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Prctica #2 Pruebas bioqumicas

Nancy Paola Hernandez Payro


Melissa Alejandra Gomez Gomez
Objetivos
- Aprender el fundamento de cada prueba bioqumica y sus caractersticas.
- Aprender a sembrar de manera correcta en los tubos.
- Observar las caractersticas fsicas de cada medio con diferentes bacterias.
Introduccin
Determinan la actividad metablica de una cepa pura. Son empleadas principalmente la
identificacin y clasificacin de bacterias y hongos.

Se pueden resumir en los siguientes puntos:

Sustrato (contenido en el medio de cultivo)


Enzima o va metablica (secretada o en el interior del microorganismo)
Producto
Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean)

El estudio bioqumico que se lleva a cabo como complemento de otros estudios


bacteriolgicos es posible gracias a las reacciones fisiolgicas y qumicas que llevan a cabo
los microorganismos. Para esto se emplean medios de cultivo enriquecidos con productos
tiles para el metabolismo celular, los cuales adems contienen algn indicador que hace
cambiar el color del medio al efectuar dichos microorganismos sus funciones.
Los organismos varan en su capacidad para utilizar diferentes compuestos (por ejemplo:
carbohidratos, urea, citrato, etc.) para algunos microorganismos que se usan en su
identificacin en el laboratorio.
De acuerdo a los productos de su actividad qumica, las bacterias se pueden clasificar
como:
1. Zimgenas: las que fermentan los carbohidratos, desdoblndolos en alcohol, cido
lctico o actico.
2. Aergenas: las que producen gas como hidrgeno y dixido de carbono como
resultado de su actividad metablica.
3. Anaergenas: las que no producen cantidades visibles de gas durante su actividad
metablica.
4. Cromgenas: las que producen pigmentos solubles o insolubles.
5. Fotgenas: las que causan putrefaccin y producen una dbil fosforescencia
(algunas bacterias marinas)

Fundamento
Citrato
Un microorganismo que puede utilizar el citrato como nica fuente de carbono tambin
utiliza las sales de amonio del medio como nica fuente de nitrgeno. La extraccin de
nitrgeno de las sales de amonio producen amoniaco y se alcaliniza el medio virando el
indicador al alcalino.
SIM
En presencia de tiosulfato en el medio o la degradacin de protenas liberando aminocidos
azufrados, algunos microorganismos forman H2S gaseoso por medio de las enzimas
tiosulfato reductasa y cistena desulfurilasa. El gas incoloro H2S reacciona con el citrato de
amonio frrico para producir un precipitado negro insoluble de sulfuro ferroso metlico.
Las enzimas triptofanasas oxidan el triptfano para formar tres metabolitos: indol, metil
indol y cido indolactico. Los reactivos de Erhlich o Kovac contienen DMABA que
reacciona con el indol producido formado un compuesto quinnico color violeta, que se
observa por la aparicin de un anillo en la superficie del medio.
Urea
La hidrlisis de la urea por la enzima ureasa libera dos molculas de amoniaco que
alcaliniza el medio, entonces se vira el indicador de pH, en el caso del rojo de fenol una
prueba positiva es color bugambilia.
TSI
El agar TSI es uno de los ms usados para ver la fermentacin de carbohidratos en la
familia Enterobacteriaceae. Se pueden tener varias posibilidades de fermentacin de
acuerdo a las caractersticas metablicas del microorganismo como son:
Utilizacin de glucosa sola. Los microorganismos que fermentan solo la glucosa provocan
en este medio una reaccin alcalina en la superficie ( roja) sobre un fondo cido (amarillo,
k/a) debido a que realizan una degradacin aerbica de la glucosa en la superficie,
convirtiendo el piruvato en agua y dixido de carbono. Despus de 18 a 24 horas de
incubacin como la concentracin de glucosa es baja (0.1%), los microorganismos
empiezan a utilizar las peptonas que se encuentran en el medio, causando la liberacin de
amoniaco y produciendo un pH alcalino ( rojo) gracias al rojo de fenol que tiene el medio
como indicador de pH. En el fondo, como no hay oxgeno, se realiza una degradacin
anaerbica y el piruvato se convierte en lactato con lo cual el pH disminuye quedando el
pH cido ( amarillo).
LIA
Algunos microorganismos son capaces de provocar la descarboxilacidon de los
aminocidos por induccin de enzimas especficas, el resultado de esta descarboxilacin es
la produccidon de una amina ( o diamina) y dixido de carbono. Tal es el caso de la
produccin de la enzima lisina descarboxilasa la cual al actuar sobre la lisina produce una
diamina llamada cadaverina.
En el medio LIA se puede detectar la produccin de la lisina descarboxilasa ya que se
produce una reaccin coloreada por un cambio en el pH del medio, que contiene como
indicador prpura de bromocresol. Un cambio del color original del medio (morado) hacia

amarillo en el fondo indica una reaccidon cida por la fermentacin de una pequea
cantidad de glucosa en el medio. Si el microorganismo produce lisina descarboxilasa, la
accin de esta enzima sobre la lisina dar lugar a la cadaverina, la cual provocar un
cambio de pH hacia la alcalinidad dando un color morado que sobrepasa la acidez debida a
la glucosa. As pues, un fondo amarillo indica que no se produce lisina descarboxilasa y un
color morado que si es producida.
MALONATO
El malonato de sodio, es una sal orgnica que es utilizada por las bacterias como nica
fuente de carbono con formaron de productos alcalinos que se evidencia por un viraje de
verde a azul del indicador del medio, azul de Bromotimol. Si un microorganismo es capaz
de utilizar el malonato de sodio como nica fuente de carbono, al mismo tiempo que
utilizar el sulfato de amonio como fuente de nitrgeno, se produce un aumento de la
alcalinidad que se debe a la formacin de Hidrxido de sodio (NaOH).
Materiales y reactivos
Cantidad
3 c/u
3
1
1
4
1
3

Material
Pruebas bioqumicas
Asas rectas
Encendedor
Mechero
Asas bacteriolgicas
Gradilla
Cultivos con bacterias
Reactivo de Kovac
Pipetas plsticas

Resultados
CULTIVO

CONTROL

E.COLI

ACINETOBACTER

PRUEBAS
BIOQUIMICAS

Pruebas bioqumicas
TSI
LIA
Malonato
Citrato
Urea
MIO
SIM

Acinetobacter
A sin cambio, gas (-),H2S (-)
K/A, descaboxilacin (-)
(-)
(+)
(-)
descaboxilacin (+), indol (-),
movilidad (-)
indol (-), movilidad (-)

Escherichia coli
A/A, gas (-), H2S (-)
K/A
(-)
(-)
(-)
descaboxilacin (-), indol (+),
movilidad (+)
indol (+), movilidad (+)

Conclusin
Las pruebas bioqumicas son importantes para ver el mecanismo que tienen las bacterias de
alimentacin y los cambios que pueden ocasionar en un medio, ms que para observar su
morfologa. Para esta prctica, se utilizo una cepa con E. coli y una de Acinetobacter. Obviamente
nos arrojaron resultados diferentes ya que la E. coli es una enterobacteria con necesidades diferentes
de alimentacin al Acinetobacter que es Gram (-).
Fue interesante observar los cambios en las coloraciones de cada prueba, ya que pueden indicar
muchas cosas como descarboxilacin, movilidad, acidez o basicidad, presencia de gas o de cido
sulfhdrico, entre otras.
Es importante conocer las caractersticas para identificar las bacterias que se estn cultivando.

Bibliografa
1. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3c_PruebasBioquimicas_17461.PDF
2. https://microdonto.files.wordpress.com/2009/04/pruebas-bioquimicas.pdf
3. http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm#MALONATO