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PROFESORES AL DA (BIOMEDICINA)

Trabajos de revisin de
un campo de frontera, de
manera que sea utilizable
para la docencia

Especies reactivas de oxgeno


y sistemas antioxidantes:
aspectos bsicos
Noem Crdenas-Rodrguez y Jos Pedraza-Chaverri*

Abstract (Reactive oxygen species and antioxidant


systems: basic concepts)
Molecular oxygen is indispensable for aerobic organisms, as
the final acceptor of electrons derived from the normal
cellular metabolism at the end of the mitochondrial respiratory chain. However, oxygen also is toxic under some con ditions. The oxygen paradox is that oxygen is dangerous
to the same life-forms for which it has become an essential
component of energy production.
Oxygen toxicity may be explained by the formation of
reactive oxygen species ( ROS) (including oxygen free radicals) which may oxidize biological macromolecules when
there is an excessive ROS production and/or when the antioxidant systems are decreased. Excessive ROS production is
associated with several pathological diseases.
This review provides a basic overview of the ROS chemistry
and the antioxidant systems and will introduce the reade r to
the most important concepts of this broad topic of study.

Introduccin
El oxgeno molecular (O2) o dioxgeno es uno de los gases
ms importantes de la Tierra. Constituye el 21% de la
atmsfera, 89% del peso del agua del mar y al menos el 47%
de la corteza terrestre. La atmsfera terrestre est constituida
por los siguientes componentes:

Nitrgeno: 78.08%
Oxgeno: 20.95%
Argn: 0.93%
Bixido de carbono: 0.03%
Nen: 0.0018%
Helio: 0.0005%
Criptn: 0.0001%
Hidrgeno: 0.00006%

Autor para recibir correspondencia. Departamento de Biologa, Facultad de Qumica, Edificio B, Lab 209, Ciudad Universitaria, UNAM04510
Mxico, D.F. Mxico.
Telfono y fax: (55) 56 22 35 15
Correo electrnico: pedraza@servidor.unam.mx
Recibido: 23 de junio de 2005; aceptado: 2 de agosto de 2005.
164

Ozono: 0.00004 %
Xenn: 0.000008 %
El oxgeno atmosfrico es producido por la oxidacin del
agua por el complejo de ruptura del agua del fotosistema I
de las clulas fotosintticas durante la fase luminosa de la
fotosntesis:
2H2O O2 + 4H+ + 4e

(1)

En los organismos aerobios el oxgeno es el ltimo aceptor


de los electrones en la cadena respiratoria en donde se forma
agua. La enzima citocromo c oxidasa, el complejo IV de
transporte de electrones, reduce completamente el oxgeno
a agua por la adicin de cuatro protones y 4 electrones.
O2 + 4H+ + 4e 2H2O

(2)

A esta reaccin tambin se le conoce como reduccin tetravalente del oxgeno, indicando que este complejo reduce
completamente al oxgeno y no libera especies parcialmente
reducidas. Las reacciones 1 y 2 establecen un ciclo entre los
organismos productores y consumidores de oxgeno.
Dado el uso frecuente de los trminos oxidacin y
reduccin en esta revisin, stos se definen en la tabla 1 junto
con los trminos agente oxidante y agente reductor
Acoplado al proceso de respiracin o consumo de oxgeno, las clulas sintetizan la mayor parte del adenosn
trifosfato (ATP) que se requiere para los diversos procesos
celulares. A estos dos procesos acoplados (la oxidacin de
los acarreadores de electrones reducidos NADH y FADH 2
y el transporte de los electrones hasta el O2 para formar H2O
y la sntesis de ATP a partir del ADP) se le conoce como
fosforilacin oxidativa.
El oxgeno no slo se requiere en la respiracin; hay
muchas enzimas que tambin lo utilizan. Una lista parcial de
estas enzimas se presenta en la tabla 2.
Adems el oxgeno juega un papel esencial en la qumica de los radicales libres, razn por la cual resulta de importancia definir algunos conceptos bsicos para entender la
importancia del mismo no slo en el proceso respiratorio
sino tambin en el metabolismo celular.

Educacin Qumica 17[2]

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Tabla 1. Diferencias entre el proceso de oxidacin y el proceso de reduccin (Halliwell y Gutteridge, 1999).
Trmino
Oxidacin

Definicin

Ejemplo

Proceso qumico que implica:


Ganancia de oxgeno

C + O2 CO2 (El tomo de C se oxida a dixido


de carbono).

Prdida de electrones
Reduccin

Na Na+ + e (El atmo de Na se oxida al catin


Na con prdida de un electrn).

Proceso qumico que implica:


Prdida de oxgeno

CO2 + C 2 CO (El CO2 es reducido a CO mientras


que el C es oxidado a CO).

Ganancia de hidrgeno

C + 2H2 CH4 (El tomo de C es reducido a


metano).
Cl + e Cl (El tomo de Cl es reducido al in Cl
con ganancia de un electrn).

Ganancia de electrones
Agente oxidante

Es un compuesto qumico que oxida a otro compuesto, ya sea


tomndole electrones o hidrgeno o bien adicionndole
oxgeno con su correspondiente reduccin.

Agente reductor

Es un compuesto qumico que reduce a otro compuesto, ya sea


donndole electrones o hidrgeno o bien removindole
oxgeno con su correspondiente oxidacin.

Radicales libres
Un radical libre ( RL) se define como cualquier especie
qumica, ya sea atmica o molecular, capaz de existir inde pendientemente, que contenga uno o ms electrones desapareados (que ocupan por s mismos un orbital molecular o
atmico), ya sea por ganancia o prdida de un electrn de
un no radical o por la ruptura homoltica de una molcula:
X e + X.+ Radical formado por la prdida de un
electrn de un no radical.
Y + e Y. Radical formado por la ganancia de un
electrn de un no radical.

Tabla 2. Algunas enzimas que requieren oxgeno.


Sintasa de xido ntrico
Hemo oxigenasa
Xantina oxidasa
NADPH oxidasa
Acil CoA desaturasa
Triptofano 2,3 dioxigenasa
Citocromo P450
Escualeno monooxigenasa
Desmolasa
Fenilalanina hidroxilasa
Abril de 2006

A:B A + B. Radicales formados por la ruptura


homoltica de una molcula.
La presencia de electrones desapareados modifica la reactividad qumica de un tomo o de una molcula, y suele ser
ms reactiva que su correspondiente no radical. Sin embargo, la reactividad qumica de los diferentes tipos de radicales
libres es muy variable.
Es importante mencionar que los RL existen como
derivados de muchos elementos o molculas qumicas, y los
ms importantes desde el punto de vista biolgico son los
derivados del oxgeno y del nitrgeno principalmente, aunque tambin destacan los derivados del hidrgeno y del
carbono, as como los formados por los metales de transicin
como el hierro y el cobre, entre otros.
Toxicidad del oxgeno
Aunque el oxgeno es indispensable para la vida de los
organismos aerobios, a altas concentraciones o bajo ciertas
condiciones a la concentracin normal llega a ser txico. A
este hecho contrastante se le conoce como la paradoja del
oxgeno. La toxicidad del oxgeno se puede explicar por la
formacin de las especies reactivas de oxgeno (ERO). Estas
especies, como posteriormente se explicar, son ms reactivas que el oxgeno en su estado basal de triplete. Las principales especies son: (a) las que se producen por la ruptura o
la excitacin del oxgeno (oxgeno atmico, ozono y el
oxgeno singulete) y (b) las parcialmente reducidas (anin
165

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superxido, perxido de hidrgeno y radical hidroxilo)


(Hansberg, 2002).
As, la presencia de las ERO ha sido asociada al proceso
de envejecimiento, a los daos ocasionados por la isquemiareperfusin y a una amplia diversidad de estados patolgicos
como la enfermedad de Alzheimer, la artritis reumatoide, la
hipertensin, la catarognesis y la carcinognesis, entre
otros.
ERO: estructura electrnica y formacin
Como ya hemos visto, el oxgeno es indispensable para la
vida de los organismos aerobios pero tambin puede formar
diversas ERO, cuya excesiva produccin est asociada a
muchos desrdenes patolgicos.
Debido a lo anterior, es muy importante analizar las
estructuras del oxgeno y la estructura y la formacin de
las especies reactivas de oxgeno y conocer las ms impor tantes pues a lo largo de esta revisin sern mencionadas
continuamente.
Estructura electrnica del dioxgeno y del oxgeno singulete
Para entender la reactividad del oxgeno molecular o dioxgeno (porque son dos tomos de oxgeno atmico unidos por
un enlace covalente, O2), debemos entender su estructura
electrnica. Una de las caractersticas interesantes del oxgeno es el hecho de que tiene dos electrones desapareados (que
no estn unidos cada uno con otro electrn) ocupando cada
uno de ellos dos diferentes orbitales moleculares externos
(en el orbital * pi antienlace ver tabla 3). Este tipo de
estructura es llamado estado basal o estado triplete y significa
que el oxgeno es un birradical, pues los radicales son
usualmente ms reactivos tratando de encontrar otro electrn con quien establecer un par (recordando que un RL por
definicin tiene al menos un electrn desapareado). Sin
embargo, como se observa en la tabla 3, el dioxgeno posee
estos dos electrones en giro paralelo (el espn nuclear representado por la punta de la flecha se encuentra haca
arriba) y esto le dificulta tomar dos electrones libres con giro
antiparalelo (donde el espn nuclear representado por la
punta de la flecha se encuentra hacia bajo) a la vez, por ello
slo puede recibir estos electrones de uno en uno para cada
orbital molecular externo. Esto explica por qu en su estado
basal y a temperatura ambiente el oxgeno reacciona muy
poco, a pesar del hecho de ser un birradical.
A la adicin sucesiva de electrones a la molcula de
oxgeno se le conoce como reduccin univalente (reaccin
3) y esto produce especies parcialmente reducidas de oxge no. Esto contrasta con la reduccin tetravalente del oxgeno
catalizada por la citocromo oxidasa en donde no se producen
estas especies parcialmente reducidas.
Cuando uno de los electrones desapareados del oxgeno
166

+e

O2
Dioxgeno

O2

+e

+e

Anin
superxido

H2O2
Perxido de
hidrgeno

+e

OH H2O
Radical
hidroxilo

(3)

Agua

absorbe energa e invierte su rotacin (giro), se forma el


oxgeno singulete (1O2). Existen dos formas del oxgeno
singulete: la sigma () que es un radical libre, debido a que
conserva los dos electrones desapareados en los orbitales
moleculares externos 2* (cada electrn en un orbital) como
en el caso del dioxgeno, la diferencia radica en que un
electrn tiene giro paralelo y otro electrn tiene giro antiparalelo, y la delta (), la cual tambin posee dos electrones,
aunque en este caso se encuentran apareados en un solo
orbital 2*, por lo que no es un radical libre (de acuerdo con
la definicin de RL no posee ningn electrn desapareado,
por ello ya no se considera radical). El oxgeno singulete en
su forma posee una energa de37.5 kcal, mientras que en su
forma es de 22.4 kcal. La forma es muy inestable y por
ello en los sistemas biolgicos slo tiene importancia el
segundo. En la tabla 3 se puede observar la configuracin
electrnica del dioxgeno, oxgeno singulete y del anin
superxido.
Formacin de las ERO
La expresin especies reactivas de oxgeno es un trmino
colectivo que involucra no slo los RL derivados del oxgeno, sino tambin a los no radicales derivados de la reduccin
molecular del oxgeno, y que adems son muy reactivos,
como el H 2O2 y el cido hipocloroso (HOCl). En la tabla 4
se presenta una lista ms completa de radicales y no radicales
Oxgeno singulete: Como ya vimos anteriormente, existen
dos formas, la sigma y la delta , y que es la primera la que
es un RL. Esta especie se forma por la inversin en el espn
de uno de los electrones desapareados de uno de los orbitales
moleculares externos de la molcula de oxgeno (recordando que un electrn tiene un giro paralelo en un orbital y otro
electrn tiene un giro antiparalelo en otro orbital), como se
explic anteriormente.
Tabla 3. Configuracin electrnica de algunas molculas de
oxgeno diatmico en el orbital 2*
Especie de oxgeno

Configuracin electrnica
en el orbital 2*

Dioxgeno (O2)

Oxgeno singulete ( O2)


forma 1
forma 1
.

Superxido (O2 )

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De la misma forma, la formacin de oxgeno singulete


es llevada a cabo por fagocitos activados, los cuales son
clulas que forman parte del sistema inmunolgico de los
seres vivos (por ejemplo los monocitos y macrfagos), y que
son estimuladas cuando ya existe o hay posibilidad de dao
a las clulas (como bien sera la inhalacin o consumo de
compuestos txicos y/o colonizacin bateriana) pues liberan
enzimas tal como proteasas y ERO para combatir este dao.
A continuacin se muestran algunas de las reacciones de
produccin de esta ERO (Eberhardt, 2001):
2O2. + 2H+

H2O2 + 1O2

(4)

HOCl + H2O2 HCl + H2O + O2


1

OCl + H2O2

(5)

H2O + Cl + 1O2

(6)

Anin superxido: La formacin del radical superxido


ocurre por la reduccin univalente del oxgeno; es decir,
cuando el oxgeno acepta un electrn, reaccin que se puede
llevar a cabo despus de varios eventos. Esta especie es
relativamente inestable y se encuentra en equilibrio con su
cido conjugado, el radical hidroperoxilo. El anin super xido tiene una funcin importante in vivo, ya que participa
en la descarga respiratoria (aumento sbito del consumo de
oxgeno) de las clulas fagocticas activadas por contacto con
partculas extraas en los eventos inmunolgicos. Cuando
estas clulas se activan, el complejo enzimtico NADPH
(forma reducida de nicotinamida adenn dinucletido fosfato) oxidasa, localizado en la membrana citoplasmtica, reduce parcialmente el oxgeno de la siguiente forma:
NADPH oxidasa

2O2 + NADPH + H+

O2. + NADP+ + 2H+

(7)

De la misma forma, la xantina oxidasa ( XO) es capaz de


reducir la molcula de oxgeno para dar el anin radical
superxido de acuerdo a la siguiente reaccin:

Xantina + O2 + H2O cido rico

.
2

O +H

(8)

Perxido de hidrgeno: El perxido de hidrgeno es for mado por la enzima superxido dismutasa SOD). Aunque no
es un radical libre, tiene una gran lipofilicidad que le permite
atravesar las membranas celulares y reaccionar con el anin
superxido en presencia de metales de transicin, para
generar el radical hidroxilo. Por esta razn se le considera
un oxidante importante en las clulas de los organismos
aerobios.

Abril de 2006

SOD

Radicales

No-radicales

Superxido (O2 )

Oxgeno singulete ( 1O2) forma1

Hidroxilo (OH)

Perxido de hidrgeno (H2O2)

Peroxilo (RO2)

Ozono (O3)

Alcoxilo (RO)

Anin peroxinitrito (ONOO )

Hidroperoxilo (HO2)

cido hipocloroso (HOCl)


cido hipobromoso (HOBr)

Un grupo de flavoenzimas localizadas en el retculo endoplasmtico del hgado y el rin son importantes en el
metabolismo de los aminocidos y producen perxido de
hidrgeno, de acuerdo con las reacciones (Eberhardt, 2001):
D-aminocido + H 2O + E-FAD -cetocido
+ NH
3 + E-FADH2
E-FADH2 + O2 E-FAD + H2O2
L-aminocido + H2O + E-FMN -cetocido + NH3
+ E-FMNH2
E-FMNH2 + O2 E-FMN + H2O2

2 + H2O2

(9)

(10)

Radical hidroxilo: El radical hidroxilo es considerado una


de las especies oxidantes ms dainas por su vida media
corta y alta reactividad, y suele actuar en los sitios cercanos
a donde se produce. La formacin del radical hidroxilo
puede lograrse fcilmente por la reaccin de Haber-Weiss
entre el anin superxido y el perxido de hidrgeno cata lizada por un metal de transicin (Halliwell y Gutteridge,
1999).
O2. + H2O2

Fe2+/Fe3+

O2 + OH + OH

(11)

La reaccin (11) es la suma de la reaccin de Fenton


(reaccin 12) y de la reaccin (13):
Fe2+ + H2O2 Fe3+ + OH + OH.

XO

2O2.- + 2H+

Tabla 4. Especies reactivas de oxgeno.

Fe3+ + O2.

Fe2+ + O2

(12)
(13)

Ahora bien, el radical hidroxilo tambin se puede for mar a partir del cido hipocloroso:
HOCl + O2.

OH. + Cl + 1O2

(14)

Anin peroxinitrito (ONOO ): Este anin puede formarse


por la combinacin del radical xido ntrico (NO .) y O2.:

NO + O2

ONOO

(15)

El ONOO es un potente oxidante que induce nitracin


de tirosina, lipoperoxidacin y citotoxicidad. Se ha encon167

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trado involucrado en varios estados patolgicos (Chirino,


Hernndez-Pando y Pedraza-Chaverr, 2004). Un exceso en
la produccin de O2. puede contrarrestar los efectos vasodilatadores del NO. (por medio de la reaccin 15) induciendo
vasoconstriccin.
cido hipocloroso: Las peroxidasas son un grupo de enzimas que remueven el perxido de hidrgeno para oxidar a
otro sustrato. Una peroxidasa, en este caso, la mielo-peroxidasa (MPO), presente en altas concentraciones en los grnulos de los neutrfilos, cataliza la conversin de perxido de
hidrgeno a cido hipocloroso de acuerdo a la siguiente
reaccin:
Cl + H2O2

MPO

HOCl + OH

(16)

La MPO tambin cataliza la oxidacin de los iones Br ,


I y SCN.
El sistema MPO-H2O2-Cl ha sido estudiado ampliamente, porque la reaccin de cido hipocloroso y perxido
de hidrgeno puede producir oxgeno singulete (Eberhardt,
2001).
Ozono: El ozono (O 3) es un gas triatmico de color azul
plido y constituye una capa protectora de la radiacin solar
en la atmsfera superior. El ozono es producido por la
fotodisociacin de la molcula de oxgeno lo que genera dos
tomos de oxgeno monoatmicos, los cuales posteriormente reaccionan con el dioxgeno.

molculas deben ser reparadas (tal como el ADN) o incluso


reemplazadas (tal como muchos tipos de protenas oxidadas). As, por ejemplo, algunas protenas en cuya estructura
se encuentra el grupo prosttico hierro-azufre (Fe-S) impor tantes para el metabolismo de E. coli pueden ser daadas por
la niveles de 0.1-0.2 M de O2. (Halliwell y Gutteridge,
1999).
De acuerdo con lo anterior, es importante dar un pano rama general sobre el dao oxidativo de las ERO a las
macromolculas biolgicas ms abundantes: ADN, lpidos y
protenas, por el papel tan importante que desempean en
el organismo, recordando que en forma principal el ADN
constituye el material gentico, los lpidos son una rica fuente
de energa durante el ayuno y las protenas tienen funcin
estructural, entre muchas otras.

Energa solar

O2
O2 + O

2O
O3

(17)

Sin embargo, el ser humano tambin est expuesto al


O3 pues ste se puede formar por las reacciones fotoqumicas
entre los xidos de nitrgeno y los hidrocarburos. Yaque es
un poderoso agente oxidante puede producir inflamacin y
dao pulmonar.
Hidroperoxilo: Este radical es formado cuando se lleva a
cabo la dismutacin espontnea del superxido, y esto ocurre slo cuando uno de los dos superxidos se protona.
Peroxilo, alcoxilo: Estos radicales se forman durante la
ruptura de los perxidos orgnicos y durante la reaccin de
radicales con tomos de carbono con oxgeno (RO2.)
Efectos de las ERO sobre las macromolculas
biolgicas
En los organismos aerobios, la produccin de ERO est
controlada por los mecanismos antioxidantes de defensa
(como posteriormente se describirn). Sin embargo, este
equilibrio se pierde cuando hay una excesiva produccin de
ERO o una deficiencia de los mecanismos antioxidantes lo
que conlleva a daos a las molculas. Muchas de estas
168

Efectos sobre los cidos nucleicos


Las ERO daan al cido desoxirribonucleico (ADN) al reaccionar con las bases nitrogenadas y con la desoxirribosa. El
dao oxidativo al ADN es de extrema importancia, debido
a que las bases nitrogenadas daadas pueden generar mutaciones que a su vez pueden resultar en carcinognesis,
apoptosis, necrosis y aun enfermedades hereditarias. En
relacin con esto, se han detectado ms de 20 tipos de
modificaciones estructurales de las bases. Se ha observado
que en presencia de las ERO se fragmenta el ADN y aparecen
fragmentos internucleosomales, formados por la ruptura de
ADN entre los nucleosomas (estructuras fundamentales para
la organizacin del ADN dentro de los cromosomas), ocasionando con ello problemas en la compactacin y enrolla miento del ADN dentro de la cromatina y con ello, alteraciones en las propiedades funcionales de la misma cromatina,
la cual juega un papel importante en la regulacin de la
transcripcin gnica.
Existen mecanismos de reparacin del ADN que se
activan en el momento en que ste sufre modificaciones
oxidativas. Cuando las ERO alcanzan el ncleo o se generan
dentro de este por reaccin de Fenton, estos mecanismos de
reparacin funcionan de manera eficiente, ya que continuamente revisan que exista una adecuada secuencia de bases
en la molcula de ADN y en caso de existir alguna mutacin
(ya sea ruptura, entrecruzamiento o eliminacin de bases)
reparan el dao causado. Se ha reportado que el mecanismo
de reparacin por escisin de bases es el ms importante en
el caso de la modificacin oxidativa. Cuando la modificacin
afecta regiones ms extensas del ADN, acta el sistema de
reparacin por escisin de nucletidos, removiendo todo el
segmento daado a travs de una nucleasa, para ser reem plazado por la ADN polimerasa I y la ligasa.
Educacin Qumica 17[2]

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Efectos sobre los lpidos


El efecto principal de las ERO sobre los lpidos es la lipoperoxidacin, que se produce al contacto con los lpidos de las
membrana con un agente oxidante, como cualquiera de
las ERO. En esta reaccin el radical libre formado oxida una
cadena insaturada de lpido, dando la formacin de un lpido
hidroperoxidado y un radical alquilo. El alquilo reacciona con una molcula de oxgeno y regenera la especie inicial,
constituyendo una reaccin que se repite. Esta lipoperoxidacin trae como consecuencia alteraciones en la estructura
de la membrana, afectando su fluidez y provocando dao en
su integridad. La peroxidacin de los lpidos genera especies
como el malondialdehdo y el 4-hidroxi-2-nonenal, los cuales
son considerados como citotxicos, ya que pueden funcionar
como agentes electroflicos capaces de interactuar con otros componentes celulares, principalmente protenas y ADN. Cabe
mencionar que la lipoperoxidacin es un proceso identificado
en enfermedades cardiovasculares. Uno de los procesos impo rtantes es la oxidacin de las lipoprotenas de baja densidad,
efecto que se ha correlacionado con la aterosclerosis.
Efectos sobre las protenas
Uno de los aspectos ms crticos del estrs oxidativo es el
dao causado a las protenas, debido a que puede causar la
prdida de la actividad cataltica de enzimas, daos en
la integridad de protenas estructurales o interrumpir la re gulacin de las vas metablicas. A diferencia de los cidos
nucleicos, los sistemas de reparacin de las protenas slo se
limitan a los residuos de metionina, por lo que las protenas
oxidadas deben ser hidrolizadas para evitar su difusin en la
red metablica o su interaccin con otras protenas.
Los efectos de las ERO sobre las protenas son: la oxidacin
de residuos de los aminocidos, el rompimiento de los e laces
peptdicos y la agregacin entre protenas. Se ha vinculado
una amplia diversidad de enfermedades con la presencia de
las protenas oxidadas, algunas de sas son: la enfermedad
de Alzheimer, la artritis reumatoide y la catarognesis.
Estrs oxidativo
Por diversas causas puede perderse el balance entre condi ciones oxidantes y defensas antioxidantes. Lo anterior puede
deberse a un aumento en la produccin de ERO o bien, o
una disminucin en los sistemas antioxidantes o de repara cin, o a una combinacin de estos factores. A tal condicin
se le denomina estrs oxidativo. En esta situacin se presentan daos de las macromolculas por el rompimiento o
modificacin de su estructura, trayendo como consecuencia
una alteracin en la funcin o incluso, la muerte de la clula.
El estudio del estrs oxidativo ha cobrado considerable
importancia debido a las consecuencias que puede tener en
la salud. Tambin se ha observado que diversos factores
Abril de 2006

ambientales, como los contaminantes en el aire y la radiacin


ionizante pueden favorecer el desbalance oxidante/antioxidante. En la clnica se han desarrollado diversos mtodos
para evaluar las condiciones de estrs oxidativo basados en
la acumulacin de productos oxidados (tabla 5).
Mecanismos antioxidantes de defensa a
nivel celular y extracelular
Un antioxidante es cualquier sustancia que a bajas concen traciones, comparado con el sustrato oxidable, retarda o
previene significativamente la oxidacin de ese sustrato. Los
antioxidantes se pueden clasificar de la siguiente manera
(Halliwell y Gutteridge, 1999):
(a) Agentes que catalticamente remueven los RL y a otras
especies reactivas. Ejemplos: enzimas SOD, catalasa, peroxidasas y antioxidantes especficos para el grupo tiol.
(b) Protenas que abaten la disponibilidad de los prooxidan tes tal como los iones de hierro o cobre, y el grupo hemo.
Ejemplos: ferritina, transferrina, haptoglobinas, hemopexina y metalotionena. Esta clasificacin incluye protenas que oxidan el ion ferroso, como la ceruloplasmina. La ferritina es una protena intracelular que
almacena hierro. La transferrina transporta hierro en los
fluidos extracelulares.
(c) Protenas que protegen biomolculas contra el dao
(incluyendo estrs oxidativo) por otros mecanismos.
Ejemplo: protenas de choque trmico localizadas en
retculo endoplsmico, periplasma y citoplasma. Tienen
como funcin la estabilizacin y cobertura de la estructura proteica parcialmente plegada.
(d) Agentes de bajo peso molecular que atrapan ERO y ERN
(Especies reactivas de nitrgeno). Ejemplos: glutatin,
-tocoferol, bilirrubina y cido rico. Algunos agentes
Tabla 5. Algunos marcadores de estrs oxidativo.
Determinacin

Fundamento

Niveles plasmticos de
malondialdehdo

El malondialdehdo se forma como


producto de la lipoperoxidacin. A travs
de su reaccin con el cido tiobarbitrico
se forma un derivado cuantificable por
colorimetra.

Alcanos exhalados

La oxidacin de los cidos grasos


insaturados presentes en las membranas
da como productos alcanos como el
etano, el propano y el pentano.

Grupos carbonilo en el
plasma

Se cuantifican por colorimetra, a travs


del producto de reaccin entre la 2,4dinitrofenilhidrazina y los grupos
carbonilo generados por oxidacin de
biomolculas.
169

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antioxidantes de bajo peso molecular que provienen de


la dieta, especialmente la vitamina C y el -tocoferol,
estn ntimamente relacionados con la nutricin y la
defensa antioxidante.
Debido a que la produccin de ERO ocurre espontneamente en los organismos aerobios, se hace necesario la presencia
de un sistema de defensa que contrarreste los efectos oxidantes de estas especies. Este sistema de defensa para su poste rior explicacin puede ser dividido en dos partes: Agentes
antioxidantes de alto peso molecular y agentes antioxidantes de bajo peso molecular. A continuacin, se dan sus
principales caractersticas:
Agentes antioxidantes de alto peso molecular
Superxido dismutasa (SOD): Cu-Zn SOD y Mn SOD
Es una enzima que se encuentra en el citoplasma (Cu-Zn
SOD), mitocondria (Mn-SOD) y en el fluido extracelular
(Cu-Zn SOD).
La SOD cataliza la conversin del anin superxido a
perxido de hidrgeno:
2O2. + 2H+

H2O2 + O2

(18)

Catalasa (CAT)
Esta enzima se encuentra en las mitocondrias y los peroxiso mas, y cataliza la reduccin del perxido de hidrgeno a agua:
2H2O2

2H2O + O2

(19)

Cabe mencionar que esta enzima tambin tiene actividad de peroxidasa:


H2O2 + RH2

2H 2O + R

(20)

GSSG + H2O

ROOH + 2GSH GSSG + ROH + H2O

(21)
(22)

Glutatin reductasa (GRs)


Es una enzima que se encuentra en citoplasma y tiene a la
coenzima FAD en su sitio activo. Esta enzima cataliza la
reduccin de GSSG empleando la coenzima NADPH:
170

NADP+ + 2GSH

(23)

Aparentemente el NADPH reduce el FAD, el cual transfiere dos electrones a la unin disulfuro (SS) entre dos
residuos de cistena del sitio activo. Los dos grupos SH
formados interactan entonces con el GSSG reducindolo a
dos molculas de GSH.
Glutatin S-transferasa (GST)
Hasta el momento se han encontrado las isoformas GST
citoslicas y GST microsomales. Las GST citoslicas estn
divididas en cuatro familias principales: , , y , y en
cuatro familias minoritarias: , , y ). Las GST citoslicas
estn constituidas por dos subunidades protenicas idnticas,
mientras que las GST microsomales son trmeros (Sharma,
Yang, Sharma, Awasthi y Awasthi, 2004)
Su funcin primaria es catalizar la conjugacin de GSH
con una gran cantidad de compuestos orgnicos ( RX). La
reaccin general de esta enzima es:
RX + GSH RSG + HX

(24)

Se ha demostrado que las GST pueden reducer hidroperxidos de lpidos por medio de una actividad de glutatin
peroxidasa independiente de selenio y que estas enzimas
tambin pueden detoxificar al 4-hidroxinonenal un producto de la peroxidacin de lpidos.
Tiorredoxina (Trx)
Es un polipptido con un peso molecular de 12 kDa, espe cialmente distribuido en el retculo endoplsmico (Nakamu ra, 2005). Esta protena contiene dos grupos tiol adyacentes
en su forma reducida (SH) que se pueden oxidar a su forma
disulfuro (S 2 o SS):
Trx-(SH)2 + protena-S2 Trx-S2 + protena-(SH)2

Glutatin peroxidasa (GPx)


Es una selenoenzima presente en varias isoformas, entre las
que se encuentran la GPx citoslica, la GPx plasmtica y
la GPx de fosfolpidos. Es posible encontrarla en citoplasma,
mitocondria y membrana plasmtica. Esta enzima cataliza
la reduccin de perxidos empleando dos molculas de
glutatin reducido (GSH). Los productos de la reaccin son
el glutatin oxidado (GSSG) y el agua.
H2O2 + 2GSH

GSSG + NADPH + H+

(25)

De acuerdo con la reaccin anterior,la Trx puede suplir


los electrones en diversas reacciones de xido-reduccin, de
la misma manera puede reaccionar directamente con el
perxido de hidrgeno. Por estas razones se considera que
la Trx es una protena antioxidante.
Trx-(SH)2 + 2H2O2

Trx-S2 + 2H2O + O2

(26)

Tiorredoxina reductasa (TrxR)


Es una selenoprotena que contiene en su penltimo carbono
un residuo de selenocistena, necesario para su actividad
cataltica. Existen dos isoformas: la TrxR1 citoslica y la
TrxR2 mitocondrial, razn por la cual se ubica principalment
en el citosol y la mitocondria (Nordberg y Arner, 2001). Las
dos isoformas son homodimricas con u FAD por subunidad,
el cual reduce el grupo disulfuro del sitio activo. Su funcin
Educacin Qumica 17[2]

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es catalizar la reduccin del polipptido tiorredoxina (Trx):


Trx-S2 + NADPH + H NADP + Trx-(SH)2
+

(27)

Peroxirredoxinas (Prxs)
Este grupo de enzimas se caracteriza por poseer residuos de
cistena en su centro cataltico, lo cual las identifica como
enzimas antioxidantes especficas para el grupo tiol. Los
grupos cistenas son oxidados a cido sulfnico en forma
reversible por los sustratos de estas enzimas (perxidos).
Estn subdivididas en tres subclases: Prx 2-cistena tpica
(Prx I-IV), Prx 2-cistena atpica (Prx V) y Prx 1-cistena (Prx
VI). Su localizacin vara en funcin de la subclase. Suelen
encontrarse en el citoplasma, peroxisoma y mitocondria (Prx
I y V), ncleo y citoplasma (Prx II), citoplasma y lisosomas
(Prx IV), mitocondria (Prx III), citoplasma (Prx VI) (Immenschuh y Baumgart-Vogt, 2004).
Estn envueltas en la degradacin enzimtica de perxido de hidrgeno, hidroperxidos y peroxinitrito, por lo
tanto, las Prxs asumen un papel importante contra el estrs
oxidativo.
Prx (SH)2 + 2H2O2

Prx S2 + 2H2O + O2

(28)

La tiorredoxina puede regenerar la forma reducida de las Prx


Prx S2 + Trx-(SH)2 Prx (SH)2 + Trx-S2

(29)

Hemo oxigenasa (HO)


Esta enzima est presente en dos isoformas: una constitutiva
(HO-2) y una inducible (HO-1). Se localiza en el retculo
endoplsmico. La HO cataliza el paso limitante de la degradacin del grupo hemo proveniente de las hemoprotenas,
produciendo biliverdina, monxido de carbono y hierro. La
biliverdina es reducida a bilirrubina por la biliverdina reductasa (BR) (Barrera y cols., 2003).

HO

Hemo + O2 + NADPH + H+ Biliverdina +


CO + Fe + NADP+
BR

Biliverdina + NADPH Bilirrubina + NADP+

(30)

La expresin de HO-1 aumenta en respuesta a muchos


agentes que inducen estrs oxidativo como lo es el mismo
grupo hemo. La actividad antioxidante de la HO-1 se puede
explicar, al menos en parte, por el hecho de que esta enzima
degrada a un prooxidante (grupo hemo) y genera un compuesto con actividad antioxidante (biliverdina) el cual es
transformado a otro antioxidante (bilirrubina).
Agentes antioxidantes de bajo peso molecular
En la tabla 6 se muestran algunas de las principales caractersticas de antioxidantes de bajo peso molecular. Es impor tante sealar que tanto la vitamina C como la vitamina E son
obtenidos de la dieta. De la misma manera, se conocen otros
antioxidantes que son obtenidos tambin de algunos alimentos, principalmente frutas y verduras, y que contribuyen a
prevenir el estrs oxidativo, por ejemplo compuestos caroteneoides como el licopeno, la lutena y el -caroteno y
compuestos fenlicos como los flavonoles, flavonas, flavo nonas, antocianidinas, y fenilpropanoides
Determinacin de ERO: radical superxido y per xido
de hidrgeno (Tarpey, Wink y Grisham, 2004)
A lo largo de esta revisin ha quedado de manifiesto la
importancia de los RL y ERO. Es importante destacar que
no todas las ERO aumentan necesariamente en un proceso
oxidativo o en un estado patolgico. Por lo tanto es impor tante precisar cul o cules son las ERO que estn involucra-

Tabla 6. Caractersticas generales de algunos compuestos de bajo peso molecular que integran al sistema antio xidante
(Halliwell y Gutteridge, 1999).
Compuestos hidrosolubles

Compuestos liposolubles

Vitamina C. Tambin se conoce con el nombre de cido ascrbico. Se


localiza en el citosol y en los fluidos extracelulares. Tiene la
capacidad de aceptar electrones y reaccionar directamente con el
anin superxido y el radical hidroxilo.

Vitamina E: La isoforma ms abundante es el -tocoferol. Es el


antioxidante ms distribuido en los seres vivos. Se encuentra en las
membranas biolgicas y tiene la capacidad de interrumpir la
lipoperoxidacin en la fase de propagacin.

Glutatin. El glutatin reducido protege los grupos sulfhidrilo de las


protenas de la accin antioxidante de los RL y tiene la capacidad de
reaccionar con el perxido de hidrgeno, el anin superxido y el
radical hidroxilo.

Vitamina A: Se encuentra en las membrana se impide la


lipoperoxidacin al reaccionar principalmente con el 1O2 y el OH..

cido rico. Es producto final del metabolismo de las purinas en los


primates y funciona como un buen atrapador de RL. Cuando el cido
rico reacciona con ERO (RO2., OH., O3, NO2. y 1O2) se generan
alantona, cidos cianrico y parabnico y otros productos. Adems,
algunos informes sugieren que el cido rico forma complejos con
los metales de transicin cuando interacciona con el ascorbato.

Bilirrubina. Es el producto de degradacin del grupo hemo en


mamferos; su precursor es la biliverdina. Es un poderoso atrapador
de radicales peroxilo y de 1O2. La bilirrubina unida a la albmina
protege a esta ltima molcula contra el dao por RL.

Abril de 2006

171

PROFESORES AL DA (BIOMEDICINA)

das en algn proceso oxidativo o enfermedad. Dicha infor macin es importante para conocer ms a fondo el mecanis mo del dao y puede ser muy importante para tratar de
establecer una terapia con un antioxidante que neutralice
dicha ERO con el propsito de detener el dao oxidativo.
Esto es importante en el contexto de que no se conoce an
un antioxidante universal que prevenga todo tipo de dao
oxidativo. Algunos de estos mtodos descritos a continuacin para identificar a alguna ERO, tambin pueden ser
usados para estudiar y caracterizar el potencial antioxidante
de alguna sustancia o extracto. Por lo anterior es importan te contar con mtodos que nos permitan identificar y cuan tificar dichas especies.
Deteccin del superxido
Reduccin del citocromo c
Este mtodo se basa en la reduccin de ferricitocromo c (Fe3+ cit
c) a ferrocitocromo c (Fe2+ cit c) razn por la cual ha sido utilizado para medir el tiempo de formacin del superxido por
numerosas enzimas, clulas y tejido vascular. La reaccin es:
Fe3+ cit c + O2

Fe2+ cit c + O2

(31)

La reduccin del citocromo se cuantifica espectrofotomtricamente a 550 nm, utilizando un coeficiente de extincin molar para el ferricitocromo c de 0.89 104 M1/cm1.
Inhibicin de aconitasa
Las alteraciones en la actividad de la aconitasa han sido
utilizadas como un indicador sensible de los cambios en la
actividad del superxido in vivo e in vitro. La aconitasa cataliza
la interconversin de citrato a isocitrato y est presente tanto
en el citosol como en la mitocondria. El superxido, inactiva
a la aconitasa debido a la oxidacin seguida por la prdida
reversible de hierro (el cual es el cofactor de la enzima); por
lo tanto, con la formacin de superxido, una fraccin de la
aconitasa en algn momento es inactiva, pero ca paz de reactivarse, as la relacin de aconitasa inactiva/aconitasa activa
es un indicador de la produccin de superxido.
Oxidacin de hidroetidina
La hidroetidina (HE) es un compuesto permeable a las
clulas que puede transferir dos electrones al superxido
provocando la oxidacin de la hidroetidina. La reaccin es
relativamente especfica para superxido, con una mnima
oxidacin del compuesto inducida por la presencia de perxido de hidrgeno o cido hipocloroso. La oxidacin intracelular de HE a etidio por el superxido puede analizarse
por citometra de flujo en suspensiones celulares y por
microfluorometra in vivo en cortes de tejidos y sangre.
172

Reacciones de quimioluminiscencia
Los mtodos de quimioluminiscencia para la deteccin de
superxido han sido frecuentemente empleados porque son
potencialmente accesibles a los sitios intracelulares donde es
generado este radical, por lo cual son altamente especficos.
El compuesto quimioluminiscente utilizado ms ampliamente es la lucigenina, aunque ya se han desarrollado otros
compuestos como la coelenterazina y el 2-metil-6-[4-metoxi fenil]-3,7-dihidroimidazo[1,2-] pirazin-3-ona (MCLA) que se
utilizan para medir la formacin de superxido en neutrfilos, macrfagos, cultivos celulares y tejido vascular
Resonancia del espn electrnico y atrapamiento del espn
La espectroscopa por resonancia de electrn-espn ( RES)
tambin conocida como Resonancia paramagntica electrnica (RPE), es un mtodo analtico que permite la deteccin
directa de los radicales libres. Cabe mencionar de manera
general, que esta tcnica se basa en las propiedades magnticas de los electrones no apareados y su ambiente molecular.
Los electrones desapareados pueden existir en dos orienta ciones en paralelo o antiparalelo con respecto al campo
magntico aplicado; por ello es posible observar diferencias
de energas en los estados correspondientes a la regin de
microondas del espectro electromagntico; as se pueden
diferenciar especies tal como el NO , superxido y radical
hidroxilo en sistemas biolgicos en bajas concentraciones.
Deteccin de perxido de hidrgeno
Ensayos ligados a peroxidasa de raz fuerte (HRP)
Estos ensayos dependen de la oxidacin de un compuesto
donador de tomos de hidrgeno. As, bajo la presencia de
perxido de hidrgeno, los donadores de tomos de hidr geno son oxidados por la HRP:
HRP + H2O2

HRP-H2O2 (Compuesto 1)

HRP-H2O2 + AH2

HRP + 2H2O + A

(32)

La cantidad de perxido de hidrgeno presente se mide


por la disminucin de la fluorescencia de un compuesto
fluorescente como la escopoletina, o bien observando el
aumento de la fluorescencia de un donador de tomos de
hidrgeno, previamente no fluorescente, como la diacetildiclorofluorescena, p-hidroxifenilacetato, cido homovainllico y el rojo de fenol.
Fluorescencia de la diclorofluorescena
La oxidacin de la 2-7-diclorofluorescna (DCFH) al compuesto fluorescente 2-7- diclorofluorescena oxidada (DCF)
por la presencia de perxido de hidrgeno, permite utilizar
esta reaccin como indicador especfico de la formacin de
Educacin Qumica 17[2]

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esta especie reactiva. Este mtodo se utiliza ampliamente en


la deteccin de perxido de hidrgeno en neutrfilos. La
fluorescencia producida por la DCF se mide a 498 nm de
excitacin y 522 nm de emisin.
Inhibicin de la catalasa por el aminotriazol
El aminotriazol es un inhibidor irreversible de la catalasa,
que reacciona con el complejo intermediario H 2O2-catalasa,
por ello inhibe a la catalasa slo en presencia de perxido
de hidrgeno; de ah que esta reaccin pueda utilizarse como
indicador de la presencia de H2O2.
Conclusiones
Las ERO son producidas continuamente en nuestro organismo como parte del metabolismo celular. Nuestras clulas
estn equipadas con sistemas antioxidantes de defensa que
le permiten mantener en bajas concentraciones dichas especies y as evitar el dao oxidativo sobre las macromolculas
biolgicas. La excesiva produccin de ERO por los fagocitos
juega un papel fisiolgico muy importante en la proteccin
del organismo contra muchas infecciones. As, las ERO
constituyen verdaderas armas qumicas para la destruccin
de los agentes infecciosos. Sin embargo, cuando se pierde el
equilibrio oxidante-antioxidante y se genera estrs oxidativo
se daan macromolculas esenciales para llevar a cabo las
funciones normales de una clula lo cual se puede traducir
en diversos procesos patolgicos.
Algunos ejemplos de patologas asociadas al estrs oxidativo que aquejan al ser humano y que actualmente se han
vuelto tan comunes son: artritis reumatoide, aterosclerosis,
diabetes, cncer, hipertensin, enfermedades neurodegenerativas como Alzheimer y Parkinson, degeneracin de la
retina, etctera. Dado que es muy difcil de evitar el estrs
oxidativo con la vida actual que llevamos donde en las
grandes ciudades predominan factores que agravan o incluso
inducen el estrs oxidativo (por ejemplo, contaminantes del
aire y radiaciones) es necesario seguir estudiando la actividad de muchas sustancias que ya se conocen por tener
propiedades antioxidantes e incluso fomentar su consumo
(por ejemplo aquellas que se encuentran en frutas, verduras
y algunas plantas) ya que en muchos casos una dieta pobre
en antioxidantes contribuye al dao oxidativo.


Abril de 2006

Agradecimientos
Este trabajo fue posible gracias a los donativos del Consejo
Nacional de Ciencia y Tecnologa (Conacyt, 40009-M) y de
la Direccin General de Asuntos del Personal Acadmico
(DGAPA, PAPIIT IN227103) de la UNAM.
Referencias
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Eberhardt, M. K., Reactive oxygen metabolites. Chemistry and
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Halliwell, B., Gutteridge, M., Free Radicals in Biology and
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Nordberg, J. Arner, ES., Reactive oxygen species, antioxidants, and the mammalian thioredoxin system, Free
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Tarpey, M. Wink, D. Grisham, M. Methods for detection of
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Bibliografa recomendada
Hansberg, W., La biologa del dioxgeno en singulete, TIP
Revista Especializada en Ciencias Qumico-Biolgicas, 2, (2),
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