaria

para dar cumplimiento a los requisitos
establecidos en la NTC-ISO/IEC
17025:2005 en el numeral 5.4.2
La documentacin que soporta que el

LQA aplica de forma adecuada el
mtodo de ensayo para el anlisis de
Fsforo Total y Fsforo Disponible Total
se evidencia en los anexos del A al L.
Presentar los resultados del trabajo de De forma preliminar, se entreg al LQA

grado como base para realizar una un documento que se encuentra en
construccin con los resultados del
divulgacin cientfica de los mismos.
ensayo de fsforo total.
Tabla 4.
Resultados validacin del ensayo Fsforo total y Fsforo
Disponible Total
21
CONCLUSIONES
Se valid el ensayo de Fsforo Total a travs de los parmetros caractersticos
como Lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, exactitud y precisin bajo
condiciones de repetibilidad y reproducibilidad, rango lineal y de trabajo,
sensibilidad y porcentaje de recuperacin lo que permiti concluir que el mtodo
es apto para el alcance y uso propuesto en el numeral 1 del anexo C.
Se valid el ensayo de Fsforo Disponible Total a travs de los parmetros
caractersticos como Lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, exactitud y
precisin bajo condiciones de repetibilidad y reproducibilidad, rango lineal y de
trabajo, sensibilidad y porcentaje de recuperacin lo que permiti concluir que el
mtodo es apto para el alcance y uso propuesto en el numeral 1 del anexo I.
Se estim la incertidumbre de medicin asociada a los ensayos de Fsforo Total y
Fsforo Disponible Total lo que genera una mayor confianza en la validez del
resultado permitiendo establecer las fuentes que en mayor proporcin contribuyen
a la misma para tomar acciones correctivas, eliminar errores sistemticos y
obtener resultados analticos ms confiables.
Para los ensayos de Fsforo Total y Fsforo Disponible Total se estableci que
cada una de las mediciones involucradas en los ensayos son trazables a las
unidades del Sistema Internacional.
Con la documentacin generada (anexos del A al L) a travs del desarrollo del
presente trabajo se demostr que el mtodo de ensayo para determinar fsforo
utilizado por el Laboratorio de Qumica Ambiental es apropiado para el uso
especfico previsto.
Se elabor un documento con la estructura de un artculo con base en los
resultados del ensayo de Fsforo Total que fue entregado al Laboratorio de
Qumica Ambiental con el objetivo de presentarlo posteriormente ante una revista
de carcter cientfico cuyos temas de inters sean del mbito ambiental.
22
RECOMENDACIONES
Como oportunidad de mejora se sugiere analizar un duplicado de una muestra
adicionada simultneamente con los ensayos para evaluar la precisin y el
porcentaje de recuperacin del analto de inters, cumpliendo as en su totalidad
con los nuevos controles de calidad estipulados en el Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. 22nd Ed.
Se sugiere que para el ensayo de Fsforo Total se digieran los patrones de la
curva de calibracin al igual que el patrn de control y se comparen los resultados
obtenidos sin digestin utilizando un patrn o muestra de concentracin conocida
para observar si existen prdidas del analto que se puedan disminuir.
23
REFERENCIAS
[1] International Organization for Standardization. Requisitos Generales para la
Competencia de los Laboratorios de Ensayo y Calibracin. NTC-ISO/IEC
17025:2005
[2] Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial. Instituto de Hidrologa,
Meteorologa y Estudios Ambientales, IDEAM. Resolucin No. 0425 del 28 de
Febrero de 2011.
[3] American Public Health Association, American Water Works Association &
Water Environment Federation. Standard Methods for the Examination of Water
and Wastewater. 22nd. Washington, D.C., 2012.
[4] MetAs & Metrlogos Asociados. El Proceso de Medicin. No. 09 (La Gua
MetAs, 2007). Pg. 1 3.
[5] MetAs & Metrlogos Asociados. Herramientas de la metrologa en sistemas de
calidad. No. 09 (La Gua MetAs, 2004). Pg. 1 5.
[6] MetAs & Metrlogos Asociados. Cartas de control para instrumentos de
medicin. No. 06 (La Gua MetAs, 2004). Pg. 1 5.
[7] MetAs & Metrlogos Asociados. Capacidad de medicin. No. 03 (La Gua
MetAs, 2006). Pg. 2 8.
[8] MetAs & Metrlogos Asociados. Expresin e interpretacin de resultados
experimentales en metrologa. No. 05 (La Gua MetAs, 2007). Pg. 1 12.
[9] Metrologa Abreviada. 3 Ed. EURAMET, 2008. Pg 13 18.
[10] La importancia de la validacin. En: Tcnicas de Laboratorio. No 269 (_____,
2002); p.110 111.
[11] GREEN, JM. A Practical Guide to Analytical Method Validation. No. 68
(Analytical Chemistry, 1996). Pg. 305A - 309A.
[12] RIUS, F. Xavier. MAROTO, Alicia. BOQU, Ricard. RIU, Jordi. Exactitud y
Trazabilidad. En: Tcnicas de Laboratorio. No 254 (_____, 2000); p. 591 594.
[13] RIUS, F. Xavier. MAROTO, Alicia. BOQU, Ricard. RIU, Jordi. Incertidumbre
y Precisin. En: Tcnicas de Laboratorio. No 266 (_____, 2001); p.834 837.
24
[14] DE BIVRE, P. Measurement results without statements of reliability

(uncertainty) should not be taken seriously. No 6 (Accreditation and Quality
Assurance, 1997); p. 269
[15] RIUS, F. Xavier. MAROTO, Alicia. BOQU, Ricard. RIU, Jordi. La validacin
de Mtodos Analticos. En: Tcnicas de Laboratorio. No 252 (_____, 2000); Pg.
382 385.
[16] The fitness for purpose of analytical methods: A laboratory guide to method
validation and related topics. Eurcachem. 1998
[17] Quantifying uncertainty in analytical measurement. Eurachem / CITAC guide.
2nd Ed. 2000
[18] SCHIMID, Wolfgang. LAZOS, Ruben. Gua para estimar la incertidumbre de la
medicin. Centro Nacional de Metrologa, CENAM. Mxico, 2000.
[19] Traceability in chemical measurements: A guide to achieving comparable
results in chemical measurements. Eurachem / CITAC guide. 2003. Eurachem /
CITAC guide. 2003
[20] _____. FMEA. Disponible
Consultado: Agosto de 2012.
en
lnea:
http://www.quality-one.com/fmea.
[21] NAGENDRAPPA, G; MAHADEVAIAH, M; YOGENDRA KUMAR, M; ABDUL

GALIL, M;
SURESHA, M. A Simple spectrophotometric determination of
phosphate in sugarcane juices, water and detergent samples. No. 4 (E-Journal of
Chemistry, 2007) Pg. 467 473.
[22] McKELVIE, I; PEAT, D; WORSFOLD, P. Techniques for the quantification and
speciation of phosphorus in natural waters. No.10 (Analytical Proceedings
Including Analytical Communications, 1995) Pg. 437- 445.
[23] ROBARDS, K; MCKELVIE, I; BENSON, R; WORSFOLD, P; BLUNDELL, N;
CASEY, H Determination of carbon, phosphorus, nitrogen and silicon species in
waters. No. 3 (Analytica Chimica Acta, 1994) Pg 147-190.
[24] WORSFOLD, P; GIMBERT, L; MANKASINGH, U; OMAKA, O; HANRAHAN,
G; GARDOLINSKI, P; HAYGARTH, P; M; TURNER, B; KEITH-ROACH, M;
MCKELVIE, I. Sampling, sample treatment and quality assurance issues for the
determination of phosphorus species in natural waters and soils. No. 2 (Talanta,
2005) Pg. 273 293
[25] HARVEY, D. Modern Analytical Chemistry. McGraw-Hill: USA, 2000. Pg. 35 47
25
ANEXOS
Anexo A. Puntos crticos del ensayo Fsforo total
Medir Volumen de Muestra*
Adicin de cidos y
perlas de ebullicin
Digestin hasta observar

vapores cafs*
Adicin de agua destilada y

gotas de fenolftalena
Adicin de NaOH hasta

viraje de color
Transferir, filtrando a
baln de 100 mL
Aclimatar y aforar*
Medir 50 mL solucin* +
gotas de H2SO4 5N +
8 mL de reactivo coloreador*
Lectura en fotmetro a los 15 minutos
Resultado (mg P-PO4/L)
Figura 2. Puntos crticos del ensayo Fsforo Total.

En la figura 2, se esquematiza el anlisis de fsforo total con los puntos crticos (*).
Nota: Para la adecuada preparacin del reactivo coloreador remitirse al Standard methods for the examination
nd
of water and wastewater. 22 . 2012. Mtodo 4500 P E.
26
Adicionar 5 mL HNO3 conc, 1mL

2 H2SO4 conc y Perlas de ebullicin
Medir ms o menos del

volumen indicado
No agregar alguno de
los dos cidos perlas
de ebullicin
Manejo incorrecto de la pipeta

Falta de atencin en el orden
de adicin de los cidos o de
las perlas
Ubicar baln en hornilla, girar perrilla

3 a posicin 3 y encender digestor
Ubicar perrilla en
posicin incorrecta. No Visualizacin equivocada de la
encender digestor
posicin indicada
4 Digerir hasta observar vapores cafs
Detener calentamiento
en un lapso de tiempo
superior a la formacin Dejar un tiempo excesivo la
de vapores cafs
digestin
Etapas del proceso
Medir 100 mL Mx y transferirlos a

1 baln Kjeldahl
Efecto de falla potencial
3 Datos inexactos
Determinacin de slo una
parte de fsforo como
3 ortofosfatos en la muestra
Controles actuales
Entrenamiento para
realizar el pipeteado
8 correctamente
2 48
8 Leer SOP del ensayo
2 48
Cerciorrse del buen

estado y funcionamiento
8 del digestor
2 32

Emplear un
temporizador para la
revisin del tiempo de
8 digestin
Apagar digestior
luego de digerir
2 48 todas las muestras
Premura para realizar etapa de

neutralizacin
Procesamiento inadecuado
2 de la muestra
Adicionar menos del

Agregar 20 mL Agua destilada y unas volumen indicado. No
agregar fenolftalena
6 gotas de fenolftaleina.
Determinacin inadecuada de
la cantidad de volumen. Falta
de atencin
2 de la muestra
Revisin de la
3 temperatura del baln
Utilizar una probeta
adecuada para medir el
volumen. Revisar el
3 estado del indicador
Neutralizar con NaOH 33% hasta

7 viraje a color rosa plido
Agregar ms NaOH del Dispensar ms gotas de las

requerido
necesarias
4 de la muestra
Filtrar solucin neutralizada a baln

8 de 100 mL
Mala agitacin antes

de filtrar contenido
2 Prdida de muestra
Agitar solucin
3 adecuadamente
Observar que la solucin
posea una ligera
3 coloracin rosa
9 Agregar agua de lavados
Mala agitacin antes

de filtrar contenido
2 Prdida de muestra
Utilizar siempre agua

3 destilada
Agitacin inapropiada
Acciones
recomendadas

No dejar enfrar el
5 Dejar enfriar a temperatura ambiente tiempo necesario
Agitacin inapropiada
NPR
Causas de falla potencial
Deteccin
Modo de falla potencial
Severidad
Descripcin del Proceso
Ocurrencia
Anexo B. AMEF Fsforo total
2 12
2 12
1 12
2 12
2 12
No dejar aclimatar el
Tiempo insuficiente para
Aclimatar a 20 C en bao termostado tiempo requerido.
aclimatar. Visualizacin
Aforar incorrectamente inadecuada del aforo
10 y luego aforar
Disminucin de la
3 concentracin de fsforo
Medir 50 mL de Mx adicionndola en Medir ms o menos del Determinacin inadecuada de

volumen indicado
la cantidad de volumen
11 beaker de 100 mL
Reporte errneo de fsforo.

3 Sesgo negativo
Verificar temperatura del

8 bao
Revisin del
funcionamiento de las
8 pipetas
Agregar H2SO4 5N para eliminar

12 coloracin
3 de la muestra
Adicionar el cido gota a

3 gota
2 18

3 Sesgo negativo
Preparar siempre el
reactivo coloreador
antes de realizar el
8 ensayo
Preparar slo la
cantidad necesaria
de acuerdo con el
1 24 nmero de muestras

3 Sesgo negativo
Verificar encendido de
todo el equipo. Efectuar
las mediciones antes de
8 30 minutos
Verificar que se
haya cargado el
2 48 mtodo de fosfatos
Adicionar ms
Dispensar ms gotas de las
volumen del necesario necesarias
Adicionar 8 mL Reactivo Coloreador y Adicionar ms o menos

del volumen indicado
13 agitar
No permitir el
calentamiento previo
Calentar lmparas mnimo 10
de las lmparas y
minutos, hacer lecturas despus de
realizar lecturas fuera
14 15 minutos pero antes de 30 minutos del tiempo indicado
Determinacin inadecuada de
la cantidad de volumen
No realizar el procedimiento en
los tiempos indicados
Tabla 5. AMEF Fsforo total
27
Observar que la
temperatura del
2 48 bao est a 20 C
2 48
rea/proceso/p
ersona
responsable
Analista LQA
Anexo C. Plan de validacin Fsforo total
1. Alcance
El mtodo es apropiado para determinar Fsforo Total (como ortofosfatos) en
aguas naturales (superficiales y subterrneas) y residuales (domsticas e
industriales), en el rango comprendido entre 0.03 mg P-PO4/L y 0.60 mg P-PO4/L.
2. Principio
Este mtodo es aplicable para la determinacin de Fsforo Total por conversin
de las formas de fsforo a ortofosfatos por medio de una digestin cida, seguida
de una determinacin colorimtrica, en la cual el molibdato de amonio y el tartrato
antimonoltico de potasio reaccionan en medio cido con ortofosfatos para formar
un heteropolicido (cido Fosfomolibdco) de color amarillo plido, que es
reducido por el cido ascrbico a molibdeno de color azul, cuya intensidad es
proporcional a la concentracin del analito23 y puede ser determinado por
fotometra a 880 nm, donde las reacciones que se llevan a cabo se representan
por medio de las ecuaciones 1 y 2:24,25,26
PO43 + 12MoO42 + 27H+ H3PO4(MoO3)12 + 12 H2O
(3)
H3PO4(MoO3)12 + C6H8O6 Azul de fosfomolibdeno [Mo(VI) Mo(V)]
(4)
3. Criterios de Aceptacin
Exactitud expresada como porcentaje de error (% E) menor igual al 10 % para
patrones.
Precisin expresada como porcentaje de coeficiente de variacin (% CV) menor
igual al 10 % para los patrones y muestras.
23
American Public Health Association, American Water Works Association & Water Environment
Federation. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 22nd. Washington, D.C., 2012.
24
McKELVIE, I; PEAT, D; WORSFOLD, P. Techniques for the quantification and speciation of phosphorus
in natural waters. No.10 (Analytical Proceedings Including Analytical Communications, 1995) Pg. 437- 445.
25
ROBARDS, K; MCKELVIE, I; BENSON, R; WORSFOLD, P; BLUNDELL, N; CASEY, H
Determination of carbon, phosphorus, nitrogen and silicon species in waters. No. 3 (Analytica Chimica Acta,
1994) Pg 147-190.
26
WORSFOLD, P; GIMBERT, L; MANKASINGH, U; OMAKA, O; HANRAHAN, G; GARDOLINSKI, P;
HAYGARTH, P; M; TURNER, B; KEITH-ROACH, M; MCKELVIE, I. Sampling, sample treatment and
quality assurance issues for the determination of phosphorus species in natural waters and soils. No. 2
(Talanta, 2005) Pg. 273 - 293
28
4. Parmetros de Validacin
Se considera que aplican para la validacin los siguientes parmetros: Lmite de
cuantificacin y deteccin, rango lineal y de trabajo, exactitud y precisin,
porcentaje de recuperacin y sensibilidad.
4.1 Lmites de deteccin LD y de cuantificacin LC
Previamente a la validacin del mtodo se realizaron varios ensayos analizando
patrones de diferente concentracin, con el fin de determinar cul de ellos cumple
con los criterios de aceptacin establecidos en cuanto a exactitud expresada como
% E y precisin como % CV. Posterior a la seleccin del estndar adecuado y con
el objetivo de ratificar el lmite de cuantificacin experimental, se evaluarn
rplicas de un patrn de concentracin 0.03 mg P-PO4/L.
4.2 Rango Lineal
Para la determinacin del rango lineal se analizarn una serie de patrones que
comprendan aproximadamente el rango sugerido por el mtodo (Segn Standard
Methods Ed 22. de 0.15 a 1.3 mg P-PO4/L).
4.3 Rango de trabajo
Con base en el resultado del rango lineal se definir el rango de concentraciones
en los cuales se obtengan resultados coherentes con los criterios de calidad
especificados por el laboratorio. El patrn ms bajo ser la concentracin definida
como lmite de cuantificacin.
4.4 Exactitud
Con el fin de evaluar la exactitud del mtodo se analizarn diariamente 2 rplicas,
durante 7 das, de 3 estndares de diferente concentracin. Los estndares se
preparan a partir de diluciones de la solucin madre de 50 mg P-PO4/L:
-
Solucin Madre: Concentracin terica de 50 mg P-PO4/L, preparada por

pesada directa de 0.2195 g de Fosfato monobsico de Potasio MR, secado
previamente a 105 C por 1 hora y disuelto en 1 L de agua destilada
aforando a 20 C.
Patrn Intermedio: Concentracin terica de 2.5 mg P-PO4/L, preparado

por dilucin, midiendo 10 mL de la solucin madre y diluyendo a 200 mL
con agua destilada aforando a 20 C.
29
Estndar Bajo, Eb: Concentracin terica de 0.03 mg P-PO4/L, preparado

por dilucin, midiendo 3 mL del Patrn intermedio y diluyendo a 250 mL con
agua destilada aforando a 20 C.
Estndar Medio, Em: Concentracin terica de 0.30 mg P-PO4/L,

preparado por dilucin, midiendo 30 mL del Patrn intermedio y diluyendo a
250 mL con agua destilada aforando a 20 C.
Estndar Alto, Ea: Concentracin terica de 0.60 mg P-PO4/L, preparado

por dilucin, midiendo 60 mL del Patrn intermedio y diluyendo a 250 mL
4.5 Precisin
Para evaluar la precisin del mtodo se analizarn diariamente rplicas de
estndares y muestras dentro del rango de aplicacin del mtodo. La precisin se
evaluar en trminos de Repetibilidad y de Repetibilidad intermedia de los
estndares.
As mismo se incluirn 2 muestras naturales cuyos valores de fsforo (como
ortofosfato) se encuentran dentro del rango de aplicacin del mtodo. El objeto de
incluir muestras en este parmetro es conocer la precisin en trminos de %CV
cuando se analizan duplicados de muestras; a la vez que se analiza
especficamente para esta determinacin el efecto de las diluciones sobre el
resultado.
M1
Muestra PTAR UTP
ARD Efluente. Con una concentracin de fsforo cercana a 0.30 mg P-PO4/L.

M2
Muestra PTAR UTP
ARD Afluente. Con una concentracin de fsforo cercana a 0.32 mg P-PO4/L

con un factor de dilucin, FD = 20 veces.
Estndares y muestras
Eb
Em
Ea
M1
M2
Concentracin mg P-PO4/L
0.03
0.30
0.60
Aprox. 0.30
Aprox.0.32
30
4.5.1 Precisin en trminos de Repetibilidad

El analista responsable aplicar el mtodo a todos los estndares y muestras
propuestas durante 7 das en la validacin.
4.5.2 Precisin en trminos Repetibilidad intermedia
El analista sustituto aplicar el mtodo a todos los estndares y muestras
propuestos.
4.5.3 Reproducibilidad
Se evaluar la Desviacin estndar media de las series de mediciones. En esta
prueba es posible evaluar la dispersin de cada una de las series de datos (s)
frente al nmero total de datos (N) y al nmero total de series de mediciones (k).
1 k
ni 1 si 2
sI
N k i 1
Donde:
n = Nmero de mediciones por serie
N = Nmero total de mediciones
k= Nmero de series de mediciones.
Se espera que la desviacin estndar media de las series de mediciones cumpla
con los criterios de aceptacin establecidos.
4.6 Recuperacin
Con el fin de evaluar el porcentaje de recuperacin se analizar 1 muestra de
agua (M1) que contiene una concentracin aproximada de 0.30 mg P-PO4/L a la
cual se le efectuar una adicin baja (Ab) de aproximadamente 0.06 mg P-PO4/L
(20%) y una adicin alta (Aa) de aproximadamente 0.16 mg P-PO4/L (53%) de la
concentracin de la muestra.
La muestra y las muestras adicionadas se analizarn por el analista responsable
durante 7 das en la validacin. El analista sustituto efectuar el anlisis durante 2
das al final de la validacin. A partir de los valores promedio obtenidos, cada da,
31
para la muestra y de los valores promedio obtenidos, cada da, para las adiciones
se calcular el porcentaje de recuperacin. Una vez terminada la validacin se
espera obtener un porcentaje de recuperacin de 100% 20%.
Las adiciones sugeridas se harn diariamente, a partir de una solucin patrn de
5.0 mg P-PO4/L y una solucin patrn de 10 mg P-PO4/L. La preparacin de las
muestras adicionadas se describe a continuacin:
-
Patrn de 5.0 mg P-PO4/L: Preparado por dilucin, midiendo 10 mL de la

solucin madre y diluyendo a 100 mL con agua destilada aforando a 20 C.

M1 + Ab: Medir 250 mL de la muestra M1, adicionarle 3 mL de solucin

patrn de 5.0 mg P-PO4/L, homogenizando adecuadamente.
M1 + Aa: Medir 250 mL de la muestra M1, adicionarle 4 mL de solucin

4.7 Sensibilidad
En el LQA se ha establecido que la determinacin de la sensibilidad aplica a
procedimientos de ensayo en los que se requiera la construccin de curvas de
calibracin. La sensibilidad estar dada por el valor promedio de la pendiente de
las curvas de calibracin obtenidas durante la validacin.
5. Materiales
5.1 Equipos
Estufa de secado marca Binder
Balanza analtica marca Sartorious BP 221 S
Cabina de extraccin de gases y humos marca C4 modelo C 120X
Agitador magntico marca Heidolph MR 3001 con barras magnticas
Termstato marca Julabo modelo F34
Digestor de Fsforo marca Gerhardt tipo KI 16
Fotmetro marca Hewlett Packard modelo 8453
32
5.2 Reactivos
Agua destilada
Fosfato monobsico de Potasio, MR
cido Ntrico concentrado
cido Sulfrico concentrado
Hidrxido de Sodio p.a
cido Sulfrico 5 N
Tartrato antimonoltico de potasio p.a
Molibdato de amonio p.a
cido Ascrbico p.a
Fenolftalena
5.3 Material de Vidriera
Balones de digestin Kjeldahl
Balones aforados de 100 mL, 200 mL, 250 mL, 1000 mL. Clase A
Pipetas aforadas de 3 mL, 4 mL, 8 mL, 10 mL, 15 mL, 25 mL, 50 mL, 100 mL.
Pipetas graduadas de 10 mL.
Beakers de 100 mL, 250 mL, 1000 mL.
Erlenmeyer de 100 mL, 250 mL.
Probetas de 50 mL y 100 mL
Embudos de 5 cm de dimetro
Esptula
Frasco lavador
Varilla de vidrio
Papel filtro cualitativo Munktell No. 125
33
Anexo D. Resultados validacin Fsforo total

1. Recoleccin de datos
NA
NA
NA
Analito
Estndar bajo (Eb)
Estndar medio (Em)
Estndar alto (Ea)
Muestra baja (M1)
Muestra alta (M2)
Muestra baja + Adicin

Baja (M1Ab)
Unidades
Analista
07/05/2012
Da 1
Oscar Cullar
08/05/2012
Da 2
Oscar Cullar
10/05/2012
Da 3
Oscar Cullar
30/07/2012
R/ Da 4
Oscar Cullar
14/05/2012
Da 5
Oscar Cullar
01/08/2012
R/ Da 6
(maana)
Oscar Cullar
16/05/2012
Da 7
Oscar Cullar
Mauricio
Camacho
Mauricio
Camacho
22/06/2012
Da 6 (Sustituo 1)
25/06/2012
Da 7 (Sustituo 1)
22/05/2012
Da 6 (Sustituo)
Mnica Rodas
30/07/2012
Da 7 (Sustituto)
Mnica Rodas
n
ProControl
ProControl
Mnimo
Mximo
Total datos
Prueba F
Prueba t
Media
Desviacin
Coeficiente variacin
Error
LDM
LCM
Rango
s
%CV
%Error
3s
10s
mg /L
0,030
0,031
0,030
0,030
0,027
0,027
0,033
0,032
0,027
0,026
0,032
0,031
0,030
0,030
0,030
0,030
mg /L
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,029
0,031
0,028
0,035
0,031
21
0,03
0,03
0,03
0,04
0,03
0,00
0,03
0,03
0,03
0,00
7,22
-0,06
0,01
0,02
Exactitud,
precisin
0,285
0,286
0,285
0,285
0,261
0,261
0,286
0,286
0,286
0,288
0,305
0,305
0,273
0,273
0,293
0,301
0,265
0,283
0,303
0,303
0,290
0,280
22
mg /L
0,29
0,29
0,26
0,29
0,29
0,31
0,27
0,30
0,27
0,30
0,29
0,27
0,31
0,29
0,01
0,27
0,31
0,29
0,01
4,63
-4,80
Precisin,
% Recuperacin
0,56
0,56
0,58
0,58
0,58
0,56
0,57
0,55
0,58
0,58
0,55
0,55
0,57
0,57
0,57
0,58
0,55
0,55
0,58
0,60
0,57
0,57
22
Precisin,
% Recuperacin
mg/L
0,56
0,58
0,57
0,56
0,58
0,55
0,57
0,58
0,55
0,59
0,28
0,28
0,29
0,29
0,29
0,29
0,30
0,30
0,30
0,30
0,28
0,28
0,29
0,29
0,30
0,31
0,31
0,35
0,34
Precisin, %
Recuperacin
mg/L
0,28
0,29
0,29
0,30
0,30
0,28
0,29
0,30
0,31
6,36
6,37
6,36
6,37
6,31
6,32
6,22
6,23
6,28
6,30
6,34
6,35
6,25
6,29
6,28
6,42
6,12
6,14
Reactividad
cruzada
0,33
89,9
0,36
124
0,34
90,1
0,35
90,3
0,34
73,5
0,33
89,9
0,33
73,3
0,36
98,8
0,36
82,1
0,40
91,2
mg/L
6,37
6,37
6,32
6,23
6,29
6,35
6,27
6,35
6,13
0,35
0,33
0,33
0,36
0,36
0,34
0,34
0,35
0,35
0,34
0,34
0,33
0,33
0,33
0,33
0,35
0,36
0,35
0,36
0,39
0,40
%R (M1Ab)
NA
NA

Alta (M1Aa)
100
%R (M1Aa)
Precisin, %
Recuperacin
Promedio
Da
LDM,LCM,
Exactitud,
Precisin
100
Promedio
Uso
Exactitud,
precisin.
Creacin de
Cartas de
control
Promedio
0,60
Promedio
0,30
Promedio
0,03
Promedio
Fecha
Valor nominal
(mg/L)
Promedio
VARIABLE
En la tabla 6, se encuentra el consolidado de datos producto de la validacin y en la tabla 7 el consolidado de

la muestra adicionada.
%R
mg/L
mg/L
%R
0,42
91,7
0,45
105
0,43
91,8
0,46
101
0,43
85,6
0,43
94,9
0,42
85,5
0,42
79,2
0,48
90,6
0,42
0,48
0,44
0,02
4,89
NA
79
105
92
7,93
8,65
-8,33
0,42
0,42
0,45
0,45
0,43
0,43
0,45
0,46
0,43
0,43
0,43
0,42
0,42
0,42
0,45
0,39
0,48
0,49
Reactividad
cruzada
0,57
19
0,55
0,60
0,57
0,01
0,55
0,59
0,57
0,01
2,37
-5,22
0,28
0,35
0,30
0,02
6,34
NA
Tabla 6. Consolidado de datos validacin Fsforo Total
34
18
Ver registros Procontrol
0,28
6,12
0,35
6,42
0,30
6,30
0,02
0,08
6,32
1,27
NA
NA
20
6,13
6,37
6,30
0,08
1,24
NA
0,33
0,40
0,35
0,02
5,61
NA
18
0,33
0,40
0,35
0,02
5,70
NA
73,3
124
90
14,30
15,84
-9,70
0,39
0,49
0,44
0,02
5,34
NA
Da 1
Oscar Cullar
08/05/2012
Da 2
Oscar Cullar
10/05/2012
Da 3
Oscar Cullar
30/07/2012
R/ Da 4
Oscar Cullar
14/05/2012
Da 5
Oscar Cullar
01/08/2012
R/ Da 6 (maana) Oscar Cullar
16/05/2012
Da 7
Oscar Cullar
22/06/2012
Da 6 (Sustituto 1)
25/06/2012
Da 7 (Sustituto 1)
28/06/2012
Da 6 (Sustituto)
Mnica Rodas
26/06/2012
Da 7 (Sustituto)
Mnica Rodas
Total datos
Prueba F
Prueba t
n
ProControl
ProControl
Mnimo
Mximo
X
Rango
Media
Desviacin
Error
LDM
LCM
Mauricio
Camacho
Mauricio
Camacho
s
%CV
%Error
3s
10s
mg/L
0,28
0,28
0,29
0,29
0,29
0,29
0,30
0,30
0,30
0,30
0,28
0,28
0,29
0,29
0,30
0,31
0,31
0,35
0,34
mg/L
0,28
0,29
0,29
0,30
0,30
0,28
0,29
0,30
0,31
0,35
19
0,28
0,35
0,30
0,02
6,34
NA
0,33
0,33
0,36
0,36
0,34
0,34
0,35
0,35
0,34
0,34
0,33
0,33
0,33
0,33
0,35
0,36
0,35
0,35
0,39
0,40
0,33
0,36
0,34
0,35
0,34
0,33
0,33
0,36
0,35
0,40
0,33
0,40
0,35
0,02
5,56
NA
Reactividad
cruzada
Muestra baja + Adicin Alta
%R
20
0,28
0,35
0,30
0,02
6,32
NA
%R (M1Ab)
0,33
0,40
0,35
0,02
5,67
NA
90
90
124
124
90
90
90
90
73
73
90
90
73
73
107
74
74
74
108
89,9
124
90,1
90,3
73,5
89,9
73,3
107
Precisin, %
Recuperacin
mg/L
0,42
0,42
0,45
0,45
0,43
0,43
0,45
0,46
0,43
0,43
0,43
0,42
0,42
0,42
0,45
0,39
100,0
NA
%R (M1Aa)
Reactividad
cruzada
Promedio
07/05/2012
Precisin, %
Recuperacin
NA
Promedio
Da
Unidades
Analista
Precisin,
% Recuperacin
100,0
Promedio
Uso
Promedio
Fecha
Promedio
VARIABLE
Valor nominal
NA
NA
(mg/L)
Analito
Muestra baja (M1) Muestra baja + Adicin Baja
mg/L
%R
%R
0,42
0,45
0,43
0,46
0,43
0,43
0,42
0,42
92
92
105
105
92
92
98
105
86
86
98
92
85
85
286
60
91,7
105
91,8
101
85,6
94,9
85,5
173
73,7
91,2
19
Ver registros ProControl
73,3 73,3
124
124
89
90
16,31 15,86
18,24 17,56
NA -9,70
0,48
0,49
0,49
18
0,39
0,49
0,44
0,02
5,48
NA
86
99
92,4
18
0,42
0,49
0,44
0,02
5,05
NA
60,2
286
102
46,93
45,88
NA
85
173
102
27,24
26,64
2,29
Tabla 7. Consolidado de datos muestra adicionada validacin Fsforo Total

35
1.1 Lmite de deteccin y Lmite de cuantificacin

En la tabla 8, se muestran los ensayos realizados para determinar el Lmite de
deteccin LD y el Lmite de cuantificacin LC. Los criterios de aceptacin para %E
y %CV son del 5%.
El Lmite de cuantificacin definido fue de 0,03 mg P-PO4/L; si bien el patrn de
0,02 mg P-PO4/L tambin cumple con los requisitos establecidos, se opt por el
estndar de mayor concentracin para trabajar con un mayor margen de
seguridad.
El lmite de deteccin definido fue de 0,01 mg P-PO4/L
Tabla 8. Ensayos Lmite de Cuantificacin Fsforo total

1.2 Rango Lineal
El rango lineal se encuentra entre 0,02 mg P-PO4/L y 1,2 mg P-PO4/L, como se
observa en la figura 3.
0,700
y = 0,622x
R = 0,999
Absorbancia, 880 nm
0,600
0,500
0,400
0,300
0,200
0,100
0,000
0
0,2
0,4
0,6
0,8
Concentracin P-PO4 (mg/L
Figura 3. Rango lineal ensayo Fsforo total

36
1,2

0,450
y = 0,636x
R = 1
0,400
Absorbancia, 880 nm
0,350
0,300
0,250
0,200
0,150
0,100
0,050
0,000
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
Figura 4. Rango de trabajo ensayo Fsforo total

Si bien el rango lineal se encuentra comprendido entre 0,02 mg P-PO4/L y
1,2 mg P-PO4/L, se opt por el rango de trabajo comprendido entre
0,03 mg P-PO4/L y 0,60 mg P-PO4/L (Ver figura 4), lo cual obliga a que se realicen
diluciones a muestras que estn por encima de esta concentracin, dado que
durante la estandarizacin se encontr que algunas muestras con concentraciones
superiores a 1,2 mg P-PO4/L entraban en el rango de trabajo (sesgo negativo),
causando errores en la cuantificacin, pues una vez se efectuaban diluciones se
encontraba que su concentracin era mayor.
1.4 Exactitud
En cuanto a la exactitud, evaluada a travs del %E de los estndares, se pudo
evidenciar que el mtodo cumple con el criterio de aceptacin establecido en el
literal tres del anexo C.
1.5 Precisin
La precisin de la medicin se evalu bajo condiciones de Repetibilidad y de
reproducibilidad. En cuanto a la precisin, evaluada a travs del %CV, se pudo
evidenciar que el mtodo cumple con los criterios de aceptacin establecidos en el
literal tres del anexo C para todos los estndares.
37
Las muestras naturales presentan %CV del 6,32% y 1,24%, sin embargo esta
variabilidad no afecta los resultados analticos de las muestras que se analizan
habitualmente en el laboratorio porque para el ensayo de Fsforo total se ha
establecido una prioridad 3 en la ejecucin de los ensayos con lo cual se garantiza
que el anlisis de Fsforo se efecte de acuerdo al tiempo mximo de
almacenamiento establecido en el DE 097.
De manera general, las pruebas F y T realizadas (Los datos pertenecen al LQA,
razn por la cual no se muestran), con el software estadstico Procontrol,
no muestran diferencias significativas entre las varianzas, motivo por el cual, se
considera que existe Repetibilidad y Repetibilidad intermedia entre el analista
responsable y el analista sustituto.
La desviacin estndar media del mtodo es 3,96 %CV, valor que se calcul a
travs del software estadstico Procontrol con un 95% de seguridad estadstica, el
cual proporciona evidencia de condiciones de reproducibilidad y que se encuentra
por debajo de los criterios de aceptacin establecidos en el LQA.
1.6 Recuperacin
De acuerdo con la tabla 7, los porcentajes de recuperacin obtenidos para la
muestra adicionada fueron del 90% para la adicin baja y 92% para la adicin alta.
Los porcentajes de error obtenidos tanto para la adicin baja (2,78%) como para la
adicin alta (8,70%) son menores al 20%, evidenciando que no existen efectos de
matriz.
1.7 Sensibilidad
El valor promedio de la pendiente de las curvas de calibracin obtenidas durante
la validacin fue de 0,636 cuyo valor se traduce en la sensibilidad del mtodo.
1.8 Lmites de control establecidos para las cartas de control
Despus de haber efectuado la validacin del mtodo se han definido los
siguientes lmites de control (LCS = 0,29 mg/L y LCI = 0,28 mg/L) para el
estndar medio, de acuerdo con la tabla 9. Sin embargo estos lmites son muy
estrechos y no reflejan en realidad la variacin del proceso de medicin, por eso
para elaborar la carta de control del mtodo se har con base los lmites de control
por especificacin (LCS = 0,33 mg/L y LCI = 0,27 mg/L).
38
Patrn 0,30 mg/L

Da
1
2
3
4
5
6
7
1 Sustituto
2 Sustituto
1 Sustituto 2
Rplicas
0,285
0,286
0,285
0,285
0,261
0,261
0,286
0,286
0,286
0,288
0,305
0,305
0,273
0,273
0,293
0,301
0,265
0,283
0,303
0,303
Promedios
Promedio
Tamao subgrupo
Factor A2
Promedio Rango
LCS
LCI
LCS (Por Especif. 10%)
LCI (Por Especif. 10%)
Promedio
(mg/L)
Mnimo
Mximo
Rango
0,286
0,285
0,286
0,001
0,285
0,285
0,285
0,000
0,261
0,261
0,261
0,000
0,286
0,286
0,286
0,000
0,287
0,286
0,288
0,002
0,305
0,305
0,305
0,000
0,273
0,273
0,273
0,000
0,297
0,293
0,301
0,008
0,274
0,265
0,283
0,018
0,303
0,303
0,303
0,000
0,286
0,284
0,29
2
1,88
0,003
0,29
0,28
0,33
0,27
0,287
mg/L
NA
NA
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
0,003
Tabla 9. Datos para la carta de control de Fsforo total

1.9 Segn resultados de la validacin el mtodo es apto para el alcance y el uso
propuesto en el numeral 1 del anexo C.
39
Anexo E. Estimacin de la incertidumbre del ensayo Fsforo total

1. Mesurando
Se mide la absorbancia a 880 nm del complejo de molibdeno proveniente de la
reduccin del cido fosfomolbdico causada por el cido ascrbico.
2. Modelo matemtico
y = mx
Donde, y: Absorbancia
x: Concentracin (mg P-PO4/L)
m: Sensibilidad del mtodo (L/mg P-PO4)
3. Principio de medicin
Las diferentes formas de fsforo presentes en la muestra se convierten a
ortofosfatos por medio de una digestin cida, luego mediante una determinacin
colorimtrica, en la cual el molibdato de amonio y el tartrato antimonoltico de
potasio reaccionan en medio cido con ortofosfatos para formar un heteropolicido
(cido Fosfomolibdco) de color amarillo plido, que es reducido por el cido
ascrbico a molibdeno de color azul, se mide la absorbancia a 880 nm, cuya
intensidad es proporcional a la concentracin del analito en la muestra.
4. Identificacin de las fuentes de incertidumbre
Las siguientes consideraciones se tienen en cuenta para estimar la incertidumbre
del ensayo Fsforo total:
- Temperatura de trabajo: 20 C, utilizando un termstato calibrado
- Agua destilada libre del analito de inters
- Reactivos grado analtico
- Fotmetro calibrado y correcto funcionamiento del equipo segn Procedimiento
Estndar de operacin e Instruccin de trabajo.
Las posibles fuentes de incertidumbre se resumen en la tabla 10 y posteriormente
se desarrollaran en la figura 5.
40
Factor crtico en la cuantificacin

Aplica
No aplica
Incertidumbre
Incertidumbre
X
Procedimiento
Preparacin de la solucin madre de

50 mg P-PO4/L
Preparacin de la solucin intermedia de
X
2,5 mg P-PO4/L
Preparacin de la solucin de trabajo de
X
0,3 mg P-PO4/L
Preparacin de muestra
X
Preparacin blanco de digestin
Digestin de muestra
Construccin curva de calibracin
X
Preparacin blanco de curva de calibracin
Lectura fotomtrica de patrones y muestras
X
Repetibilidad y reproducibilidad (R y r)
X
Tabla 10. Fuentes de incertidumbre ensayo de Fsforo total.
X
X
X
5. Diagrama Causa Efecto

Solucin Intermedia
de 2.5 mg P-PO4 /L
Solucin Madre
de 50 mg P-PO4 /L
Pureza
KH2PO 4
Solucin de Trabajo
de 0.3 mg P-PO4 /L
Calibracin matraz
Masa molar
KH2PO 4
Calibracin
balanza
m tara
Volumen
Calibracin matraz
Volumen
Volumen
Calibracin pipeta
Calibracin pipeta
Calibracin matraz
m KH2PO4
Calibracin
balanza
m KH2PO 4
[P-PO4 ] Muestra (mg P-PO4 /L)
Calibracin
matraz
Aforo muestra
digerida
Repetibilidad
de la seal
Ajuste
lineal
Calibracin
pipeta
validacin
Volumen
Preparacin
de muestra
Curva de
calibracin
Lectura
fotomtrica
Ry r
Figura 5. Diagrama Causa Efecto ensayo Fsforo total
41
6. Clculos
Fuente de Incertidumbre
Magnitud de entrada
Valor estimado
Xi
Xi
Incertidumbre original
Fuente de
informacin
Tipo de distribucin
Valor
Unidades
Incertidumbre
estndar
Incertidumbre
combinada (por
fuente) xi
Incertidumbre
estandar relativa
u (xi)
u c (xi)
u (xi)/xi
[u c (xi)/xi]2
PREPARACION DEL FOSFATO MONOBASICO DE POTASIO 50 mg/L
Peso del Reactivo
0,2195
Calibracin de la balanza
Fabricante
0,000100626
B, normal. K=2
0,00005031
tara
Fabricante
0,0001
B, normal. K=2
0,00005
N/A
B, rectangular.
0,00029
Pureza del Reactivo
0,9996
Peso formula del reactivo
Certificado
0,0005
136
K
H2
P
O4
Dilucin del reactivo
g/mol
Referencia
0,0001
g/mol
B, rectangular
5,7735E-05
Referencia
0,00007
g/mol
B, rectangular
8,0829E-05
Referencia
0,000002
g/mol
B, rectangular
1,1547E-06
Referencia
0,0003
g/mol
B, rectangular
6,9282E-04
1000
Incertidumbre calibracin del baln B20-1000
N/A
Calculada
0,13
mL
B, normal. K=2
7,09322E-05
0,000323154
1,04E-07
0,00029
0,000288791
8,34E-08
0,000699906
5,14637E-06
2,65E-11
0,065
0,000065
4,225E-09
0,065
PREPARACION DE PATRONES INTERMEDIOS Y DE TRABAJO
Preparacin patrn de 2,5 mg/L

Incertidumbre calibracin de pipeta PV37
mg/L
100
Calculada
0,02
Calculada
0,01

mL
B, normal. K=2
0,01
0,01
0,0001
1,00E-08
mL
B, normal, K=2
0,005
0,005
0,001
1,00E-06
mg/L
200
Calculada
0,13
mL
B, normal. K=2
0,065
0,065
0,000325
1,06E-07
24
Calculada
0,02
mL
B, normal. K=2
0,02
0,02
0,000833333
6,94E-07
0,025
0,00025
6,25E-08
0,01
0,000100
1,00E-08
3,52E-03
1,174E-02
1,38E-04
0,0011
0,003666667
1,34E-05
1,49E-03
4,96E-03
2,46E-05
PREPARACION DE MUESTRAS
Medicin del volumen de muestra
100
Incertidumbre calibracin pipeta PV40

Aforo de la muestra despues de digerirla
Calculada
B, normal. K=2
0,025
mL
B, normal. K=2
0,01
UA
Mediciones
Repetibilidad y reproducibilidad (R & r)
0,02
0,3
6,10E-03
0,3
UA
A, normal
3,52E-03
UA
Clculos
Desviacin en la medicin de la ordenada (Absorbancia)
mL
N/A
Calculada
Repetibilidad de la seal
Incertidumbre de la curva de calibracin ajustada por mnimos cuadrados
0,05
100

Seal del equipo por medicin de muestras y patrones
mL
0,3
0,0011
UA
N/A
Tabla 11. Formato para estimar la incertidumbre del ensayo Fsforo Total
En la tabla 11 se observan de donde provienen los valores para la estimacin de
la incertidumbre de medicin del ensayo Fsforo total, por lo cual se aplicarn las
ecuaciones 3 y 4:

=
2
(
)
(3)
Donde:
=
(4)
a. Incertidumbre por la solucin madre de 50 mg P-PO4/L, USM:
()
=
7,09322 105 2
0,00029 2
0,000699906 2 0,065 2
(
) +(
) +(
) +(
) = 4,38 104
0,2195
0,9996
136
1000
b. Incertidumbre por la solucin intermedia de 2,5 mg P-PO4/L, USI:

()
0,01 2
0,005 2
(
) +(
) = 1,00 103
100
5
42
c. Incertidumbre por la solucin de trabajo de 0,3 mg P-PO4/L, UST:

( )
0,065 2
0,02 2
(
) +(
) = 8,94 104
200
24
d. Incertidumbre por preparacin de la muestra, UMx:

( )
0,025 2
0,01 2
(
) +(
) = 2,69 104
100
100
e. Incertidumbre por Lectura fotomtrica, ULF:

3,52 103 2
(
) = 1,17 102
0,3
()
=
f. Incertidumbre por Repetibilidad y reproducibilidad, URyr:

( )
=
1,49 103 2
(
) = 4,96 103
0,3
g. Incertidumbre por la curva de calibracin, UCC:

La ecuacin para estimar la incertidumbre por el ajuste lineal de la curva de
calibracin es la que se describe en 5:
() =
1 1 ( )2
+ +

(5)
Donde,
s: Desviacin estndar residual regresin lineal
b: Pendiente curva de calibracin
p: Nmero de mediciones de la muestra objeto de estudio
n: Nmero de patrones de la curva de calibracin
CM: Concentracin de la muestra
C : Concentracin promedio de los patrones
43
Sxx: suma de cuadrados de los residuales de las concentraciones obtenidas

Para realizar el clculo de C , se utilizan los datos obtenidos en la validacin, de
forma tal que las concentraciones de los patrones se encuentran en la tabla 12:
Concentracin del Patrn (mg P-PO4/L)
Absorbancia
0,03
1,8441 E-2
0,05
3,0732 E-2
0,08
5,1293 E-2
0,10
6,3837 E-2
0,30
0,19219
0,50
0,31794
0,60
0,38184
Tabla 12. Curva de calibracin Fsforo total
La ecuacin de la recta se observa en 6:
=
y = 0,637x
(6)
0,03 + 0,05 + 0,08 + 0,10 + 0,30 + 0,50 + 0,60

7
= 0,24 mg 4/
Sxx y s se calculan mediante las ecuaciones 7 y 8:
(7)
(8)
Donde,
Ai: Absorbancia del patrn i
bo: Intercepto de la curva de calibracin (en este caso = 0,00)
bI: Pendiente de la curva de calibracin
Ci: Concentracin del patrn i
44
Ci
0,03
0,05
0,08
0,10
0,30
0,50
0,60
(Ci - C )2
0,0441
0,0361
0,0256
0,0196
0,0036
0,0676
0,1296
0,326
Por lo tanto, se tiene que:
( )2 = 0,326
=
=
Ci
0,03
0,05
0,08
0,10
0,30
0,50
0,60
Ai
1,8441E-2
3,0732 E-2
5,1293 E-2
6,3837 E-2
0,19219
0,31794
0,38184
4,48E-7
1,25E-6
1,11E-7
1,88E-8
1,19E-6
3,14E-7
1,30E-7
3,46E-6
De lo anterior se obtiene:
=1
( + ) 2
=
2
3,46 6
= 8,32 4
5
Se asumir que la concentracin de la muestra, CM, es de 0,30 mg P-PO4/L, que

corresponde a la mitad del rango trabajo, para efectos prcticos de clculo.
45
()
8,32 4 1 1 (0,30 0,24)2

=
+ +
= 0,0011
0,637
2 7
0,326
()
=
0,0011 2
(
) = 3,67 103
0,3
h. Incertidumbre combinada ensayo Fsforo total

Se combinan cada una de las contribuciones a la incertidumbre del ensayo.
(4/)
4/
(4/)
4/
(4,38 104 )2 + (1,00 103 )2 + (8,94 104 )2 + (2,69 104 )2

+(1,17 102 )2 + (4,96 103 )2 + (3,67 103 )2
= 1,33 102
i. Incertidumbre expandida, K = 2. Intervalo de Confianza = 95%

(4/)
4/
(4/)
4/
= 1,33 102 2
= 0,03
j. Expresin de los resultados

[P-PO4/L]muestra = [P-PO4/L]muestra (0,03 * [P-PO4/L]muestra)
k. Contribuciones a la incertidumbre de Fsforo total
En la figura 6 se observa como las diversas fuentes contribuyen a la incertidumbre
del ensayo fsforo total.
46
0,013305
Incertidumbre total
0,003670
Curva de Calibracin
0,004960
Ry r
0,011700
Lectura fotomtrica
Preparacin de la muestra
0,000269
Solucin de Trabajo 0,30 mg P-PO4/L
0,000894
Solucin Intermedia 2,5 mg P-PO4/L
0,001000
Solucin Madre 50 mg P-PO4/L

0,0000
0,000438
0,0020
0,0040
0,0060
0,0080
0,0100
0,0120
Incertidumbre Estndar Relativa
Figura 6. Contribuciones a la incertidumbre del ensayo Fsforo Total
47
0,0140
Anexo F. Trazabilidad del ensayo Fsforo total

Medicin Vol. Mx
Adicin de cidos y
perlas de ebullicin
Digestin hasta observar

vapores cafs
Adicin de Agua destilada

y gotas de fenolftalena
Adicin de NaOH 33%

hasta coloracin rosa
Preparacin
Solucin Madre
Transferir, filtrando a
baln de 100 mL
Preparacin
Curva de Calibracin
Aclimatar y aforar
Medir 50 mL solucin
+ 8 mL coloreadora
Medir 50 mL solucin +
gotas de H2SO4 5N +
8 mL de reactivo coloreador
Figura 7. Esquema del ensayo Fsforo total

En la figura 7, se esquematizan las diferentes etapas para el ensayo de fsforo
total de forma tal que se pueda tener un panorama general para establecer la
trazabilidad del ensayo.
48
Aseguramiento de la trazabilidad
Medicin Vol. Mx: La trazabilidad de la temperatura del termstato se tiene por
calibracin con termmetro calibrado.
Se asegura la trazabilidad de la medicin del volumen usando la pipeta bajo las
condiciones descritas por el fabricante, adems se cuenta con una calibracin
hecha en el laboratorio.
Transferir, aclimatar y aforar a un baln de 100 mL: Se asegura la trazabilidad del
baln mediante una calibracin hecha en el laboratorio del material volumtrico y
usando la solucin a 20 C.
Medir 50 mL solucin + Gotas de H2SO4 5N + 8 mL Reactivo coloreador:
Se asegura la trazabilidad de la medicin de los volmenes de solucin y
coloreadora usando las pipetas bajo las condiciones descritas por el fabricante,
adems se cuenta con una calibracin hecha en el laboratorio.
Lectura en el Fotmetro: Se asegura la trazabilidad en la lectura mediante
certificacin de mantenimiento y tests del equipo realizada segn el fabricante.
Preparacin de la solucin madre: La trazabilidad de la temperatura de la estufa
para secar el material de referencia se tiene por verificacin con termmetro
calibrado.
Se asegura la trazabilidad del valor de la masa pesada del material de referencia
mediante certificado de calibracin de la balanza analtica y usndola bajo las
condiciones de temperatura y humedad relativa controladas.
Se asegura la trazabilidad del baln mediante una calibracin hecha en el
laboratorio del material volumtrico.
Preparacin de la Curva de Calibracin: Se asegura la trazabilidad de las pipetas
usndolas bajo las condiciones descritas por el fabricante, adems se cuenta con
una calibracin hecha en el laboratorio.
Se asegura la trazabilidad de los balones mediante una calibracin hecha en el
laboratorio del material volumtrico, y usando las soluciones a 20 C.
49
Anexo G. Puntos crticos del ensayo Fsforo Disponible Total

Medir 50 mL de muestra* +
Figura 8. Puntos crticos del ensayo Fsforo Disponible Total

En la figura 8, se esquematiza el anlisis de Fsforo Disponible Total con los
puntos crticos (*).
Nota: Para la adecuada preparacin del reactivo coloreador remitirse al Standard methods for the examination
nd
of water and wastewater. 22 . 2012. Mtodo 4500 P E.
50
Anexo H. AMEF Fsforo Disponible Total
Tabla 13. AMEF Fsforo Disponible Total
51
Anexo I. Plan de validacin Fsforo Disponible Total
1. Alcance
El mtodo es apropiado para determinar Fsforo Disponible Total (como
ortofosfatos) en aguas naturales (superficiales y subterrneas) y residuales
(domsticas e industriales), en el rango comprendido entre 0.03 mg P-PO4/L y
0.60 mg P-PO4/L.
2. Principio
Este mtodo es aplicable para la determinacin de Fsforo Disponible Total por
una determinacin colorimtrica, en la cual el molibdato de amonio y el tartrato
antimonoltico de potasio reaccionan en medio cido con ortofosfatos para formar
un heteropolicido (cido Fosfomolibdco) de color amarillo plido, que es
reducido por el cido ascrbico a molibdeno de color azul, cuya intensidad es
proporcional a la concentracin del analito27 y puede ser determinado por
fotometra a 880 nm, donde las reacciones que se llevan a cabo se representan
por medio de las ecuaciones 1 y 2:28,29,30
PO43 + 12MoO42 + 27H+ H3PO4(MoO3)12 + 12 H2O
(3)
H3PO4(MoO3)12 + C6H8O6 Azul de fosfomolibdeno [Mo(VI) Mo(V)]
(4)
3. Criterios de Aceptacin
Exactitud expresada como porcentaje de error (% E) menor igual al 10 % para
patrones.
Precisin expresada como porcentaje de coeficiente de variacin (% CV) menor
igual al 10 % para los patrones y muestras
27
American Public Health Association, American Water Works Association & Water Environment
Federation. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 22 nd. Washington, D.C., 2012.
28
McKELVIE, I; PEAT, D; WORSFOLD, P. Techniques for the quantification and speciation of phosphorus
in natural waters. No.10 (Analytical Proceedings Including Analytical Communications, 1995) Pg. 437- 445.
29
ROBARDS, K; MCKELVIE, I; BENSON, R; WORSFOLD, P; BLUNDELL, N; CASEY, H
Determination of carbon, phosphorus, nitrogen and silicon species in waters. No. 3 (Analytica Chimica Acta,
1994) Pg 147-190.
30
WORSFOLD, P; GIMBERT, L; MANKASINGH, U; OMAKA, O; HANRAHAN, G; GARDOLINSKI, P;
HAYGARTH, P; M; TURNER, B; KEITH-ROACH, M; MCKELVIE, I. Sampling, sample treatment and
quality assurance issues for the determination of phosphorus species in natural waters and soils. No. 2
(Talanta, 2005) Pg. 273 - 293
52
4. Parmetros de Validacin
Se considera que aplican para la validacin los siguientes parmetros: Lmite de
cuantificacin y deteccin, rango lineal y de trabajo, exactitud y precisin,
porcentaje de recuperacin y sensibilidad.
4.1 Lmites de deteccin y de cuantificacin
Previamente a la validacin del mtodo se realizaron varios ensayos analizando
patrones de diferente concentracin, con el fin de determinar cul de ellos cumple
con los criterios de aceptacin establecidos en cuanto a exactitud expresada como
%E y precisin como %CV. Posterior a la seleccin del estndar adecuado y con
el objetivo de ratificar el lmite de cuantificacin experimental, se evaluarn
rplicas de un patrn de concentracin 0.03 mg P-PO4/L.
4.2 Rango Lineal
Para la determinacin del rango lineal se analizarn una serie de patrones que
comprendan aproximadamente el rango sugerido por el mtodo (Segn Standard
Methods Ed 22. de 0.15 a 1.3 mg P-PO4/L).
Con base en el resultado del rango lineal se definir el rango de concentraciones
en los cuales se obtengan resultados coherentes con los criterios de calidad
especificados por el laboratorio. El patrn ms bajo ser la concentracin definida
como lmite de cuantificacin.
4.4 Exactitud
Con el fin de evaluar la exactitud del mtodo se analizarn diariamente 2 rplicas,
durante 7 das, de 3 estndares de diferente concentracin. Los estndares se
preparan a partir de diluciones de la solucin madre de 50 mg P-PO4/L:
-
Solucin Madre: Concentracin terica de 50 mg P-PO4/L, preparada por

pesada directa de 0.2195 g de Fosfato monobsico de Potasio MR, secado
previamente a 105 C por 1 hora y disuelto en 1 L de agua destilada
aforando a 20 C.
Patrn Intermedio: Concentracin terica de 2.5 mg P-PO4/L, preparado

por dilucin, midiendo 10 mL de la solucin madre y diluyendo a 200 mL
53
Estndar Bajo, Eb: Concentracin terica de 0.03 mg P-PO4/L, preparado

por dilucin, midiendo 3 mL del Patrn intermedio y diluyendo a 250 mL con
agua destilada aforando a 20 C.
Estndar Medio, Em: Concentracin terica de 0.30 mg P-PO4/L,

preparado por dilucin, midiendo 24 mL del Patrn intermedio y diluyendo a
200 mL con agua destilada aforando a 20 C.
Estndar Alto, Ea: Concentracin terica de 0.60 mg P-PO4/L, preparado

por dilucin, midiendo 48 mL del Patrn intermedio y diluyendo a 200 mL
4.5 Precisin
Para evaluar la precisin del mtodo se analizarn diariamente rplicas de
estndares y muestras dentro del rango de aplicacin del mtodo. La precisin se
evaluar en trminos de Repetibilidad y de Repetibilidad intermedia de los
estndares.
As mismo se incluirn 2 muestras naturales cuyos valores de fsforo (como
ortofosfato) se encuentran dentro del rango de aplicacin del mtodo. El objeto de
incluir muestras en este parmetro es conocer la precisin en trminos de %CV
cuando se analizan duplicados de muestras; a la vez que se analiza
especficamente para esta determinacin el efecto de las diluciones sobre el
resultado.
M1
Muestra PTAR UTP
ARD Efluente. Con una concentracin de fsforo cercana a 0.16 mg P-PO4/L.

M2
Muestra PTAR UTP
ARD Afluente. Con una concentracin de fsforo cercana a 0.60 mg P-PO4/L

con un factor de dilucin, FD = 10 veces.
Estndares y muestras
Eb
Em
Ea
M1
M2
Concentracin mg P-PO4/L
0.03
0.30
0.60
Aprox. 0.16
Aprox.0.60
54
4.5.1 Precisin en trminos de Repetibilidad

El analista responsable aplicar el mtodo a todos los estndares y muestras
propuestas durante 7 das en la validacin.
4.5.2 Precisin en trminos Repetibilidad intermedia
El analista sustituto aplicar el mtodo a todos los estndares y muestras
propuestos
4.5.3 Reproducibilidad
Se evaluar la Desviacin estndar media de las series de mediciones. En esta
prueba es posible evaluar la dispersin de cada una de las series de datos (s)
frente al nmero total de datos (N) y al nmero total de series de mediciones (k).
1 k
ni 1 si 2
sI
N k i 1
Donde:
n = Nmero de mediciones por serie
N = Nmero total de mediciones
k= Nmero de series de mediciones.
Se espera que la desviacin estndar media de las series de mediciones cumpla
con los criterios de aceptacin establecidos.
4.6 Recuperacin
Con el fin de evaluar el porcentaje de recuperacin se analizar 1 muestra de
agua (M1) que contiene una concentracin aproximada de 0.16 mg P-PO4/L a la
cual se le efectuar una adicin baja (Ab) de aproximadamente 0.05 mg P-PO4/L
(33%) y una adicin alta (Aa) de aproximadamente 0.14 mg P-PO4/L (87%) de la
concentracin de la muestra.
La muestra y las muestras adicionadas se analizarn por el analista responsable
durante 7 das en la validacin, durante un da en la maana y en la tarde.
El analista sustituto efectuar el anlisis durante 2 das al final de la validacin.
55
A partir de los valores promedio obtenidos, cada da, para la muestra y de los
valores promedio obtenidos, cada da, para las adiciones se calcular el
porcentaje de recuperacin. Una vez terminada la validacin se espera obtener
un porcentaje de recuperacin de 100% 20%.
Las adiciones sugeridas se harn diariamente, a partir de una solucin patrn de
2.0 mg P-PO4/L y una solucin patrn de 3.5 mg P-PO4/L. La preparacin de las
muestras adicionadas se describe a continuacin:
-


M1 + Ab: Medir 150 mL de la muestra M1, adicionarle 4 mL de solucin

M1 + Aa: Medir 150 mL de la muestra M1, adicionarle 6 mL de solucin

4.7 Sensibilidad
En el LQA se ha establecido que la determinacin de la sensibilidad aplica a
procedimientos de ensayo en los que se requiera la construccin de curvas de
calibracin. La sensibilidad estar dada por el valor promedio de la pendiente de
las curvas de calibracin obtenidas durante la validacin.
5. Materiales
5.1 Equipos
Estufa de secado marca Binder
Balanza analtica marca Sartorious BP 221 S
Cabina de extraccin de gases y humos marca C4 modelo C 120 X
Agitador magntico marca Heidolph MR 3001 con barras magnticas
Termstato marca Julabo modelo F34
Digestor de Fsforo marca Gerhardt tipo KI 16
Fotmetro marca Shimadzu modelo UV 1700
56
5.2 Reactivos
Agua destilada
Fosfato monobsico de Potasio, MR
cido Ntrico concentrado
cido Sulfrico concentrado
cido Sulfrico 5 N
Tartrato antimonoltico de potasio p.a
Molibdato de amonio p.a
cido Ascrbico p.a
Fenolftalena
5.3 Material de Vidriera
Balones de digestin Kjeldahl
Balones aforados de 100 mL, 200 mL, 250 mL, 1000 mL. Clase A
Pipetas aforadas de 3 mL, 4 mL, 8 mL, 10 mL, 15 mL, 25 mL, 50 mL, 100 mL .
Pipetas graduadas de 10 mL.
Beakers de 100 mL, 250 mL, 1000 mL.
Erlenmeyer de 100 mL, 250 mL.
Probetas de 50 mL y 100 mL
Embudos de 5 cm de dimetro
Esptula
Frasco lavador
Varilla de vidrio
Papel filtro cualitativo Munktell No. 125
57
Anexo J. Resultados validacin Fsforo Disponible Total

1. Recoleccin de datos
NA
100
Analito
Estndar bajo (Eb)
Estndar medio (Em)
Estndar alto (Ea)
Muestra baja (M1)
Muestra alta (M2)

Baja (M1Ab)
%R (M1Ab)
Uso
Unidades
Analista
Da
19/06/2012
Da 1
Oscar Cullar
20/06/2012
Da 2
Oscar Cullar
21/06/2012
Da 3
Oscar Cullar
22/06/2012
Da 4
Oscar Cullar
25/06/2012
Da 5
Oscar Cullar
26/06/2012
Da 6
Oscar Cullar
27/06/2012
Da 7 (Maana)
Oscar Cullar
27/06/2012
Da 7 (Tarde)
Oscar Cullar
Mauricio
Camacho
Mauricio
Camacho
27/06/2012
Da 1 Sustituto
28/06/2012
Da 2 Sustituto
26/06/2012
Da 1 Sustituto 2
Mnica Rodas
n
ProControl
ProControl
Mnimo
Mximo
Total datos
Prueba F
Prueba t
Rango
Media
Desviacin
Error
LDM
LCM
LDM,LCM,
Exactitud,
Precisin
s
%CV
%Error
3s
10s
Exactitud,
precisin.
Creacin de
Cartas de
control
mg /L
0,029
0,030
0,030
0,030
0,031
0,030
0,030
0,031
0,030
0,030
0,030
0,030
0,030
0,030
0,030
0,030
0,028
0,029
0,029
0,030
0,031
0,032
22
mg /L
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,00
0,03
0,03
0,03
0,00
2,69
-0,26
0,00
0,01
Exactitud,
precisin
0,297
0,297
0,299
0,299
0,300
0,299
0,301
0,303
0,300
0,300
0,301
0,301
0,301
0,300
0,300
0,300
0,296
0,297
0,290
0,300
0,301
0,303
22
mg /L
0,30
0,30
0,30
0,30
0,30
0,30
0,30
0,30
0,30
0,30
0,30
0,29
0,30
0,30
0,00
0,30
0,30
0,30
0,00
0,90
-0,25
Precisin,
% Recuperacin
0,593
0,593
0,600
0,598
0,598
0,598
0,610
0,604
0,600
0,600
0,601
0,600
0,600
0,600
0,600
0,600
0,594
0,596
0,590
0,592
0,597
0,601
22
mg/L
0,59
0,60
0,60
0,61
0,60
0,60
0,60
0,60
0,60
0,59
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,14
0,15
0,60
20
0,59
0,60
0,60
0,00
0,59
0,60
0,60
0,00
0,73
-0,28
0,14
0,16
0,16
0,01
3,89
NA
Precisin,
% Recuperacin
mg/L
5,88
0,16
5,86
5,87
0,16
5,88
5,99
0,16
5,98
5,92
0,16
5,90
5,94
0,16
5,93
5,95
0,16
5,95
5,95
0,16
5,95
5,95
0,16
5,95
5,82
0,16
5,84
5,86
0,14
5,89
5,86
5,89
22
0,14
5,82
0,16
5,99
0,16
5,91
0,01
0,05
3,98
0,79
NA
NA
Tabla 14. Consolidado de datos validacin Fsforo Disponible Total
58
Precisin, %
Recuperacin
mg/L
5,87
5,88
5,99
5,91
5,94
5,95
5,95
5,95
5,83
5,88
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
NA
NA

Alta (M1Aa)
100
%R (M1Aa)
Reactividad
cruzada
Precisin, %
Recuperacin
Promedio
NA
Promedio
NA
Promedio
0,60
Promedio
0,30
Promedio
0,03
Promedio
Fecha
Valor nominal
(mg/L)
Promedio
VARIABLE
En la tabla 14, se encuentra el consolidado de datos producto de la validacin y en la tabla 15 el consolidado

de la muestra adicionada.
Reactividad
cruzada
%R
mg/L
mg/L
%R
0,29
102
0,29
101
0,29
103
0,30
102
0,30
103
0,30
103
0,29
104
0,29
100
0,28
100
0,27
101
0,27
0,30
0,29
0,01
2,39
NA
100
104
102
1,38
1,35
1,97
0,22
108
0,21
102
0,22
113
0,21
103
0,22
108
0,21
97,39
0,21
103
0,21
103
0,21
101
0,19
100
0,29
0,29
0,29
0,29
0,29
0,29
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
5,88
20
5,83
5,99
5,91
0,05
0,80
NA
0,19
0,22
0,21
0,01
3,41
NA
20
0,19
0,22
0,21
0,01
3,49
NA
97,4
113
104
4,51
4,35
3,77
0,27
0,30
0,29
0,01
2,36
NA
19/06/2012
Da 1
Oscar Cullar
20/06/2012
Da 2
Oscar Cullar
21/06/2012
Da 3
Oscar Cullar
22/06/2012
Da 4
Oscar Cullar
25/06/2012
Da 5
Oscar Cullar
26/06/2012
Da 6
Oscar Cullar
27/06/2012
Da 7 (Maana)
Oscar Cullar
27/06/2012
Da 7 (Tarde)
Oscar Cullar
27/06/2012
Da 1 Sutituto
28/06/2012
Da 2 Sustituto
26/06/2012
Da 1 Sustituto 2 Mnica Rodas

n
ProControl
ProControl
Mnimo
Mximo
Total datos
Prueba F
Prueba t
Rango
Media
Desviacin
Error
LDM
LCM
Mauricio
Camacho
Mauricio
Camacho
s
%CV
%Error
3s
10s
Muestra baja + Adicin Baja
%R (M1Ab)
Precisin,
% Recuperacin
Precisin, %
Recuperacin
mg/L
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,14
0,15
0,16
0,16
22
0,14
0,16
0,16
0,01
3,71
NA
mg/L
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,16
0,14
0,16
0,14
0,16
0,16
0,01
3,78
NA
0,22
0,22
0,21
0,21
0,22
0,22
0,21
0,21
0,22
0,22
0,21
0,21
0,21
0,21
0,21
0,21
0,21
0,20
0,19
0,19
0,21
0,21
22
Muestra baja + Adicin Alta
%R
0,22
0,21
0,22
0,21
0,22
0,21
0,21
0,21
0,21
0,19
0,21
0,19
0,22
0,21
0,01
3,26
NA
Reactividad
cruzada
0,19
0,22
0,21
0,01
3,32
NA
109
108
102
102
115
110
102
103
109
107
98
97
103
103
103
103
103
98
101
98
96
101
108
102
113
103
108
97,4
103
103
101
99,9
98,5
22
95,9 97,4
115
113
103
103
4,66 4,56
4,52 4,42
NA
3,29
Precisin, %
Recuperacin
mg/L
0,29
0,29
0,29
0,29
0,29
0,29
0,30
0,30
0,30
0,30
0,29
0,30
0,29
0,30
0,29
0,29
0,28
0,29
0,27
0,27
0,29
0,29
22
0,27
0,30
0,29
0,01
2,25
NA
100,0
NA
%R (M1Aa)
Reactividad
cruzada
Promedio
Unidades
Analista
Muestra baja (M1)
NA
Promedio
Da
100,0
Promedio
Uso
NA
Promedio
Fecha
NA
Promedio
VARIABLE
Valor nominal
(mg/L)
Analito
mg/L
%R
%R
0,29
0,29
0,29
0,30
0,30
0,30
0,29
0,29
0,28
0,27
0,29
102
102
101
100
103
103
102
103
104
103
101
106
104
104
100
100
100
101
103
100
101
99
101
103
102
103
103
104
100
100
101
100
22
0,27
0,30
0,29
0,01
2,27
NA
99,4
106
102
1,66
1,63
NA
Tabla 15. Consolidado muestra adicionada validacin Fsforo Disponible Total
59
102
100
104
102
1,42
1,39
1,80
1.1 Lmite de deteccin y Lmite de cuantificacin

En la tabla 16, se muestran los ensayos realizados para determinar el lmite de
deteccin LD y el Lmite de cuantificacin LC. Los criterios de aceptacin para %E
y %CV son del 5%.
El Lmite de cuantificacin definido fue de 0,03 mg P-PO4/L; si bien el patrn de
0,02 mg P-PO4/L tambin cumple con los requisitos establecidos, se opt por el
estndar de mayor concentracin para trabajar con un mayor margen de
seguridad.
El lmite de deteccin definido fue de 0.01 mg P-PO4/L
Tabla 16. Ensayos Lmite de Cuantificacin Fsforo Disponible Total

1.2 Rango Lineal
El rango lineal se encuentra entre 0,02 mg P-PO4/L y 1,2 mg P-PO4/L, como se
observa en la figura 9.
0,700
y = 0,622x
R = 0,999
Absorbancia, 880 nm
0,600
0,500
0,400
0,300
0,200
0,100
0,000
0
0,2
0,4
0,6
0,8
Figura 9. Rango lineal ensayo Fsforo Disponible Total

60
1,2

0,450
y = 0,636x
R = 1
0,400
Absorbancia, 880 nm
0,350
0,300
0,250
0,200
0,150
0,100
0,050
0,000
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
Figura 10. Rango de trabajo ensayo Fsforo Disponible Total

Si bien el rango lineal se encuentra comprendido entre 0,02 mg P-PO4/L y
1,2 mg P-PO4/L, se opt por el rango de trabajo comprendido entre
0,03 mg P-PO4/L y 0,60 mg P-PO4/L (Ver figura 10), lo cual obliga a que se
realicen diluciones a muestras que estn por encima de esta concentracin, dado
que durante la estandarizacin se encontr que algunas muestras con
concentraciones superiores a 1,2 mg P-PO4/L entraban en el rango de trabajo
(sesgo negativo), causando errores en la cuantificacin, pues una vez se
efectuaban diluciones se encontraba que su concentracin era mayor.
1.4 Exactitud
En cuanto a la exactitud, evaluada a travs del %E de los estndares, se pudo
evidenciar que el mtodo cumple con el criterio de aceptacin establecido en el
literal tres del anexo I.
1.5 Precisin
La precisin de la medicin se evalu bajo condiciones de Repetibilidad y de
reproducibilidad. En cuanto a la precisin, evaluada a travs del %CV, se pudo
evidenciar que el mtodo cumple con los criterios de aceptacin establecidos en el
literal tres del anexo I para todos los estndares.
61
Las muestras naturales presentan %CV del 3,89% y 0,80%, sin embargo esta
variabilidad no afecta los resultados analticos de las muestras que se analizan
habitualmente en el laboratorio porque para el ensayo de Fsforo Disponible Total
se ha establecido una prioridad 1 en la ejecucin de los ensayos con lo cual se
garantiza que el anlisis de Fsforo se efecte de acuerdo al tiempo mximo de
almacenamiento establecido en el DE 097.
De manera general, las pruebas F y T realizadas (Los datos pertenecen al LQA,
razn por la cual no se muestran), con el software estadstico Procontrol,
no muestran diferencias significativas entre las varianzas, motivo por el cual, se
considera que existe Repetibilidad y Repetibilidad intermedia entre el analista
responsable y el analista sustituto. Los resultados para el mismo analista en la
maana y en la tarde proporcionan evidencia de condiciones de Repetibilidad.
La desviacin estndar media del mtodo es 0,88 %CV, valor que se calcul a
travs del software estadstico Procontrol con un 95% de seguridad estadstica, el
cual proporciona evidencia de condiciones de reproducibilidad y que se encuentra
por debajo de los criterios de aceptacin establecidos en el LQA.
1.6 Recuperacin
De acuerdo con la tabla 14, los porcentajes de recuperacin obtenidos para la
muestra adicionada fueron del 103% para la adicin baja y del 102% para la
adicin alta.
Los porcentajes de error obtenidos tanto para la adicin baja (0,00%) como para la
adicin alta (3,33%) son menores al 20%, evidenciando que no existen efectos de
matriz.
1.7 Sensibilidad
El valor promedio de la pendiente de las curvas de calibracin obtenidas durante
la validacin fue de 0,636 cuyo valor se traduce en la sensibilidad del mtodo.
1.8 Lmites de control establecidos para las cartas de control
Despus de haber efectuado la validacin del mtodo se han definido los
siguientes lmites de control (LCS = 0,30 mg/L y LCI = 0,30 mg/L) para el
estndar medio, de acuerdo con la tabla 17. Sin embargo estos lmites son muy
estrechos y no reflejan en realidad la variacin del proceso de medicin, por eso
62
para elaborar la carta de control del mtodo se har con base los lmites de control
por especificacin (LCS = 0,33 mg/L y LCI = 0,27 mg/L).
Patrn 0,30 mg/L

Da
Rplicas
1
2
3
4
5
6
7 (Maana)
7 (Tarde)
1 Sustituto
2 Sustituto
1 Sustituto 2
Promedios
Promedio
Tamao subgrupo
Factor A2
Promedio Rango
LCS
LCI
LCS (Por Especif. 10%)
LCI (Por Especif. 10%)
0,297
0,297
0,299
0,299
0,300
0,299
0,301
0,303
0,300
0,300
0,301
0,301
0,301
0,300
0,300
0,300
0,296
0,297
0,290
0,300
0,301
0,303
Promedio
(mg/L)
Mnimo
Mximo
Rango
0,297
0,297
0,297
0,000
0,299
0,299
0,299
0,000
0,300
0,299
0,300
0,001
0,302
0,301
0,303
0,002
0,300
0,300
0,300
0,000
0,301
0,301
0,301
0,000
0,301
0,300
0,301
0,001
0,300
0,300
0,300
0,000
0,297
0,296
0,297
0,001
0,295
0,290
0,300
0,010
0,302
0,301
0,303
0,002
0,299
0,299
0,30
2
1,88
0,002
0,30
0,30
0,33
0,27
0,300
mg/L
NA
NA
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
0,002
Tabla 17. Datos para la carta de control de Fsforo Disponible Total

1.9 Segn resultados de la validacin el mtodo es apto para el alcance y el uso
propuesto en el numeral 1 del anexo I.
63
Anexo K. Estimacin de la incertidumbre del ensayo Fsforo Disponible

Total
1. Mesurando
Se mide la absorbancia a 880 nm del complejo de molibdeno proveniente de la
reduccin del cido fosfomolbdico causada por el cido ascrbico.
2. Modelo matemtico
y = mx
Donde, y: Absorbancia
x: Concentracin (mg P-PO4/L)
m: Sensibilidad del mtodo (L/mg P-PO4)
3. Principio de medicin
Mediante una determinacin colorimtrica, en la cual el molibdato de amonio y el
tartrato antimonoltico de potasio reaccionan en medio cido con fsforo en forma
ortofosfatos para formar un heteropolicido (cido Fosfomolibdco) de color
amarillo plido, que es reducido por el cido ascrbico a molibdeno de color azul,
se mide la absorbancia a 880 nm, cuya intensidad es proporcional a la
concentracin del analito en la muestra.
Las siguientes consideraciones se tienen en cuenta para estimar la incertidumbre
del ensayo Fsforo total:
- Temperatura de trabajo: 20 C, utilizando un termstato calibrado
- Agua destilada libre del analito de inters
- Reactivos grado analtico
- Fotmetro calibrado y correcto funcionamiento del equipo segn Procedimiento
Estndar de operacin e Instruccin de trabajo.
Las posibles fuentes de incertidumbre se resumen en la tabla 18 y posteriormente
se desarrollaran en la figura 11.
64

Factor crtico en la cuantificacin
Aplica
No aplica
Incertidumbre
Incertidumbre
X
Procedimiento
Preparacin de la solucin madre de

50 mg P-PO4/L
Preparacin de la solucin intermedia de
X
2,5 mg P-PO4/L
Preparacin de la solucin de trabajo de
X
0,3 mg P-PO4/L
Preparacin de muestra
X
Preparacin blanco de digestin
X
Digestin de muestra
X
Construccin curva de calibracin
X
Preparacin blanco de curva de calibracin
X
Lectura fotomtrica de patrones y muestras
X
Repetibilidad y reproducibilidad (R y r)
X
Tabla 18. Fuentes de incertidumbre ensayo Fsforo Disponible Total
5. Diagrama Causa Efecto
Solucin Madre
de 50 mg P-PO4 /L
Pureza
KH2PO 4
Solucin Intermedia
de 2.5 mg P-PO4 /L
Solucin de Trabajo
de 0.3 mg P-PO4 /L
Calibracin matraz
Masa molar
KH2PO 4
Calibracin
balanza
m tara
Volumen
Calibracin matraz
Volumen
Volumen
Calibracin pipeta
Calibracin pipeta
Calibracin matraz
m KH2PO4
Calibracin
balanza
m KH2PO 4
[P-PO4 ] Muestra (mg P-PO4 /L)

Repetibilidad
de la seal
Ajuste
lineal
Calibracin
pipeta
validacin
Volumen
Preparacin
de muestra
Curva de
calibracin
Lectura
fotomtrica
Ry r
Figura 11. Diagrama Causa Efecto ensayo Fsforo Disponible Total
65
6. Clculos
De la misma manera que para el ensayo de fsforo total se utilizarn las mismas
ecuaciones para la estimar la incertidumbre de medicin del ensayo Fsforo
disponible total, observndose en la tabla 19 el origen de los valores para realizar
el respectivo clculo.
Fuente de Incertidumbre
Magnitud de entrada
Valor estimado
Xi
Xi
Fuente de
informacin
Incertidumbre original
Tipo de distribucin
Valor
Unidades
Incertidumbre
estndar
Incertidumbre
combinada (por
fuente) xi
Incertidumbre
estandar relativa
u (xi)
u c (xi)
u (xi)/xi
[u c (xi)/xi]2
PREPARACION DEL FOSFATO MONOBASICO DE POTASIO 50 mg/L
Peso del Reactivo
0,2195
Calibracin de la balanza
g
Fabricante
tara
Fabricante
Pureza del Reactivo
0,9996
Peso formula del reactivo
Certificado
0,000100626
0,0001
0,0005
136
Referencia
P
O4
0,00005031
B, normal. K=2
0,00005
N/A
B, rectangular.
0,00029
0,0001
g/mol
B, rectangular
5,7735E-05
Referencia
0,00007
g/mol
B, rectangular
8,0829E-05
Referencia
0,000002
g/mol
B, rectangular
1,1547E-06
Referencia
0,0003
g/mol
B, rectangular
6,9282E-04
1000
B, normal. K=2
g/mol
K
H2
Dilucin del reactivo
N/A
Calculada
0,13
mL
B, normal. K=2
7,09322E-05 0,000323154
1,04E-07
0,00029 0,000288791
8,34E-08
0,000699906
5,14637E-06
2,65E-11
0,065
0,000065
4,225E-09
0,065
PREPARACION DE PATRONES INTERMEDIOS Y DE TRABAJO
mg/L
100
Calculada
0,02
mL
B, normal. K=2
0,01
0,01
0,0001
1,00E-08
Calculada
0,01
mL
B, normal, K=2
0,005
0,005
0,001
1,00E-06
200
Calculada
0,13
mL
B, normal. K=2
0,065
0,065
0,000325
1,06E-07
24
Calculada
0,02
mL
B, normal. K=2
0,02
0,02 0,000833333
6,94E-07
B, normal. K=2
0,01

mg/L
PREPARACION DE MUESTRAS
Medicin del volumen de muestra
50
Incertidumbre calibracin pipeta PV40

Seal del equipo por medicin de muestras y patrones
Repetibilidad de la seal
Incertidumbre de la curva de calibracin ajustada por mnimos cuadrados
0,02
mL
UA
Mediciones
6,10E-03
0,3
UA
A, normal
0,0011
0,3
0,003
0,0002
4,0E-08
1,17E-02
1,38E-04
0,0011 0,003666667
1,344E-05
UA
N/A
Clculos
0,01
3,52E-03
3,52E-03
UA
Clculos
Desviacin en la medicin de la ordenada (Absorbancia)

Repetibilidad y reproducibilidad (R & r)
mL
Calculada
0,3
A, normal
3,69E-04
1,23E-03
1,52E-06
3,69E-04
Tabla 19. Formato para estimar la incertidumbre del ensayo Fsforo disponible total
a. Incertidumbre por la solucin madre de 50 mg P-PO4/L, USM:

()
=
7,09322 105 2
0,00029 2
0,000699906 2 0,065 2
(
) +(
) +(
) +(
) = 4,38 104
0,2195
0,9996
136
1000
b. Incertidumbre por la solucin intermedia de 2,5 mg P-PO4/L, USI:

()
0,01 2
0,005 2
(
) +(
) = 1,00 103
100
5
c. Incertidumbre por la solucin de trabajo de 0,3 mg P-PO4/L, UST:

( )
0,065 2
0,02 2
(
) +(
) = 8,94 104
200
24
66
d. Incertidumbre por preparacin de la muestra, UMx:

( )
=
0,01 2
(
) = 2,0 104
50
e. Incertidumbre por Lectura fotomtrica, ULF:

()
3,52 103 2
(
) = 1,17 102
0,3
f. Incertidumbre por Repetibilidad y reproducibilidad, URyr:

( )
=
3,69 104 2
(
) = 1,23 103
0,3
g. Incertidumbre por la curva de calibracin, UCC:

Los clculos para estimar la incertidumbre por el ajuste lineal de la curva de
calibracin son los mismos que se utilizaron para el ensayo de fsforo total.
()
0,0011 2
(
) = 3,67 103
0,3
h. Incertidumbre combinada ensayo Fsforo total

Se toman cada una de las contribuciones anteriores a la incertidumbre
(4/)
4/
(4/)
4/
(4,38 104 )2 + (1,00 103 )2 + (8,94 104 )2 + (2,00 104 )2

+(1,17 102 )2 + (1,23 103 )2 + (3,67 103 )2
= 1,24 102
i. Incertidumbre expandida, K = 2. Intervalo de Confianza = 95%

(4/)
4/
(4/)
4/
= 1,24 102 2
= 0,02
67
j. Expresin de los resultados

[P-PO4/L]muestra = [P-PO4/L]muestra (0,02 * [P-PO4/L]muestra)
k. Contribuciones a la incertidumbre de Fsforo Disponible total
En la figura 12 se observa como las diversas fuentes contribuyen a la
incertidumbre del ensayo fsforo total
0,012564
Incertidumbre total
0,003670
Curva de Calibracin
Ry r
0,001230
0,011700
Lectura fotomtrica
0,002000
Preparacin de la muestra
Solucin de Trabajo 0,30 mg P-PO4/L
0,000894
Solucin Intermedia 2,5 mg P-PO4/L
0,001000
Solucin Madre 50 mg P-PO4/L

0,0000
0,000438
0,0020
0,0040
0,0060
0,0080
0,0100
0,0120
0,0140
Incertidumbre Estndar Relativa
Figura 12. Contribuciones a la incertidumbre del ensayo Fsforo Disponible Total
68
Anexo L. Trazabilidad del ensayo Fsforo Disponible Total

Medicin Vol. Mx
Preparacin
Solucin Madre
Preparacin
Curva de Calibracin
Medir 50 mL solucin +
gotas de H2SO4 5N +
Medir 50 mL solucin
+ 8 mL coloreadora
Lectura en fotmetro
a los 15 minutos
Figura 13. Esquema del ensayo Fsforo Disponible Total

En la figura 13, se esquematizan las diferentes etapas para el ensayo de fsforo
total de forma tal que se pueda tener un panorama general para establecer la
trazabilidad del ensayo.
Aseguramiento de la trazabilidad
Medicin Vol. Mx: La trazabilidad de la temperatura del termstato se tiene por
calibracin con termmetro calibrado.
Se asegura la trazabilidad de la medicin del volumen usando la pipeta bajo las
condiciones descritas por el fabricante, adems se cuenta con una calibracin
hecha en el laboratorio.
Medir 50 mL solucin + Gotas de H2SO4 5N + 8 mL Reactivo coloreador:
Se asegura la trazabilidad de la medicin de los volmenes de solucin y
coloreadora usando las pipetas bajo las condiciones descritas por el fabricante,
adems se cuenta con una calibracin hecha en el laboratorio.
69
Lectura en el Fotmetro: Se asegura la trazabilidad en la lectura mediante

certificacin de mantenimiento y tests del equipo realizada por el fabricante.
Preparacin de la solucin madre: La trazabilidad de la temperatura de la estufa
para secar el material de referencia se tiene por calibracin con termmetro
calibrado.
Se asegura la trazabilidad del valor de la masa pesada del material de referencia
mediante certificado de calibracin de la balanza analtica y usndola bajo las
condiciones de temperatura y humedad relativa controladas.
Se asegura la trazabilidad del baln mediante una calibracin hecha en el
laboratorio del material volumtrico.
Preparacin de la Curva de Calibracin: Se asegura la trazabilidad de las pipetas
usndolas bajo las condiciones descritas por el fabricante, adems se cuenta con
una calibracin hecha en el laboratorio.
Se asegura la trazabilidad de los balones mediante una calibracin hecha en el
laboratorio del material volumtrico, y usando las soluciones a 20 C.
70
GLOSARIO31
Anlisis: Proceso que provee de informacin qumica o fsica a cerca de los
constituyentes de una muestra o de la muestra en s.
Analito: Constituyente de inters en una muestra.
Blanco del mtodo: Muestra que sin contener analito pasa a travs de todos los
pasos del mtodo.
Calibracin: Proceso para asegurar que la seal de la medicin dada por un
equipo o instrumento es correcta.
Curva de calibracin: Resultado de la estandarizacin que muestra grficamente
como la seal del mtodo cambia respecto a la cantidad de analito.
Determinacin: Anlisis de una muestra que busca la identidad, la concentracin
o las propiedades del analito.
Estandarizacin: Proceso para establecer la relacin entre la cantidad de analito
y la seal del mtodo.
Exactitud: Diferencia entre el resultado obtenido y el resultado esperado,
usualmente dividido entre el resultado esperado y reportado como porcentaje de
error relativo, E%.
Incertidumbre: Rango de posibles valores para una medicin.
Lmite de cuantificacin: Mnima cantidad de analito que puede ser cuantificada
con un alto grado de confianza.
Lmite de deteccin: Cantidad ms pequea de analito que puede ser detectada
con confianza, pero no cuantificada.
Linealidad: Capacidad del mtodo para producir resultados proporcionales,
directamente o mediante una transformacin matemtica, a la concentracin del
analito en las muestras, dentro de un determinado rango.
Matriz: Todos los constituyentes de una muestra a excepcin del analito.
31
HARVEY, D. Modern Analytical Chemistry. McGraw-Hill: USA, 2000. Pg. 35 47.
71
Medicin: Determinacin experimental de una propiedad qumica o fsica del

analito, usualmente producto de la comparacin con un patrn trazable a un
estndar definido y aceptado.
Mesurando: Magnitud particular sujeta a medicin.
Mtodo: Forma de analizar una muestra para un analito especfico en una matriz
especfica.
Muestra: Parte del sistema que se somete a anlisis.
Precisin: Indicacin de la reproducibilidad de la medida o resultado.
Procedimiento: Directriz escrita que resume cmo analizar una muestra.
Protocolo: Directriz escrita para analizar una muestra, especificada por una
agencia.
Prueba t: Prueba estadstica para comparar dos medias y ver s su diferencia es
suficientemente grande para explicar errores indeterminados.
Prueba f: Prueba estadstica para comparar dos varianzas y ver s su diferencia
es suficientemente grande para explicar errores indeterminados.
Regresin lineal: Tcnica matemtica para ajustar una ecuacin, a una tendencia
lineal, obtenida experimentalmente.
Residual: Diferencia entre un valor experimental y el obtenido por la ecuacin de
regresin lineal.
Sensibilidad: Medida de la habilidad del mtodo para distinguir entre dos
muestras con diferente concentracin de analito, reportada como el cambio de la
seal por unidad de cambio en la cantidad de analito.
Tcnica: Principio qumico o fsico que puede ser usado para analizar una
muestra.
Validacin32: Es la confirmacin, a travs del examen y el aporte de evidencias
objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares para un uso especfico
previsto.
32

Laboratorios de Ensayo y Calibracin. NTC-ISO/IEC 17025:2005. Pg. 17.
72

Causa y Efecto de Fosforo Total

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VALIDACIN, DETERMINACIN DE LA TRAZABILIDAD Y ESTIMACIN DE

LA INCERTIDUMBRE DEL MTODO DEL CIDO ASCRBICO PARA LA

OSCAR ANDRS CULLAR GARCA

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

VALIDACIN, DETERMINACIN DE LA TRAZABILIDAD Y ESTIMACIN DE

OSCAR ANDRS CULLAR GARCA

Documento presentado como requisito parcial para optar al ttulo de

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

NOTA DE ACEPTACIN DEL TRABAJO DE GRADO

VALIDACIN, DETERMINACIN DE LA TRAZABILIDAD Y ESTIMACIN DE

La nota de: _____________________________

Con la connotacin: _____________________

Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy _________________

A mi abuelita, Q.E.P.D, en el Reino de los Cielos, dedico con

A Santiago y Vernica porque ellos fueron mi inspiracin cada

A mi padre Oscar y mi madre Gloria Ins, por apoyarme

A mi to Arturo por sus palabras de aliento y apoyo emocional.

Oscar Andrs Cullar Garca

A Lina por sus consejos y orientacin en los diferentes aspectos durante la

A Clarita por sus observaciones para mejorar cada da.

A Mauricio por estar siempre presto a colaborarme cuando lo necesitaba

Igualmente a todo el personal del Laboratorio de Qumica Ambiental por su

A Norma por la revisin y asesora del proyecto de grado.

Oscar Andrs Cullar Garca

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

3.1 OBJETIVO GENERAL

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

4.1 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LAS MEDICIONES

4.3 METROLOGA EN QUMICA

4.7 MATRIZ AMEF

4.8 IMPORTANCIA DE LA DETERMINACIN DEL FSFORO

Tabla 2. Parmetros de Calidad de un mtodo

Tabla 3. Magnitudes y unidades de medicin qumica

Tabla 4. Resultados validacin del ensayo Fsforo total y

Tabla 5. AMEF Fsforo total

Tabla 6. Consolidado de datos validacin Fsforo total

Tabla 7. Consolidado de datos muestra adicionada validacin Fsforo total

Tabla 8. Ensayos lmite de cuantificacin Fsforo total

Tabla 9. Datos para la carta de control de Fsforo total

Tabla 10. Fuentes de incertidumbre ensayo Fsforo total

Tabla 12. Curva de calibracin Fsforo total

Tabla 13. AMEF Fsforo Disponible Total

Tabla 14. Consolidado de datos validacin Fsforo Disponible Total

Tabla 15. Consolidado muestra adicionada validacin

Tabla 16. Ensayos lmite de cuantificacin Fsforo Disponible Total

Tabla 17. Datos para la carta de control Fsforo Disponible Total

Tabla 18. Fuentes de incertidumbre ensayo Fsforo Disponible Total

Tabla 19. Formato para estimar la incertidumbre del ensayo

Figura 2. Puntos crticos del ensayo del ensayo Fsforo total

Figura 3. Rango lineal ensayo Fsforo total

Figura 4. Rango de trabajo ensayo Fsforo total

Figura 5. Diagrama Causa Efecto ensayo Fsforo total

Figura 6. Contribuciones a la incertidumbre del ensayo Fsforo total

Figura 7. Esquema del ensayo Fsforo total

Figura 8. Puntos crticos del ensayo Fsforo Disponible Total

Figura 9. Rango lineal ensayo Fsforo Disponible Total

Figura 10. Rango de trabajo ensayo Fsforo Disponible Total

Figura 11. Diagrama Causa Efecto ensayo Fsforo Disponible Total

Figura 12. Contribuciones a la incertidumbre del ensayo

Figura 13. Esquema del ensayo Fsforo Disponible Total

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

International Organization for Standardization. Requisitos Generales para la Competencia de los

Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial. Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios

3.1.3 Determinar la trazabilidad para los ensayos validados