Universidad del Valle de Mxico

Campus Chapultepec
Escuela de Ciencias de la Salud
Licenciatura en QFBT

NOMBRE DEL TRABAJO:

Reporte de prctica: Las protenas

Presenta:
Basilio Glvez Edna

Materia: Biologa Molecular

Semestre: 4 semestre
Fecha de entrega: 03 de Marzo del 2016

INTRODUCCIN

La palabra Protena, del griego proteios que significa primordial o primer lugar,
fue sugerida por Berzelius para llamar as, al material que describiera el qumico
holands Mulder en 1838 como sustancia compleja en cuya composicin
intervena el nitrgeno (N), y la cual, era sin duda la ms importante de todas las
sustancias conocidas en el reino orgnico, sin la cual no pareca posible la vida
sobre nuestro planeta.
Existen muchas clasificaciones de las protenas, dependiendo de su estructura,
funcin, solubilidad, forma, etc., pero una clasificacin general para estas, las
divide en: globulares y fibrosas, las primeras son de forma esfrica o parecida a
sta, contienen en su estructura hlices y hebras , adems de estructuras no
repetitivas (asas y giros) las cuales les proporcionan diseos compactos con
funciones particulares, son solubles en agua; algunos ejemplos son: la insulina,
albmina, globulinas plasmticas y numerosas enzimas. Las protenas fibrosas
son de forma alargada, su armazn es una repeticin de elementos de estructura
secundaria (hlices y hebras), stas le confieren la forma de fibras cilndricas
observables al microscopio, son de baja solubilidad en agua, dentro de stas se
encuentran la queratina, miosina, colgeno y fibrina.
Las protenas son macromolculas las cuales desempean el mayor nmero de
funciones en las clulas de los seres vivos. Forman parte de la estructura bsica
de tejidos (msculos, tendones, piel, uas, etc.), durante todos los procesos de
crecimiento y desarrollo, crean, reparan y mantienen los tejidos corporales;
adems desempean funciones metablicas (actan como enzimas, hormonas,
anticuerpos) y reguladoras a saber: asimilacin de nutrientes, transporte de
oxgeno y de grasas en la sangre, eliminacin de materiales txicos, regulacin de
vitaminas liposolubles y minerales, etc. (1)
Los aminocidos se han clasificado, clsicamente, basndose en la posibilidad o
no de ser sintetizados de novo por el organismo. As, se incluyen los
aminocidos esenciales (o indispensables), cuyo esqueleto hidrocarbonato no se
puede sintetizar en el organismo humano y por tanto, deben ser aportados, de
forma obligatoria, por la dieta para atender a las necesidades corporales
(crecimiento y mantenimiento de estructuras). Los nueve aminocidos
indispensables son: fenilalanina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina,
treonina, triptfano y valina. En la actualidad, el grupo de aminocidos no
esenciales (o dispensables) se ha subdividido en los realmente dispensables que
son sintetizados en el organismo a partir de otros aminocidos o de otros
metabolitos (alanina, cido asprtico, asparragina, cido glutmico y serina) y los
condicionalmente indispensables que se sintetizan por vas complejas y
obligatoriamente, a partir de otros amino- cidos o su sntesis puede estar limitada
en situaciones fisiolgicas (prematuridad) o fisiopatolgicas (estrs catablico
severo o disfuncin metablica intestinal). A este grupo pertenecen la arginina,
cistena/cistina, glutamina, glicina, prolina y tirosina. Sus precursores son

glutamina/glutamato, aspartato, metionina, serina, cido glutmico, amonio, colina,

glutamato y fenilalanina respectivamente. (2)
Ms all de la funcin de aminocidos como unin de protenas, estos tienen otras
finalidades, con este respecto y tomando como primer ejemplo la metionina, el
aminocido codificado por el codon de inicio de los ORFs (ATG), resulta que
tambin se puede encontrar incorporado en un compuesto pequeo y, por as
decirlo original, la S-adenosilmetionina (SAM. En la estructura de la SAM se
combinan un aminocido esencial (metionina), a travs de su tomo de azufre, y
un nucleotido (ATP), que pierde su cadena trifosfato, generndose as el ms
importante donante de grupos metilo (-CH 3) de la clula. Los compuestos que se
metilan son muchos y variados, engloban desde pequeas molculas como
neurotransmisores, hasta protenas y ADN. Mediante las reacciones de metilacin
se puede tanto sintetizar nuevos compuestos (colina a partir de etanolamina)
como modificar su funcin (la metilacin de ADN o histonas regula la expresin de
genes), y en todas ellas surge como producto el SAM desmetilado, la Sadenosilhomocistena (SAH). Se trata nuevamente de un compuesto no proteico
que contiene un aminocido, la homocistena, y que al aumentar su concentracin
puede inhibir en muchos casos las reacciones de las que surge (metilaciones).
Una segunda muestra nos la proporciona la propia homocistena. Se trata de un
aminocido no esencial y que no est incluido en las cadenas proteicas recin
traducidas, aunque lo puede estar a posteriori mediante su modificacin
postraduccional (una vez generada la protena puede incorporar modificaciones a
los aminocidos de la cadena principal). Tambin se puede combinar con otro
aminocido, la serina, y generar as cistationina, un compuesto precursor de otro
aminocido, la cistena. ste tambin tiene otras utilidades adems de
incorporarse a protenas, y entre ellas la generacin de un tripptido muy
particular, el glutation (GSH), en el que se combina con otros dos aminocidos, la
glicina y el glutmico. Se genera as un tripptido en el que la cistena y el
glutmico forman un enlace peptdico entre el grupo amino del primero (-NH2) y el
carboxilo (-COOH) de la cadena lateral del segundo. Este compuesto es uno de
los reguladores del estado de oxidacin de las protenas, actuando bien como
receptor de protones en su forma oxidada (GSSG) o incorporndose a las
cadenas laterales de las protenas (glutationilacin). (3)
1.- O. Martnez Agustin, E. Martnez de Victoria Muoz. (2006).

Protenas y pptidos en nutricin enteral. 01 de Marzo de 2016,

de
Nutricin
Hospitalaria
Sitio
web:
http://scielo.isciii.es/pdf/nh/v21s2/original1.pdf
2.- Laura Gonzlez-Torres, Alfredo Tllez-Valencia* , Jos G.

Sampedro y Hugo Njera. (2007). Las protenas en la nutricin.

01 de Marzo del 2016, de RESPYN (Revista de salud pblica y

nutricin)
Sitio
http://www.medigraphic.com/pdfs/revsalpubnut/spn2007/spn072g.pdf

web:

3.- Ma. De los ngeles Pajares. (2010). Las otras utilidades de los

aminocidos. 01 de Marzo del 2016, de SEBBM Sitio web:

http://www.sebbm.es/web/es/divulgacion/rincon-profesorciencias/articulos-divulgacion-cientifica/293-las-otras-utilidadesde-los-aminoacidos
OBJETIVO
El alumno desarrollar conceptos tericos relacionados a la estructura de
protenas, as como mtodos generales y especficos para la identificacin de
pptidos y de aminocidos.

HIPTESIS
Identificar por mtodos qumicos-colorimtricos la presencia de pptidos y grupos
funcionales (grupos R) de algunos aminocidos que se encuentran en alimentos
naturales y procesados.

PROCEDIMIENTO
Desnaturalizacin Biuret

Plomo
para
cistena

HopkinsCole

Millon

Xantoprotica

3 tubos con clara de

huevo o 2 mL de
problema

1 mL de
problema +
2 mL de
NaOH 10%
bao
mara + 3

1
mL
de
problema + 5
gotas
de
Hopkins- Cole
+ 1 mL H2SO4
concentrado.

1 mL de
problema+ 2
a 5 gotas de
Millon
y
calentar
a
bao mara.

1
mL
de
problema + 1
mL
HNO3
concentrado,
calentar
y
enfriar + 1 mL

3 tubos con 2 mL de
suero

1 mL de
problema
+ 2 mL de
NaOH
10% + 3 a
5 gotas de

Tubo 1- a bao
mara
Tubo 2- 2 mL de HCl
Tubo 3- 2 mL EtOH

reactivo de
Biuret.

a 5 gotas
de acetato
de plomo
5%
y
calentar.
(Precipita
negro).

NH4OH
concentrado.

RESULTADOS

Experimento 1 (desnaturalizacin de protenas)

Tubo Clara de
huevo
1 (temperatura)
2 (HCl)

3 (EtOH)

Observacin por
condicin
Totalidad blanca
y slida.
Sup.
Transparente
e
inferior blanco.
Sup.
Transparente
e
inferior blanco.

Tubo suero
1 (temperatura)
2 (HCl)

3 (EtOH)

Observacin por
condicin.
Halo blanco ligero
sobrenadante.
Anillo
en
sobrenadante,
turbio.
Sup.
Turbio,
inferior
blanquecino.

Tabla 1. Observaciones de experimento de desnaturalizacin de dos soluciones

con alto contenido protico, sometidas a distintas condiciones.

Experimento 2. Reacciones coloreadas especficas.

Muestra
Albmina de
Huevo
Gelatina al 5%
Leche entera
Manzana
Suero de rata
1:10
Peptona al 5%
Tirosina al 1%
Triptfano al 1%
Cistena al 1%

Biuret Plomo

HopkinsCole

Xantoproti
Millon ca

+++
+++
+++
No

+++
No
++
No

+++
+++
+++
+++

+++
No
No
No

+++
No
+++
++

+++
+++
No
No
No

No
No
No

+++
+++

No
No
No
No

++
+
++
+++

+++
No

Tabla 2. Nivel de reaccin por muestra. Cada prueba se identifica con cruces,
siendo (+++) fuerte, (++) regular y (+) dbil, las soluciones problema que no
reaccionaron se identificaron con la palabra No.

Muestra Biuret
Albmi
na de
Huevo
Gelatin
a al 5%
Leche
entera
Manzan
a
Suero
de rata
1:10
Peptona
al 5%
Tirosina
al 1%
Triptfa
no al
1%
Cistena
al 1%

Plomo

Halo
morad Formacin de
o
color negro
Halo
morad
o
Negativa

Hopkins-Cole

Millon
Cogulo
rojo
Sup. Bco, halo
blanqueci
violeta, inf. Caf no
Sup. Rosa, halo
caf, inf.
Amarillo
Negativo

Halo
Divisin de fases, Sup. Bco, halo
morad precipitado verde violeta, inf.
o
oscuro
Amarillo
Sup. Caf, halo
Negati
violeta, inf.
vo
Negativa
Amarillo
Halo
Sup. Turbio, halo
morad
violeta, inf.
o
Negativa
Amarillo
Halo
Sup. Caf, halo
morad
violeta, inf.
o
Negativa
Transparente
Negati
vo
Negativa
Sup. Transp.,
Negati
halo violeta, inf.
vo
Transp.
Negati
vo
Negativa

Xantoproti
ca
Sup.
Amarillo,
interfase
blanca

Negativo

Transparent
e
Sup.
Amarillo,
interfase
blanca

Negativo

Amarillo
claro H

Negativo

Amarillo
claro H
Amarillo
transparent
eH
Amarillo
claro H

Negativo

Amarillo
fuerte H

Negativo
Negativo

Tabla 3. Descripcin fsica de los niveles de reaccin de cada muestra problema

para cada reactivo. En el caso de la reaccin Xantoprotica, la presencia de la
letra H indica que el color del tubo era homogneo.

Composicin reportada de protenas y aminocidos para las muestras

trabajadas durante la prctica:
Leche: cido asprtico, cido glutmico, alanina, arginina, cistena, fenilalanina,
glicina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, tirosina, hidroxiprolina, histidina,
isoleucina, triptfano, valina y treonina (aa), caseinato de sodio, (casenas alfa y
beta), alfa lactoalbmina, beta lactoglobulina, albmina del suero sanguneo e
inmunoglobilinas.
Gelatina: cido asprtico, cido glutmico, alanina, arginina, cistena, fenilalanina,
glicina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, tirosina, hidroxiprolina, histidina,
isoleucina, triptfano, valina y treonina (aa), su principal protena es el colgeno de
origen animal.
Albmina de huevo: Alanina, arginina, cido asprtico, cistina/cistena, cido
glutmico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina,
prolina, serina, treonna, triptfano, tirosina y valina.
Manzana: Arginina, cistena, glicina, lisina, valina, metionina, triptfano. Su
principal protena es la pectna.
Suero: su composicin se basa en tres tipos distintos de protena, a saber,
fibringenos, albminas y globulinas. Creatina, creatinina, crioglobulinas,
fibringeno, fenilalanina, glutatin, hepto y hemoglobina
Peptona: Es un hidrolizado de protena, especficamente de casena, sta a su vez
es una fosfoprotena con un residuo grande de prolina.
Tirosina, triptfano y cistena son aminocidos.

DISCUSIN
Experimento 1 (protena desnaturalizada)
Para el experimento 1 de desnaturalizacin, se sabe que los enlaces peptdicos
pueden ser rotos por distintos mtodos, ocasionando as la desnaturalizacin de la
protena, estos factores son principalmente la temperatura, el pH y la agitacin
(para pptidos de cadena corta). La desnaturalizacin de protenas puede derivar
en una modificacin fsica de la muestra, como pudo observarse, indicando las
condiciones de sta.

Tanto para el caso de la clara de huevo con un alto contenido de albmina y

casena, como en el caso del suero, que posee un alto contenido de albminas,
globulinas y fibringeno, se sabe que la desnaturalizacin lleva a un estado de
coagulacin protica mismo que fue observable (principalmente en la clara de
huevo) al formarse un precipitado blanco. Esta desnaturalizacin se llev a cabo
por dos factores, el pH (al emplear HCl que gener un pH cido de la muestra y
etanol, que funciona como base de Lewis y basifca el medio), y la temperatura,
pues a pesar de que la protena posee interacciones fuertes, el calentamiento
constante a ms de 60C logra la desnaturalizacin de ciertas protenas. Este
cambio tambin fue observable, aunque en menor grado, en las muestras de
suero de rata. La disminucin en el grado de evidencia de desnaturalizacin se vio
justificado a partir de la dilucin empleada (que redujo la concentracin de
protenas en solucin), de 1:10.

Experimento 2 (reacciones coloridas especficas)

Reaccin de Biuret
La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de
urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin
La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la
reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO 4 en solucin acuosa
alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto
de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los
iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte
de los enlaces peptdicos presentando un mximo de absorcin a 540 nm.
Dado entonces que esta reaccin es positiva para la presencia de enlaces
peptdicos (entre aminocidos), se esperaba que las muestras de leche, gelatina,
albmina de huevo, suero de rata y peptona, fueran positivas, pues stas
muestras tienen en su composicin un alto contenido protico, las muestras de
tirosina, triptfano y cistena, al tratarse de aminocidos per s, no se esperaban
positivas, esto gracias a que no existe un enlace peptdico entre dos o ms
aminocidos diferentes.
En el caso de la muestra de manzana, se esperaba tambin una reaccin positiva,
pues a pesar de ser una muestra con bajo contenido protico, tiene presencia de
protenas, no obstante el resultado fue negativo. Esto se puede explicar mediante
dos formas, la primera es que la concentracin de protena fuera tan baja que el
reactivo no alcanzara a detectarla y por lo mismo no se pudieran formar los
complejos de coordinacin Cu2+ - N con electrones libres. La otra explicacin es
que en la preparacin de la muestra se desnaturalizara accidentalmente la
cantidad protica de sta.

Reaccin entre enlace peptdico (amida) y Cu, el color se produce por el enlace
entre el Cu y los pares de electrones libres de los Nitrgenos participantes del
enlace peptdico, lo que reduce al cobre de Cu 2+ a Cu+.

Reaccin de plomo para cistena: Grupos sulfhidrilo

Los Aminocidos azufrados como Metionina, Cisteina y Cistina se reconocen por
la formacin de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que
se forman cuando reaccionan los grupos sulfhidrilo con Acetato de Plomo en
medio alcalino (NaOH 10%).

La reaccin descrita anteriormente es la reaccin que se lleva a cabo entre el

Acetato de plomo y la Cistena, como puede observarse, el producto es Sulfuro de
plomo que se forma gracias al medio bsico y a la energa aplicada mediante
calentamiento.
Esta reaccin es positiva para cualquier compuesto que posea un sulfhidrilo no
comprometido, por lo que se esperaba que la muestra de Cistena fuera positiva
en sta reaccin, dado que era el nico aminocido azufrado. No obstante no
hubo reaccin al realizar la prueba. En contraste la prueba fue positiva para las
muestras de albmina de huevo y leche entera (tambin rica en albmina, pero no
tanto como la muestra de huevo). La referencia (albumin.org) menciona que la
albmina est compuesta por 585 aminocidos, dentro de sta composicin
refiere una cadena cida larga (98 Glu + Asp) y una cadena bsica corta (83 Lys +
Arg), 17 residuos de cistena y 6 bipptidos de glutamilcistina (Glu-Cis); en la
lactoferrina, 17 residuos de cistina y 4 bipptidos Glu-Cis y en residuos de cistina,

4 de lacto-albmina alfa. Esto explica entonces la respuesta positiva a la reaccin

con Acetato de plomo.
En cuanto al aminocido cistena que no dio positivo a la reaccin, siendo sta la
nica tcnica para identificar a ste aa en especfico y no habiendo otra forma de
corroborar que se emple el reactivo correcto de Cistena, se sugiere que el
aminocido trabajado no fue el adecuado.
El suero de rata, el cual tambin se esperaba diera positivo en esta reaccin por
tratarse de un producto con albmina en su composicin, no dio positivo,
atribuible, probablemente a la baja concentracin de suero en dilucin a razn de
1:10.

Reaccin de Hopkins-Cole (indol Triptfano)

Es especfica del grupo indol caracterstico del Triptfano. El anillo del indol se
hace reaccionar con cido Glioxlico en presencia de cido Sulfrico concentrado
para formar un compuesto violeta que se forma en la interfase entre la solucin de
protena y el cido sulfrico.
La estructura exacta del compuesto violeta no se conoce, pero parece estar
relacionado con el producto de condensacin del aldehdo del cido Glioxlico con
los nitrgenos de dos anillos indlicos, como se muestra en la reaccin, ya que
tambin se pueden formar complejos con otros aldehdos.
La reaccin de Hopkins Cole es positiva slo para las protenas que contienen
Triptfano. Se supone que el cido concentrado hidroliza las protenas en la
interfase liberando el Triptfano para dar el producto violeta. Sin embargo, el
Triptfano puro en solucin no da positiva la reaccin, a menos que se agreguen
agentes oxidantes, por lo que es de suponer que el Triptfano de las protenas no
se libera como tal, por lo cual la reaccin presentada es slo parcialmente
correcta.

Reaccin llevada a cabo entre el triptfano y el cido Glioxlico en cido Sulfrico,

produciendo la unin de dos triptfanos a partir de sus grupos indol mediante la

presencia del cido glioxlico, la reaccin tiene como subproducto la formacin de

agua.
En cuanto a los resultados de sta prueba, todas las muestras dieron positivo,
presentando el halo violeta divisor entre la fraccin protica y la acida,
correspondiente a los grupos indol. Esto es congruente con el hecho de que todos
los analitos muestreados poseen diferentes aminocidos en su composicin, entre
ellos el triptfano, por lo que el resultado es el esperado, con la salvedad de la
muestra del aminocido per se, como se refiere anteriormente, el aminocido no
es capaz de dar positivo dado que no se encontraba en presencia de agentes
oxidantes que pudieran apoyar en la generacin de la carga del Nitrgeno para
llevar a cabo la reaccin, no obstante podra suponerse que por encontrarse en
solucin (agua con pH cercano a 6), el Triptfano sera capaz de generar la carga
necesaria en el grupo indol para favorecer la aparicin de la interfase.

Reaccin de Milln
Es especfica para el grupo fenlico por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen esta funcin, como la Tirosina y todas las protenas que
contengan Tirosina. El primer paso de la reaccin de Millon consiste en la nitracin
del anillo fenlico de la Tirosina, por el cido Ntrico del reactivo. La Tirosina
nitrada forma complejos con los iones Mercurioso Hg(I) y Mercrico Hg(II) del
reactivo produciendo un precipitado rojo o una solucin roja, ambos resultados
positivos. Algunas protenas pueden formar el precipitado rojo desde el inicio,
mientras que otras primero forman un precipitado blanco, que se debe calentar
para dar el color rojo indicativo de la presencia de Tirosina. Cualquier sustancia
con un grupo fenlico dar positiva la reaccin de Millon y puede interferir con la
deteccin de Tirosina.

Se observa aqu como el fenilo, al cual es fcil introducir grupos por su alta
reactividad en presencia de energa, es nitrado mediante el reactivo de Milln, no
obstante no es la nitracin lo que produce el color rojo de la muestra, sino la
reduccin del Mercurio dada a partir de sta nitracin.

En esta prueba slo la leche dio positivo mostrando un precipitado coagulado

(este ltimo efecto por la desnaturalizacin ocasionada a razn de la temperatura
elevada y constante en el bao mara) de color blanquecino con un ligero tono
rojo. La prueba se esperaba positiva para la leche, la gelatina, la albmina, el
suero y la tirosina, no obstante, slo la leche dio el color rojizo, para el resto de las
muestras (salvo la manzana, el triptfano y el peptona), slo se observ un vire a
un color blanquecino, por lo que se sugiere que a la reaccin le falt tiempo de
calentamiento (aplicacin de energa), para que se llevara a cabo la doble
nitracin y el nmero de oxidacin del mercurio se viera modificado.

Reaccin Xantoprotica
Algunos aminocidos como Fenilalanina, Tirosina y Triptofano, tienen anillo
aromticos derivados de benceno y por ello tiene las propiedades qumicas del
benceno y sus derivados. Una de estas propiedades es la reaccin de nitracin del
anillo bencnico con cido Ntrico concentrado. Los anillos Benceno de Tirosina y
Triptofano estn activados y reaccionan fcilmente, mientras que el benceno de la
Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y reacciona con ms dificultad.
El nombre de la reaccin se deriva del griego xantos, que significa amarillo, que es
el color caracterstico de la reaccin positiva. El color amarillo se intensifica en
medio alcalino. Esta reaccin es la que provoca el color amarillo cuando se salpica
la piel con cido Ntrico concentrado, las protenas de la piel tienen Tirosina y
Triptfano, los cuales al nitrarse, le dan a la piel un color amarillo caracterstico.

Como puede observarse en la reaccin, la presencia del cido ntrico y la

aplicacin de energa promueven la nitracin, considerando que el anillo se
encuentra ya activado con la presencia del hidroxilo, circunstancia que facilita la
reaccin. Se puede observar tambin que gracias a la presencia del medio cido,
el aminocido del ejemplo (triptfano) pasa de una forma zwitterinica (carga
neutra total), a una forma catinica por exceso de protones del medio cido, y
posteriormente a una forma aninica.

Para esta prueba todas las muestras dieron positivo demostrando que en su
composicin haba algn aminocido con un anillo aromtico, circunstancia cierta
pues todas las muestras posean ya fuera tirosina o triptfano en su composicin.
La nica muestra que no result positiva fue la gelatina, circunstancia
incongruente con el ensayo de Milln, y el de Hopkins-Cole, que demostraban la
presencia tanto de triptfano como de tirosina, por lo que se podra explicar ste
suceso con un error en el rtulo del tubo, pudiendo haber aadido cistena en
lugar de gelatina, dado que la cistena es una estructura aliftica.
La aparicin de un sobrenadante blanco en las muestras de leche y albmina de
huevo se pueden justificar por el medio cido en el que se encontraban, que pudo
haber promovido la desnaturalizacin y posterior coagulacin de las protenas,
dado que stas dos eran las que mayor concentracin protica contenan.

CONCLUSIN
La desnaturalizacin provoca, generalmente, una disminucin de la solubilidad de
las protenas, que pueden precipitar, sto es, las protenas se coagulan
(solidifican) o aparecen grumos en la disolucin. Ello se debe a la prdida de su
estructura globular, que pasa a filamentosa, de manera que quedan expuestos al
agua tanto los residuos polares (hidrfilos) como los apolares (hidrfobos),
responsables de la prdida de solubilidad.
Los factores que provocan la desnaturalizacin pueden ser fsicos (variaciones de
T o presin) o qumicos (cambios de pH, presencia de iones, urea, etc.).
Si los cambios ambientales son poco intensos o de corta duracin, la
desnaturalizacin es temporal y reversible y, una vez que se recuperan las
condiciones iniciales, la protena vuelve a plegarse hasta alcanzar la conformacin
nativa. Pero si los cambios ambientales son intensos o de larga duracin, la
desnaturalizacin es permanente e irreversible, de forma que la protena no
recupera su conformacin nativa ni sus propiedades biolgicas.
Dentro de las reacciones realizadas durante esta prctica, se modificaron
severamente las condiciones de pH y temperatura de las muestras por lo que
adems de mostrar un resultado especfico a la reaccin mediante color, las
muestras con altas concentraciones proticas (leche, albmina de huevo y
gelatina en ocasiones), evidenciaron una desnaturalizacin a partir de la aparicin
de sobrenadantes o cogulos blanquecinos en el tubo de reaccin. Esto no
significa que los otros tubos no presentaran esta circunstancia, sino que por las
bajas concentraciones de las soluciones (1% y 1:10), los cambios resultaban un
poco ms difciles de evidenciar.

CUESTIONARIO
1. Qu son las protenas?
Las protenas son biomolculas de elevado peso molecular (macromolculas) y
presentan una estructura qumica compleja. Sin embargo, cuando se someten a
hidrlisis cida, se descomponen en una serie de compuestos orgnicos sencillos
de bajo peso molecular: los - Aminocidos. Estos aminocidos se encuentran
enlazados entre s mediante enlaces peptdicos (amino-carboxilo)
2. Cul es la funcin de las protenas en los seres vivos?
Poseen varias funciones entre las que se encuentran el sostn, proteccin,
transporte, constitucin, como catalizadores de reacciones internas, entre otras.
3. Cul es la reaccin qumica que une a dos aminocidos?

4. Cmo se clasifica a los aminocidos?

Se clasifican en: alifticos, aromticos, azufrados, hidroxilados y bsicos. La
clasificacin puede variar aadiendo los grupos con carga positiva y negativa,
polar y no polar, etc.
5. Qu es la desnaturalizacin de las protenas?
Es el rompimiento de los enlaces peptdicos a partir de cambios en las condiciones
de temperatura (aumento), pH (aumento o disminucin) o presin entre otros.
Estas rupturas eliminan la configuracin globular de las protenas dejndolas a
manera de fibras con los extremos hidrofbicos e hidroflicos expuestos, se
vuelven ms insolubles en solventes polares y pueden llegar a coagular. La
desnaturalizacin puede ser permanente o transitoria dependiendo de las
condiciones.
6. Mecanismos de reaccin de cada prueba.
Reaccin de Biuret

Reaccin de Plomo

Reaccin de Hopkins-Cole

Reaccin de Milln

Reaccin Xantoprotica

7.- Qu es Tripsinizacin?
La tripsinizacin es una tcnica permite separar las clulas de su soporte
mediante un enzima, la tripsina, que rompe las uniones de las clulas al soporte
de un cultivo, as como las uniones entre las clulas de un tejido. Este proceso
debe realizarse con cuidado ya que la tripsina tambin es capaz de destruir las
clulas por digestin total. Cuando las clulas se hayan separado deben aadirse
a una placa con medio o suero. En el suero hay molculas que inhiben a la
tripsina, parando la reaccin impidiendo as la destruccin de las clulas.
8.- Qu es protemica?
Es el estudio de las protenas desde un punto de vista integral que incluye
diversas tcnicas y el apoyo de otras ciencias como la genmica. Se vale de la
Bioinformtica para recolectar los datos obtenidos.
9.- Para qu se utiliza la espectrofotometra de masas?
La Espectrometra de Masas es una poderosa tcnica microanaltica usada para
identificar compuestos desconocidos, para cuantificar compuestos conocidos, y
para elucidar la estructura y propiedades qumicas de molculas. La deteccin de
compuestos puede ser llevada a cabo con cantidades realmente pequeas
(algunos pmoles) de muestra y obtener informacin caracterstica como el peso y
algunas veces la estructura del analito.
En todos los casos, alguna forma de energa es transferida a las molculas a
analizar para afectar la ionizacin. En la tcnica clsica de impacto electrnico
(electron ionization EI), algunas de las molculas ionizadas del analito explotan
en una variedad de fragmentos ionizados, el patrn de fragmentacin resultante
as como los iones residuales constituyen el espectro de masas.
10.- Qu es un punto isoelctrico?
Existe un pH para el cual la carga elctrica media de las molculas es cero. Este
pH se llama punto isoelctrico (pI). El pI es el pH en el que la molcula se disocia
por igual en ambos sentidos, y como equidista de los dos valores de pK, puede
obtenerse por su semisuma:

pI =

pK 1+ pK 2
2

As, para la glicina (pK1=2,22 y pK2=9,86, el pI vale 6,04. As, a pH=6,04 la

immensa mayora de las molculas de glicina estaran en forma de iones hbridos
(zwitterin) y no se desplazaran hacia ningn polo al aplicarles un campo
elctrico.