Вы находитесь на странице: 1из 9

FUNDAMENTO

La espectrometra de masas (EM) es una tcnica analtica, preferentemente para


molculas orgnicas, que es usada en complemento con otras para caracterizar
compuestos desconocidos, cuantificar o identificar materiales conocidos. Lo
anterior, puede ser efectuado con cantidades muy pequeas (ng) y actualmente
desde equipos muy simples a complejos. El instrumento actual vara en tamao y
obviamente en configuracin desde una caja pequea como un horno de
microondas casero, a grandes instrumentos de investigacin que ocupan un
laboratorio entero.
La espectrometra de masas se diferencia de otras formas comunes de anlisis
espectral orgnico, en que la muestra no absorbe radiacin del espectro
electromagntico. Adems, en contraste con las espectrofotometra por absorcin
de IR o la espectrometra por resonancia magntica nuclear (RMN), ambos de los
cuales identifican compuestos con una especificidad comparable a la de la
espectrometra de masas. La espectrometra de masas es adems un mtodo de
anlisis destructivo, es decir, que la muestra no se puede recuperar despus de
realizar el anlisis de espectrometra de masas. Afortunadamente, la EM es
adems altamente sensible, as que solo se requieren cantidades muy pequeas
de la misma para el anlisis (g).
La muestra (slida, lquida o gaseosa) se introduce en una cmara de vaco y
enseguida se ioniza en una cmara de ionizacin, de forma comn mediante el
bombardeo de las molculas en estado gaseoso con un haz de electrones, tcnica
conocida como ionizacin por impacto electrnico (IE) entre otras, as se genera
una mezcla de iones positivos, negativos y neutros, predominando las especies
positivas, que son las analizadas por esta tcnica. Dicho bombardeo se realiza
con electrones de un potencial de 70 eV.
Durante el anlisis de espectrometra de masas, las molculas de la muestra
primero se someten a una reaccin con un agente ionizante, el cual en el caso de
la espectrometra de masas por ionizacin por impacto con electrones, es un haz
de electrones de alta energa. La ionizacin es seguida por la fragmentacin en la
cual los enlaces se rompen, y en muchas instancias nuevos enlaces se forman, en
formas que son caractersticos de la estructura de la fragmentacin de iones.
Esto es porque la EM, especialmente cuando es acoplada con tcnicas de
separacin tales como la cromatografa de gases (GC) o HPLC, es una forma
altamente especfica para identificar compuestos orgnicos.
Los iones (fragmentos) positivos son separados por combinaciones de campos
elctricos ( E ) y/o magnticos ( B ) de acuerdo a su relacin masa carga (m/z);
despus se manifiestan mediante un detector en el cual los iones generan una
corriente elctrica que es un potencial al nmero de iones; finalmente estas
seales elctricas son registradas como un espectro de masas.

Los componentes de la EM que proveen la formacin de los iones, separacin y


deteccin estn contenidas en una cmara de metal a alto vaco (10 -5 a 10-6 torr).
El alto vaco es necesario por diferentes razones. Primero, esto asegura que las
molculas que entran al espectrmetro de masas se encontraran en fase gaseosa
y no se condensaran en las superficies interiores del espectrmetro. Segundo, el
recorrido libre de los iones formados bajo el alto vaco, es relativamente largo,
por lo que las colisiones con otros iones son extremadamente escasas. El
anlisis de masas requiere que los iones formados en la fase de ionizacin, se
mantengan ntegros hasta llegar al detector. Finalmente, el alto vaco protege las
superficies metlicas y de xido de la fuente de iones, el analizador y el detector,
de la corrosin por el aire y el vapor de agua, los cuales pueden comprometer
seriamente la habilidad de separar y detectar iones del espectrmetro.

ESTRUCTURA GENERAL DEL ESPECTROMETRO DE MASAS


Esencialmente, el espectrmetro de masas debe ser capaz de desempear cuatro
funciones:
1) El espectrmetro de masas debe ser capaz de vaporizar substancias de
volatilidades muy diferentes.
2) Una vez volatilizada la muestra, el espectrmetro debe ser capaz de originar
iones a partir de las molculas neutras en fase gaseosa.
3) Una vez generados los iones, el espectrmetro debe ser capaz de separarlos
en funcin de su relacin masa/carga.
4) Una vez separados los iones, el espectrmetro debe ser capaz de detectar los
iones formados y registrar la informacin adecuadamente.
Ya que el espectrmetro debe cumplir estas cuatro funciones, deber constar de
cuatro partes ms o menos independientes:
1.2.3.4.-

Sistema de introduccin de muestras.


Fuente de iones.
Analizador, para la separacin de iones.
Sistema detector y registrador.

Esquema de funcionamiento de un analizador por sector magntico.

MTODOS DE IONIZACIN EN ESPECTROMETRA DE MASAS


Las fuentes de iones de los espectrmetros de masas, tienen todas unas
caractersticas comunes, pese a la variabilidad de tipos existente y es que todas
transforman los componentes de una muestra en iones. En muchos casos el
sistema de entrada y la fuente de iones estn combinados en un nico
componente. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o negativos
(normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior del
analizador de masas o sistema separador a travs del acelerador. La formacin
de iones del analito es el punto de arranque de arranque de un anlisis por
espectrometra de masas. El aspecto de los espectros de masas para distintas
especies moleculares, depende en gran medida del mtodo utilizado para la
formacin de los iones. Estos mtodos los podemos dividir en dos categoras:

Fuentes de fase gaseosa

En estas primero se volatiliza la muestra y luego se ioniza. Estn generalmente


restringidas a compuestos trmicamente estables que tengan puntos de
ebullicin menores de unos 500C. En la mayora de los casos, estos
requerimientos limitan la utilizacin de las fuentes de fase gaseosa a compuestos
con pesos moleculares menores de unos 103 Daltons. Son aplicables a muestras
no voltiles y trmicamente inestables. Normalmente los espectrmetros de
masas estn equipados con accesorios que permiten intercambiar ambos tipos de
fuentes. Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores
de 1000 Daltons.

Fuentes de desorcin.

En estas la muestra en estado slido o lquido, se transforma directamente en


iones gaseosos. Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente
inestables. Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con
accesorios que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes. Son aplicables a
compuestos que tienen pesos moleculares superiores de
100000 Daltons.
Las fuentes de iones se pueden clasificar tambin en fuentes duras y fuentes
blandas.

Fuentes duras

Comunican suficiente energa a las molculas para que estn en un estado de


energa altamente excitado. La relajacin posterior, implica la rotura de las
uniones produciendo iones fragmentados. Su espectro da lugar a muchos picos y

nos da informacin acerca de la naturaleza de los grupos funcionales e


informacin estructural de los analitos.

Fuentes blandas

Dan lugar a poca fragmentacin y el resultado es un espectro con muy pocos


picos dndonos informacin til ya que nos permite la determinacin exacta del
peso molecular de la molcula o molculas.

TIPOS DE CAMARAS DE IONIZACIN

Fuentes De Fase Gaseosa

Impacto de electrones (EI).


Se somete a la muestra a una temperatura suficientemente elevada
(normalmente mediante un filamento caliente de wolframio o de renio) como
para producir un vapor molecular, el cual posteriormente se ioniza
bombardeando las molculas originadas con un haz de electrones de elevada
energa. Pese a sus desventajas, esta tcnica es la que se ha usado para
determinar la mayora de los espectros que componen las colecciones de
espectros.
Fuentes de ionizacin qumica (CI).
En la ionizacin qumica los tomos gaseosos de la muestra (tanto de un sistema
de entrada indirecto como de una sonda caliente) se ionizan al colisionar con los
iones producidos al bombardear con electrones un exceso de gas reactivo
(normalmente metano). Normalmente se utilizan iones negativos, aunque la
ionizacin qumica de iones negativos se utiliza ocasionalmente en aquellos
analitos que contienen tomos muy electrnegativos.
Fuentes de ionizacin por campo (FI).
En las fuentes de ionizacin por campo, los iones se forman bajo la influencia de
un campo elctrico elevado (108 V/cm). Estos campos se producen al aplicar
elevados potenciales (10 a 20 kV) a emisores especialmente construidos. Que
estn formados por numerosas puntas finas cuyos dimetros son menores a 1
m. A menudo estos emisores adquieren la forma de un fino hilo de wolframio en
el cual se han formado dendritas o filamentos microscpicos de carbono por
pirolisis de benzonitrilo en un campo elctrico elevado. El resultado de este
tratamiento es la aparicin de centenares de microagujas de carbn que emergen
desde la superficie del hilo. En este caso el analito adquiere poca energa
vibracional y rotacional por lo que tiene poca fragmentacin.

Fuentes De Desorcin

En las dos ltimas dcadas se han desarrollado numerosos mtodos de ionizacin


por desercin para tratar muestras no voltiles o termodinmicamente
inestables. Estas tcnicas prescinden de la volatilizacin y de la posterior
ionizacin y en su lugar se suministra energa a la muestra slida o lquida de
diversas maneras, de modo que se provoca la formacin directa de iones
gaseosos. Como consecuencia se obtienen espectros muy simplificados.
Fuentes de desorcin por campo (FD).
Esta fuente de ionizacin usa un emisor con mltiples puntas, similar al usado en
las fuentes de ionizacin por campo. En este caso el electrodo se coloca sobre
una sonda que puede retirarse y recubrirse con una disolucin de la muestra,
despus de reinsertarla la ionizacin se produce tras proporcionar un potencial
elevado a este electrodo. En ocasiones es necesario calentarlo hacindole pasar
una corriente pero puede ocurrir una degradacin trmica antes de completarse
la degradacin.
Desorcin/ionizacin por lser asistida por una matriz (MALDI).
Esta tcnica de reciente descubrimiento nos permite calcular pesos moleculares
exactos de extractos de biopolmeros polares en un intervalo de masas
moleculares de varios cientos de miles de Daltons. En esta tcnica se mezcla una
disolucin acuoso/alcohlica de la muestra con un exceso de una sustancia matriz
que absorbe la radiacin. La disolucin resultante se evapora en la superficie de
una sonda metlica que se utiliza para la introduccin de la muestra. La mezcla
slida se expone a la accin de un haz de lser pulsante, provocando la
sublimacin del analito a iones que son introducidos en un espectrmetro de
tiempo de vuelo para el anlisis de masas.
Ionizacin por electronebulizacin (ESI/MS).
Esta tcnica se ha convertido en una de las ms importantes para el anlisis de
biomolculas de pesos superiores a 100.000 Daltons. Se realiza en condiciones
atmosfricas de presin y temperatura. La disolucin de la muestra se
bombardea a travs de una aguja capilar de acero inoxidable a un flujo de
algunos microlitros por minuto. Las agujas se mantienen a un potencial de varios
kV con respecto al electrodo cilndrico que rodea a dicha aguja. La niebla de finas
gotitas cargadas resultantes pasa a travs de un capilar de desolvatacin donde
se produce la evaporacin del disolvente y de las molculas del analito y donde
estas adquieren la carga. Debido a que las gotitas se vuelven ms pequeas por
la evaporacin del disolvente, su densidad aumenta producindose la desorcin
de los iones en la atmsfera gaseosa.
Fuentes de bombardeo con tomos rpidos (FAB).

Con este tipo de fuentes, las muestras en un estado condensado, a menudo en


una matriz de una disolucin de glicerol, se ionizan por bombardeo con tomos
de xenn o argn de elevada energa. Tanto los iones positivos como negativos
del analito son expulsados de la superficie de la muestra por un proceso de
desorcin. El haz de tomos rpido se obtiene pasar iones acelerados de argn o
xenn de una fuente o can de iones a travs de una cmara que contiene
tomos de argn o xenn a una presin de unos 10-5 torr. Setos experimentan
una reaccin de intercambio de electrones en resonancia con los tomos
obtenindose un haz de tomos de alta energa.
Desorcin por plasma (PD).
El deterioro del 252Cf produce dos fragmentos de fisin que viajan en direcciones
opuestas. Un fragmento golpea la muestra anulando entre 1-10 iones analticos.
El otro fragmento golpea un detector y desencadena la puesta en marcha de la
adquisicin de datos. Este mtodo es especialmente interesante para molculas
largas de origen biolgico.
Espectrometra de masas de iones secundarios (SIMS).
Un haz de luz ionizado primitivo como 3He+,16O+, o 40Ar+ es acelerado y
enfocado hacia la superficie de la muestra y chisporrotea entrando dentro de la
fase gas. Aproximadamente el 1% del material chisporroteado entra en forma
ionizada, el cual ya puede ser analizado. SIMS tiene la ventaja que puede ser
continuamente chisporroteado desde la superficie y determinar las
concentraciones analticas en funcin de la distancia desde la superficie original
(perfil de profundidad)
Ionizacin por termonebulizacin (TS).
La ionizacin por termonebulizacin se usa para elementos reflectantes. Una
muestra es depositada encima de una cinta metlica, que puede ser de Pt o Re y
una corriente elctrica calienta el metal a altas temperaturas. La cinta es
revestida de grafito que reduce la desfragmentacin.

ACOPLAMIENTOS (Sistema de entrada de muestras)


En el sistema de entrada de muestras, un micromol o menos de muestra se
convierten al estado gaseoso por calentamiento a unos 400C y se introduce
lentamente en la cmara de ionizacin. La finalidad del sistema de entrada es
permitir la introduccin de una muestra representativa en la fuente de iones con
la mnima perdida de vaco. En los espectrmetros de masas ms modernos
encontramos diferentes tipos de sistemas de entrada:

Entrada por sonda directa

Los lquidos y slidos no voltiles se pueden introducir en la regin de ionizacin


mediante un soporte de muestra o sonda, el cual se inserta a travs de una
cmara intermedia de vaco (vase Figura 7). La cmara intermedia est
diseada para limitar el volumen de aire que puede entrar en la regin de
ionizacin durante la insercin de la sonda. Las sondas se utilizan tambin
cuando la cantidad de muestra es limitada. Por tanto, los espectros de masas se
pueden obtener a menudo con una cantidad de muestra tan pequea como unos
pocos nanogramos. En una sonda, la muestra se pone generalmente en la
superficie de un vidrio o en un tubo capilar de aluminio, un alambre fino o una
copa pequea y la sonda se coloca a unos pocos milimetros de la fuente de
ionizacin y de la rendija que conduce al espectrmetro.
La baja presin del rea de ionizacin y la proximidad de la muestra a la fuente
de ionizacin a menudo hace posible la obtencin de espectros de compuestos
inestables trmicamente antes que se descompongan. La baja presin
proporciona tambin una mayor concentracin de compuestos relativamente no
voltiles en el rea de ionizacin, de modo que, la sonda permite el estudio de
materiales no voltiles tales como carbohidratos, esteroides, especies
organometlicas y sustancias polimricas de bajo peso molecular. El requisito
principal de la muestra es que alcance una presin parcial de al menos 10 -8 torr
antes que empiece a descomponerse.

Sistemas de entrada cromatogrficos

Los espectrmetros de masas a menudo estn acoplados con sistemas


cromatogrficos de gases o de lquidos de alta resolucin que permiten la
separacin y determinacin de los componentes de mezclas complejas. El
acoplamiento de una columna cromatogrfica a un espectrmetro de masas
requiere la utilizacin de sistemas de entrada especiales, algunos de los cuales se
describen a continuacin.
Cromatografa de gases / Espectrometra de masas. Algunos fabricantes de
instrumentos ofrecen equipos de cromatografa de gases que pueden acoplarse
directamente con distintos tipos de espectrmetros de masas de barrido rpido.
El caudal de las columnas capilares en general es suficientemente bajo como
para que la salida de la columna pueda introducirse directamente en la cmara
de ionizacin de un espectrmetro de masas. Desde finales de los aos setenta
han aparecido en el mercado diversos espectrmetros de masas diseados
especficamente como detectores para cromatografa de gases.
Cromatografa HPLC / Espectrometra de masas. Un problema fundamental
del acoplamiento de la cromatografia de lquidos con la espectrometra de masas
es el enorme contraste que existe entre los volmenes relativamente grandes de
disolvente de la primera y los requerimientos de vaco de la ltima. Para resolver
este problema se han desarrollado diversas interfaces. Algunas de las tcnicas de
acoplamiento se utilizaron durante un tiempo y hoy estn en desuso, como la
DLI=Direct Liquid Inlet o la Moving Belt (cinta mvil). Las tcnicas que se usan

rutinariamente en la actualidad para la introduccin y anlisis de muestras


lquidas por espectrometra de masas pueden clasificarse en dos grupos: las que
solo introducen la muestra lquida en la fuente inica del instrumento tales como
las de haz de partculas (PB, Particle Beam) y las que adems consiguen la
ionizacin de la misma (TSP = Thermospra y o termonebulizacin, LC-FAB =
Liquid chromatography - Fast Atom Bombardment, ESI= Electrospray Ionization).
En la

USOS DE LA ESPECTROMETRA DE MASAS


Los principales usos de la espectrometra de masas, son los que se enlistan a
continuacin

Identificacin de compuestos comunes, as como de biomolculas tales


como carbohidratos, cidos nucleicos y esteroides.
Determinacin de frmacos (metabolitos) en el cuerpo, antidopingdeportivos.
Realizacin de varios anlisis forenses.
Anlisis de contaminantes en el ambiente.
Identificacin y cuantificacin de componentes de mezclas orgnicas
complejas.

Bibliografa
Hoffman, d., & de Hoffman, E. (2007). Mass Spectrometry: Principles and Applications. NJ:
Wiley.
R. Matin, S. (1999). Understanding Mass Spectra: A Basic Approach. NY: Technical Editor.
Wi, & Weininger, S. (1988). Qumica Orgnica. Barcelona: Revert.

Pginas web revisadas


Espectrometra de Masas. (revisado el da 09 de Febrero de 2015). Obtenido de:
http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/espect
rometria_de_masas.pdf
Fundamentos de la Espectrometra de Masas. (revisado el da 09 de Febrero de 2015).
Obtenido de:
http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/espect
rometria_de_masas.pdf