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Mestrado Integrado em Medicina Veterinria

Cincias Veterinrias

Tumores Melanocticos em Equinos Estudo


Clnico, Histopatolgico e Imunohistoqumico

Ana Margarida Sampaio e Melo Pereira

Orientador:
Professor Doutor Mrio Pedro Gonalves Cotovio
Co-orientador:
Dr. Miguel de S Cardoso Machado Bahia

UNIVERSIDADE DE TRS-OS-MONTES E ALTO DOURO


VILA REAL, 2011

Mestrado Integrado em Medicina Veterinria


Cincias Veterinrias

Tumores Melanocticos em Equinos Estudo


Clnico, Histopatolgico e Imunohistoqumico

Ana Margarida Sampaio e Melo Pereira

Orientador:
Professor Doutor Mrio Pedro Gonalves Cotovio
Co-orientador:
Dr. Miguel de S Cardoso Machado Bahia

UNIVERSIDADE DE TRS-OS-MONTES E ALTO DOURO


VILA REAL, 2011

The greatness of a nation and its moral progress can be


judged by the way its animals are treated. M. Gandhi

Resumo

RESUMO
A pele o local mais comum de neoplasias em equinos. Supe-se que a prevalncia
destas condies esteja a aumentar e estima-se que cerca de 2/3 (66%) dos tumores
melanocticos em equinos possam progredir para malignidade. A classificao destas leses
em equinos complexa e dificulta o trabalho do patologista. A evoluo ao nvel das tcnicas
de imunohistoqumica tem sido importante no diagnstico, prognstico e teraputica desta
doena.
Foi realizada a exciso cirrgica de ndulos cutneos de 43 equinos acompanhada de
inqurito. A avaliao clnica baseou-se na idade (valor mnimo de 2,5 anos e mximo de 26
anos com mdia de 14,9 anos), gnero (51,2% ocorreram em machos e 48,8% em fmeas),
raa (sobretudo Puro-Sangue Lusitano - 60,5% e Cruzado Lusitano - 27,9%), pelagem (rua
em 90,7%, isabel em 4,7%, baia em 2,3% e castanha em 2,3%), quantidade (melanoma
drmico em 11,6% e melanomatose drmica em 88,4%), tamanho (90,7 % pequeno, 44,2%
mdio e 25,6% grande), localizao (zona perineal em 93%, outras localizaes em 27,9% e
padro difuso em 4,7%) e durao das leses (entre 6 meses e 20 anos). As amostras foram
processadas e submetidas a anlise histopatolgica e imunohistoqumica. As variveis
histopatolgicas avaliadas foram: localizao (65,1 % na derme e 34,9% na derme e
epiderme), tipo celular (7,0% fusiforme, 53,5% redondo e misto em 39,5%), ulcerao
(presente em 23,3%), quantidade de pigmento (escassa em 11,6%, moderada em 37,2% e
abundante em 51,2%), quantidade de estroma (escassa em 44,2%, moderado em 37,2% e
abundante em 18,6%), mbolos vasculares/linfticos (presentes em 9,3% das amostras).
Obteve-se uma marcao positiva para o c-Kit em 62,8% das amostras.
A quantidade, tamanho e localizao das leses so factores importantes na deciso
teraputica e no prognstico das leses. As variveis histopatolgicas podem ajudar a prever o
comportamento dos tumores pelo que se dever prosseguir com os estudos no sentido de
estabelecer critrios direccionados para a espcie.
A expresso desta protena c-Kit no se encontrava avaliada em tumores melanoccitos
de equinos. Obteve-se imunorreactividade em todos os tumores com caractersticas de
malignidade evidente, dados que podero ter implicaes no diagnstico e teraputica dos
mesmos.

iii

Abstract

ABSTRACT
The skin is the most common site of neoplasia in the horse. It is assumed that the
prevalence of this condition is increasing and it is estimated that about 2/3 (66%) of melanocytic
tumors in horses can progress to malignancy. The classification of this disease in horses is
complex and hinders the work of the pathologist. The development of immunohistochemistry
techniques has been important in diagnosis, prognosis and therapy of this disease.
Was performed the surgical excision of cutaneous nodules of 43 horses accompanied by
inquiry. The clinical evaluation based on age (minimum 2.5 years old and a maximum of 26
years old with an average of 14.9 years old), gender (51.2% in males and 48.8% in females),
breed (especially Lusitano - 60.5% and Lusitano Crossed Breed - 27.9%), coat color (gray in
90.7%, pearl in 4.7%, buckskin in 2.3% and bay in 2.3%), amount (dermal melanomas in 11.6%
and dermal melanomatosis in 88.4%), size (90.7% small, 44.2% medium and 25.6% large),
location (perineal area in 93%, other locations in 27.9% and diffuse in 4.7%) and duration of
lesions (between 6 months and 20 years). The samples were processed and subjected to
histopathological and immunohistochemical analysis. The histopathological variables evaluated
were: location (65.1% in dermis and 34.9% in dermis and epidermis), cell type (7.0% spindle,
53.5% round and 39.5% mixed), ulceration (present in 23.3%), amount of pigment (poor in
11.6%, moderated in 37.2% and abundant in 51.2%), amount of stroma (poor in 44.2%,
moderated in 37.2% and abundant in 18.6%) and vascular/lymphatic invasion (present in 9.3%
of the samples). We obtained immunoreactivity for the c-Kit in 62.8% of the samples.
The amount, size and location of the lesions are important factors in therapeutic decision
and prognosis of the lesions. The histopathological variables can help predict the behavior of
tumors, so we should continue with studies to establish criteria directed to the species. The
expression of this protein c-Kit was evaluated for the first time, as far as we know, in equine
melanocytic tumors. The fact that immunoreactivity was present in all tumors with features of
evident malignancy may have implications on diagnosis and therapy of these tumors.

iv

Durante a realizao desta Dissertao foram executados os seguintes trabalhos:

- Comunicao Oral intitulada Caracterizao de Tumores Melanocticos em Cavalos de


Raa Lusitana, por Ana Margarida Pereira, Mrio Cotovio, Justina Oliveira e Miguel Bahia. Foi
apresentada nas II Jornadas do GTIE (Grupo de Trabalho em Investigao em Equdeos), em
Ponte de Lima no dia 25 de Junho de 2011, onde foi atribudo o prmio de melhor
Comunicao Oral.
- Comunicao Livre intitulada Expresso Imunohistoqumica do c-Kit em Tumores
Melanocticos de Equinos, por Ana Margarida Pereira, Mrio Cotovio, Justina Oliveira e Miguel
Bahia. Foi apresentada no II Encontro Formao OMV (Ordem dos Mdicos Veterinrios), em
Lisboa no dia 8 de Outubro de 2011.

ndice geral

NDICE GERAL
1. INTRODUO........................................................................................................................1
1.1. Classificao e nomenclatura ..............................................................................................3
1.2. Etiologia ...............................................................................................................................4
1.3. Predisposio ......................................................................................................................6
1.4. Patogenia.............................................................................................................................9
1.5. Diagnstico clnico e histopatolgico..................................................................................11
1.6. Tratamento e seguimento clnico .......................................................................................17
1.7. c-Kit (CD117 ou Kit) ...........................................................................................................19
2. OBJECTIVOS .......................................................................................................................21
3. MATERIAL e MTODOS ......................................................................................................22
3.1. Material utilizado e a sua procedncia ...............................................................................22
3.2. Avaliao clnica ................................................................................................................22
3.3. Avaliao histopatolgica...................................................................................................23
3.4. Avaliao imunohistoqumica .............................................................................................24
3.5. Anlise estatstica ..............................................................................................................26
4. RESULTADOS .....................................................................................................................27
4.1. Avaliao dos dados clnicos .............................................................................................27
4.2. Avaliao dos dados histopatolgicos................................................................................31
4.3. Avaliao dos dados imunohistoqumicos ..........................................................................38
5. DISCUSSO.........................................................................................................................41
5.1. Estudo clnico ....................................................................................................................41
5.2. Estudo histopatolgico .......................................................................................................50
5.3. Estudo imunohistoqumico .................................................................................................52
6. CONCLUSES.....................................................................................................................54
7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ......................................................................................55
8. ANEXOS...............................................................................................................................61

vi

Lista de quadros, grficos e figuras

LISTA DE QUADROS
Quadro 1 - Predisposio racial para tumores melanocticos em equinos. .................................7
Quadro 2 - Localizaes mais comuns de ocorrncia de tumores melanocticos em equinos. ....8
Quadro 3 - Variveis histolgicas avaliadas. .............................................................................24
Quadro 4 - Frequncias e percentagens das raas dos animais includos no estudo. ..............28
Quadro 5 - Frequncias e percentagens dos tamanhos das leses encontradas nos animais
avaliados. .................................................................................................................................29
Quadro 6 - Caracterizao histopatolgica das amostras analisadas. ......................................32
Quadro 7 - Expresso de c-Kit nas amostras em estudo. .........................................................40

LISTA DE GRFICOS

Grfico 1 - Distribuio dos 43 animais includos no estudo segundo o gnero. .......................27


Grfico 2 - Frequncias das diferentes pelagens observadas nos animais deste estudo. .........28
Grfico 3 - Distribuio da quantidade de leses nos animais includos no estudo. ..................29
Grfico 4 - Distribuio das localizaes das leses encontradas nos animais includos no
estudo. ......................................................................................................................................31

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Equino de pelagem rua, includo no estudo, com vitiligo (pr-cirrgico). ...................5
Figura 2 - Equino da figura 1 no ps-cirrgico, onde se evidencia o grau de vitiligo. ..................5
Figura 3 - Melanocitoma nico na cauda de um equino jovem..................................................13
Figura 4 - Ilustrao esquemtica do receptor c-Kit.. ................................................................20
Figura 5 - Exciso cirrgica de uma das amostras includas no estudo. ...................................23
Figura 6 - Localizao tpica de ocorrncia das leses em estudo. Imagem recolhida antes da
exciso cirrgica. ......................................................................................................................30
Figura 7 - Padro difuso de leses melanocticas. Alm destas o animal apresentava ndulos
na rea da traqueia, base da cauda e perneo. .........................................................................30
Figura 8 - Localizao drmica da leso. Colorao com HE, 4x..............................................33
Figura 9 - Localizao drmica que se estende epiderme. Colorao HE, 40x. .....................33
Figura 10 - Morfologia celular fusiforme. Colorao HE, 40x. ...................................................34
Figura 11 - Morfologia celular redonda. Colorao HE, 40x. .....................................................34
Figura 12 - Ulcerao dos tecidos observada em amostra do estudo. Colorao HE, 40x. ......35
Figura 13 - Quantidade de pigmento melnico escassa (grau 1). Colorao HE, 40x. ..............35
Figura 14 - Quantidade de pigmento melnico abundante (grau 3). Colorao HE, 40x. ..........36
Figura 15 - Quantidade de estroma moderada (grau 2). Colorao HE, 40x. ............................36
Figura 16 - Quantidade de estroma abundante (grau 3). Colorao HE, 40x. ...........................37

vii

Lista de quadros, grficos e figuras

Figura 17 - mbolo vascular. Observa-se pigmento melnico no seu interior. Colorao HE,
40x............................................................................................................................................37
Figura 18 - Imunorreactividade para o c-Kit com padro citoplasmtico granular, 40x. .............38
Figura 19 - Imunorreactividade para o c-Kit com padro citoplasmtico difuso, 40x. ................39
Figura 20 - Imunorreactividade positiva para o c-Kit nos melancitos e negativa para
melanfagos, 40x. ....................................................................................................................39
Figura 21 - Leso melanoctica em equino com pelagem de cor castanha. ..............................46

viii

Lista de siglas e abreviaturas

LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS


ADN cido Desoxirribonucleico
BCG Bacillus Calmette-Guerin
cm centmetro
CD117 cluster de differenciao 117
CDK cyclin-dependent kinase
Cdkn2a/p16 inibidor 2a da quinase dependente da ciclina
CK citoqueratina
CO2 dixido de carbono
DAB tetra-hidrocloreto de 3,3-diaminobenzidina
EUA Estados Unidos da Amrica
HE hematoxilina-eosina
HIS hibridizao in situ
HMB-45 Human Melanoma Black-45
IHQ imunohistoqumica
IL interleucina
LEH Liphook Equine Hospital
MC1R receptor 1 da melanocortina
ME microscopia electrnica
min minuto
ml mililitro
mm milmetro
MSH Melanocyte Stimulating Hormone
n nmero de amostras
NR4A3 nuclear receptor, subfamlia 4, grupo A, membro 3
NSE enolase especfica dos neurnios
OMS Organizao Mundial de Sade
p53 protena 53
PBS phosphate buffered saline (tampo fosfato salino)
PCNA proliferating cell nuclear antigen (antignio nuclear de clulas em proliferao)
pH potencial de hidrognio inico
Pmel17/gp100 protena melanoctica 17/gp100
PSI Puro-Sangue Ingls
PSL Puro-Sangue Lusitano
Rb retinoblastoma

ix

Lista de siglas e abreviaturas

RTK receptor da tirosina quinase


SCF Stem Cell Factor
STX17 sintaxina 17
TYRP1/gp75 - protena 1 relacionada tirosinase
UAB Universidade Autnoma de Barcelona
UTAD Universidade de Trs-os-Montes e Alto Douro
UV Ultravioleta
UVA Ultravioleta A
UVB Ultravioleta B
W watt
% percentagem
m micrmetro
l microlitro
2 Qui-quadrado

Agradecimentos

AGRADECIMENTOS
Palavras soltas que insurgem a mente, como agora. Tantas que parecem poucas!
Insuficientes para definir o que vai muito alm do Obrigada:
Ao Professor Doutor Mrio Cotovio pela brevidade no momento de aceitar orientar esta
Dissertao (pouco sabia do que o esperava!). Pela forma sria, meticulosa, cuidadosa,
paciente, crtica e acima de tudo perfeccionista com que levou a cabo este trabalho. Pelo seu
saber profundo, dedicao, incentivo (sempre). Pelas palavras adequadas aos momentos
certos que me fizeram continuar, que me permitiram e permitem seguir
Ao Dr. Miguel Bahia pela excelncia dos ensinamentos, pela particularidade das
experincias, por toda a pacincia em todas as horas (muitas) partilhadas. Pelo enorme
esforo e profissionalismo na parte mais prtica (e na restante tambm) deste trabalho. Por me
fazer exigir de mim mais e melhor a cada minuto
Professora Doutora Justina Oliveira pela disponibilidade incansvel, pela facilidade em
tornar simples e real o que em tantos momentos parecia catico. Pelo imenso tempo dedicado,
pelo interesse sempre partilhado, pela participao activa, pela entrega verdadeira e pelo
despertar de novos desafios.
Aos meus amigos e colegas desta viagem que tambm embarcaram nela. Ao Guinhas,
ao Rapper, ao Zero, ao Paulo pela partilha de sentimentos, pelas horas e horas de conversas,
confidncias, apoio, por me fazerem acreditar, sempre. Di por tudo isto, pelo enorme bom
senso com que me ajuda sempre, por estar comigo. Ao Triguinho e ao Mrio Joo pelas horas
de ensaios de apresentaes que no sero esquecidas, pelas crticas construtivas sempre
presentes, por estarem ali.
Aos meus amigos e colegas das casas que sero sempre as nossas casas. Koka,
Vera, aos meus padrinhos Fernando e Lara, aos meus afilhados Rui e Daniela que me
mostraram uma passagem para a outra margem da amizade e que reservaram um lugar eterno
na minha memria.
melhor colheita 2004/2005 em nome da Ariana, B, Beta, Bola, Carla, Diana, Ftima,
Gustavo, Natlia, Rafa por me mostrarem que valeu a pena, por me darem a certeza que este
era o caminho.
Diana, Joana e Mrcia, onde o sentido da amizade prevalece, onde as dificuldades
se tornam facilidades, onde tudo parece mais certo.
Aos meus Avs, Tios, Primas, Madrinha e Irene pela compreenso, pacincia, incentivo,
pela ajuda inigualvel durante estes anos. Natacha por tudo isto, por me saber aturar, por
estar ao meu lado.

xi

Agradecimentos

Universidade de Trs-os-Montes e Alto Douro (UTAD), Universidade Autnoma de


Barcelona (UAB) e ao Liphook Equine Hospital (LEH) pela colaborao na realizao deste
estudo.
Ao 3 Esquadro, do Regimento de Cavalaria, da Guarda Nacional Republicana, na
pessoa do Coronel Mariz dos Santos, ao Comando Territorial da Guarda Nacional Republicana
de vora, na pessoa do Coronel Jacob, ao Comando Territorial da Guarda Nacional
Republicana de Viseu, na pessoa do Coronel Calheiros, ao Centro Hpico de Viseu, ao Centro
Hpico da Quinta, ao Centro Equestre de Loureiro, a todos os proprietrios e responsveis
pelos cavalos do estudo e aos Mdicos Veterinrios referentes Dr. Henrique Cruz, Dr. Rui
Mendes, Dr. Rita Rocha Pires, Dr. Francisco Fernandes, Dr. Joo Borges, Dr. Jordi Figueres e
sua equipa pelo interesse demonstrado e ajuda prestada.
Aos Cavalos, responsveis pela realizao deste sonho, que nos ensinam um pouco
mais da vida e que so o maior e melhor motivo que nos faz ir mais longe
Aos meus bichos que fazem parte de mim, que so a minha vida.
Por ltimo, mas no em ltimo, aos meus Pais, a quem dedico este culminar de esforo,
dedicao e empenho. Por cada minuto, por todo o verdadeiro amor incondicional que
condiciona todos os meus dias, pelos ideais transmitidos que me fazem querer ser sempre
mais e melhor. Pelos sacrifcios e compreenso sem fim, por ser vossa Por serem quem so
e por me fazerem chegar aqui onde toda e qualquer palavra nada para expressar o que vai
para alm de mim

Obrigada

xii

Introduo

1. INTRODUO
A oncologia veterinria foi, no passado, considerada como uma especialidade
emergente (Cotchin, 1984) tornando-se, na actualidade, uma especialidade por si s com
detalhada informao publicada sobre a etiopatogenia e imunologia das neoplasias (Scott e
Miller, 2003). No entanto, a oncologia cutnea parece ser amplamente ignorada na medicina
equina (Knottenbelt, 2009a).
As neoplasias so uma causa maior de morbilidade e mortalidade em equinos de todo o
mundo e a pele constitui, sem dvida, o rgo mais afectado por este tipo de doena
(Knottenbelt, 2009b citando Jackson, 1936; British Equine Veterinary Association, 1965; Kerr e
Alden, 1974; Baker e Leyland, 1975; Cotchin, 1977). As neoplasias cutneas constituem cerca
de 50% do total das neoplasias nesta espcie (Scott e Miller, 2003; Valentine, 2006b; Scott e
Miller, 2011) ou inclusive 80% segundo Thon (2006).
A incidncia de neoplasias em cavalos varia de acordo com o tipo de estudo: 1-3% em
cavalos submetidos a cirurgia e 11% em cavalos examinados em matadouro, 26% em material
remetido para bipsia e 4,4% em estudos de necrpsia (Valentine, 2006a). A prevalncia de
tumores cutneos em cavalos considerada relativamente elevada e a maioria dos tumores
apresentam caractersticas particulares pelo que se torna importante o diagnstico precoce
(Knottenbelt, 2009b). Alm disso considera-se que a prevalncia dos tumores em equinos tem
vindo a aumentar devido no s ao facto de os animais viverem cada vez mais anos mas
tambm pela evoluo na preveno e teraputica (Thon, 2006).
Segundo Valentine (2006), o aumento da idade claramente um factor que aumenta a
susceptibilidade de ocorrncia de neoplasias em todas as espcies. No entanto, outros autores
citados por Scott e Miller (2011) afirmam que, contrariamente a outras espcies, o risco para
neoplasia cutnea em equinos no aumenta com a idade corroborando Knottenbelt (2009b),
que sugere haver pouca correlao entre a ocorrncia de tumores de pele em equinos e o
avano da idade.

Os tumores melanocticos em equinos so uma entidade reconhecida h centenas de


anos (Foley et al., 1991; Valentine, 1995; Roels et al., 2000) e tm o seu primeiro relato, tanto
quanto foi possvel analisar, em 1813 por Gohier (Farcu et al., 2007), apesar de outros
estudos referirem os trabalhos nesta rea apenas a partir do incio do sculo XX
(Seltenhammer et al., 2003; Pielberg et al., 2008). No entanto, a gesto das neoplasias
cutneas em equinos ainda est muito atrs da de outras espcies (Knottenbelt, 2008b) e
permanece uma condio pouco esclarecida (Sutton e Coleman, 1997).

Introduo

Em cavalos ruos considerada uma condio quase inevitvel (Smith et al., 2002) e
sugerido que ocorrer em todos os cavalos com esta pelagem desde que vivam tempo
suficiente (Cotchin, 1965; Valentine, 1995; Sutton e Coleman, 1997; Bengtstrm, 2011)
diminuindo assim a sua longevidade (Pielberg et al., 2008). Estudos realizados at data
revelam que os melanomas so o tipo de tumor mais frequente em equinos (Fleury et al.,
2000b),

constituindo

3,8%

de

todas

as

neoplasias

diagnosticadas

nesta

espcie

(Seltenhammer et al., 2003; Laus et al., 2010). Relativamente ao conjunto dos tumores
cutneos em equinos os estudos apresentam diversas percentagens para os tumores
melanocticos:
- 6-15% (Patterson-Kane e Ginn, 2003);
- at 15% (Smith et al., 2002);
- at 18%, sendo considerado o segundo tipo de tumor cutneo mais comum em equinos
(Spugnini et al., 2011);
- entre 4-15% (Foley et al., 1991; MacGillivray et al., 2002; Scott e Miller, 2003; Scott e
Miller, 2011), ressalvando que a incidncia real nestes estudos pode ser mais elevada uma vez
que estes tumores, sendo facilmente identificveis, so infrequentemente submetidos a exame
histolgico.
Esta discrepncia nos valores de incidncia estar ligada ausncia de critrios
diagnsticos de malignidade estandardizados para os tumores melanocticos (Gross et al.,
2005).
Porm, estima-se que cerca de 2/3 (66%) dos tumores melanocticos em equinos possam
eventualmente progredir para malignidade, ou seja, ter a capacidade de desenvolver
metstases (Patterson-Kane e Ginn, 2003; Scott e Miller, 2003; Seltenhammer et al., 2004;
Chapman et al., 2009).
A importncia deste tema prende-se com a sua elevada prevalncia. Por um lado como
causa de rejeio de cavalos ruos em matadouros com implicaes econmicas importantes.
Por outro como um potencial modelo para alteraes celulares de pigmentao e malignidade
em outras espcies incluindo em humanos (Sutton e Coleman, 1997). Ou ainda fazendo-se
notar com as repercusses na sade dos equinos (em especial disfunes urogenitais e
gastrointestinais) e os seus efeitos negativos na performance do cavalo de desporto (Laus et
al., 2010). Uma vez que se tem vindo a verificar, na populao humana, um aumento
significativo na incidncia de melanomas ao longo das ltimas dcadas (Paek et al., 2008)
persiste a necessidade de encontrar um modelo animal que se adeqe e que facilite, de
alguma forma, os estudos pr-clnicos (Heinzerling et al., 2001). O cavalo, particularmente de
pelagem rua, parece ser um modelo animal apropriado uma vez que alm de esta ser uma
afeco com predisposio gentica (Heinzerling et al., 2001) apresenta uma progresso

Introduo

espontnea com desenvolvimento de metstases em outros rgos (Heinzerling et al., 2001;


Chapman et al., 2009). Os tumores melanocticos dos cavalos ruos tambm apresentam
caractersticas histolgicas e marcao IHQ que se assemelham ao melanoma humano
(Seltenhammer et al., 2004), tendo mesmo sido introduzido na terminologia humana um subtipo
de melanoma designado melanoma tipo animal (Ludgate et al., 2010). Assim, aprofundar o
conhecimento acerca de neoplasias numa espcie ajudar a uma melhor compreenso das
mesmas em outras espcies como na humana (Bengtstrm, 2011).

1.1. Classificao e nomenclatura


Os tumores melanocticos tm vindo a ser classificados com base nas diferenas clnicas,
histolgicas e de comportamento, isto , benigno ou maligno (Buechner-Maxwell, 2009). No
entanto a literatura, quer humana quer veterinria, parece no ser consistente quanto
terminologia (Smith et al., 2002). No que diz respeito espcie equina, a nomenclatura pode
tornar-se complexa e confusa com termos como melanoma (benigno ou maligno),
melanossarcoma,

melanocitoma,

melanose,

melanomatose,

nevo

melanoctico,

nevo

nevocelular e nevo congnito a assumirem significados incertos em diferentes contextos (Scott


e Miller, 2011). Porm, o termo nevo no usado na dermatopatologia veterinria
(Goldschmidt, 1998). O termo melanoma tem sido aplicado de forma varivel de acordo com os
sistemas de classificao usados, alguns para designar neoplasias quer benignas quer
malignas, outros limitam-no a proliferaes neoplsicas malignas (Gross et al., 2005).
Quanto classificao clnica, Desser et al. (1980) sugeriu um sistema de graus (0-5)
assumindo o grau 0 para ausncia de melanomas e o grau 5 para um crescimento exoftico
de tumores com superfcie ulcerada e metstases em diversos rgos acompanhada de
sndromes paraneoplsicas (Seltenhammer et al., 2003; Slkner et al., 2004).
Em 1993, Wilcock descreveu 2 formas para esta doena em cavalos ruos: melanoma
drmico idioptico (raro), anlogo ao melanoma drmico benigno em ces e melanocitose
drmica, equivalente melanomatose drmica (Valentine, 1995).
Em 1995, Valentine realizou um estudo retrospectivo o qual revelou 4 sndromes clnicas
distintas: nevo melanoctico, melanoma drmico, melanomatose drmica e melanoma maligno
anaplsico. Este sistema classificativo tem sido adoptado por alguns autores como Smith et al.
(2002), Seltenhammer et al. (2004), Chapman et al. (2009), Laus et al. (2010) e a classificao
que parece ser actualmente aceite recomendada pela Organizao Mundial de Sade
(OMS), em 1998, em que os tumores melanocticos cutneos so divididos em 4 categorias:

Introduo

melanocitoma (melanoma drmico, melanoma benigno), melanoacantoma, melanoma maligno


e hiperplasia melanoctica (lentigo) (Goldschmidt, 1998).
Em 2000, Roels et al. classificou os tumores estudados em apenas 2 categorias:
melanoma maligno metasttico e melanoma benigno baseando-se na sua localizao e
indicadores citolgicos de malignidade. No mesmo ano, Fleury et al., com base nas
caractersticas histolgicas dividiu-os em 2 tipos: anaplsicos e melanomatose.
Numa tentativa de comparar caractersticas histolgicas entre o melanoma equino e o
humano, Seltenhammer et al. (2004) identificou 3 tipos: melanoma benigno drmico de cavalos
ruos, melanoma maligno drmico de cavalos ruos e melanoma maligno anaplsico de
cavalos de outras pelagens que no a rua.
De uma forma mais simplificada, alguns autores distinguem os tumores melanocticos em
melanocitomas para os tumores benignos e melanomas para os que tenham comportamento
maligno (Goldschmidt e Hendrick, 2002).
Contudo, embora existam sistemas de classificao perfeitamente esclarecidos para
tumores melanocticos em humanos e ces, os sistemas usados para equinos continuam a no
resolver o dilema do patologista quando confrontado com os mesmos uma vez que a
classificao histolgica deve idealmente prever o comportamento do tumor (Valentine, 1995).

1.2. Etiologia
Apesar dos estudos e das diversas teorias, a causa desta doena assumida por muitos
autores como desconhecida (Buechner-Maxwell, 2009) ou pouco esclarecida (Cotchin, 1965;
Foy et al., 2002; Laus et al., 2010) estando ainda por determinar o seu verdadeiro mecanismo
(Bengtstrm, 2011). No obstante de ter em conta que as causas de transformao celular
so multifactoriais desde vricas, traumticas, inflamatrias, radiao ultravioleta (UV) (Foy et
al., 2002).
Alguns autores assumem que ocasionalmente podem ter uma componente congnita
(Foley et al., 1991; Goldschmidt e Hendrick, 2002; Pamela et al., 2007; McMullen et al., 2008).
Outros investigadores estudaram a componente hereditria comparando modelos genticos e
no genticos (ambientais) e falam de um impacto gentico importante nesta afeco apesar
de no ter sido estabelecido um modelo de heritabilidade (Rieder et al., 2000).
Segundo Pielberg et al. (2008), desde que comearam os primeiros trabalhos em
melanomas que os investigadores perguntam como que uma mutao que provoca a perda
de pigmentao no plo pode tambm causar melanomas com excessiva produo de

Introduo

melanina. Estes autores sugerem uma possvel explicao baseando-se no facto de os


melancitos do folculo piloso e da derme terem diferentes ciclos de vida e demonstram que o
fentipo de pelagem rua causado por uma mutao em que h sobrexpresso dos genes
STX17 e NR4A3 estimulada por duplicaes nos pares de bases do cido Desoxirribonucleico
(ADN). Esta sobrexpresso gnica parece tambm estimular a proliferao de melancitos na
derme aumentando ento a propenso para o desenvolvimento de melanomas em cavalos
ruos. Em 2003, um estudo feito comparando a prevalncia de melanomas em cavalos de
diferentes coudelarias levou a concluir que a heritabilidade tem um efeito estatstico
significativo no desenvolvimento dos tumores (Seltenhammer et al., 2003). Assim, a
despigmentao do plo parece estar directamente correlacionada com a formao dos
tumores (Seltenhammer et al., 2003), sendo considerado um factor de risco relacionado com
uma mutao no detectada em humanos (Zhao et al., 2009). Em contrapartida, Slkner et al.
(2004), estabelecendo as relaes genticas entre despigmentao, melanoma e vitiligo
(Figura 1 e 2), afirma a elevada heritabilidade para a caracterstica de despigmentao mas a
ausncia de correlao gentica entre esta e os melanomas e uma elevada correlao entre a
despigmentao e o vitiligo.

Figura 1 - Equino de pelagem rua, includo Figura 2 - Equino da figura 1 no ps-cirrgico,


no estudo, com vitiligo (pr-cirrgico).
onde se evidencia o grau de vitiligo.

Algumas teorias sugerem que em vez de uma verdadeira neoplasia a manifestao de


uma alterao no metabolismo da melanina, levando formao de novos melanoblastos ou a
um aumento da actividade dos j existentes (Foy et al., 2002), resultando numa acumulao
deste pigmento nos melanfagos durante o processo de despigmentao (Smith et al., 2002
citando Levene, 1971). Dados clnicos, histolgicos e imunohistoqumicos de um estudo
realizado em 1997, corroboram que se trata de uma alterao no neoplsica, provavelmente
devido a uma falha na degradao da melanina medida que o animal envelhece e perde a
5

Introduo

pigmentao, apesar de poderem habitualmente invadir e metastizar para diversos rgos


internos (Rodrguez et al., 1997).
Estas teorias parecem, no entanto ser refutadas por outros estudos nos quais ficou
demonstrada a natureza neoplsica desta condio pela ocorrncia de metstases, de
caractersticas histolgicas e marcaes imunohistoqumicas que assim o indicam (Valentine,
1995; Fleury et al., 2000a; Rieder et al., 2000; MacGillivray et al., 2002; Seltenhammer et al.,
2004), ou mesmo uma possvel origem multicntrica dos tumores (Sutton e Coleman, 1997).
Revolucionando um pouco estes estudos demonstrando sempre uma ligao entre a
origem desta doena e os melancitos, Fleury et al. (2000a) sugeriu que estas leses teriam
origem em glndulas apcrinas e no em melancitos (Fleury et al., 2000a).
Uma outra corrente de pensamento, de algum modo controversa, questiona o papel da
exposio a elevados nveis de radiao UV na patogenia desta doena (Patterson-Kane e
Ginn, 2003; Buechner-Maxwell, 2009). Contudo, devido sua elevada ocorrncia em zonas
protegidas da luz solar, como a rea perianal, este parece no ser um factor de risco para a
formao destes tumores em equinos ao contrrio do que se verifica em humanos (Fleury et
al., 2000b; Foy et al., 2002; Paek et al., 2008).
Em suma, parece haver evidncias para suportar as diversas teorias mas pouco se
evoluiu desde a descrio de McFadyean em 1933 (Sutton e Coleman, 1997).

1.3. Predisposio
Esta doena ocorre, resumidamente em animais de pelagem rua e idade avanada
(Valentine, 1995; Rieder et al., 2000).

Pelagem
A bibliografia unnime em relatar a elevada percentagem destes tumores em cavalos
de pelagem rua embora possa ocorrer em qualquer pelagem (Knottenbelt e Pascoe, 1994;
Bengtstrm, 2011). Apesar disso alguns autores afirmam que estes tumores so exclusivos de
cavalos ruos (Sutton e Coleman, 1997; Rees, 2004).
Outros estudos parecem estabelecer uma relao entre a pelagem e a idade afirmando
que esta condio ocorre maioritariamente em cavalos ruos ou brancos, normalmente antes
ou aos 5 anos de idade, correspondendo altura em que h mudanas na cor da pelagem
(Lerner e Cage, 1973; Smith et al., 2002). Podem, no entanto, ocorrer noutras pelagens como
na baia ou laz (Smith et al., 2002).

Introduo

Idade
Assumindo uma classificao em melanocitomas (benignos) e melanomas (malignos) h
autores que expem o tema classificando os melanocitomas como uma condio mais
frequente em cavalos jovens (menos de 2 anos de idade) (Goldschmidt e Hendrick, 2002),
enquanto os melanomas apresentam maior importncia em cavalos de idade mais avanada, a
partir dos 6 anos de idade (Valentine, 2006a; Scott e Miller, 2011).
Considerando os tumores melanocticos como um todo, ocorrem maioritariamente em
cavalos de idade avanada e raramente em cavalos com idade inferior a 6 anos (Foley et al.,
1991).

Gnero
Os estudos no so consistentes neste tema (Smith et al., 2002), pelo que divergem
entre no haver qualquer predisposio sexual (Valentine, 1995; Sutton e Coleman, 1997;
Fleury et al., 2000b; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011), as
fmeas serem mais predispostas (Foley et al., 1991) ou, pelo contrrio, haver uma maior
predisposio em machos (Valentine, 1995 citando Sundberg et al., 1977).

Raa
As investigaes realizadas at data falam em predisposio de vrias raas (Quadro
1) embora sejam, na maioria, raas com elevada percentagem de cavalos ruos (Smith et al.,
2002; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009).
No que se refere prtica clnica parece haver uma frequncia considervel desta
condio em cavalos Puro-Sangue Lusitano (PSL), porm, do que foi possvel apurar, no
existem estudos de prevalncia nesta raa.

Quadro 1 - Predisposio racial para tumores melanocticos em equinos.


Raa
rabe
Percheron
PSI
Lipizzaner
Andaluz

Estudo
(Foley et al., 1991; Valentine, 1995; Goldschmidt e Hendrick, 2002; Smith et al.,
2002; Rees, 2004; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011)
(Smith et al., 2002; Rees, 2004; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e
Miller, 2011)
(Valentine, 1995; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009)
(Goldschmidt e Hendrick, 2002; Smith et al., 2002; Valentine, 2006a; Scott e Miller,
2011)
(Valentine, 2006a)

Shire

(Valentine, 2006a)

Irish Draught

(Valentine, 2006a)

Pnei Gals

(Valentine, 2006a)

PSI Puro-Sangue Ingls

Introduo

Localizao
Esta afeco pode ocorrer, virtualmente, em qualquer local (Buechner-Maxwell, 2009;
Scott e Miller, 2011). Os que se desenvolvem a nvel cutneo tm uma predisposio para a
superfcie ventral da cauda, regio perianal e perineal, rea genital, rea auricular, comissuras
labiais, zona periorbital e glndula partida, como esquematizado no quadro 2.
H tambm referncias a outras localizaes como: membros (Foy et al., 2002; Pamela
et al., 2007; Scott e Miller, 2011), glndula mamria (Buechner-Maxwell, 2009), bordo
coronrio, casco (Smith et al., 2002), pescoo (Rodrguez et al., 1997; Foy et al., 2002), bolsas
guturais (Foy et al., 2002; Valentine, 2006a), olho (Murphy e Young, 1979).
Um estudo faz meno influncia da idade na localizao dos tumores, especificamente
no caso de melanocitomas, afirmando que os membros e tronco estaro mais predispostos em
cavalos jovens enquanto o perneo e cauda assumem maior importncia em geritricos
(Goldschmidt e Hendrick, 2002).
Segundo Sutton e Coleman (1997), h autores que defendem no haver locais
predispostos para estes tumores e portanto h alguma variabilidade quanto a este tema entre
investigadores. A ttulo de exemplo, os msculos esquelticos normalmente no so
mencionados, porm um local comum encontrado por Mdicos Veterinrios que
desempenham funes em matadouros. No estudo realizado por estes autores, o local mais
comum para ocorrncia destes tumores foi a superfcie ventral da cauda seguindo-se os
msculos esquelticos e glndula partida.
Quadro 2 - Localizaes mais comuns de ocorrncia de tumores melanocticos em equinos.
Localizao
Superfcie ventral cauda

Perianal

Perineal

Genital / Vulva / Prepcio


Orelha
Comissura labial
Glndula partida
Periorbital
Pescoo

Estudo
(Foley et al., 1991; Rodrguez et al., 1997; Sutton e Coleman, 1997;
Fleury et al., 2000b; Foy et al., 2002; MacGillivray et al., 2002; Smith
et al., 2002; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a; Farcu et
al., 2007; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011)
(Foley et al., 1991; Fleury et al., 2000b; Seltenhammer et al., 2004;
Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011)
(Valentine, 1995; Fleury et al., 2000b; Goldschmidt e Hendrick, 2002;
MacGillivray et al., 2002; Smith et al., 2002; Seltenhammer et al.,
2004; Valentine, 2006a; Farcu et al., 2007; Pamela et al., 2007;
Buechner-Maxwell, 2009)
(Foley et al., 1991; Valentine, 1995; Rodrguez et al., 1997; Fleury et
al., 2000b; Smith et al., 2002; Pamela et al., 2007; BuechnerMaxwell, 2009)
(Foy et al., 2002; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011)
(Fleury et al., 2000b; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a;
Buechner-Maxwell, 2009)
(Rodrguez et al., 1997; Sutton e Coleman, 1997; Valentine, 2006a;
Buechner-Maxwell, 2009)
(Fleury et al., 2000b; Seltenhammer et al., 2004; Buechner-Maxwell,
2009)
(Rodrguez et al., 1997)

Introduo

1.4. Patogenia
Apesar de ser uma condio bem reconhecida e muito comum o seu processo
subjacente continua a ser enigmtico e discordante (Sutton e Coleman, 1997).
Os melanoblastos tm origem neuroectodrmica e durante o desenvolvimento fetal
migram para a derme, epiderme e folculos pilosos. As clulas diferenciadas produtoras de
pigmento so referidas como melancitos. Estas clulas dendrticas encontram-se interpostas
entre os queratincitos basais da epiderme e o folculo piloso. So encontradas molculas de
caderina epitelial (caderina-E) na superfcie dos melancitos e queratincitos. Normalmente,
estes dois tipos de clulas no formam ligaes entre si a no ser atravs destas molculas
que constituem o mecanismo de adeso entre os 2 tipos celulares. A melanina, produzida
pelos melancitos, armazenada nos melanossomas e transferida para os queratincitos num
processo designado por citocrinia. Os melanossomas acumulam-se no interior do citoplasma
dos queratincitos onde protegem a pele dos efeitos nocivos da radiao UV. Os
melanoblastos que no atingem a epiderme desenvolver-se-o em melancitos intradrmicos.
Na derme, pode-se encontrar uma segunda populao de clulas que contm melanina, os
melanfagos, que fagocitam a melanina que atinge a derme proveniente da migrao e
destruio dos melancitos da epiderme ou folculos (Goldschmidt e Hendrick, 2002; Smith et
al., 2002).
A converso de melancitos normais, no pigmentados e isolados de outros melancitos,
para pigmentados e neoplsicos, em ninhos, um processo com vrias etapas desde a
iniciao seguida de promoo, transformao e metastizao. Virtualmente, nada se sabe
acerca da iniciao da maioria dos melanomas em animais. Porm pensa-se que este
processo, em cerca de 65% dos melanomas cutneos em humanos, ocorrer em
consequncia de mutaes geradas por radiao solar UVA e UVB. Esta concluso baseia-se
na ligao epidemiolgica do melanoma com a exposio solar. Supe-se que a
susceptibilidade gentica, possivelmente aumentando a frequncia espontnea de clulas
mutadas, pode ser crtica para iniciao de muitos tumores. Contudo, com excepo do cavalo
ruo, a transformao maligna de leses benignas muito pouco comum em animais e
acredita-se que a maioria dos melanomas surgem de melancitos na epiderme, derme, epitlio
ocular e epitlio oral. Quanto aos promotores podem incluir trauma, exposio qumica,
queimaduras, hormonas, infeces, drogas e outras causas de hiperplasia reactiva. Talvez os
melanomas cutneos surjam de leso crnica resultando em hiperplasia reactiva do epitlio,
ruptura da interaco normal entre queratincitos e melancitos e amplificao das clulas
iniciadas espontaneamente ou por factores ambientais no identificados. A transformao
coadjuvada por instabilidade ao nvel do ADN. Os supressores de proliferao celular e
9

Introduo

activadores da apoptose, como por exemplo a protena retinoblastoma (Rb) e protena 53 (p53)
so, eventualmente, substitudos por factores de crescimento e/ou receptores de factores de
crescimento e inibidores da apoptose (Smith et al., 2002). Apesar destes dados foi detectada
sobrexpresso da p53 normal em melanomas metastticos em 2 cavalos o que sugeriu que
esta protena no estar envolvida na tumorignese do melanoma equino (Roels et al., 2000).
A mutao de proto-oncogenes em oncogenes (c-myc, c-erb-B-2, c-yes, c-Kit, ras)
tambm favorece a proliferao e desenvolvimento tumoral assim como o crescimento
autnomo, atravs de factores de crescimento, requerido para a progresso neoplsica. Esta
transformao neoplsica, resultado de mutaes, ocorre antes da metastizao que , em si,
um processo com vrias etapas iniciando-se com a separao da massa primria,
deslocamento para e atravs do endotlio, migrao via sangunea e/ou linftica e, por fim,
ligao e proliferao numa localizao secundria. Durante todo este processo as clulas
tumorais devem conseguir escapar ao sistema imunitrio, sobreviver e deslocar-se no sistema
circulatrio e/ou linftico e proliferar numa localizao distinta da sua origem. Outras alteraes
necessrias para que um melancito se torne maligno so ainda alvo de investigao (Smith et
al., 2002) e o conhecimento destas informaes torna-se assim importante tendo em conta as
implicaes que pode ter no tratamento desta condio (Sutton e Coleman, 1997).
De notar ainda o facto de o processo de diluio da cor da pelagem e o desenvolvimento
tumoral poderem estar relacionados. A pigmentao visvel da pele e plo o culminar dos
processos que foram sendo referidos anteriormente. Embora na ltima dcada se tenham feito
enormes avanos no que respeita compreenso da fisiologia e gentica da pigmentao,
usando tecnologia de ADN e linhagens mutantes de ratos, o mecanismo em cavalos recebeu
pouca ateno. Uma anlise das alteraes morfolgicas nos melancitos foliculares de
cavalos ruos seria um passo importante para definir os genes nos quais se devem focar os
estudos. Em 1984, foi observado por Altmeyer e colaboradores que os nveis da hormona
estimulante dos melancitos (-MSH) diminuem medida que o cavalo se torna ruo. Esta
hormona induz a proliferao dos melancitos e estimula a produo de pigmento pelos
mesmos. Dois dos genes mais importantes na cor da pelagem, extension e agouti, codificam
receptores da -MSH e uma protena antagonista da mesma hormona respectivamente.
Interaces entre ambas tm uma influncia importante no nvel e tipo de melanina produzida
(eumelanina e feomelanina). Assim, alargar investigaes neste tema pode ser importante,
comeando por estabelecer os nveis de -MSH, identificar e caracterizar os genes que
codificam o seu receptor (receptor 1 da melanocortina - MC1R) bem como a protena
sinalizadora de agouti em cavalos ruos e de outras pelagens (Sutton e Coleman, 1997).

10

Introduo

1.5. Diagnstico clnico e histopatolgico

O diagnstico desta condio , por norma, baseado na sua aparncia macroscpica


(Foy et al., 2002). Os sinais clnicos e sintomas variam desde interferncia com o freio/ brido
ou selar o cavalo at srias leses obstrutivas no tracto urogenital ou gastrointestinal
progredindo para metstases viscerais que ameaam a vida do animal (Foy et al., 2002; Smith
et al., 2002; Laus et al., 2010).
Como j abordado, a maioria dos estudos faz uma distino importante no que toca
pelagem. Estes tumores apesar de serem mais comuns em pelagens ruas, como referido
anteriormente, ocorrem tambm em animais de outras pelagens como baia, laz, castanha,
tendo nestes um desenvolvimento mais precoce e uma maior tendncia para a malignidade
(Smith et al., 2002; Seltenhammer et al., 2003).
Ao que parece, cerca de 90% (ou 95% segundo Foy et al. (2002)) destes tumores so
benignos aquando da sua apresentao inicial. No entanto, pensa-se que cerca de 2/3
progridem para malignidade e tm capacidade de metastizao generalizada (Smith et al.,
2002), apesar de esta informao contrariar um estudo em que no foram detectadas
caractersticas histolgicas de malignidade (Rodrguez et al., 1997).
Como j foi referido anteriormente, apesar de existirem classificaes bem estabelecidas
para tumores melanocticos em humanos e ces, as apresentadas para cavalos parecem no
resolver o dilema do patologista quando confrontado com este tipo de tumores, sendo por
vezes extrapoladas de outras espcies. Idealmente, a classificao histolgica deve culminar
numa previso precisa do comportamento do tumor em causa (Valentine, 1995; Stokking,
2004; Knottenbelt, 2008a; Paek et al., 2008). Por esta razo, Chapman et al. (2009) optou por
no classificar as leses como benignas ou malignas por falta de critrios fiveis para uma
diferenciao numa base histolgica.
Segundo Rees (2004), o diagnstico usualmente baseado nos sinais clnicos e a
bipsia no necessria para confirmar o diagnstico a no ser em casos de leses com
aparncias bizarras. No entanto, o diagnstico pode complicar-se pelo facto destas leses
poderem variar consideravelmente na sua aparncia assim como no grau de pigmentao,
caracterstica que parece no estar associada ao prognstico e que no especfica porque
existem outras leses neoplsicas e no neoplsicas que podem ser fenotipicamente
semelhantes (Smith et al., 2002).
Contudo, a chave para o maneio adequado e prognstico preciso das neoplasias
cutneas um diagnstico especfico, conseguido apenas atravs de bipsia e avaliao
histolgica. A citologia aspirativa embora fornea informao importante no substitui a bipsia
e exame histopatolgico. Apesar da histria clnica facultar dados importantes que podem

11

Introduo

inclusive ajudar no diagnstico diferencial, a imensa variedade de neoplasias cutneas faz com
que estes dados se tornem menos fiveis. Em suma, um ndulo no passa de um ndulo at
que seja avaliado histologicamente (Scott e Miller, 2011) e a sua deteco pode ser obtida por
inspeco e palpao (Seltenhammer et al., 2003).
O exame histolgico pode basear-se em vrias caractersticas como: localizao do
tumor, presena de actividade juncional, tipo de clulas presentes, grau de pigmentao, grau
de pleomorfismo, actividade mittica, presena de inflamao e/ou necrose, padro de
crescimento e leses em tecidos adjacentes (Foley et al., 1991; Smith et al., 2002; Chapman et
al., 2009).
No que se refere descrio da localizao das neoplasias melanocticas da pele
devemos ter em considerao 3 termos:
- juncional: proliferao de melancitos neoplsicos na juno dermo-epidrmica. Pode
envolver a epiderme ou folculo piloso;
- composto: o tumor apresenta tanto uma componente epidrmica como drmica;
- drmico: em que o tumor apenas intradrmico sem envolvimento da epiderme
(Goldschmidt, 1998; Goldschmidt e Hendrick, 2002).
A morfologia celular e actividade mittica so elementos importantes na distino de
tumores melanocticos benignos e malignos pelo que est sugerido o branqueamento dos
mesmos em casos de cortes histolgicos densamente pigmentados (Goldschmidt, 1998).
Apesar disso, esta diferenciao bastante complicada. A presena de melancitos isolados
ou em ninhos na camada superior da epiderme , por norma, indicativo de malignidade assim
como uma componente infiltrativa drmica ou subcutnea do tumor (Goldschmidt, 1998).
Alguns autores referem tambm a presena de uma componente inflamatria constituda
principalmente de linfcitos (Roels et al., 2000).

Melanocitoma (melanoma benigno)


O melanocitoma no pode ser diferenciado do melanoma na avaliao macroscpica
(Goldschmidt e Hendrick, 2002). Estas leses variam consideravelmente na sua aparncia o
que poder estar relacionado com o intervalo de tempo que esto presentes na pele
(Goldschmidt e Hendrick, 2002). As leses so, normalmente, firmes e bem circunscritas. A
pele subjacente pode apresentar-se normal, alopcica, hiperpigmentada, hiperquerattica ou
ulcerada (Scott e Miller, 2011). Na maioria, segundo alguns investigadores, aparecem como
ndulos cutneos nicos que podem ser pretos, castanhos ou cinzentos (Pamela et al., 2007)
(Figura 3).
A citologia revela variabilidade na forma dos melancitos. Histologicamente os
melanocitomas caracterizam-se por vrios padres celulares desde feixes, cordes ou ninhos

12

Introduo

de melancitos. A morfologia celular pode ir de epiteliide a fusiforme ou um misto destas duas


(Foley et al., 1991; Scott e Miller, 2011). Alm destas h autores que referem ainda clulas
poligonais e redondas (Goldschmidt, 1998). Est presente pleomorfismo celular e clulas
binucleadas, com ncleos redondos ou ovais. A actividade mittica , habitualmente, reduzida.
A intensidade de pigmento varia entre reduzida a abundante e os melanfagos encontram-se
entre as clulas tumorais ou em tecidos adjacentes contendo elevadas quantidades de
melanina no seu citoplasma. H marcado envolvimento da epiderme e do epitlio do folculo
piloso com ninhos de melancitos (Foley et al., 1991; Valentine, 1995; Scott e Miller, 2011).
Em cavalos novos parece existir uma caracterstica particular quanto sua localizao,
aparentemente ocorrem em vrios locais mas no na tpica regio perianal. A ulcerao
tambm parece ser uma caracterstica bem mais frequente do que habitualmente nos animais
de idade avanada (Foley et al., 1991).

Figura 3 - Melanocitoma nico na cauda de um equino jovem. Adaptado de Scott e Miller


(2011).

Melanoma
As leses so muito variveis no que diz respeito sua aparncia, independentemente
da sua localizao. Podem assomar qualquer cor, desde cinzento ou castanho, vermelho ou
mesmo azul (Smith et al., 2002). Habitualmente so leses firmes, nodulares ou com aparncia
de placas. Podem ou no ser alopcicas, hiperpigmentadas ou ulceradas (Rodrguez et al.,
1997; Rees, 2004; Scott e Miller, 2011). Em alguns casos podem libertar uma substncia
espessa e negra. Ao coalescer os ndulos podem apresentar uma aparncia irregular e
rugosa. Alguns tumores podem, contudo, ser pedunculados ou ter aspecto verrucoso. Embora
de forma menos frequente podem aparecer como leses isoladas (Foy et al., 2002; Smith et al.,
2002; Scott e Miller, 2011).

13

Introduo

Em funo da avaliao clnica e caractersticas histolgicas, Fleury et al. (2000a)


categoriza 2 tipos de leses, semelhantes a placas com proliferao atpica de melancitos e
nodular com disposio concntrica de clulas tumorais e melanfagos.
O comportamento destas leses em equinos difcil de prever baseado nas
caractersticas histolgicas. Definem-se 3 padres distintos de crescimento:
- crescimento lento durante anos, sem metstases;
- crescimento lento durante anos com sbito crescimento rpido e metstases;
- crescimento rpido com malignidade desde o incio (Rees, 2004; Pamela et al., 2007;
Scott e Miller, 2011).
De referir que Valentine (1995) sugere 4 sndromes, como referido anteriormente, sendo
que 3 deles tm potencial metasttico e cada um deles diferenciado por caractersticas
clnicas, histolgicas e comportamentais apesar do melanoma drmico s poder ser distinguido
da melanomatose drmica com base nas caractersticas clnicas. O melanoma drmico
normalmente uma leso nica ocorrendo em animais com um amplo intervalo de idades, na
melanomatose surgem leses mltiplas que coalescem com frequncia e com uma maior
probabilidade para metastizar internamente.
Embora a maioria dos animais, mesmo com metstases, no apresente sintomatologia
clnica h outros que desenvolvem sinais clnicos (em especial claudicao) referente ao tumor
primrio ou s metstases (nomeadamente neurolgicos) (Scott e Miller, 2011).
O exame citolgico revela melancitos pleomrficos e atpicos. Histopatologicamente
estes tumores caracterizam-se por melancitos atpicos difusos, em ninhos ou cordes. A
morfologia pode ser predominantemente epiteliide, fusiforme ou uma combinao de ambas
embora conste no ter significado prognstico neste tipo de tumor (Goldschmidt, 1998).
Smith et al. (2002) define 4 variantes histopatolgicas mais comuns para este tumor em
animais domsticos:
- epiteliide, clulas redondas com bordos celulares discretos, citoplasma com aspecto
vtreo, ncleos grandes e nuclolos proeminentes;
- fusiforme, clulas em feixes simples ou feixes entrelaados;
- misto, incluindo ambas as morfologias anteriores;
- turbilhonar ou dendrtico, que ocorre apenas nas leses cutneas e usualmente
benigno em oposio aos restantes.
J Seltenhammer et al. (2004) identificou tambm 4 tipos histolgicos sendo os 3
primeiros equiparveis aos anteriores e definindo um quarto tipo como clulas balonizantes.
Ao contrrio do que acontece nos humanos, ces e gatos h uma tendncia para estas
leses se iniciarem em associao aos folculos pilosos ou glndulas apcrinas e para no

14

Introduo

envolverem a epiderme e juno dermoepidrmica (Seltenhammer et al., 2004; Scott e Miller,


2011).
Talvez um pouco parte temos um outro tipo de melanomas, os amelnicos, que so
frequentemente mais invasivos que os restantes, exibindo desenvolvimento precoce de
metstases quando comparados com os outros tipos (Seltenhammer et al., 2004).

Metstases
Embora a controvrsia relativamente ao tema, por definio, metstases provam
malignidade (Roels et al., 2000 citando Majno e Joris, 1996). Independentemente da sua
localizao, estas leses podem metastizar atravs dos vasos sanguneos ou linfticos, sendo
os gnglios linfticos regionais o alvo primrio (Fleury et al., 2000a; MacGillivray et al., 2002;
Smith et al., 2002).
Apesar de poderem apresentar um crescimento lento estes tumores so localmente
invasivos e se o factor tempo proporcionar iro metastizar para fscia muscular, glndula
mamria, osso, canal vertebral, crebro e rgos internos como pulmo, fgado, bao, rim,
corao. Os sinais clnicos mais comuns associados so: depresso, perda de peso, clica e
edema perifrico. A palpao rectal e ultrasonografia so exames teis na deteco de
tumores internos. A constatao de clulas com pigmento melnico, que podem ser
melancitos neoplsicos ou melanfagos associados, em bipsia ou citologias de massas
internas ou ainda em preparaes citolgicas de fluido abdominal ou torcico, confirma o
diagnstico de melanoma metasttico (Fleury et al., 2000a; Patterson-Kane et al., 2001; Foy et
al., 2002; MacGillivray et al., 2002; Valentine, 2006a; Garvican et al., 2007).
Foi sugerido que estas massas internas possam ser acumulaes ectpicas de
melancitos hiperplsicos ou pigmento melnico em aglomerados dentro de melanfagos e
no verdadeiras metstases e podem assim experimentar transformao maligna in situ
(Patterson-Kane et al., 2001 citando Wilock, 1993).

Critrios de malignidade
Muitas vezes estes critrios referem-se aos animais em geral e no especificamente a
equinos o que torna a avaliao nesta espcie pouco ajustada. O melanoma ser uma das
poucas neoplasias em animais em que a localizao um importante factor prognstico mas
no existe uma relao evidente entre as caractersticas histolgicas, incluindo o ndice
mittico e pigmentao, e a taxa de sobrevivncia (Smith et al., 2002).
Para tumores cutneos em animais a caracterstica mais fivel para distinguir benigno de
maligno o ndice mittico (Smith et al., 2002) e segundo Goldschmidt (1998) 3 ou mais figuras
mitticas por 10 campos de grande ampliao indicam malignidade.

15

Introduo

A morfologia celular tambm uma caracterstica discriminatria til e no caso de


malignidade as clulas apresentam um ncleo grande com variaes de tamanho e forma,
hipercromasia, condensao da cromatina incomum, um ou mais nuclolos e figuras mitticas
atpicas. O critrio mais importante , sem dvida, a invaso linftica ou sangunea
(Goldschmidt, 1998; Smith et al., 2002).
O tamanho da leso, o grau de pigmentao, a intensidade da colorao do antignio
nuclear de proliferao celular (PCNA), a presena de necrose, ulcerao ou inflamao e
expresso da p53 so de valor prognstico limitado em animais (Smith et al., 2002).

Outras tcnicas diagnsticas


No caso de melanomas amelnicos ou pouco diferenciados o diagnstico definitivo pode
estar comprometido uma vez que existem algumas neoplasias que simulam melanomas
microscopicamente. As tcnicas tradicionais de histoqumica passam assim para segundo
plano para a imunohistoqumica (IHQ) incorporando anticorpos monoclonais e policlonais, a
microscopia electrnica (ME) e mais recentemente a hibridizao in situ (HIS) (Smith et al.,
2002).
A deteco IHQ de marcadores melanocticos tem auxiliado em muito o diagnstico
destes tumores (Pamela et al., 2007). A vimentina, citoqueratina (CK), protena S100, enolase
especfica dos neurnios (NSE), Melanocyte Antigen-A (Melan-A) ou Melanoma Antigen
Recognized by T-cells 1 (MART-1), PCNA, Ki-67 e Human Melanoma Black-45 (HMB-45) so
alguns dos exemplos de marcadores mais reportados na bibliografia (Rodrguez et al., 1997;
Sutton e Coleman, 1997; Roels et al., 2000; Heinzerling et al., 2001; Smith et al., 2002;
Patterson-Kane e Ginn, 2003; Seltenhammer et al., 2004; Stokking, 2004; Pamela et al., 2007;
Chapman et al., 2009; Scott e Miller, 2011).
A protena vimentina um filamento intermedirio expresso por clulas mesenquimatosas
e neuroectodrmicas de tecidos normais assim como a CK mas expressa por clulas epiteliais
(Koenig et al., 2001). A maioria dos melanomas, em humanos, ces e gatos, seno todos
parecem ser positivos vimentina e negativos CK (Gown et al., 1986; Smith et al., 2002). Um
outro marcador que se tem mostrado til a S100, uma protena ligante do clcio, intranuclear
e por norma encontrada em clulas do tecido nervoso central e perifrico. Esta protena
tambm foi encontrada em clulas fora do tecido nervoso como nos melancitos sendo que a
maioria dos melanomas so S100-positivos (Sandusky Jr et al., 1985; Gown et al., 1986; Smith
et al., 2002). A NSE, uma enzima glicoltica, um marcador frequentemente utilizado para
identificar tumores melanocticos contudo, no especfica destes uma vez que pode ser
encontrada numa variedade de outros tecidos como o msculo liso ou tecidos neuroendcrinos
(Koenig et al., 2001; Smith et al., 2002). Melan-A/MART-1 uma protena de funes pouco

16

Introduo

conhecidas que elcita uma resposta citotxica das clulas T, fortemente positiva no
citoplasma dos melancitos mas no expressa noutros tipos celulares e talvez seja o
marcador mais especfico at ao momento (Koenig et al., 2001; Smith et al., 2002; Stokking,
2004; Chapman et al., 2009). O PCNA e o Ki-67 so marcadores de proliferao e, segundo
alguns autores, so importantes na distino de tumores benignos e malignos (Seltenhammer
et al., 2004), embora outros estudos no partilhem desta opinio (Roels et al., 2000; Pamela et
al., 2007; Scott e Miller, 2011). O HMB-45 um anticorpo monoclonal apresentado pela
primeira vez em 1986, quando se admitia ser absolutamente especfico e sensvel para leses
melanocticas (Gown et al., 1986; Orchard, 2000). Estudos mais actuais revelam, porm uma
diminuio da especificidade e sensibilidade deste marcador sendo considerado menos
profcuo em tecidos animais (Berrington et al., 1994; Orchard, 2000; Smith et al., 2002).
Adicionalmente ressalva-se a possvel importncia diagnstica que ter avaliar determinados
oncogenes relacionados com tecidos melanocticos (Sahar El-Sheikh et al., 2009). Como
referido previamente, estes oncogenes so resultado de mutaes de proto-oncogenes como
o caso do c-Kit (Smith et al., 2002), tema que ser aprofundado posteriormente neste trabalho.

1.6. Tratamento e seguimento clnico


Para determinar as opes de tratamento dever ter-se em conta a localizao, o
tamanho, o nmero e o tipo de tumor assim como os custos associados e possveis efeitos
secundrios (Knottenbelt, 2008b; Buechner-Maxwell, 2009; Laus et al., 2010). O tamanho
considerado por numerosos investigadores, quer em humanos quer em equinos, um importante
factor prognstico podendo influenciar a escolha do tratamento (Valentine, 1995; MacGillivray
et al., 2002; Knottenbelt, 2008b; Knottenbelt, 2008a; Paek et al., 2008; Buechner-Maxwell,
2009).
As modalidades de tratamento disponveis, mesmo sem custos demasiado elevados e
passveis de serem realizadas em ambiente no hospitalar, so vastas: exciso convencional,
crioterapia, imunoterapia e quimioterapia intralesional (cisplatina, 5-fluorouracilo). A exciso a
laser com dixido de carbono (CO2) e a radioterapia so tambm modalidades a considerar, no
entanto o equipamento dispendioso e estes casos so habitualmente referidos para ambiente
hospitalar (Palmer, 2002; Knottenbelt, 2008a; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011).
Alm destes mtodos h estudos que referem tambm a ablao por radiofrequncia, a
braquiterapia ou a amputao parcial da cauda (Knottenbelt, 2008a; Chapman et al., 2009;
Spugnini et al., 2011). Apesar das imensas escolhas a resposta ao tratamento difcil de

17

Introduo

determinar devido baixa taxa de crescimento da maioria dos tumores e ao facto de, por
vezes, se combinarem vrias modalidades teraputicas (MacGillivray et al., 2002).
De acordo com alguns autores, a exciso cirrgica, quando possvel, o tratamento de
eleio (Goldschmidt e Hendrick, 2002; Valentine, 2006a).
A cimetidina um antagonista do receptor

da histamina (H2) com efeitos

imunomoduladores. usada em humanos, ces e embora seja benfica nestes a mesma


evidncia no est bem esclarecida em cavalos (Buechner-Maxwell, 2009; Laus et al., 2010).
um assunto que tem gerado alguma controvrsia uma vez que h registos de ser efectiva
levando a remisso completa ou mais comummente parando a progresso da doena atravs
da diminuio no tamanho e nmero de tumores. Tambm existem estudos a contrapor estes
resultados ou ainda investigadores que defendem ser mais indicado em tumores que crescem
activamente no havendo assim consenso acerca da eficcia deste frmaco (Rodrguez et al.,
1997; Goldschmidt e Hendrick, 2002; MacGillivray et al., 2002; Palmer, 2002; Rees, 2004; Laus
et al., 2010; Scott e Miller, 2011). A falta de homogeneidade relativamente aos mtodos,
apresentao clnica e tratamentos entre os investigadores pode ser a razo para no se
conseguir estabelecer uma comparao lgica e vivel entre os diversos estudos (Laus et al.,
2010).
No caso dos melanocitomas a exciso cirrgica completa curativa (Foley et al., 1991;
Roels et al., 2000). No que se refere aos melanomas a exciso cirrgica extensa pode ser
curativa no caso de leses isoladas mas impossvel ou impraticvel nas leses mltiplas. A
crioterapia uma alternativa mas alguns autores verificaram rpida recorrncia quer com este
mtodo ou com exciso cirrgica (Scott e Miller, 2011). A remoo incompleta, quer por
exciso cirrgica quer por criocirrgia, pode aumentar o risco de recidiva de uma forma
agressiva (Foley et al., 1991; Farcu et al., 2007; Scott e Miller, 2011 citando Johnson, 1998)
ou mesmo aumentar o risco de metstases por estimulao mecnica (Chapman et al., 2009).
De acordo com alguns autores, a radioterapia, a quimioterapia tradicional e a
imunoterapia com BCG (Bacillus Calmette-Guerin) no tm sido vantajosas (Scott e Miller,
2011). Actualmente investigam-se hipteses focadas na imunoprofilaxia quer em humanos quer
em animais. Uma eventual vacina, preparada a partir de um tumor excisionado, como um
potencial tratamento nos casos no passveis de exciso cirrgica ou administrao
intratumoral de ADNs de interleucina-18 (IL-18) e interleucina-12 (IL-12) demostraram alguns
efeitos inibitrios no crescimento dos tumores em cavalos ruos (Heinzerling et al., 2001;
Valentine, 2006a; Knottenbelt, 2008a; Chapman et al., 2009).
Recentemente (2011) foi publicado o primeiro caso de sucesso no tratamento de
mltiplos melanomas num equino usando a tcnica clnica da electroquimioterapia, uma
estratgia que liga a administrao de um agente quimioterpico, no caso a cisplatina, e a

18

Introduo

descarga de pulsos elctricos aumentando a absoro e eficcia do frmaco usado. uma


abordagem segura e eficaz para os tumores cutneos em equinos e est disponvel
equipamento porttil permitindo a sua realizao em ambulatrio (Spugnini et al., 2011).
Uma taxa significativa de tratamentos fracassa devido falta de seguimento clnico e
aqui, tanto o Mdico Veterinrio responsvel como o proprietrio, assumem um papel
fundamental no que diz respeito monitorizao do animal (Hewes e Sullins, 2009).
Alguns autores assumem, porm, ser dispensvel qualquer tipo de tratamento a no ser
que interfira com funes orgnicas do animal (Foley et al., 1991; Rees, 2004).
, sem qualquer dvida, fundamental continuar a investigao neste tema (Valentine,
2006a; Chapman et al., 2009) pois parece haver escassos progressos em tratamentos de
melanomas malignos quer em humanos quer em animais (Goldschmidt e Hendrick, 2002).
necessrio que sejam estabelecidos modelos pr-clnicos que permitam a determinao da
eficcia de novas abordagens teraputicas bem como um marcador fivel para o melanoma
equino, que continua por estabelecer (Seltenhammer et al., 2004; Chapman et al., 2009).

1.7. c-Kit (CD117 ou Kit)


O c-Kit (Figura 4) um proto-oncogene com importantes funes na normal proliferao,
desenvolvimento e diferenciao dos melanoblastos embrionrios. A sua expresso
constitutivamente

mantida

em

clulas-tronco

hematopoiticas,

mastcitos,

linfcitos

intraepiteliais, clulas germinativas, melancitos e clulas intersticiais de Cajal onde actua


como receptor do factor de crescimento. Codifica um receptor transmembranar da tirosina
quinase (RTK) c-Kit e localiza-se no cromossoma 4q em humanos. A transformao maligna
dos melancitos est associada a alteraes na expresso do receptor c-Kit. A protena
codificada pelo proto-oncogene activada pelo seu ligante, designado Stem Cell Factor (SCF)
ou factor de crescimento dos mastcitos, durante a melangenese (Morini et al., 2004; Alexeev
e Kyonggeun, 2006; Rivera et al., 2008; Sahar El-Sheikh et al., 2009).

19

Introduo

Figura 4 - Ilustrao esquemtica do receptor c-Kit. Adaptado de Lennartsson et al. (2005).

Em Medicina Humana a sua expresso foi cuidadosamente avaliada em tecidos normais


e em tecidos neoplsicos (Matsuda et al., 1993; Morini et al., 2004). Em 1993, Matsuda et al.
levou a cabo um estudo em que avaliou a expresso do c-Kit em diversos tipos de tumores e
comparou-os com os correspondentes tecidos normais, fetais e adultos, concluindo que este
proto-oncogene estar envolvido na patogenia de determinados tipos especficos de tumores
bem como na iniciao e progresso dos mesmos (Matsuda et al., 1993). Os investigadores
continuam a direccionar esforos para o estudo desta protena nos melanomas humanos,
avaliando melanomas orais e melanomas cutneos malignos quanto expresso IHQ do c-Kit.
Diversos estudos demostraram que a progresso e o comportamento metasttico do
melanoma humano esto associados a perda de expresso do proto-oncogene c-Kit, no
entanto, a causa subjacente ainda no se encontra totalmente esclarecida (Bar-Eli, 1997; Potti
et al., 2003; Gross et al., 2005; Alexeev e Kyonggeun, 2006; Sahar El-Sheikh et al., 2009).
Embora existam trabalhos realizados em tecidos humanos, caninos, felinos e de roedores
(Komuro, 1999; Morini et al., 2004; Rivera et al., 2008; Sahar El-Sheikh et al., 2009), tanto
quanto foi possvel averiguar, no h registos da expresso desde marcador em tumores
melanocticos em equinos.

20

Objectivos

2. OBJECTIVOS

A realizao desta dissertao teve como objectivos principais:

- avaliar as caractersticas clnicas e histolgicas dos tumores melanocticos de equinos e


estabelecer comparaes com as investigaes j publicadas;
- avaliar a expresso IHQ do marcador c-Kit nos tumores melanocticos de equinos criando um
paralelismo com os resultados obtidos para outras espcies;
- estudar possveis relaes entre as caractersticas clnicas e histopatolgicas e a marcao
IHQ obtida;
- ponderar possveis implicaes desta marcao de c-Kit no diagnstico de tumores
melanocticos na espcie equina.

21

Material e mtodos

3. MATERIAL e MTODOS

3.1. Material utilizado e a sua procedncia

Neste estudo foram includos ndulos cutneos de equinos, com suspeita de serem
tumores melanocticos pelo Mdico Veterinrio responsvel e cujos proprietrios autorizaram a
sua remoo (total ou parcial). As amostras foram recolhidas em territrio nacional, em
Inglaterra e em Barcelona durante um perodo de 8 meses, entre Novembro de 2010 e Julho de
2011. As amostras foram processadas na Universidade de Trs-os-Montes e Alto Douro
(UTAD), no Liphook Equine Hospital (LEH) e na Universidade Autnoma de Barcelona (UAB)
para posterior avaliao.

3.2. Avaliao clnica

A cada animal foi efectuado um exame fsico geral o qual incluiu detalhada observao e
palpao das zonas passveis de se encontrar ndulos cutneos.
A par do material recolhido foi efectuado um questionrio ao proprietrio (Anexo 1),
responsvel pelo animal ou Mdico Veterinrio referente no qual constava dados referentes ao
animal como nome, idade, gnero, raa, pelagem e aptido. Relativamente (s) leso(es)
foram recolhidos dados sobre o tamanho, a quantidade, a localizao e a durao bem como
cada caso documentado por suporte fotogrfico (Sony Cyber-shot DSC-W120, 7.2 Megapixels).
Estes dados recolhidos com as respectivas categorias associadas constituram as nossas
variveis clnicas.
Em relao ao tamanho dos ndulos considerou-se pequenas as leses at 1 centmetro
(cm) de dimetro, mdias as leses que apresentavam entre 1 e 4 cm e grandes as leses
superiores a 4 cm de dimetro.
Relativamente quantidade considerou-se melanoma drmico quando se identificou 1 ou
2 ndulos e melanomatose drmica quando visveis ndulos em nmero superior a 2.

22

Material e mtodos

3.3. Avaliao histopatolgica

O material foi recolhido por exciso cirrgica (Figura 5), fixado em formol a 10%, includo
em parafina sinttica Histoplast-Shandon, seguindo a metodologia habitual.

Figura 5 - Exciso cirrgica de uma das amostras includas no estudo.

Aps incluso, foram realizados cortes de cada um dos tumores, com 3 micrmetros (m)
de espessura, num micrtomo automtico Leica RM 2255. Em seguida, os cortes foram
colocados em lminas e efectuou-se secagem na estufa, temperatura de 37C. Aps
secagem, foram desparafinados em xilol, hidratados por passagem consecutiva em lcoois de
concentraes decrescentes, procedendo-se colorao convencional com hematoxilinaeosina (HE) para posterior diagnstico histopatolgico.
O diagnstico histopatolgico foi realizado em conformidade com os critrios da
Organizao Mundial de Sade (OMS) (Goldschmidt, 1998), num microscpio Nikon
Optiphot-2.
Todas as amostras foram observadas com a colorao de HE e avaliadas as
caractersticas histolgicas descritas no quadro 3 que se segue. Foi avaliada a localizao das
leses entre derme ou derme e epiderme, o tipo de clulas presentes em fusiforme, redondo ou
um misto destes, foi observada a presena de ulcerao, quantificou-se o pigmento e estroma
em 3 graus, escasso (1), moderado (2) e abundante (3) e observou-se ainda a presena de
mbolos vasculares/linfticos.

23

Material e mtodos

Quadro 3 - Variveis histolgicas avaliadas.


Variveis histolgicas
Localizao

Categorias
Derme e/ou
Epiderme

Tipo de clulas

Fusiforme
Redondo
Misto

Ulcerao

Presente
Ausente

Quantidade de pigmento

Escasso 1
Moderado 2
Abundante 3

Quantidade de estroma

Escasso 1
Moderado 2
Abundante 3

mbolos

Presente
Ausente

3.4. Avaliao imunohistoqumica


Para a anlise IHQ foram utilizadas amostras preservadas em formol a 10%, includas em
parafina. No micrtomo foram realizados cortes seriados de cada um dos tumores com 3 m de
espessura, que foram colocados em lminas revestidas com soluo de Silane (3Aminopropyltriethoxysilane, Sigma), de acordo com a metodologia convencional. Antes de
estarem preparados para a realizao da tcnica de IHQ, os cortes permaneceram por 48
horas na estufa a 37C, para secagem e melhor aderncia s lminas.
A presena de melanina por vezes dificulta a avaliao da imunorreactividade, uma vez
que se torna difcil de diferenciar da reaco castanha adquirida pelo cromogneo tetrahidrocloreto de 3,3-diaminobenzina (DAB) pelo que, num estudo prvio, tentou-se um
apuramento da tcnica de branqueamento da melanina com diferentes tempos de actuao da
soluo de cido oxlico (H2C2O4) a 0,1%.
De forma a optimizar os resultados foram tambm realizados estudos preliminares para
adequar concentraes do anticorpo primrio, mtodo de recuperao antignica e diferentes
tempos de incubao. Todas as incubaes foram realizadas em cmara hmida horizontal,
Bio Optica.

24

Material e mtodos

3.4.1 Procedimento

A expresso IHQ da protena em estudo foi obtida pelo mtodo indirecto com uso de um
complexo estreptavidina-biotina peroxidase, utilizando o kit Ultravision Detection System,
Labvision Corporation, Fremont, CA, USA (as suas componentes figuram a negrito no
seguimento do texto).
O procedimento escolhido foi adaptado do mtodo exposto por Sulaimon (2002)
conforme abaixo descrito:
1. Desparafinao dos cortes em xilol durante 30 minutos e hidratao com uma srie
de lcoois de concentrao decrescente (100%, 95%, 80% e 70%) at gua
destilada;
2. Realizao de um pr-tratamento de recuperao antignica em microondas (imerso
das lminas em tampo citrato com pH=6,2) durante 15 minutos, divididos em 3 ciclos
de 5 minutos com intervalos de 30 segundos entre cada um, a 750W;
3. Arrefecimento das lminas durante cerca de 30 minutos temperatura ambiente;
4. Imerso das lminas durante 30-40 minutos numa soluo de permanganato de
potssio (KMnO4) a 0,25%;
5. Lavagem das lminas por gua destilada;
6. Colocao das lminas numa soluo de cido oxlico (H2C2O4) a 0,1% durante
aproximadamente 10 minutos (processo monitorizado ao minuto, adaptando-se os
tempos quantidade de pigmento da amostra);
7. Inibio das peroxidases endgenas com perxido de hidrognio (H2O2) a 3%,
durante 30 minutos e remoo do excesso do mesmo com duas lavagens sucessivas
com tampo fosfato salino (PBS);
8. Incubao dos cortes temperatura ambiente durante 5 minutos com Ultra V
Block;
9. Incubao dos cortes com o anticorpo primrio c-Kit (CD117) (clone Ab-6, Dako),
com uma concentrao de 1:500 (diluio em tampo PBS com pH=7,4), durante a
noite, no frigorfico a 4C, permanecendo em cmara hmida horizontal, Bio Optica;
10. Aps o perodo de incubao, remoo do anticorpo primrio com 4 lavagens com
tampo PBS e incubao dos cortes durante 10 minutos com Biotinylated Goat
Polivalent (anticorpo secundrio) temperatura ambiente;
11. Realizao de 2 lavagens com tampo PBS e incubao durante 10 minutos com
Streptavidin Peroxidase temperatura ambiente e de seguida uma lavagem com
tampo PBS;

25

Material e mtodos

12. Revelao das lminas com uma incubao de aproximadamente 10 minutos em


soluo aquosa de tetra-hidrocloreto de 3,3-diaminobenzidina (DAB) SIGMA, qual
se adicionou previamente 1,2 l de perxido de hidrognio (H2O2) a 30% por cada
mililitro (ml) de soluo seguida de lavagem com gua destilada;
13. Realizao de contraste nuclear ou contra-colorao com imerso das lminas numa
soluo de Hematoxilina de Gill, durante 1 minuto, seguindo-se uma lavagem em
gua corrente at as lminas contrastarem de azul (cerca de 10 minutos);
14. Desidratao das lminas em concentrao crescente de lcoois (95%, 100%),
diafinizao em xilol durante aproximadamente 20 minutos e montagem utilizando a
resina sinttica Entellan (Merck).

3.4.2 Mtodos de quantificao da imunorreactividade

Foi considerada reaco positiva a marcao no citoplasma dos melancitos. Os tumores


foram considerados positivos quando apresentavam mais de 5% das clulas tumorais
positivas, de acordo com o descrito (Morini et al., 2004).
A imunorreactividade foi avaliada quando a marcao ocorria no citoplasma dos
melancitos e classificada em presente ou ausente.

3.5. Anlise estatstica

A anlise estatstica foi realizada com o programa estatstico SPSS (Statistical Package
for the Social Sciences, Chicago, IL, EUA), verso 19.0 para Windows.
Como anlise descritiva das variveis contnuas, usou-se a mdia, a mediana, o desvio
padro e o erro padro da mdia, mnimo e mximo. Os resultados foram expressos da forma
mdia desvio padro. Usou-se a anlise descritiva das variveis categricas, com a obteno
de frequncias e percentagens das categorias.
Foi usado o teste de Qui-Quadrado (2) para analisar as correlaes entre cada categoria
das variveis dentro de cada estudo (clnico, histopatolgico e imunohistoqumico) assim como
para analisar as associaes das categorias das variveis entre estudos (clnico,
histopatolgico e imunohistoqumico). Os valores obtidos foram considerados significativos
para valores de p<0,05.

26

Resultados

4. RESULTADOS

Neste estudo foram includos tumores cutneos de 43 equinos e foram avaliados os


dados clnicos, histolgicos e imunohistoqumicos. De alguns animais foram retirados vrios
ndulos, no entanto, s foi analisado histologicamente um ndulo por animal.
A classificao das amostras avaliadas neste estudo vai de encontro classificao
adoptada por Valentine, no estudo publicado em 1995. Os tumores foram classificados em 4
sndromes clnicas: nevo melanoctico, melanoma drmico, melanomatose drmica e
melanoma maligno anaplsico. Esta classificao suportada pelas caractersticas clnicas e
histolgicas, com a ressalva que a diferena entre melanoma drmico e melanomatose
drmica exclusivamente clnica (Valentine, 1995).

4.1. Avaliao dos dados clnicos

Idade:
Dos animais includos no estudo registou-se um valor mdio de idades de 14,9 anos
(5,03), com um mnimo de 2,5 anos e um mximo de 26 anos.

Gnero:
Dos tumores analisados, 22/43 (51,2%) ocorreram em machos e 21/43 (48,8%) em
fmeas como podemos observar pelo grfico 1.

Gnero

machos

48,8%
51,2%

fmeas

Grfico 1 - Distribuio dos 43 animais includos no estudo segundo o gnero.

27

Resultados

Raa:
As leses estudadas ocorreram em equinos de vrias raas sobretudo PSL (n=26;
60,5%) e Cruzado Lusitano (n=12; 27,9%) alm de Anglolusa (n=2; 4,7%), Anglorabe (n=1,
2,3%), Cruzado Espanhol (n=1; 2,3%) e Irish Draught x Thoroughbred (n=1; 2,3%) conforme o
quadro 4 que se segue.
Quadro 4 - Frequncias e percentagens das raas dos animais includos no estudo.
Raa

Frequncia (n)

Percentagem (%)

PSL

26

60,5

Cruzado Lusitano

12

27,9

Anglolusa

4,7

Anglorabe

2,3

Cruzado Espanhol

2,3

Irish Draugh x
Thoroughbreb

2,3

Total

43

100

PSL Puro-Sangue Lusitano

Pelagem:
As pelagens encontradas nos animais avaliados incluram: rua (n=39; 90,7%), isabel
(n=2; 4,7%), baia (n=1; 2,3%) e castanha (n=1; 2,3%) conforme se segue apresentado no
grfico 2.

Pelagem
2,3%

2,3%

4,7%
Rua
Isabel
Baia
Castanha
90,7%

Grfico 2 - Frequncias das diferentes pelagens observadas nos animais deste estudo.

28

Resultados

Quantidade:
semelhana do estudo feito por Valentine (1995), as leses foram divididas em
melanoma drmico quando identificados 1 ou 2 ndulos (n=5; 11,6%) ou em melanomatose
drmica quando identificadas leses em nmero superior a 2 (n=38; 88,4%), como se segue
abaixo apresentado no grfico 3.

Quantidade

88,4%
100%
11,6%

50%

Quantidade

0%
Melanoma drmico

Melanomatose
drmica

Grfico 3 - Distribuio da quantidade de leses nos animais includos no estudo.

Tamanho:
A avaliao macroscpica das leses, antes destas serem excisionadas, levou a um
agrupamento das mesmas em pequenas (n=39; 90,7%), mdias (n=19; 44,2%) e grandes
(n=11; 25,6%) quando apresentavam at 1 cm de dimetro, entre 1 e 4 cm ou superior a 4 cm
respectivamente, como esquematizado no quadro 5 que se segue. Ressalva-se que o mesmo
animal pode apresentar mais do que uma categoria de tamanho.
Quadro 5 - Frequncias e percentagens dos tamanhos das leses encontradas nos animais
avaliados.
Tamanho
Pequenas
(< 1 cm)
Mdias
(1 a 4 cm)
Grandes
(> 4 cm)

Frequncia (n)

Percentagem (%)

39

90,7

19

44,2

11

25,6

29

Resultados

Localizao:
Tendo em conta os 43 animais avaliados, os tumores identificados localizavam-se na
pele, em diversas zonas que foram categorizadas:
- zona perineal (n=40; 93%), considerada tpica, que inclui um ou vrios ndulos na
superfcie ventral da cauda, nus, vulva e/ou perneo (Figura 6);
- outras localizaes (n=12; 27,9%), consideradas atpicas, que incluem um ou vrios
ndulos numa das seguintes regies: garupa, olho, glndula salivar, glndula submandibular,
espdua, pescoo, crineira, comissura labial, costado e/ou face interna da coxa;
- padro difuso (n=2; 4,7%) (Figura 7), considerado uma distribuio exagerada de
ndulos (em nmero superior a 4 em localizaes distintas entre si) um pouco por toda a regio
corporal.
De ressalvar que 10 dos animais apresentavam concomitantemente leses nas
localizaes tpicas e atpicas (n=10; 23,3%) (Grfico 4).

Figura 6 - Localizao tpica de Figura 7 - Padro difuso de leses melanocticas.


ocorrncia das leses em estudo. Alm destas o animal apresentava ndulos na rea
Imagem recolhida antes da exciso da traqueia, base da cauda e perneo.
cirrgica.

30

Resultados

Localizao
93,0%
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%

Localizao
27,9%
4,7%

Zona perineal

Outras

Difusa

Grfico 4 - Distribuio das localizaes das leses encontradas nos animais includos no
estudo.

Durao:
Aquando do inqurito foi tambm questionado o tempo estimado do aparecimento das
leses obtendo-se valores entre 6 meses e 20 anos.

4.2. Avaliao dos dados histopatolgicos

De todos os ndulos identificados e excisionados, foi avaliado um por animal, isto , 43


ndulos no total.
Com base nas caractersticas clnicas e histolgicas das 43 amostras deste estudo foi
possvel, seguindo a linha de pensamento de Valentine (1995), classificar histologicamente 2
tipos distintos de tumores: melanoma drmico (n=39; 90,7%) e melanoma maligno anaplsico
(n=4; 9,3%).
Os tumores avaliados localizavam-se apenas na derme (n=28; 65,1%) (Figura 8) ou na
derme estendendo-se epiderme (n=15; 34,9%) (Figura 9). Apresentavam uma morfologia
celular que foi agrupada em fusiforme (n=3; 7,0%) (Figura 10), redonda (n=23; 53,5%) (Figura
11) e mista (n=17; 39,5%) caso exibissem os dois tipos celulares. Em 10 casos (n=10; 23,3%)
foi observada ulcerao (Figura 12) dos tecidos embora na maioria (n=33; 76,7%) esta
caracterstica no se verificasse. A quantidade de pigmento melnico foi categorizada em
escassa (1) (n=5; 11,6%) (Figura 13), moderada (2) (n=16; 37,2%) e abundante (3) (n=22;
51,2%) (Figura 14) assim como a quantidade de estroma, escassa (1) (n=19; 44,2%),

31

Resultados

moderada (2) (n=16; 37,2%) (Figura 15) e abundante (3) (n=8; 18,6%) (Figura 16). Em 4 dos 43
animais includos (n=4; 9,3%) foram tambm observados mbolos vasculares/linfticos (Figura
17), enquanto que nas restantes amostras (n=39; 90,7%) esta caracterstica no estava
presente.
No quadro 6 resumem-se as variveis histolgicas avaliadas nos tumores includos na
amostra e as respectivas percentagens associadas.

Quadro 6 - Caracterizao histopatolgica das amostras analisadas.


Variveis histolgicas

Categorias

n=43
N

Derme
Derme + Epiderme

28
15

65,1
34,9

Tipo de clulas

Fusiforme
Redondo
Misto

3
23
17

7,0
53,5
39,5

Ulcerao

Presente
Ausente

10
33

23,3
76,7

Escassa (1)
Quantidade de pigmento Moderada (2)
Abundante (3)

5
16
22

11,6
37,2
51,2

Escassa (1)
Moderada (2)
Abundante (3)

19
16
8

44,2
37,2
18,6

Presente
Ausente

4
39

9,3
90,7

Localizao

Quantidade de estroma
mbolos

Tendo em conta os resultados dos dados clnicos e histopatolgicos, seguindo a


classificao estabelecida por Valentine (1995), como j referido anteriormente, podemos
ento classificar as amostras do estudo em melanoma drmico (n=4; 9,3%), melanomatose
drmica (n=35; 81,4%) e melanoma maligno anaplsico (n=4; 9,3%).

32

Resultados

Figura 8 - Localizao drmica da leso. Colorao com HE, 4x.

Figura 9 - Localizao drmica que se estende epiderme. Colorao HE, 40x.

33

Resultados

Figura 10 - Morfologia celular fusiforme. Colorao HE, 40x.

Figura 11 - Morfologia celular redonda. Colorao HE, 40x.

34

Resultados

Figura 12 - Ulcerao dos tecidos observada em amostra do estudo. Colorao HE, 40x.

Figura 13 - Quantidade de pigmento melnico escassa (grau 1). Colorao HE, 40x.

35

Resultados

Figura 14 - Quantidade de pigmento melnico abundante (grau 3). Colorao HE, 40x.

Figura 15 - Quantidade de estroma moderada (grau 2). Colorao HE, 40x.

36

Resultados

Figura 16 - Quantidade de estroma abundante (grau 3). Colorao HE, 40x.

Figura 17 - mbolo vascular. Observa-se pigmento melnico no seu interior. Colorao HE,
40x.

37

Resultados

4.3. Avaliao dos dados imunohistoqumicos

A reactividade ao anticorpo c-Kit ocorreu no citoplasma das clulas, de forma difusa ou


com padro granular (Figuras 18 e 19). Observou-se imunorreactividade nos melancitos
neoplsicos, no se observando marcao nos melanfagos (Figura 20).
Observou-se ainda marcao nas glndulas apcrinas da derme e na epiderme, o que
constituiu o controlo positivo interno.
A imunomarcao foi observada em 62,8% (n=27) dos tumores (Quadro 7) e estava
ausente em 37,2% (n=16).

Figura 18 - Imunorreactividade para o c-Kit com padro citoplasmtico granular, 40x.

38

Resultados

Figura 19 - Imunorreactividade para o c-Kit com padro citoplasmtico difuso, 40x.

Figura 20 - Imunorreactividade positiva para o c-Kit nos melancitos e negativa para


melanfagos, 40x.

39

Resultados

Quadro 7 - Expresso de c-Kit nas amostras em estudo.


c-Kit

n=43
N

Presente

27

62,8

Ausente

16

37,2

Usando o teste de 2 na anlise das correlaes entre as categorias de cada varivel


clnica (gnero - macho e fmea; raa - PSL, Cruzado Lusitano, Anglolusa, Anglorabe,
Cruzado Espanhol e Irish Draught x Thoroughbred; pelagem - rua, isabel, baia e castanha;
quantidade - melanoma drmico e melanomatose drmica; tamanho - pequeno, mdio e
grande; e localizao - zona perineal, outras localizaes e padro difuso) e histopatolgica
(localizao - derme ou derme e epiderme; tipo de clulas - fusiforme, redondo e misto;
presena de ulcerao, quantidade de pigmento - escassa, moderada e abundante; quantidade
de estroma - escassa, moderada e abundante e presena de mbolos), referidas
anteriormente, assim como na associao das variveis entre estudos, ou seja, associando
cada categoria das variveis clnicas com cada categoria das variveis histopatolgicas e
destas com a imunorreactividade de c-Kit no foram encontrados resultados estatisticamente
significativos (p<0,05) para nenhuma das associaes.

40

Discusso

5. DISCUSSO

De acordo com os resultados expostos discutimos cada caracterstica avaliada, clnica e


histopatolgica, bem como a imunorreactividade observada estabelecendo comparaes com
estudos efectuados at data salvaguardando as diferenas entre espcies e as condies
das investigaes em causa como sendo o nmero de animais includos no estudo e a
metodologia seguida. A discusso neste tema transporta-nos a resultados muito diferentes
entre estudos e por isso torna-se por vezes complexa e dbia (Gross et al., 2005), uma vez que
no existe um consenso entre os investigadores no que se refere classificao desta doena
em equinos.

5.1. Estudo clnico

Os dados avaliados referem-se apenas populao estudada e no foi objectivo do


trabalho avaliar incidncias e prevalncias das caractersticas clnicas.

Idade
No que diz respeito idade dos animais em estudo obteve-se uma mdia de 14,9 anos
com um desvio padro de 5,03 sendo que foram includos animais com idades compreendidas
entre os 2,5 e os 26 anos de idade. Estes resultados esto prximos dos obtidos em alguns
estudos anteriores, no entanto divergem relativamente a outros de acordo com as diversas
classificaes estabelecidas. Dos resultados obtidos, ou seja, num total de 43 amostras: 4
(9,3%) foram considerados melanomas drmicos, 35 (81,4%) melanomatose drmica e 4
(9,3%) melanomas malignos anaplsicos, como referido anteriormente. Assim, relativamente
aos melanomas drmicos temos animais com idades contidas entre os 7 e os 15 anos de
idade, com uma mdia de 11 anos ( 3,37), nos casos de melanomatose drmica os animais
encontram-se entre os 6 e os 26 anos com uma mdia de 15,9 anos de idade ( 4,60) e quanto
aos animais com melanomas malignos anaplsicos apresentavam idades entre os 2,5 e os 19
anos de idade com uma mdia de 10,4 anos ( 7,18).
Como exemplo, num estudo onde foram includos 20 animais com melanomas drmicos,
o intervalo de idades ocorreu entre os 2 e os 29 anos, com uma mdia de 13 anos. No caso de
animais com melanomatose, um estudo com 12 animais revelou que esta condio se
proporciona em animais com idades superiores a 15 anos podendo afectar equinos entre os 7

41

Discusso

e os 29 anos de idade. Refere-se ainda a condio de melanoma maligno anaplsico,


encontrado em animais com idade superior a 20 anos (Buechner-Maxwell, 2009). As diferenas
encontradas paras as distintas classes de tumores podem estar relacionadas com o nmero de
animais includos nas mesmas. Relativamente ao melanoma maligno anaplsico o presente
estudo contraria os dados referidos por Buechner-Maxwell (2009) e Seltenhammer et al. (2003)
uma vez que estes no se apresentaram em animais com idade superior a 20 anos, pelo
contrrio, todos os animais apresentavam idades inferiores, como acima mencionado.
Um estudo levado a cabo em 1997 analisou 58 cavalos com idades entre os 6 meses e
os 23 anos, sendo que 34 (58,6%) tinha mais de 10 anos (Rodrguez et al., 1997).
Outros autores referem apenas que a apresentao tpica de melanomas ocorre com
maior frequncia em animais com idades superiores a 6 anos (Valentine, 2006a; Scott e Miller,
2011).
Uma outra investigao dividiu a idade em trs classes: 0-4 anos, 5-10 anos e 10-30
anos e obteve frequncias de 10%, 25% e 60% respectivamente (Rieder et al., 2000).
Um estudo comparativo de tumores melanocticos defende que estes aparecem em
cavalos ruos aos 5 anos de idade ou antes, coincidindo com a mudana de cor da pelagem.
Contudo, os melanomas so pouco comuns em cavalos com idades inferiores a 6 anos e
desenvolvem formas malignas por volta dos 15 anos de idade (Smith et al., 2002).
Valentine, num estudo retrospectivo publicado em 1995, avaliou 53 cavalos com idades
compreendidas entre os 2 meses e os 29 anos de idade. Destes, 29 foram includos no grupo
diagnstico de nevo melanoctico com idades entre os 2 meses e 16 anos (mdia de 5 anos), 8
cavalos foram diagnosticados com melanomas drmicos entre os 2 e 10 anos de idade (mdia
de 7 anos), 12 cavalos com melanomatose drmica entre os 7 e os 29 anos (mdia de 17
anos), 2 cavalos com melanoma maligno anaplstico entre os 20 e 23 anos e 2 nos quais no
se obteve diagnstico concreto com idades entre os 13 e 14 anos. Comparando com o
presente estudo, os animais diagnosticados com melanomas drmicos, embora em nmero
inferior, tm uma idade, quer mnima quer mxima, superior. No que diz respeito aos animais
com melanomatose drmica, apesar do nmero de animais bastante superior, as idades
mnima, mdia e mxima no se distanciam muito das obtidas no estudo de Valentine (1995).
De notar que, quanto aos melanomas malignos anaplsicos, semelhana do que j referido
para o estudo de Buechner-Maxwell (2009) e contrariando os resultados de Valentine (1995),
todos os animais includos neste estudo apresentavam idades inferiores a 20 anos, inclusive o
animal mais novo do grupo apresentava apenas 2,5 anos de idade.
Um outro trabalho, onde foram includos 296 cavalos de raa Lipizzaner, 148 (50%)
apresentava a doena, 68 (46%) dos quais tinham mais de 15 anos (Seltenhammer et al.,
2003). O estudo apresentado diverge deste, no s no nmero de animais avaliados mas

42

Discusso

tambm no facto de terem sido includos apenas os que apresentam a doena. No entanto, de
um total de 43 animais, a percentagem de animais com a doena e com idades superiores a 15
anos de alguma forma idntica (n= 23; 53,5%).
Dados obtidos de um estudo com 70 animais de matadouro, salvaguardando uma maior
tendncia para terem uma idade mais avanada, foram divididos em 3 classes e em cavalos
com menos de 7 anos obtiveram uma percentagem de 53,3% para a presena de melanomas,
em cavalos entre 7 e 15 anos uma percentagem de 90,9% e uma percentagem de 100% para
cavalos com idades superiores a 15 anos (Sutton e Coleman, 1997).
Fleury et al. (2000b) analisou uma populao de 264 animais sendo que 31,4%
apresentava melanomas. Estes foram divididos em 4 classes etrias: 0-4 anos, 5-9 anos, 10-14
anos e 15 anos ou superior com percentagens de 2,5%, 20%, 40% e 68% respectivamente.
As diferenas encontradas podem ser explicadas pelo nmero de animais includos,
pelos critrios de seleco para entrada no estudo bem como pela diviso das diferentes
classes etrias. No entanto, os estudos so concordantes em concluir que esta uma condio
mais frequente em cavalos de idade geritrica. Estas frequncias podem, contudo, estar
sobrevalorizadas por uma relativizao desta doena, sobretudo nas fases iniciais, quer por
parte dos clientes quer dos clnicos responsveis.

Gnero
Os resultados respeitantes ao gnero so inconsistentes na bibliografia (Smith et al.,
2002).
Dos tumores analisados 22/43 (51,2%) ocorreram em machos e 21/43 (48,8%) em
fmeas pelo que parece no haver uma predisposio sexual para esta doena. Estes
resultados so concordantes com algumas investigaes anteriores (Valentine, 1995; Sutton e
Coleman, 1997; Fleury et al., 2000b; Valentine, 2006a; Scott e Miller, 2011). Contudo,
contrariam outros estudos que referem uma maior predisposio em machos (Smith et al.,
2002 citando Sundberg et al., 1977) ou mesmo uma outra investigao que sugere uma maior
predisposio em fmeas (Foley et al., 1991) apesar de terem sido apenas includos
diagnsticos de melanocitomas em cavalos com idade inferior a 2 anos, num total de 18
animais. Num outro estudo foram avaliados 296 animais em que 206 eram fmeas e 90 eram
machos porm, o efeito destes dados no foi significativo para o objectivo em causa que seria
avaliar a heritabilidade desta condio (Seltenhammer et al., 2003).
Esta diferena nos dados obtidos pode ser resultado do nmero de animais includos no
estudo bem como dos critrios de seleco dos mesmos pelo que no se encontram motivos
relacionados com a fisiopatologia e origem da doena que justifiquem predisposio nesta
caracterstica.

43

Discusso

Raa
As leses estudadas ocorreram em equinos de vrias raas sobretudo PSL (n=26;
60,5%) e Cruzado Lusitano (n=12; 27,9%) alm de Anglolusa (n=2; 4,7%), Anglorabe (n=1,
2,3%), Cruzado Espanhol (n=1; 2,3%) e Irish Draught x Thoroughbred (n=1; 2,3%).
Esta caracterstica no de fcil discusso uma vez que alguns estudos usam apenas
uma raa de cavalos (Lerner e Cage, 1973; Fleury et al., 2000a; Fleury et al., 2000b;
Seltenhammer et al., 2003) e muitas vezes no h referncias a frequncias exactas. A maioria
dos autores refere apenas que raas como rabe, Percheron, PSI, Lipizzaner, Andaluz, Shire,
Irish Draught, Pnei Gals (Goldschmidt e Hendrick, 2002; Smith et al., 2002; Rees, 2004;
Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009; Hewes e Sullins, 2009; Scott e Miller, 2011) esto
em elevado risco, no entanto, algumas destas raas tambm tm uma maior percentagem de
cavalos ruos (Smith et al., 2002; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009) o que pode
sobrevalorizar as frequncias. Em raas como Camargue Francs ou Lipizzaner 31% a 50%
dos cavalos apresenta alguma evidncia de tumores melanocticos (Buechner-Maxwell, 2009),
podendo mesmo chegar aos 75% em Lipizzaners (Seltenhammer et al., 2003). Em 53 animais
avaliados por Valentine em 1995, a raa rabe e PSI foram as mais afectadas. A mesma
autora, em 2006 e semelhana de estudos anteriores apontou a raa rabe como a mais
comum para neoplasias melanocticas (Valentine, 2006b).
Os resultados apresentados neste estudo abarcam uma maior percentagem de cavalos
PSL e Cruzado Lusitano. Uma possvel explicao ser o facto de a maior parte dos ndulos
terem sido recolhidos em territrio nacional sendo que haver uma maior probabilidade dos
cavalos observados serem destas raas. No entanto, no podemos especificar a influncia
desta caracterstica nos tumores melanocticos de equinos. Devero ser conduzidos mais
estudos na base da gentica que tero todo o interesse no que respeita evoluo da doena
e possveis opes teraputicas.

Pelagem
As pelagens encontradas nos animais avaliados incluram: rua (n=39; 90,7%), isabel
(n=2; 4,7%), baia (n=1; 2,3%) e castanha (n=1; 2,3%), ou seja, uma frequncia de 9,3% (n=4)
de outras pelagens que no rua.
Ao contrrio do que alguns autores estabeleceram, isto , os tumores melanocticos
serem uma condio mpar de cavalos ruos (Sutton e Coleman, 1997; Rees, 2004), as nossas
observaes demostraram que tambm possvel surgirem em outras pelagens. O nosso
estudo corrobora a opinio de outros investigadores que assumem ser uma doena passvel de
ocorrer em qualquer pelagem, embora se assome com mais frequncia na pelagem rua
(Knottenbelt e Pascoe, 1994; Valentine, 1995; Smith et al., 2002; Buechner-Maxwell, 2009;

44

Discusso

Scott e Miller, 2011). Inclusive surgem estudos com frequncias mais elevadas de outras
pelagens comparativamente com o nosso, por exemplo, 28,3% (n=15) no estudo de Valentine
(1995), 14,8% (n=4) no trabalho de Seltenhammer et al. (2004).
Estes dados, e validando especificamente para os resultados obtidos, podem estar
sobrevalorizados uma vez que a maioria das amostras referem-se a cavalos de raa PSL e
Cruzado Lusitano e reconhecida a elevada prevalncia da pelagem rua nestas raas
(Lusitano, 2011).
Ao que parece a elevada incidncia destas leses em cavalos ruos est intimamente
relacionada com o processo de despigmentao da pelagem (Sutton e Coleman, 1997; Slkner
et al., 2004). Com base na suspeita de uma influncia hereditria e gentica importante no
desenvolvimento de melanomas tm sido direccionados alguns estudos nesta rea (Rieder et
al., 2000; Seltenhammer et al., 2003; Slkner et al., 2004; Pielberg et al., 2008). Embora no
esteja concretamente esclarecida a relao entre a pelagem e o aparecimento destes tumores
parece que os cavalos se tornam ruos com a idade devido a uma mutao em que h
sobrexpresso gnica do STX17 e NR4A3, como j referido. Os autores propem que a
duplicao no gene STX17, tendo em conta a influncia deste na produo e transporte dos
melanossomas, leve proliferao de melancitos drmicos na pele glabra predispondo-a a
melanomas (Pielberg et al., 2008).
Rieder et al. (2000) sugeriu os genes protena melanoctica 17/gp100 (Pmel17/gp100) e
protena 1 relacionada tirosinase (TYRP1/gp75), como marcadores vlidos para cavalos e o
seu envolvimento no processo de perda de pigmento da pelagem. Assim como aponta a
susceptibilidade de um gene regulador do ciclo celular, inibidor 2a da quinase dependente da
ciclina (CDK) (Cdkn2a/p16), para o desenvolvimento de leses melanociticas.
Embora a frequncia de ocorrncia da doena em animais de outras pelagens que no a
rua seja, de certo modo, reduzida no deve ser descurada principalmente porque parece que
se apresenta com formas com maior malignidade (Rieder et al., 2000; Smith et al., 2002;
Seltenhammer et al., 2003; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a; Knottenbelt, 2009a)
(Figura 21), particularidade tambm observada nos nossos resultados como justificaremos no
decorrer da discusso. Uma possvel explicao para este facto ser que, devido reduzida ou
mesmo nula actividade dos melancitos drmicos em equinos de pelagem rua, a proliferao
tumoral e metasttica tenha lugar de uma forma muito atenuada. Isto permitir que os animais
com esta pelagem vivam, de certo modo, com a doena mais tempo sem complicaes mais
srias. Ao passo que nas restantes pelagens ocorre uma proliferao e metastizao tumoral
aceleradas podendo levar morte de forma mais precoce devido aos efeitos da taxa de
proliferao tumoral (Rieder et al., 2000).

45

Discusso

A seleco de cavalos de pelagem rua com ausncia de melanomas pode ter um


enorme impacto na sade animal em determinadas populaes de equinos e a sucesso de
estudos no que respeita aos genes envolvidos no processo permitir-nos- levar a identificar as
mutaes e eventuais causas do processo de doena (Rieder et al., 2000).

Figura 21 - Leso melanoctica em equino com pelagem de cor castanha.

Quantidade
As leses foram divididas em melanoma drmico quando identificados 1 ou 2 ndulos
(n=5; 11,6%) ou em melanomatose drmica quando identificadas leses em nmero superior a
2 (n=38; 88,4%).
De acordo com a bibliografia consultada no foi fcil estabelecer um paralelismo nesta
caracterstica uma vez que no foram encontrados muitos dados nestes termos. Apenas
Valentine, em 1995, descreve a diviso da populao analisada em 2 grupos, um onde incluiu
os animais com 1 ou 2 ndulos (n=8) e outro onde incluiu os animais com ndulos em nmero
superior a 2 (n=12), sendo que foram 24 os animais diagnosticados com melanomas drmicos,
2 foram classificados como indefinidos e 2 como melanomas malignos anaplsicos. O facto
destes tumores, de forma frequente, coalescerem (Foy et al., 2002) torna mais difcil esta
avaliao clnica. Os autores referem melanomas mltiplos ou solitrios mas sem nmeros
concretos (Roels et al., 2000; Rees, 2004; Hewes e Sullins, 2009; Scott e Miller, 2011).
Sugerem que o nmero est significativamente relacionado com a idade e que a aparncia de
melanomas mltiplos pode ser anunciada pelo aparecimento de vitiligo como j referido
anteriormente (Lerner e Cage, 1973; Fleury et al., 2000b). Contrariamente, um estudo provou
que, surpreendentemente, os melanomas no esto relacionados com vitiligo (Slkner et al.,
2004). Estas leses surgem habitualmente como mltiplas (Fleury et al., 2000b; Seltenhammer
et al., 2003) e de forma menos frequente ocorrem como leses nicas (Valentine, 1995).

46

Discusso

Assim, a quantidade de tumores pode ser um factor que influencia a escolha do mtodo
de tratamento e o seu xito (Knottenbelt, 2008b).

Tamanho
A avaliao macroscpica das leses, antes destas serem excisionadas, levou a um
agrupamento das mesmas em pequenas (n=39; 90,7%), mdias (n=19; 44,2%) e grandes
(n=11; 25,6%) quando apresentavam at 1 cm de dimetro, entre 1 e 4 cm ou superior a 4 cm
respectivamente.
Esta caracterstica de difcil avaliao, nomeadamente quando as leses coalescem.
Nem sempre tida em considerao e torna-se pouco precisa. Segundo Buechner-Maxwell
(2009), geralmente o tamanho est relacionado com o prognstico e tumores superiores a 4 cm
de dimetro tm maior probabilidade de metastizar do que massas de tamanho inferior. No
entanto, dos tumores analisados dos animais que tinham caractersticas bvias de
malignidade, ou seja, os melanomas malignos anaplsicos apresentavam tamanhos inferiores
a 4 cm de dimetro. De acordo com outros investigadores, os melanomas apresentam-se como
leses firmes que podem ir desde 0,5 cm a 12 cm de dimetro (Valentine, 1995; Scott e Miller,
2011), independentemente do comportamento ou classificao adoptada. Em alguns casos,
como nos de melanomatose drmica, dada a apresentao clnica das leses, torna-se invivel
fazer uma avaliao do tamanho das mesmas (Valentine, 1995). Outros autores dizem mesmo
que as leses podem assumir valores desde 0,2 cm a 20 cm de dimetro (Seltenhammer et al.,
2003) ou com variaes pouco significantes, de 0,5 cm a 15 cm, quer ao exame clnico quer
necrpsia (Farcu et al., 2007). Recentemente, num estudo controlado para avaliar a
cimetidina como teraputica na melanomatose equina, foram avaliadas dimenses entre 0,2
cm e 11 cm. Neste estudo no houve reduo no nmero nem no tamanho de nenhum dos
ndulos avaliados, sendo difcil conjecturar acerca da influncia do frmaco no tamanho das
leses. Os autores defendem a no eficcia deste frmaco nesta doena (Laus et al., 2010).
Fleury et al. (2000a) ao assumir uma diviso das leses entre nodulares e com aparncia
de placas, como j mencionado, concluiu que os ndulos podiam apresentar tamanhos de 0,5
cm at mais de 10 cm ou de 5 cm a 20 cm no caso das placas.
necrpsia as leses podem apresentar desde 1 milmetro (mm) a vrios cm de
dimetro (Patterson-Kane, 2001; Smith, 2002 citando Schott et al.,1990), havendo casos
reportados de tumores melanocticos com 15 cm, 30 cm (Foley et al., 1991) ou mesmo 40 cm
de dimetro (MacGillivray et al., 2002).
O tamanho uma caracterstica importante a ter em conta no s a nvel de prognstico
mas tambm na escolha do tratamento mais adequado e efectivo (Valentine, 1995;
MacGillivray et al., 2002; Knottenbelt, 2008a; Buechner-Maxwell, 2009). Por exemplo, a

47

Discusso

administrao intralesional de cisplatina parece ser bastante efectiva no tratamento de tumores


com menos de 3 cm de dimetro (Foy et al., 2002), a exciso cirrgica exequvel, entre vrios
factores, de acordo com a extenso do tumor (Knottenbelt, 2008b). Em tumores melanocticos
humanos, o tamanho um importante factor prognstico dado que tumores maiores so
frequentemente malignos enquanto que os de menor dimenses so, com maior probabilidade,
benignos. Em cavalos , tambm, um factor em ter em considerao. No estudo de Valentine
(1995), de uma forma geral, os tumores benignos demonstraram ser os mais pequenos, com
menos de 4 cm de dimetro (Valentine, 1995). Surgem algumas excepes como acontece em
humanos e como ficou demostrado no presente estudo.

Localizao
Tendo em conta os 43 animais avaliados, os tumores identificados localizavam-se na
pele, em diversas zonas que foram categorizadas:
- zona perineal (n=40; 93%), considerada tpica, que inclui um ou vrios ndulos na
superfcie ventral da cauda, nus, vulva e/ou perneo;
- outras localizaes (n=12; 27,9%), consideradas atpicas, que incluem um ou vrios
ndulos numa das seguintes regies: garupa, olho, glndula salivar, glndula submandibular,
espdua, pescoo, crineira, comissura labial, costado e/ou face interna da coxa;
- padro difuso (n=2; 4,7%), considerado uma distribuio exagerada de ndulos (em
nmero superior a 4 em localizaes distintas entre si) um pouco por toda a regio corporal. De
ressalvar que 10 dos animais apresentavam concomitantemente leses nas localizaes
tpicas e atpicas (n=10; 23,3%).
Estes resultados vo, de forma geral, de encontro maioria dos estudos realizados at
data. Os tumores em causa, quer sejam solitrios ou mltiplos, podem desenvolver-se em
qualquer local embora haja uma predileco para a superfcie ventral da cauda, reas perineal,
perianal e genital (Cotchin, 1965; Knottenbelt e Pascoe, 1994; Rodrguez et al., 1997;
Goldschmidt e Hendrick, 2002; MacGillivray et al., 2002; Smith et al., 2002; Seltenhammer et
al., 2003; Rees, 2004; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a; Farcu et al., 2007;
Buechner-Maxwell, 2009; Hewes e Sullins, 2009; Laus et al., 2010; Scott e Miller, 2011). Fleury
et al. (2000a) concorda relativamente superfcie ventral da cauda e regio perianal mas
discorda quanto ao envolvimento da genitlia externa. Existem tambm numerosos relatos
concordantes com as outras localizaes menos comuns encontradas nos animais do estudo
como glndula salivar, comissuras labiais, olho (Knottenbelt e Pascoe, 1994; Fleury et al.,
2000a; Smith et al., 2002; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011), embora outros
autores as incluam nas mais comuns (Seltenhammer et al., 2004; Farcu et al., 2007). Porm,
outras fontes referem as extremidades distais como uma localizao de excelncia para

48

Discusso

ocorrncia destas leses (Roels et al., 2000; Pamela et al., 2007), no entanto, no foi
encontrado nenhum caso nos animais deste estudo.
No trabalho de Valentine (1995) foi estabelecida uma classificao com tnues variaes
relativamente ao presente estudo. Foram considerados locais tpicos: superfcie ventral da
cauda, regio perianal, perneo, prepcio, vulva, glndula mamria, bere, lbios, zona
periorbital e parotdea, todas as restantes foram consideradas localizaes atpicas. A
frequncia de ocorrncia para classificao foi avaliada individualmente para as 4 sndromes
clnicas referidas anteriormente enquanto que no nosso trabalho foram avaliadas relativamente
ao total da populao estudada pelo que se torna difcil uma comparao vlida. Ainda assim,
se considerarmos que num total de 34 animais diagnosticados com melanoma drmico,
melanomatose drmica e melanoma maligno anaplsico 70,6% (n=24) apresentava leses nos
locais tpicos, 17,6% (n=6) em locais atpicos, 14,7% (n=5) em ambos e 2,9% (n=1) no se
apresentava disponvel, verificamos uma menor frequncia relativamente aos resultados do
presente trabalho. Focando apenas a melanomatose drmica, no estudo de Valentine (1995),
todos os animais apresentavam os tumores nas localizaes de predileco assim como
ocorreu no presente trabalho, em que todos os animais com esta sndrome (n= 35) exibiam
tumores nos locais referidos.
Em humanos est uma estabelecida uma relao clara entre os raios UV e a formao
destes tumores, no entanto, em equinos parece ser um factor de risco pouco provvel tendo
em considerao as zonas predisponentes, ou seja, reas na sua maioria protegidas da luz
solar (Fleury et al., 2000b; Foy et al., 2002; Paek et al., 2008).
A importncia da localizao das leses prende-se, semelhana de caractersticas
anteriores, com a escolha do tratamento e subsequente prognstico pois a proximidade com
estruturas vasculares importantes, por exemplo, pode ser decisiva na opo do tipo de
resoluo da doena (Knottenbelt, 2008a; Knottenbelt, 2008b; Hewes e Sullins, 2009).
Uma vez que estas leses, como podemos concluir, ocorrem na sua maioria em zonas de
pele glabra ser de interesse continuar a investigar uma vez que apesar de se supor uma
eventual influncia da frico na tumorignese destas leses, a explicao para o facto
continua pouco clara (Fleury et al., 2000b). de notar tambm que na investigao de Sutton e
Coleman (1997), a acumulao de pigmento melnico em volta dos folculos pilosos ocorreu
apenas na superfcie ventral da cauda, facto que poder estar relacionado com a activao de
uma populao de clulas percursoras dos melancitos e, caso ocorra como consequncia do
processo de diluio da cor da pelagem, pode justificar a proximidade entre o aparecimento
das leses e o processo de diluio da cor da pelagem. Em contraposio a esta teoria e de
Valentine (1995), Fleury et al. (2000a) defende as glndulas apcrinas e a sua localizao
como origem da melanomatose drmica na zona perineal e portanto o no envolvimento dos

49

Discusso

melancitos dos folculos pilosos neste processo. Os padres de distribuio destas glndulas
podero explicar a prevalncia destes tumores em regies corporais especficas (Fleury et al.,
2000b). Assim, ser interessante levar a cabo um estudo neste sentido, tentando fundamentar
a localizao destes tumores tendo por base a patogenia e biologia dos melancitos.

Durao
Aquando do inqurito foi tambm questionado o tempo estimado do aparecimento das
leses pelo que se obteve valores entre 6 meses e 20 anos de acordo com as respostas dos
proprietrios ou responsveis pelos cavalos. Estes dados so pouco precisos j que, tendo em
conta o mercado actual de equinos e a sua elevada movimentao entre proprietrios, torna-se
muitas vezes difcil o seguimento dos animais por parte dos clnicos. Por outro lado, estas
leses comeando por apresentaes benignas e por vezes demasiado pequenas, levam
relativizao da situao por parte da equipa que trabalha com os cavalos passando bastantes
vezes, e em alguns casos durante um perodo de tempo considervel, despercebidas.

5.2. Estudo histopatolgico

De acordo com Valentine (1995) classificmos histologicamente 2 tipos distintos de


tumores: melanoma drmico (n=39; 90,7%) e melanoma maligno anaplsico (n=4; 9,3%) de
acordo com algumas variveis histolgicas como sendo: a localizao do tumor, o tipo de
clulas presentes, a presena de ulcerao, a quantidade de pigmento e de estroma, assim
como a presena de mbolos.
O facto de no existirem critrios de malignidade que possam ser aplicados
especificamente em equinos torna a avaliao histolgica menos precisa pelo que faremos
uma extrapolao do que tem vindo a ser aplicado noutras espcies e dos resultados de outros
estudos realizados (Valentine, 1995). Mesmo na classificao actualmente aceite pela OMS,
aplicada a todos os animais domsticos, constam algumas caractersticas que no so
aplicveis em cavalos (Goldschmidt, 1998). H, por isso, autores que optam por no classificar
o comportamento das leses por falta de critrios (Chapman et al., 2009).
Igualmente no co e no gato parece haver uma enorme variao nos dados que
resultar, provavelmente, desta ausncia de critrios de malignidade para os tumores
melanocticos (Gross et al., 2005). Relativamente a estas espcies, o melanoma drmico no
apresenta actividade juncional, a maioria rene clulas fusiformes, redondas e poligonais no
mesmo tumor, a quantidade de pigmento varivel desde formas amelanticas a graus

50

Discusso

abundantes. Quanto ao melanoma maligno, como definem alguns autores, podem envolver a
epiderme e derme ou derme apenas, semelhana do que ocorreu nos resultados deste
estudo, embora sejam mais comuns na derme (n=28; 65,1%). Os resultados desta varivel
esto em concordncia com os estudos realizados em equinos (Sutton e Coleman, 1997;
Seltenhammer et al., 2004; Chapman et al., 2009). A quantidade de pigmento varivel e o
estroma reduzido a moderado. Nestes casos a ulcerao e necrose so caractersticas
comuns, assim como a marcada actividade juncional, os tipos celulares presentes variam
bastante e podem apresentar-se como fusiformes, redondas, dendrticas, balonizantes. A
actividade mittica, dado o carcter maligno do tumor , habitualmente 3 ou superior por 10
campos de grande ampliao (40x). O tipo celular, pelo menos no co, parece no ter
significado prognstico (Goldschmidt e Hendrick, 2002; Gross et al., 2005). Alguns critrios que
se podem ter em conta na previso do comportamento dos tumores melanocticos em ces e
gatos so: simetria na arquitectura do tecido, definio das margens, uniformidade dos ncleos
e das clulas, ndice mittico e ploidia do ADN (Stokking, 2004). No entanto, em equinos no
estudo de Roels et al. (2000), concluram no haver diferenas notadas entre tumores
benignos e malignos com alteraes do ADN.
De acordo com Smith et al. (2002), parece no haver uma relao evidente entre as
caractersticas histolgicas, incluindo o ndice mittico e pigmentao, e a taxa de
sobrevivncia. A morfologia celular, tendo em conta o tamanho e forma, podem ser teis na
avaliao da malignidade. O risco de ocorrncia de metstases parece ser maior em tumores
com tipos celulares mistos e fusiformes, no entanto, na nossa populao todos os tumores com
caractersticas de malignidade apresentavam clulas redondas, sem um pleomorfismo
evidente. De qualquer forma a caracterstica mais importante , sem dvida, a invaso linftica
e/ou vascular (Roels et al., 2000; Smith et al., 2002).
De assinalar que nos resultados aqui obtidos todos os tumores avaliados como
melanomas malignos anaplsicos (n=4; 9,3%) apresentavam esta caracterstica que serviu de
base para esta mesma classificao. Por norma esto associados a caractersticas celulares
pleomrficas, um baixo grau de pigmentao, ulcerao, mitoses numerosas e invaso
vascular, pelo que aparentam ter caractersticas semelhantes ao melanoma cutneo humano
(Garma-Avia et al., 1981; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a). Quanto nossa
populao todos os tumores com caractersticas de malignidade apresentavam clulas
redondas, sem um pleomorfismo evidente, ao contrrio do que seria de esperar. Apenas 1
destes apresentava uma quantidade abundante de pigmento (grau 3) e os restantes (n=3) um
grau reduzido de pigmento (grau 1). Ocorreu de forma semelhante com a ulcerao, em 3 dos
4 tumores estava presente.

51

Discusso

O tamanho do tumor considerado um factor prognstico importante, tendo em conta


que tumores maiores so malignos com maior probabilidade (Valentine, 1995; Smith et al.,
2002). Porm, no caso do estudo presente todos os melanomas malignos anaplsicos
apresentavam tamanho inferior a 4 cm, isto , pequenos e/ou mdios.
Como abordado no ponto prvio, a pelagem segundo alguns autores pode estar
implicada no comportamento das leses. Assim, ressalvamos que dos 4 tumores
diagnosticados como melanomas malignos anaplsicos apenas 1 correspondia a pelagem
rua, 2 a pelagem baia e 1 a pelagem castanha, reiterando o que foi referido.
Apesar da caracterizao clnica assumir um papel importante no diagnstico das leses,
o meio de excelncia dever ser a avaliao histopatolgica, no entanto, para que tal suceda
imperativo estabelecer-se critrios metdicos e adequados de comportamento tumoral que se
apliquem espcie segundo as condicionantes da mesma.

5.3. Estudo imunohistoqumico

Como j abordado anteriormente existe actualmente uma escolha considervel de


marcadores imunohistoqumicos que podem auxiliar em muito o diagnstico das leses bem
como ter implicaes no seu prognstico e opes teraputicas. Sobretudo o diagnstico dos
tumores amelnicos ou pouco diferenciados beneficiam em muito do auxlio destas tcnicas
(Berrington et al., 1994; Koenig et al., 2001; Smith et al., 2002). Neste trabalho, arriscou-se a
utilizao de uma protena - c-Kit. A discusso deste estudo ser focada na comparao com
as outras espcies bem como nas perspectivas e implicaes que se podero alcanar em
termos futuros.
A reactividade ao anticorpo c-Kit ocorreu no citoplasma das clulas, de forma difusa ou
com padro granular. Observou-se imunorreactividade nos melancitos neoplsicos, no se
observando marcao nos melanfagos.
Em estudos onde foi avaliada a expresso deste mesmo marcador em melanomas orais
humanos foi observada maioritariamente expresso difusa, citoplasmtica mas tambm
membranar. Foi detectada imunorreactividade nos melancitos atpicos, semelhana do
presente trabalho. Em humanos, dado o carcter agressivo deste tipo de tumores, pode ser
importante a deteco precoce da expresso deste marcador uma vez que nos poder indicar
a fase inicial da progresso tumoral. Um pouco em conformidade com os resultados deste
estudo, os tumores analisados com menores quantidades de pigmento (grau 1) apresentavam
uma intensa marcao da protena o que nos levar a suspeitar um papel do c-Kit no

52

Discusso

comportamento tumoral. Assim, o uso de inibidores da RTK, por exemplo, poder ter
implicaes importantes no tratamento da doena pelo que devero continuar os estudos neste
mbito (Potti et al., 2003; Rivera et al., 2008).
Observou-se ainda a marcao nas glndulas apcrinas da derme e na epiderme, o que
constituiu o controlo positivo interno. Nota a ter em conta uma vez que, como j mencionado
anteriormente, h autores que sugerem as glndulas apcrinas ou proximidades como a
possvel origem destes tumores melanocticos em equinos (Fleury et al., 2000a).
A imunomarcao foi observada em 62,8% (n=27) dos tumores e estava ausente em
37,2% (n=16). Importante ressalvar que todos os tumores com caractersticas de malignidade
evidente, isto , os tumores classificados como melanomas malignos anaplsicos (n=4; 9,3%),
apresentavam marcao de c-Kit positiva. Assim, ser pertinente estudar estes resultados
aumentando o nmero da amostra em causa ou mesmo avaliando vrios ndulos do mesmo
animal.
Tem sido especulado que o conhecimento relativamente a possveis factores que
atrasam ou inibem o desenvolvimento de metstases no melanoma de equinos ruos possa ser
usado para estabelecer estratgias teraputicas inovadoras para o melanoma maligno
humano. O facto de estas leses partilharem algumas caractersticas em ambas as espcies
faz dos equinos um modelo animal interessante para o estudo da doena em humanos, como
j referido anteriormente (Seltenhammer et al., 2004).
Ainda h todo um sem fim de perguntas sem resposta concreta para compreender os
mecanismos que esto na base desta condio em equinos. Ser interessante prosseguir com
trabalhos nesta rea, por exemplo de seguimento clnico, tendo em conta que alguns
investigadores sugerem a perda da expresso de c-Kit durante a progresso do melanoma
(Bar-Eli, 1997; Potti et al., 2003; Alexeev e Kyonggeun, 2006) o que nos poder levar a outros
sectores como o prognstico e a teraputica.

53

Concluses

6. CONCLUSES

A realizao deste trabalho levou-nos a algumas concluses:


- a idade um factor importante no desenvolvimento das leses melanocticas em
equinos, no entanto, segundo os resultados o melanoma maligno anaplsico no
caracterstico de animais com idade superior a 20 anos;
- o gnero parece no ter influncia no surgimento desta doena;
- a quantidade, tamanho e localizao das leses so factores primordiais na escolha do
tratamento assim como no seu prognstico;
- a invaso linftica e/ou vascular , sem dvida, o factor chave na determinao do
comportamento do tumor, no entanto, no devemos desconsiderar todos os outros. Neste
sector h um longo caminho a ser percorrido. Existem variadas caractersticas que podero ser
avaliadas como o ndice mittico ou o infiltrado inflamatrio. essencial continuar os estudos
nesta espcie e estabelecer critrios que auxiliem, tanto o trabalho do patologista como o do
clnico, no momento de tomar decises quanto teraputica a instituir em cada caso;
- a imunorreactividade destes tumores para o c-Kit, sendo um dado inovador, de
interesse para a comunidade cientfica pois poder-se- partir para estudos mais concretos de
especificidade e sensibilidade do marcador, tendo em vista possveis implicaes no
prognstico e tratamento das leses melanocticas em equinos;
- a conexo entre a clnica e a histopatologia afirma-se essencial. Por um lado, a clnica
assegurando a monitorizao estreita dos animais e fornecendo dados essenciais ao
patologista que, tendo ao seu alcance as ferramentas apropriadas, poder estabelecer o
diagnstico preciso da leso.

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Anexos

8. ANEXOS

Anexo 1

Recolha Amostra Ndulos Cutneos em Equinos

N entrada:

Nome Proprietrio:
Local:

Nome Cavalo:
Gnero:

Idade:
Pelagem:
Raa:
Aptido:
Quantidade/ Tamanho:
Localizao:
Durao:

Observaes:

Data recolha:

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