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Cincias Veterinrias
Orientador:
Professor Doutor Mrio Pedro Gonalves Cotovio
Co-orientador:
Dr. Miguel de S Cardoso Machado Bahia
Orientador:
Professor Doutor Mrio Pedro Gonalves Cotovio
Co-orientador:
Dr. Miguel de S Cardoso Machado Bahia
Resumo
RESUMO
A pele o local mais comum de neoplasias em equinos. Supe-se que a prevalncia
destas condies esteja a aumentar e estima-se que cerca de 2/3 (66%) dos tumores
melanocticos em equinos possam progredir para malignidade. A classificao destas leses
em equinos complexa e dificulta o trabalho do patologista. A evoluo ao nvel das tcnicas
de imunohistoqumica tem sido importante no diagnstico, prognstico e teraputica desta
doena.
Foi realizada a exciso cirrgica de ndulos cutneos de 43 equinos acompanhada de
inqurito. A avaliao clnica baseou-se na idade (valor mnimo de 2,5 anos e mximo de 26
anos com mdia de 14,9 anos), gnero (51,2% ocorreram em machos e 48,8% em fmeas),
raa (sobretudo Puro-Sangue Lusitano - 60,5% e Cruzado Lusitano - 27,9%), pelagem (rua
em 90,7%, isabel em 4,7%, baia em 2,3% e castanha em 2,3%), quantidade (melanoma
drmico em 11,6% e melanomatose drmica em 88,4%), tamanho (90,7 % pequeno, 44,2%
mdio e 25,6% grande), localizao (zona perineal em 93%, outras localizaes em 27,9% e
padro difuso em 4,7%) e durao das leses (entre 6 meses e 20 anos). As amostras foram
processadas e submetidas a anlise histopatolgica e imunohistoqumica. As variveis
histopatolgicas avaliadas foram: localizao (65,1 % na derme e 34,9% na derme e
epiderme), tipo celular (7,0% fusiforme, 53,5% redondo e misto em 39,5%), ulcerao
(presente em 23,3%), quantidade de pigmento (escassa em 11,6%, moderada em 37,2% e
abundante em 51,2%), quantidade de estroma (escassa em 44,2%, moderado em 37,2% e
abundante em 18,6%), mbolos vasculares/linfticos (presentes em 9,3% das amostras).
Obteve-se uma marcao positiva para o c-Kit em 62,8% das amostras.
A quantidade, tamanho e localizao das leses so factores importantes na deciso
teraputica e no prognstico das leses. As variveis histopatolgicas podem ajudar a prever o
comportamento dos tumores pelo que se dever prosseguir com os estudos no sentido de
estabelecer critrios direccionados para a espcie.
A expresso desta protena c-Kit no se encontrava avaliada em tumores melanoccitos
de equinos. Obteve-se imunorreactividade em todos os tumores com caractersticas de
malignidade evidente, dados que podero ter implicaes no diagnstico e teraputica dos
mesmos.
iii
Abstract
ABSTRACT
The skin is the most common site of neoplasia in the horse. It is assumed that the
prevalence of this condition is increasing and it is estimated that about 2/3 (66%) of melanocytic
tumors in horses can progress to malignancy. The classification of this disease in horses is
complex and hinders the work of the pathologist. The development of immunohistochemistry
techniques has been important in diagnosis, prognosis and therapy of this disease.
Was performed the surgical excision of cutaneous nodules of 43 horses accompanied by
inquiry. The clinical evaluation based on age (minimum 2.5 years old and a maximum of 26
years old with an average of 14.9 years old), gender (51.2% in males and 48.8% in females),
breed (especially Lusitano - 60.5% and Lusitano Crossed Breed - 27.9%), coat color (gray in
90.7%, pearl in 4.7%, buckskin in 2.3% and bay in 2.3%), amount (dermal melanomas in 11.6%
and dermal melanomatosis in 88.4%), size (90.7% small, 44.2% medium and 25.6% large),
location (perineal area in 93%, other locations in 27.9% and diffuse in 4.7%) and duration of
lesions (between 6 months and 20 years). The samples were processed and subjected to
histopathological and immunohistochemical analysis. The histopathological variables evaluated
were: location (65.1% in dermis and 34.9% in dermis and epidermis), cell type (7.0% spindle,
53.5% round and 39.5% mixed), ulceration (present in 23.3%), amount of pigment (poor in
11.6%, moderated in 37.2% and abundant in 51.2%), amount of stroma (poor in 44.2%,
moderated in 37.2% and abundant in 18.6%) and vascular/lymphatic invasion (present in 9.3%
of the samples). We obtained immunoreactivity for the c-Kit in 62.8% of the samples.
The amount, size and location of the lesions are important factors in therapeutic decision
and prognosis of the lesions. The histopathological variables can help predict the behavior of
tumors, so we should continue with studies to establish criteria directed to the species. The
expression of this protein c-Kit was evaluated for the first time, as far as we know, in equine
melanocytic tumors. The fact that immunoreactivity was present in all tumors with features of
evident malignancy may have implications on diagnosis and therapy of these tumors.
iv
ndice geral
NDICE GERAL
1. INTRODUO........................................................................................................................1
1.1. Classificao e nomenclatura ..............................................................................................3
1.2. Etiologia ...............................................................................................................................4
1.3. Predisposio ......................................................................................................................6
1.4. Patogenia.............................................................................................................................9
1.5. Diagnstico clnico e histopatolgico..................................................................................11
1.6. Tratamento e seguimento clnico .......................................................................................17
1.7. c-Kit (CD117 ou Kit) ...........................................................................................................19
2. OBJECTIVOS .......................................................................................................................21
3. MATERIAL e MTODOS ......................................................................................................22
3.1. Material utilizado e a sua procedncia ...............................................................................22
3.2. Avaliao clnica ................................................................................................................22
3.3. Avaliao histopatolgica...................................................................................................23
3.4. Avaliao imunohistoqumica .............................................................................................24
3.5. Anlise estatstica ..............................................................................................................26
4. RESULTADOS .....................................................................................................................27
4.1. Avaliao dos dados clnicos .............................................................................................27
4.2. Avaliao dos dados histopatolgicos................................................................................31
4.3. Avaliao dos dados imunohistoqumicos ..........................................................................38
5. DISCUSSO.........................................................................................................................41
5.1. Estudo clnico ....................................................................................................................41
5.2. Estudo histopatolgico .......................................................................................................50
5.3. Estudo imunohistoqumico .................................................................................................52
6. CONCLUSES.....................................................................................................................54
7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ......................................................................................55
8. ANEXOS...............................................................................................................................61
vi
LISTA DE QUADROS
Quadro 1 - Predisposio racial para tumores melanocticos em equinos. .................................7
Quadro 2 - Localizaes mais comuns de ocorrncia de tumores melanocticos em equinos. ....8
Quadro 3 - Variveis histolgicas avaliadas. .............................................................................24
Quadro 4 - Frequncias e percentagens das raas dos animais includos no estudo. ..............28
Quadro 5 - Frequncias e percentagens dos tamanhos das leses encontradas nos animais
avaliados. .................................................................................................................................29
Quadro 6 - Caracterizao histopatolgica das amostras analisadas. ......................................32
Quadro 7 - Expresso de c-Kit nas amostras em estudo. .........................................................40
LISTA DE GRFICOS
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Equino de pelagem rua, includo no estudo, com vitiligo (pr-cirrgico). ...................5
Figura 2 - Equino da figura 1 no ps-cirrgico, onde se evidencia o grau de vitiligo. ..................5
Figura 3 - Melanocitoma nico na cauda de um equino jovem..................................................13
Figura 4 - Ilustrao esquemtica do receptor c-Kit.. ................................................................20
Figura 5 - Exciso cirrgica de uma das amostras includas no estudo. ...................................23
Figura 6 - Localizao tpica de ocorrncia das leses em estudo. Imagem recolhida antes da
exciso cirrgica. ......................................................................................................................30
Figura 7 - Padro difuso de leses melanocticas. Alm destas o animal apresentava ndulos
na rea da traqueia, base da cauda e perneo. .........................................................................30
Figura 8 - Localizao drmica da leso. Colorao com HE, 4x..............................................33
Figura 9 - Localizao drmica que se estende epiderme. Colorao HE, 40x. .....................33
Figura 10 - Morfologia celular fusiforme. Colorao HE, 40x. ...................................................34
Figura 11 - Morfologia celular redonda. Colorao HE, 40x. .....................................................34
Figura 12 - Ulcerao dos tecidos observada em amostra do estudo. Colorao HE, 40x. ......35
Figura 13 - Quantidade de pigmento melnico escassa (grau 1). Colorao HE, 40x. ..............35
Figura 14 - Quantidade de pigmento melnico abundante (grau 3). Colorao HE, 40x. ..........36
Figura 15 - Quantidade de estroma moderada (grau 2). Colorao HE, 40x. ............................36
Figura 16 - Quantidade de estroma abundante (grau 3). Colorao HE, 40x. ...........................37
vii
Figura 17 - mbolo vascular. Observa-se pigmento melnico no seu interior. Colorao HE,
40x............................................................................................................................................37
Figura 18 - Imunorreactividade para o c-Kit com padro citoplasmtico granular, 40x. .............38
Figura 19 - Imunorreactividade para o c-Kit com padro citoplasmtico difuso, 40x. ................39
Figura 20 - Imunorreactividade positiva para o c-Kit nos melancitos e negativa para
melanfagos, 40x. ....................................................................................................................39
Figura 21 - Leso melanoctica em equino com pelagem de cor castanha. ..............................46
viii
ix
Agradecimentos
AGRADECIMENTOS
Palavras soltas que insurgem a mente, como agora. Tantas que parecem poucas!
Insuficientes para definir o que vai muito alm do Obrigada:
Ao Professor Doutor Mrio Cotovio pela brevidade no momento de aceitar orientar esta
Dissertao (pouco sabia do que o esperava!). Pela forma sria, meticulosa, cuidadosa,
paciente, crtica e acima de tudo perfeccionista com que levou a cabo este trabalho. Pelo seu
saber profundo, dedicao, incentivo (sempre). Pelas palavras adequadas aos momentos
certos que me fizeram continuar, que me permitiram e permitem seguir
Ao Dr. Miguel Bahia pela excelncia dos ensinamentos, pela particularidade das
experincias, por toda a pacincia em todas as horas (muitas) partilhadas. Pelo enorme
esforo e profissionalismo na parte mais prtica (e na restante tambm) deste trabalho. Por me
fazer exigir de mim mais e melhor a cada minuto
Professora Doutora Justina Oliveira pela disponibilidade incansvel, pela facilidade em
tornar simples e real o que em tantos momentos parecia catico. Pelo imenso tempo dedicado,
pelo interesse sempre partilhado, pela participao activa, pela entrega verdadeira e pelo
despertar de novos desafios.
Aos meus amigos e colegas desta viagem que tambm embarcaram nela. Ao Guinhas,
ao Rapper, ao Zero, ao Paulo pela partilha de sentimentos, pelas horas e horas de conversas,
confidncias, apoio, por me fazerem acreditar, sempre. Di por tudo isto, pelo enorme bom
senso com que me ajuda sempre, por estar comigo. Ao Triguinho e ao Mrio Joo pelas horas
de ensaios de apresentaes que no sero esquecidas, pelas crticas construtivas sempre
presentes, por estarem ali.
Aos meus amigos e colegas das casas que sero sempre as nossas casas. Koka,
Vera, aos meus padrinhos Fernando e Lara, aos meus afilhados Rui e Daniela que me
mostraram uma passagem para a outra margem da amizade e que reservaram um lugar eterno
na minha memria.
melhor colheita 2004/2005 em nome da Ariana, B, Beta, Bola, Carla, Diana, Ftima,
Gustavo, Natlia, Rafa por me mostrarem que valeu a pena, por me darem a certeza que este
era o caminho.
Diana, Joana e Mrcia, onde o sentido da amizade prevalece, onde as dificuldades
se tornam facilidades, onde tudo parece mais certo.
Aos meus Avs, Tios, Primas, Madrinha e Irene pela compreenso, pacincia, incentivo,
pela ajuda inigualvel durante estes anos. Natacha por tudo isto, por me saber aturar, por
estar ao meu lado.
xi
Agradecimentos
Obrigada
xii
Introduo
1. INTRODUO
A oncologia veterinria foi, no passado, considerada como uma especialidade
emergente (Cotchin, 1984) tornando-se, na actualidade, uma especialidade por si s com
detalhada informao publicada sobre a etiopatogenia e imunologia das neoplasias (Scott e
Miller, 2003). No entanto, a oncologia cutnea parece ser amplamente ignorada na medicina
equina (Knottenbelt, 2009a).
As neoplasias so uma causa maior de morbilidade e mortalidade em equinos de todo o
mundo e a pele constitui, sem dvida, o rgo mais afectado por este tipo de doena
(Knottenbelt, 2009b citando Jackson, 1936; British Equine Veterinary Association, 1965; Kerr e
Alden, 1974; Baker e Leyland, 1975; Cotchin, 1977). As neoplasias cutneas constituem cerca
de 50% do total das neoplasias nesta espcie (Scott e Miller, 2003; Valentine, 2006b; Scott e
Miller, 2011) ou inclusive 80% segundo Thon (2006).
A incidncia de neoplasias em cavalos varia de acordo com o tipo de estudo: 1-3% em
cavalos submetidos a cirurgia e 11% em cavalos examinados em matadouro, 26% em material
remetido para bipsia e 4,4% em estudos de necrpsia (Valentine, 2006a). A prevalncia de
tumores cutneos em cavalos considerada relativamente elevada e a maioria dos tumores
apresentam caractersticas particulares pelo que se torna importante o diagnstico precoce
(Knottenbelt, 2009b). Alm disso considera-se que a prevalncia dos tumores em equinos tem
vindo a aumentar devido no s ao facto de os animais viverem cada vez mais anos mas
tambm pela evoluo na preveno e teraputica (Thon, 2006).
Segundo Valentine (2006), o aumento da idade claramente um factor que aumenta a
susceptibilidade de ocorrncia de neoplasias em todas as espcies. No entanto, outros autores
citados por Scott e Miller (2011) afirmam que, contrariamente a outras espcies, o risco para
neoplasia cutnea em equinos no aumenta com a idade corroborando Knottenbelt (2009b),
que sugere haver pouca correlao entre a ocorrncia de tumores de pele em equinos e o
avano da idade.
Introduo
Em cavalos ruos considerada uma condio quase inevitvel (Smith et al., 2002) e
sugerido que ocorrer em todos os cavalos com esta pelagem desde que vivam tempo
suficiente (Cotchin, 1965; Valentine, 1995; Sutton e Coleman, 1997; Bengtstrm, 2011)
diminuindo assim a sua longevidade (Pielberg et al., 2008). Estudos realizados at data
revelam que os melanomas so o tipo de tumor mais frequente em equinos (Fleury et al.,
2000b),
constituindo
3,8%
de
todas
as
neoplasias
diagnosticadas
nesta
espcie
(Seltenhammer et al., 2003; Laus et al., 2010). Relativamente ao conjunto dos tumores
cutneos em equinos os estudos apresentam diversas percentagens para os tumores
melanocticos:
- 6-15% (Patterson-Kane e Ginn, 2003);
- at 15% (Smith et al., 2002);
- at 18%, sendo considerado o segundo tipo de tumor cutneo mais comum em equinos
(Spugnini et al., 2011);
- entre 4-15% (Foley et al., 1991; MacGillivray et al., 2002; Scott e Miller, 2003; Scott e
Miller, 2011), ressalvando que a incidncia real nestes estudos pode ser mais elevada uma vez
que estes tumores, sendo facilmente identificveis, so infrequentemente submetidos a exame
histolgico.
Esta discrepncia nos valores de incidncia estar ligada ausncia de critrios
diagnsticos de malignidade estandardizados para os tumores melanocticos (Gross et al.,
2005).
Porm, estima-se que cerca de 2/3 (66%) dos tumores melanocticos em equinos possam
eventualmente progredir para malignidade, ou seja, ter a capacidade de desenvolver
metstases (Patterson-Kane e Ginn, 2003; Scott e Miller, 2003; Seltenhammer et al., 2004;
Chapman et al., 2009).
A importncia deste tema prende-se com a sua elevada prevalncia. Por um lado como
causa de rejeio de cavalos ruos em matadouros com implicaes econmicas importantes.
Por outro como um potencial modelo para alteraes celulares de pigmentao e malignidade
em outras espcies incluindo em humanos (Sutton e Coleman, 1997). Ou ainda fazendo-se
notar com as repercusses na sade dos equinos (em especial disfunes urogenitais e
gastrointestinais) e os seus efeitos negativos na performance do cavalo de desporto (Laus et
al., 2010). Uma vez que se tem vindo a verificar, na populao humana, um aumento
significativo na incidncia de melanomas ao longo das ltimas dcadas (Paek et al., 2008)
persiste a necessidade de encontrar um modelo animal que se adeqe e que facilite, de
alguma forma, os estudos pr-clnicos (Heinzerling et al., 2001). O cavalo, particularmente de
pelagem rua, parece ser um modelo animal apropriado uma vez que alm de esta ser uma
afeco com predisposio gentica (Heinzerling et al., 2001) apresenta uma progresso
Introduo
melanocitoma,
melanose,
melanomatose,
nevo
melanoctico,
nevo
Introduo
1.2. Etiologia
Apesar dos estudos e das diversas teorias, a causa desta doena assumida por muitos
autores como desconhecida (Buechner-Maxwell, 2009) ou pouco esclarecida (Cotchin, 1965;
Foy et al., 2002; Laus et al., 2010) estando ainda por determinar o seu verdadeiro mecanismo
(Bengtstrm, 2011). No obstante de ter em conta que as causas de transformao celular
so multifactoriais desde vricas, traumticas, inflamatrias, radiao ultravioleta (UV) (Foy et
al., 2002).
Alguns autores assumem que ocasionalmente podem ter uma componente congnita
(Foley et al., 1991; Goldschmidt e Hendrick, 2002; Pamela et al., 2007; McMullen et al., 2008).
Outros investigadores estudaram a componente hereditria comparando modelos genticos e
no genticos (ambientais) e falam de um impacto gentico importante nesta afeco apesar
de no ter sido estabelecido um modelo de heritabilidade (Rieder et al., 2000).
Segundo Pielberg et al. (2008), desde que comearam os primeiros trabalhos em
melanomas que os investigadores perguntam como que uma mutao que provoca a perda
de pigmentao no plo pode tambm causar melanomas com excessiva produo de
Introduo
Introduo
1.3. Predisposio
Esta doena ocorre, resumidamente em animais de pelagem rua e idade avanada
(Valentine, 1995; Rieder et al., 2000).
Pelagem
A bibliografia unnime em relatar a elevada percentagem destes tumores em cavalos
de pelagem rua embora possa ocorrer em qualquer pelagem (Knottenbelt e Pascoe, 1994;
Bengtstrm, 2011). Apesar disso alguns autores afirmam que estes tumores so exclusivos de
cavalos ruos (Sutton e Coleman, 1997; Rees, 2004).
Outros estudos parecem estabelecer uma relao entre a pelagem e a idade afirmando
que esta condio ocorre maioritariamente em cavalos ruos ou brancos, normalmente antes
ou aos 5 anos de idade, correspondendo altura em que h mudanas na cor da pelagem
(Lerner e Cage, 1973; Smith et al., 2002). Podem, no entanto, ocorrer noutras pelagens como
na baia ou laz (Smith et al., 2002).
Introduo
Idade
Assumindo uma classificao em melanocitomas (benignos) e melanomas (malignos) h
autores que expem o tema classificando os melanocitomas como uma condio mais
frequente em cavalos jovens (menos de 2 anos de idade) (Goldschmidt e Hendrick, 2002),
enquanto os melanomas apresentam maior importncia em cavalos de idade mais avanada, a
partir dos 6 anos de idade (Valentine, 2006a; Scott e Miller, 2011).
Considerando os tumores melanocticos como um todo, ocorrem maioritariamente em
cavalos de idade avanada e raramente em cavalos com idade inferior a 6 anos (Foley et al.,
1991).
Gnero
Os estudos no so consistentes neste tema (Smith et al., 2002), pelo que divergem
entre no haver qualquer predisposio sexual (Valentine, 1995; Sutton e Coleman, 1997;
Fleury et al., 2000b; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011), as
fmeas serem mais predispostas (Foley et al., 1991) ou, pelo contrrio, haver uma maior
predisposio em machos (Valentine, 1995 citando Sundberg et al., 1977).
Raa
As investigaes realizadas at data falam em predisposio de vrias raas (Quadro
1) embora sejam, na maioria, raas com elevada percentagem de cavalos ruos (Smith et al.,
2002; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009).
No que se refere prtica clnica parece haver uma frequncia considervel desta
condio em cavalos Puro-Sangue Lusitano (PSL), porm, do que foi possvel apurar, no
existem estudos de prevalncia nesta raa.
Estudo
(Foley et al., 1991; Valentine, 1995; Goldschmidt e Hendrick, 2002; Smith et al.,
2002; Rees, 2004; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011)
(Smith et al., 2002; Rees, 2004; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e
Miller, 2011)
(Valentine, 1995; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009)
(Goldschmidt e Hendrick, 2002; Smith et al., 2002; Valentine, 2006a; Scott e Miller,
2011)
(Valentine, 2006a)
Shire
(Valentine, 2006a)
Irish Draught
(Valentine, 2006a)
Pnei Gals
(Valentine, 2006a)
Introduo
Localizao
Esta afeco pode ocorrer, virtualmente, em qualquer local (Buechner-Maxwell, 2009;
Scott e Miller, 2011). Os que se desenvolvem a nvel cutneo tm uma predisposio para a
superfcie ventral da cauda, regio perianal e perineal, rea genital, rea auricular, comissuras
labiais, zona periorbital e glndula partida, como esquematizado no quadro 2.
H tambm referncias a outras localizaes como: membros (Foy et al., 2002; Pamela
et al., 2007; Scott e Miller, 2011), glndula mamria (Buechner-Maxwell, 2009), bordo
coronrio, casco (Smith et al., 2002), pescoo (Rodrguez et al., 1997; Foy et al., 2002), bolsas
guturais (Foy et al., 2002; Valentine, 2006a), olho (Murphy e Young, 1979).
Um estudo faz meno influncia da idade na localizao dos tumores, especificamente
no caso de melanocitomas, afirmando que os membros e tronco estaro mais predispostos em
cavalos jovens enquanto o perneo e cauda assumem maior importncia em geritricos
(Goldschmidt e Hendrick, 2002).
Segundo Sutton e Coleman (1997), h autores que defendem no haver locais
predispostos para estes tumores e portanto h alguma variabilidade quanto a este tema entre
investigadores. A ttulo de exemplo, os msculos esquelticos normalmente no so
mencionados, porm um local comum encontrado por Mdicos Veterinrios que
desempenham funes em matadouros. No estudo realizado por estes autores, o local mais
comum para ocorrncia destes tumores foi a superfcie ventral da cauda seguindo-se os
msculos esquelticos e glndula partida.
Quadro 2 - Localizaes mais comuns de ocorrncia de tumores melanocticos em equinos.
Localizao
Superfcie ventral cauda
Perianal
Perineal
Estudo
(Foley et al., 1991; Rodrguez et al., 1997; Sutton e Coleman, 1997;
Fleury et al., 2000b; Foy et al., 2002; MacGillivray et al., 2002; Smith
et al., 2002; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a; Farcu et
al., 2007; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011)
(Foley et al., 1991; Fleury et al., 2000b; Seltenhammer et al., 2004;
Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011)
(Valentine, 1995; Fleury et al., 2000b; Goldschmidt e Hendrick, 2002;
MacGillivray et al., 2002; Smith et al., 2002; Seltenhammer et al.,
2004; Valentine, 2006a; Farcu et al., 2007; Pamela et al., 2007;
Buechner-Maxwell, 2009)
(Foley et al., 1991; Valentine, 1995; Rodrguez et al., 1997; Fleury et
al., 2000b; Smith et al., 2002; Pamela et al., 2007; BuechnerMaxwell, 2009)
(Foy et al., 2002; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011)
(Fleury et al., 2000b; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a;
Buechner-Maxwell, 2009)
(Rodrguez et al., 1997; Sutton e Coleman, 1997; Valentine, 2006a;
Buechner-Maxwell, 2009)
(Fleury et al., 2000b; Seltenhammer et al., 2004; Buechner-Maxwell,
2009)
(Rodrguez et al., 1997)
Introduo
1.4. Patogenia
Apesar de ser uma condio bem reconhecida e muito comum o seu processo
subjacente continua a ser enigmtico e discordante (Sutton e Coleman, 1997).
Os melanoblastos tm origem neuroectodrmica e durante o desenvolvimento fetal
migram para a derme, epiderme e folculos pilosos. As clulas diferenciadas produtoras de
pigmento so referidas como melancitos. Estas clulas dendrticas encontram-se interpostas
entre os queratincitos basais da epiderme e o folculo piloso. So encontradas molculas de
caderina epitelial (caderina-E) na superfcie dos melancitos e queratincitos. Normalmente,
estes dois tipos de clulas no formam ligaes entre si a no ser atravs destas molculas
que constituem o mecanismo de adeso entre os 2 tipos celulares. A melanina, produzida
pelos melancitos, armazenada nos melanossomas e transferida para os queratincitos num
processo designado por citocrinia. Os melanossomas acumulam-se no interior do citoplasma
dos queratincitos onde protegem a pele dos efeitos nocivos da radiao UV. Os
melanoblastos que no atingem a epiderme desenvolver-se-o em melancitos intradrmicos.
Na derme, pode-se encontrar uma segunda populao de clulas que contm melanina, os
melanfagos, que fagocitam a melanina que atinge a derme proveniente da migrao e
destruio dos melancitos da epiderme ou folculos (Goldschmidt e Hendrick, 2002; Smith et
al., 2002).
A converso de melancitos normais, no pigmentados e isolados de outros melancitos,
para pigmentados e neoplsicos, em ninhos, um processo com vrias etapas desde a
iniciao seguida de promoo, transformao e metastizao. Virtualmente, nada se sabe
acerca da iniciao da maioria dos melanomas em animais. Porm pensa-se que este
processo, em cerca de 65% dos melanomas cutneos em humanos, ocorrer em
consequncia de mutaes geradas por radiao solar UVA e UVB. Esta concluso baseia-se
na ligao epidemiolgica do melanoma com a exposio solar. Supe-se que a
susceptibilidade gentica, possivelmente aumentando a frequncia espontnea de clulas
mutadas, pode ser crtica para iniciao de muitos tumores. Contudo, com excepo do cavalo
ruo, a transformao maligna de leses benignas muito pouco comum em animais e
acredita-se que a maioria dos melanomas surgem de melancitos na epiderme, derme, epitlio
ocular e epitlio oral. Quanto aos promotores podem incluir trauma, exposio qumica,
queimaduras, hormonas, infeces, drogas e outras causas de hiperplasia reactiva. Talvez os
melanomas cutneos surjam de leso crnica resultando em hiperplasia reactiva do epitlio,
ruptura da interaco normal entre queratincitos e melancitos e amplificao das clulas
iniciadas espontaneamente ou por factores ambientais no identificados. A transformao
coadjuvada por instabilidade ao nvel do ADN. Os supressores de proliferao celular e
9
Introduo
activadores da apoptose, como por exemplo a protena retinoblastoma (Rb) e protena 53 (p53)
so, eventualmente, substitudos por factores de crescimento e/ou receptores de factores de
crescimento e inibidores da apoptose (Smith et al., 2002). Apesar destes dados foi detectada
sobrexpresso da p53 normal em melanomas metastticos em 2 cavalos o que sugeriu que
esta protena no estar envolvida na tumorignese do melanoma equino (Roels et al., 2000).
A mutao de proto-oncogenes em oncogenes (c-myc, c-erb-B-2, c-yes, c-Kit, ras)
tambm favorece a proliferao e desenvolvimento tumoral assim como o crescimento
autnomo, atravs de factores de crescimento, requerido para a progresso neoplsica. Esta
transformao neoplsica, resultado de mutaes, ocorre antes da metastizao que , em si,
um processo com vrias etapas iniciando-se com a separao da massa primria,
deslocamento para e atravs do endotlio, migrao via sangunea e/ou linftica e, por fim,
ligao e proliferao numa localizao secundria. Durante todo este processo as clulas
tumorais devem conseguir escapar ao sistema imunitrio, sobreviver e deslocar-se no sistema
circulatrio e/ou linftico e proliferar numa localizao distinta da sua origem. Outras alteraes
necessrias para que um melancito se torne maligno so ainda alvo de investigao (Smith et
al., 2002) e o conhecimento destas informaes torna-se assim importante tendo em conta as
implicaes que pode ter no tratamento desta condio (Sutton e Coleman, 1997).
De notar ainda o facto de o processo de diluio da cor da pelagem e o desenvolvimento
tumoral poderem estar relacionados. A pigmentao visvel da pele e plo o culminar dos
processos que foram sendo referidos anteriormente. Embora na ltima dcada se tenham feito
enormes avanos no que respeita compreenso da fisiologia e gentica da pigmentao,
usando tecnologia de ADN e linhagens mutantes de ratos, o mecanismo em cavalos recebeu
pouca ateno. Uma anlise das alteraes morfolgicas nos melancitos foliculares de
cavalos ruos seria um passo importante para definir os genes nos quais se devem focar os
estudos. Em 1984, foi observado por Altmeyer e colaboradores que os nveis da hormona
estimulante dos melancitos (-MSH) diminuem medida que o cavalo se torna ruo. Esta
hormona induz a proliferao dos melancitos e estimula a produo de pigmento pelos
mesmos. Dois dos genes mais importantes na cor da pelagem, extension e agouti, codificam
receptores da -MSH e uma protena antagonista da mesma hormona respectivamente.
Interaces entre ambas tm uma influncia importante no nvel e tipo de melanina produzida
(eumelanina e feomelanina). Assim, alargar investigaes neste tema pode ser importante,
comeando por estabelecer os nveis de -MSH, identificar e caracterizar os genes que
codificam o seu receptor (receptor 1 da melanocortina - MC1R) bem como a protena
sinalizadora de agouti em cavalos ruos e de outras pelagens (Sutton e Coleman, 1997).
10
Introduo
11
Introduo
inclusive ajudar no diagnstico diferencial, a imensa variedade de neoplasias cutneas faz com
que estes dados se tornem menos fiveis. Em suma, um ndulo no passa de um ndulo at
que seja avaliado histologicamente (Scott e Miller, 2011) e a sua deteco pode ser obtida por
inspeco e palpao (Seltenhammer et al., 2003).
O exame histolgico pode basear-se em vrias caractersticas como: localizao do
tumor, presena de actividade juncional, tipo de clulas presentes, grau de pigmentao, grau
de pleomorfismo, actividade mittica, presena de inflamao e/ou necrose, padro de
crescimento e leses em tecidos adjacentes (Foley et al., 1991; Smith et al., 2002; Chapman et
al., 2009).
No que se refere descrio da localizao das neoplasias melanocticas da pele
devemos ter em considerao 3 termos:
- juncional: proliferao de melancitos neoplsicos na juno dermo-epidrmica. Pode
envolver a epiderme ou folculo piloso;
- composto: o tumor apresenta tanto uma componente epidrmica como drmica;
- drmico: em que o tumor apenas intradrmico sem envolvimento da epiderme
(Goldschmidt, 1998; Goldschmidt e Hendrick, 2002).
A morfologia celular e actividade mittica so elementos importantes na distino de
tumores melanocticos benignos e malignos pelo que est sugerido o branqueamento dos
mesmos em casos de cortes histolgicos densamente pigmentados (Goldschmidt, 1998).
Apesar disso, esta diferenciao bastante complicada. A presena de melancitos isolados
ou em ninhos na camada superior da epiderme , por norma, indicativo de malignidade assim
como uma componente infiltrativa drmica ou subcutnea do tumor (Goldschmidt, 1998).
Alguns autores referem tambm a presena de uma componente inflamatria constituda
principalmente de linfcitos (Roels et al., 2000).
12
Introduo
Melanoma
As leses so muito variveis no que diz respeito sua aparncia, independentemente
da sua localizao. Podem assomar qualquer cor, desde cinzento ou castanho, vermelho ou
mesmo azul (Smith et al., 2002). Habitualmente so leses firmes, nodulares ou com aparncia
de placas. Podem ou no ser alopcicas, hiperpigmentadas ou ulceradas (Rodrguez et al.,
1997; Rees, 2004; Scott e Miller, 2011). Em alguns casos podem libertar uma substncia
espessa e negra. Ao coalescer os ndulos podem apresentar uma aparncia irregular e
rugosa. Alguns tumores podem, contudo, ser pedunculados ou ter aspecto verrucoso. Embora
de forma menos frequente podem aparecer como leses isoladas (Foy et al., 2002; Smith et al.,
2002; Scott e Miller, 2011).
13
Introduo
14
Introduo
Metstases
Embora a controvrsia relativamente ao tema, por definio, metstases provam
malignidade (Roels et al., 2000 citando Majno e Joris, 1996). Independentemente da sua
localizao, estas leses podem metastizar atravs dos vasos sanguneos ou linfticos, sendo
os gnglios linfticos regionais o alvo primrio (Fleury et al., 2000a; MacGillivray et al., 2002;
Smith et al., 2002).
Apesar de poderem apresentar um crescimento lento estes tumores so localmente
invasivos e se o factor tempo proporcionar iro metastizar para fscia muscular, glndula
mamria, osso, canal vertebral, crebro e rgos internos como pulmo, fgado, bao, rim,
corao. Os sinais clnicos mais comuns associados so: depresso, perda de peso, clica e
edema perifrico. A palpao rectal e ultrasonografia so exames teis na deteco de
tumores internos. A constatao de clulas com pigmento melnico, que podem ser
melancitos neoplsicos ou melanfagos associados, em bipsia ou citologias de massas
internas ou ainda em preparaes citolgicas de fluido abdominal ou torcico, confirma o
diagnstico de melanoma metasttico (Fleury et al., 2000a; Patterson-Kane et al., 2001; Foy et
al., 2002; MacGillivray et al., 2002; Valentine, 2006a; Garvican et al., 2007).
Foi sugerido que estas massas internas possam ser acumulaes ectpicas de
melancitos hiperplsicos ou pigmento melnico em aglomerados dentro de melanfagos e
no verdadeiras metstases e podem assim experimentar transformao maligna in situ
(Patterson-Kane et al., 2001 citando Wilock, 1993).
Critrios de malignidade
Muitas vezes estes critrios referem-se aos animais em geral e no especificamente a
equinos o que torna a avaliao nesta espcie pouco ajustada. O melanoma ser uma das
poucas neoplasias em animais em que a localizao um importante factor prognstico mas
no existe uma relao evidente entre as caractersticas histolgicas, incluindo o ndice
mittico e pigmentao, e a taxa de sobrevivncia (Smith et al., 2002).
Para tumores cutneos em animais a caracterstica mais fivel para distinguir benigno de
maligno o ndice mittico (Smith et al., 2002) e segundo Goldschmidt (1998) 3 ou mais figuras
mitticas por 10 campos de grande ampliao indicam malignidade.
15
Introduo
16
Introduo
conhecidas que elcita uma resposta citotxica das clulas T, fortemente positiva no
citoplasma dos melancitos mas no expressa noutros tipos celulares e talvez seja o
marcador mais especfico at ao momento (Koenig et al., 2001; Smith et al., 2002; Stokking,
2004; Chapman et al., 2009). O PCNA e o Ki-67 so marcadores de proliferao e, segundo
alguns autores, so importantes na distino de tumores benignos e malignos (Seltenhammer
et al., 2004), embora outros estudos no partilhem desta opinio (Roels et al., 2000; Pamela et
al., 2007; Scott e Miller, 2011). O HMB-45 um anticorpo monoclonal apresentado pela
primeira vez em 1986, quando se admitia ser absolutamente especfico e sensvel para leses
melanocticas (Gown et al., 1986; Orchard, 2000). Estudos mais actuais revelam, porm uma
diminuio da especificidade e sensibilidade deste marcador sendo considerado menos
profcuo em tecidos animais (Berrington et al., 1994; Orchard, 2000; Smith et al., 2002).
Adicionalmente ressalva-se a possvel importncia diagnstica que ter avaliar determinados
oncogenes relacionados com tecidos melanocticos (Sahar El-Sheikh et al., 2009). Como
referido previamente, estes oncogenes so resultado de mutaes de proto-oncogenes como
o caso do c-Kit (Smith et al., 2002), tema que ser aprofundado posteriormente neste trabalho.
17
Introduo
determinar devido baixa taxa de crescimento da maioria dos tumores e ao facto de, por
vezes, se combinarem vrias modalidades teraputicas (MacGillivray et al., 2002).
De acordo com alguns autores, a exciso cirrgica, quando possvel, o tratamento de
eleio (Goldschmidt e Hendrick, 2002; Valentine, 2006a).
A cimetidina um antagonista do receptor
18
Introduo
mantida
em
clulas-tronco
hematopoiticas,
mastcitos,
linfcitos
19
Introduo
20
Objectivos
2. OBJECTIVOS
21
Material e mtodos
3. MATERIAL e MTODOS
Neste estudo foram includos ndulos cutneos de equinos, com suspeita de serem
tumores melanocticos pelo Mdico Veterinrio responsvel e cujos proprietrios autorizaram a
sua remoo (total ou parcial). As amostras foram recolhidas em territrio nacional, em
Inglaterra e em Barcelona durante um perodo de 8 meses, entre Novembro de 2010 e Julho de
2011. As amostras foram processadas na Universidade de Trs-os-Montes e Alto Douro
(UTAD), no Liphook Equine Hospital (LEH) e na Universidade Autnoma de Barcelona (UAB)
para posterior avaliao.
A cada animal foi efectuado um exame fsico geral o qual incluiu detalhada observao e
palpao das zonas passveis de se encontrar ndulos cutneos.
A par do material recolhido foi efectuado um questionrio ao proprietrio (Anexo 1),
responsvel pelo animal ou Mdico Veterinrio referente no qual constava dados referentes ao
animal como nome, idade, gnero, raa, pelagem e aptido. Relativamente (s) leso(es)
foram recolhidos dados sobre o tamanho, a quantidade, a localizao e a durao bem como
cada caso documentado por suporte fotogrfico (Sony Cyber-shot DSC-W120, 7.2 Megapixels).
Estes dados recolhidos com as respectivas categorias associadas constituram as nossas
variveis clnicas.
Em relao ao tamanho dos ndulos considerou-se pequenas as leses at 1 centmetro
(cm) de dimetro, mdias as leses que apresentavam entre 1 e 4 cm e grandes as leses
superiores a 4 cm de dimetro.
Relativamente quantidade considerou-se melanoma drmico quando se identificou 1 ou
2 ndulos e melanomatose drmica quando visveis ndulos em nmero superior a 2.
22
Material e mtodos
O material foi recolhido por exciso cirrgica (Figura 5), fixado em formol a 10%, includo
em parafina sinttica Histoplast-Shandon, seguindo a metodologia habitual.
Aps incluso, foram realizados cortes de cada um dos tumores, com 3 micrmetros (m)
de espessura, num micrtomo automtico Leica RM 2255. Em seguida, os cortes foram
colocados em lminas e efectuou-se secagem na estufa, temperatura de 37C. Aps
secagem, foram desparafinados em xilol, hidratados por passagem consecutiva em lcoois de
concentraes decrescentes, procedendo-se colorao convencional com hematoxilinaeosina (HE) para posterior diagnstico histopatolgico.
O diagnstico histopatolgico foi realizado em conformidade com os critrios da
Organizao Mundial de Sade (OMS) (Goldschmidt, 1998), num microscpio Nikon
Optiphot-2.
Todas as amostras foram observadas com a colorao de HE e avaliadas as
caractersticas histolgicas descritas no quadro 3 que se segue. Foi avaliada a localizao das
leses entre derme ou derme e epiderme, o tipo de clulas presentes em fusiforme, redondo ou
um misto destes, foi observada a presena de ulcerao, quantificou-se o pigmento e estroma
em 3 graus, escasso (1), moderado (2) e abundante (3) e observou-se ainda a presena de
mbolos vasculares/linfticos.
23
Material e mtodos
Categorias
Derme e/ou
Epiderme
Tipo de clulas
Fusiforme
Redondo
Misto
Ulcerao
Presente
Ausente
Quantidade de pigmento
Escasso 1
Moderado 2
Abundante 3
Quantidade de estroma
Escasso 1
Moderado 2
Abundante 3
mbolos
Presente
Ausente
24
Material e mtodos
3.4.1 Procedimento
A expresso IHQ da protena em estudo foi obtida pelo mtodo indirecto com uso de um
complexo estreptavidina-biotina peroxidase, utilizando o kit Ultravision Detection System,
Labvision Corporation, Fremont, CA, USA (as suas componentes figuram a negrito no
seguimento do texto).
O procedimento escolhido foi adaptado do mtodo exposto por Sulaimon (2002)
conforme abaixo descrito:
1. Desparafinao dos cortes em xilol durante 30 minutos e hidratao com uma srie
de lcoois de concentrao decrescente (100%, 95%, 80% e 70%) at gua
destilada;
2. Realizao de um pr-tratamento de recuperao antignica em microondas (imerso
das lminas em tampo citrato com pH=6,2) durante 15 minutos, divididos em 3 ciclos
de 5 minutos com intervalos de 30 segundos entre cada um, a 750W;
3. Arrefecimento das lminas durante cerca de 30 minutos temperatura ambiente;
4. Imerso das lminas durante 30-40 minutos numa soluo de permanganato de
potssio (KMnO4) a 0,25%;
5. Lavagem das lminas por gua destilada;
6. Colocao das lminas numa soluo de cido oxlico (H2C2O4) a 0,1% durante
aproximadamente 10 minutos (processo monitorizado ao minuto, adaptando-se os
tempos quantidade de pigmento da amostra);
7. Inibio das peroxidases endgenas com perxido de hidrognio (H2O2) a 3%,
durante 30 minutos e remoo do excesso do mesmo com duas lavagens sucessivas
com tampo fosfato salino (PBS);
8. Incubao dos cortes temperatura ambiente durante 5 minutos com Ultra V
Block;
9. Incubao dos cortes com o anticorpo primrio c-Kit (CD117) (clone Ab-6, Dako),
com uma concentrao de 1:500 (diluio em tampo PBS com pH=7,4), durante a
noite, no frigorfico a 4C, permanecendo em cmara hmida horizontal, Bio Optica;
10. Aps o perodo de incubao, remoo do anticorpo primrio com 4 lavagens com
tampo PBS e incubao dos cortes durante 10 minutos com Biotinylated Goat
Polivalent (anticorpo secundrio) temperatura ambiente;
11. Realizao de 2 lavagens com tampo PBS e incubao durante 10 minutos com
Streptavidin Peroxidase temperatura ambiente e de seguida uma lavagem com
tampo PBS;
25
Material e mtodos
A anlise estatstica foi realizada com o programa estatstico SPSS (Statistical Package
for the Social Sciences, Chicago, IL, EUA), verso 19.0 para Windows.
Como anlise descritiva das variveis contnuas, usou-se a mdia, a mediana, o desvio
padro e o erro padro da mdia, mnimo e mximo. Os resultados foram expressos da forma
mdia desvio padro. Usou-se a anlise descritiva das variveis categricas, com a obteno
de frequncias e percentagens das categorias.
Foi usado o teste de Qui-Quadrado (2) para analisar as correlaes entre cada categoria
das variveis dentro de cada estudo (clnico, histopatolgico e imunohistoqumico) assim como
para analisar as associaes das categorias das variveis entre estudos (clnico,
histopatolgico e imunohistoqumico). Os valores obtidos foram considerados significativos
para valores de p<0,05.
26
Resultados
4. RESULTADOS
Idade:
Dos animais includos no estudo registou-se um valor mdio de idades de 14,9 anos
(5,03), com um mnimo de 2,5 anos e um mximo de 26 anos.
Gnero:
Dos tumores analisados, 22/43 (51,2%) ocorreram em machos e 21/43 (48,8%) em
fmeas como podemos observar pelo grfico 1.
Gnero
machos
48,8%
51,2%
fmeas
27
Resultados
Raa:
As leses estudadas ocorreram em equinos de vrias raas sobretudo PSL (n=26;
60,5%) e Cruzado Lusitano (n=12; 27,9%) alm de Anglolusa (n=2; 4,7%), Anglorabe (n=1,
2,3%), Cruzado Espanhol (n=1; 2,3%) e Irish Draught x Thoroughbred (n=1; 2,3%) conforme o
quadro 4 que se segue.
Quadro 4 - Frequncias e percentagens das raas dos animais includos no estudo.
Raa
Frequncia (n)
Percentagem (%)
PSL
26
60,5
Cruzado Lusitano
12
27,9
Anglolusa
4,7
Anglorabe
2,3
Cruzado Espanhol
2,3
Irish Draugh x
Thoroughbreb
2,3
Total
43
100
Pelagem:
As pelagens encontradas nos animais avaliados incluram: rua (n=39; 90,7%), isabel
(n=2; 4,7%), baia (n=1; 2,3%) e castanha (n=1; 2,3%) conforme se segue apresentado no
grfico 2.
Pelagem
2,3%
2,3%
4,7%
Rua
Isabel
Baia
Castanha
90,7%
Grfico 2 - Frequncias das diferentes pelagens observadas nos animais deste estudo.
28
Resultados
Quantidade:
semelhana do estudo feito por Valentine (1995), as leses foram divididas em
melanoma drmico quando identificados 1 ou 2 ndulos (n=5; 11,6%) ou em melanomatose
drmica quando identificadas leses em nmero superior a 2 (n=38; 88,4%), como se segue
abaixo apresentado no grfico 3.
Quantidade
88,4%
100%
11,6%
50%
Quantidade
0%
Melanoma drmico
Melanomatose
drmica
Tamanho:
A avaliao macroscpica das leses, antes destas serem excisionadas, levou a um
agrupamento das mesmas em pequenas (n=39; 90,7%), mdias (n=19; 44,2%) e grandes
(n=11; 25,6%) quando apresentavam at 1 cm de dimetro, entre 1 e 4 cm ou superior a 4 cm
respectivamente, como esquematizado no quadro 5 que se segue. Ressalva-se que o mesmo
animal pode apresentar mais do que uma categoria de tamanho.
Quadro 5 - Frequncias e percentagens dos tamanhos das leses encontradas nos animais
avaliados.
Tamanho
Pequenas
(< 1 cm)
Mdias
(1 a 4 cm)
Grandes
(> 4 cm)
Frequncia (n)
Percentagem (%)
39
90,7
19
44,2
11
25,6
29
Resultados
Localizao:
Tendo em conta os 43 animais avaliados, os tumores identificados localizavam-se na
pele, em diversas zonas que foram categorizadas:
- zona perineal (n=40; 93%), considerada tpica, que inclui um ou vrios ndulos na
superfcie ventral da cauda, nus, vulva e/ou perneo (Figura 6);
- outras localizaes (n=12; 27,9%), consideradas atpicas, que incluem um ou vrios
ndulos numa das seguintes regies: garupa, olho, glndula salivar, glndula submandibular,
espdua, pescoo, crineira, comissura labial, costado e/ou face interna da coxa;
- padro difuso (n=2; 4,7%) (Figura 7), considerado uma distribuio exagerada de
ndulos (em nmero superior a 4 em localizaes distintas entre si) um pouco por toda a regio
corporal.
De ressalvar que 10 dos animais apresentavam concomitantemente leses nas
localizaes tpicas e atpicas (n=10; 23,3%) (Grfico 4).
30
Resultados
Localizao
93,0%
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Localizao
27,9%
4,7%
Zona perineal
Outras
Difusa
Grfico 4 - Distribuio das localizaes das leses encontradas nos animais includos no
estudo.
Durao:
Aquando do inqurito foi tambm questionado o tempo estimado do aparecimento das
leses obtendo-se valores entre 6 meses e 20 anos.
31
Resultados
moderada (2) (n=16; 37,2%) (Figura 15) e abundante (3) (n=8; 18,6%) (Figura 16). Em 4 dos 43
animais includos (n=4; 9,3%) foram tambm observados mbolos vasculares/linfticos (Figura
17), enquanto que nas restantes amostras (n=39; 90,7%) esta caracterstica no estava
presente.
No quadro 6 resumem-se as variveis histolgicas avaliadas nos tumores includos na
amostra e as respectivas percentagens associadas.
Categorias
n=43
N
Derme
Derme + Epiderme
28
15
65,1
34,9
Tipo de clulas
Fusiforme
Redondo
Misto
3
23
17
7,0
53,5
39,5
Ulcerao
Presente
Ausente
10
33
23,3
76,7
Escassa (1)
Quantidade de pigmento Moderada (2)
Abundante (3)
5
16
22
11,6
37,2
51,2
Escassa (1)
Moderada (2)
Abundante (3)
19
16
8
44,2
37,2
18,6
Presente
Ausente
4
39
9,3
90,7
Localizao
Quantidade de estroma
mbolos
32
Resultados
33
Resultados
34
Resultados
Figura 12 - Ulcerao dos tecidos observada em amostra do estudo. Colorao HE, 40x.
Figura 13 - Quantidade de pigmento melnico escassa (grau 1). Colorao HE, 40x.
35
Resultados
Figura 14 - Quantidade de pigmento melnico abundante (grau 3). Colorao HE, 40x.
36
Resultados
Figura 17 - mbolo vascular. Observa-se pigmento melnico no seu interior. Colorao HE,
40x.
37
Resultados
38
Resultados
39
Resultados
n=43
N
Presente
27
62,8
Ausente
16
37,2
40
Discusso
5. DISCUSSO
Idade
No que diz respeito idade dos animais em estudo obteve-se uma mdia de 14,9 anos
com um desvio padro de 5,03 sendo que foram includos animais com idades compreendidas
entre os 2,5 e os 26 anos de idade. Estes resultados esto prximos dos obtidos em alguns
estudos anteriores, no entanto divergem relativamente a outros de acordo com as diversas
classificaes estabelecidas. Dos resultados obtidos, ou seja, num total de 43 amostras: 4
(9,3%) foram considerados melanomas drmicos, 35 (81,4%) melanomatose drmica e 4
(9,3%) melanomas malignos anaplsicos, como referido anteriormente. Assim, relativamente
aos melanomas drmicos temos animais com idades contidas entre os 7 e os 15 anos de
idade, com uma mdia de 11 anos ( 3,37), nos casos de melanomatose drmica os animais
encontram-se entre os 6 e os 26 anos com uma mdia de 15,9 anos de idade ( 4,60) e quanto
aos animais com melanomas malignos anaplsicos apresentavam idades entre os 2,5 e os 19
anos de idade com uma mdia de 10,4 anos ( 7,18).
Como exemplo, num estudo onde foram includos 20 animais com melanomas drmicos,
o intervalo de idades ocorreu entre os 2 e os 29 anos, com uma mdia de 13 anos. No caso de
animais com melanomatose, um estudo com 12 animais revelou que esta condio se
proporciona em animais com idades superiores a 15 anos podendo afectar equinos entre os 7
41
Discusso
42
Discusso
tambm no facto de terem sido includos apenas os que apresentam a doena. No entanto, de
um total de 43 animais, a percentagem de animais com a doena e com idades superiores a 15
anos de alguma forma idntica (n= 23; 53,5%).
Dados obtidos de um estudo com 70 animais de matadouro, salvaguardando uma maior
tendncia para terem uma idade mais avanada, foram divididos em 3 classes e em cavalos
com menos de 7 anos obtiveram uma percentagem de 53,3% para a presena de melanomas,
em cavalos entre 7 e 15 anos uma percentagem de 90,9% e uma percentagem de 100% para
cavalos com idades superiores a 15 anos (Sutton e Coleman, 1997).
Fleury et al. (2000b) analisou uma populao de 264 animais sendo que 31,4%
apresentava melanomas. Estes foram divididos em 4 classes etrias: 0-4 anos, 5-9 anos, 10-14
anos e 15 anos ou superior com percentagens de 2,5%, 20%, 40% e 68% respectivamente.
As diferenas encontradas podem ser explicadas pelo nmero de animais includos,
pelos critrios de seleco para entrada no estudo bem como pela diviso das diferentes
classes etrias. No entanto, os estudos so concordantes em concluir que esta uma condio
mais frequente em cavalos de idade geritrica. Estas frequncias podem, contudo, estar
sobrevalorizadas por uma relativizao desta doena, sobretudo nas fases iniciais, quer por
parte dos clientes quer dos clnicos responsveis.
Gnero
Os resultados respeitantes ao gnero so inconsistentes na bibliografia (Smith et al.,
2002).
Dos tumores analisados 22/43 (51,2%) ocorreram em machos e 21/43 (48,8%) em
fmeas pelo que parece no haver uma predisposio sexual para esta doena. Estes
resultados so concordantes com algumas investigaes anteriores (Valentine, 1995; Sutton e
Coleman, 1997; Fleury et al., 2000b; Valentine, 2006a; Scott e Miller, 2011). Contudo,
contrariam outros estudos que referem uma maior predisposio em machos (Smith et al.,
2002 citando Sundberg et al., 1977) ou mesmo uma outra investigao que sugere uma maior
predisposio em fmeas (Foley et al., 1991) apesar de terem sido apenas includos
diagnsticos de melanocitomas em cavalos com idade inferior a 2 anos, num total de 18
animais. Num outro estudo foram avaliados 296 animais em que 206 eram fmeas e 90 eram
machos porm, o efeito destes dados no foi significativo para o objectivo em causa que seria
avaliar a heritabilidade desta condio (Seltenhammer et al., 2003).
Esta diferena nos dados obtidos pode ser resultado do nmero de animais includos no
estudo bem como dos critrios de seleco dos mesmos pelo que no se encontram motivos
relacionados com a fisiopatologia e origem da doena que justifiquem predisposio nesta
caracterstica.
43
Discusso
Raa
As leses estudadas ocorreram em equinos de vrias raas sobretudo PSL (n=26;
60,5%) e Cruzado Lusitano (n=12; 27,9%) alm de Anglolusa (n=2; 4,7%), Anglorabe (n=1,
2,3%), Cruzado Espanhol (n=1; 2,3%) e Irish Draught x Thoroughbred (n=1; 2,3%).
Esta caracterstica no de fcil discusso uma vez que alguns estudos usam apenas
uma raa de cavalos (Lerner e Cage, 1973; Fleury et al., 2000a; Fleury et al., 2000b;
Seltenhammer et al., 2003) e muitas vezes no h referncias a frequncias exactas. A maioria
dos autores refere apenas que raas como rabe, Percheron, PSI, Lipizzaner, Andaluz, Shire,
Irish Draught, Pnei Gals (Goldschmidt e Hendrick, 2002; Smith et al., 2002; Rees, 2004;
Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009; Hewes e Sullins, 2009; Scott e Miller, 2011) esto
em elevado risco, no entanto, algumas destas raas tambm tm uma maior percentagem de
cavalos ruos (Smith et al., 2002; Valentine, 2006a; Buechner-Maxwell, 2009) o que pode
sobrevalorizar as frequncias. Em raas como Camargue Francs ou Lipizzaner 31% a 50%
dos cavalos apresenta alguma evidncia de tumores melanocticos (Buechner-Maxwell, 2009),
podendo mesmo chegar aos 75% em Lipizzaners (Seltenhammer et al., 2003). Em 53 animais
avaliados por Valentine em 1995, a raa rabe e PSI foram as mais afectadas. A mesma
autora, em 2006 e semelhana de estudos anteriores apontou a raa rabe como a mais
comum para neoplasias melanocticas (Valentine, 2006b).
Os resultados apresentados neste estudo abarcam uma maior percentagem de cavalos
PSL e Cruzado Lusitano. Uma possvel explicao ser o facto de a maior parte dos ndulos
terem sido recolhidos em territrio nacional sendo que haver uma maior probabilidade dos
cavalos observados serem destas raas. No entanto, no podemos especificar a influncia
desta caracterstica nos tumores melanocticos de equinos. Devero ser conduzidos mais
estudos na base da gentica que tero todo o interesse no que respeita evoluo da doena
e possveis opes teraputicas.
Pelagem
As pelagens encontradas nos animais avaliados incluram: rua (n=39; 90,7%), isabel
(n=2; 4,7%), baia (n=1; 2,3%) e castanha (n=1; 2,3%), ou seja, uma frequncia de 9,3% (n=4)
de outras pelagens que no rua.
Ao contrrio do que alguns autores estabeleceram, isto , os tumores melanocticos
serem uma condio mpar de cavalos ruos (Sutton e Coleman, 1997; Rees, 2004), as nossas
observaes demostraram que tambm possvel surgirem em outras pelagens. O nosso
estudo corrobora a opinio de outros investigadores que assumem ser uma doena passvel de
ocorrer em qualquer pelagem, embora se assome com mais frequncia na pelagem rua
(Knottenbelt e Pascoe, 1994; Valentine, 1995; Smith et al., 2002; Buechner-Maxwell, 2009;
44
Discusso
Scott e Miller, 2011). Inclusive surgem estudos com frequncias mais elevadas de outras
pelagens comparativamente com o nosso, por exemplo, 28,3% (n=15) no estudo de Valentine
(1995), 14,8% (n=4) no trabalho de Seltenhammer et al. (2004).
Estes dados, e validando especificamente para os resultados obtidos, podem estar
sobrevalorizados uma vez que a maioria das amostras referem-se a cavalos de raa PSL e
Cruzado Lusitano e reconhecida a elevada prevalncia da pelagem rua nestas raas
(Lusitano, 2011).
Ao que parece a elevada incidncia destas leses em cavalos ruos est intimamente
relacionada com o processo de despigmentao da pelagem (Sutton e Coleman, 1997; Slkner
et al., 2004). Com base na suspeita de uma influncia hereditria e gentica importante no
desenvolvimento de melanomas tm sido direccionados alguns estudos nesta rea (Rieder et
al., 2000; Seltenhammer et al., 2003; Slkner et al., 2004; Pielberg et al., 2008). Embora no
esteja concretamente esclarecida a relao entre a pelagem e o aparecimento destes tumores
parece que os cavalos se tornam ruos com a idade devido a uma mutao em que h
sobrexpresso gnica do STX17 e NR4A3, como j referido. Os autores propem que a
duplicao no gene STX17, tendo em conta a influncia deste na produo e transporte dos
melanossomas, leve proliferao de melancitos drmicos na pele glabra predispondo-a a
melanomas (Pielberg et al., 2008).
Rieder et al. (2000) sugeriu os genes protena melanoctica 17/gp100 (Pmel17/gp100) e
protena 1 relacionada tirosinase (TYRP1/gp75), como marcadores vlidos para cavalos e o
seu envolvimento no processo de perda de pigmento da pelagem. Assim como aponta a
susceptibilidade de um gene regulador do ciclo celular, inibidor 2a da quinase dependente da
ciclina (CDK) (Cdkn2a/p16), para o desenvolvimento de leses melanociticas.
Embora a frequncia de ocorrncia da doena em animais de outras pelagens que no a
rua seja, de certo modo, reduzida no deve ser descurada principalmente porque parece que
se apresenta com formas com maior malignidade (Rieder et al., 2000; Smith et al., 2002;
Seltenhammer et al., 2003; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a; Knottenbelt, 2009a)
(Figura 21), particularidade tambm observada nos nossos resultados como justificaremos no
decorrer da discusso. Uma possvel explicao para este facto ser que, devido reduzida ou
mesmo nula actividade dos melancitos drmicos em equinos de pelagem rua, a proliferao
tumoral e metasttica tenha lugar de uma forma muito atenuada. Isto permitir que os animais
com esta pelagem vivam, de certo modo, com a doena mais tempo sem complicaes mais
srias. Ao passo que nas restantes pelagens ocorre uma proliferao e metastizao tumoral
aceleradas podendo levar morte de forma mais precoce devido aos efeitos da taxa de
proliferao tumoral (Rieder et al., 2000).
45
Discusso
Quantidade
As leses foram divididas em melanoma drmico quando identificados 1 ou 2 ndulos
(n=5; 11,6%) ou em melanomatose drmica quando identificadas leses em nmero superior a
2 (n=38; 88,4%).
De acordo com a bibliografia consultada no foi fcil estabelecer um paralelismo nesta
caracterstica uma vez que no foram encontrados muitos dados nestes termos. Apenas
Valentine, em 1995, descreve a diviso da populao analisada em 2 grupos, um onde incluiu
os animais com 1 ou 2 ndulos (n=8) e outro onde incluiu os animais com ndulos em nmero
superior a 2 (n=12), sendo que foram 24 os animais diagnosticados com melanomas drmicos,
2 foram classificados como indefinidos e 2 como melanomas malignos anaplsicos. O facto
destes tumores, de forma frequente, coalescerem (Foy et al., 2002) torna mais difcil esta
avaliao clnica. Os autores referem melanomas mltiplos ou solitrios mas sem nmeros
concretos (Roels et al., 2000; Rees, 2004; Hewes e Sullins, 2009; Scott e Miller, 2011).
Sugerem que o nmero est significativamente relacionado com a idade e que a aparncia de
melanomas mltiplos pode ser anunciada pelo aparecimento de vitiligo como j referido
anteriormente (Lerner e Cage, 1973; Fleury et al., 2000b). Contrariamente, um estudo provou
que, surpreendentemente, os melanomas no esto relacionados com vitiligo (Slkner et al.,
2004). Estas leses surgem habitualmente como mltiplas (Fleury et al., 2000b; Seltenhammer
et al., 2003) e de forma menos frequente ocorrem como leses nicas (Valentine, 1995).
46
Discusso
Assim, a quantidade de tumores pode ser um factor que influencia a escolha do mtodo
de tratamento e o seu xito (Knottenbelt, 2008b).
Tamanho
A avaliao macroscpica das leses, antes destas serem excisionadas, levou a um
agrupamento das mesmas em pequenas (n=39; 90,7%), mdias (n=19; 44,2%) e grandes
(n=11; 25,6%) quando apresentavam at 1 cm de dimetro, entre 1 e 4 cm ou superior a 4 cm
respectivamente.
Esta caracterstica de difcil avaliao, nomeadamente quando as leses coalescem.
Nem sempre tida em considerao e torna-se pouco precisa. Segundo Buechner-Maxwell
(2009), geralmente o tamanho est relacionado com o prognstico e tumores superiores a 4 cm
de dimetro tm maior probabilidade de metastizar do que massas de tamanho inferior. No
entanto, dos tumores analisados dos animais que tinham caractersticas bvias de
malignidade, ou seja, os melanomas malignos anaplsicos apresentavam tamanhos inferiores
a 4 cm de dimetro. De acordo com outros investigadores, os melanomas apresentam-se como
leses firmes que podem ir desde 0,5 cm a 12 cm de dimetro (Valentine, 1995; Scott e Miller,
2011), independentemente do comportamento ou classificao adoptada. Em alguns casos,
como nos de melanomatose drmica, dada a apresentao clnica das leses, torna-se invivel
fazer uma avaliao do tamanho das mesmas (Valentine, 1995). Outros autores dizem mesmo
que as leses podem assumir valores desde 0,2 cm a 20 cm de dimetro (Seltenhammer et al.,
2003) ou com variaes pouco significantes, de 0,5 cm a 15 cm, quer ao exame clnico quer
necrpsia (Farcu et al., 2007). Recentemente, num estudo controlado para avaliar a
cimetidina como teraputica na melanomatose equina, foram avaliadas dimenses entre 0,2
cm e 11 cm. Neste estudo no houve reduo no nmero nem no tamanho de nenhum dos
ndulos avaliados, sendo difcil conjecturar acerca da influncia do frmaco no tamanho das
leses. Os autores defendem a no eficcia deste frmaco nesta doena (Laus et al., 2010).
Fleury et al. (2000a) ao assumir uma diviso das leses entre nodulares e com aparncia
de placas, como j mencionado, concluiu que os ndulos podiam apresentar tamanhos de 0,5
cm at mais de 10 cm ou de 5 cm a 20 cm no caso das placas.
necrpsia as leses podem apresentar desde 1 milmetro (mm) a vrios cm de
dimetro (Patterson-Kane, 2001; Smith, 2002 citando Schott et al.,1990), havendo casos
reportados de tumores melanocticos com 15 cm, 30 cm (Foley et al., 1991) ou mesmo 40 cm
de dimetro (MacGillivray et al., 2002).
O tamanho uma caracterstica importante a ter em conta no s a nvel de prognstico
mas tambm na escolha do tratamento mais adequado e efectivo (Valentine, 1995;
MacGillivray et al., 2002; Knottenbelt, 2008a; Buechner-Maxwell, 2009). Por exemplo, a
47
Discusso
Localizao
Tendo em conta os 43 animais avaliados, os tumores identificados localizavam-se na
pele, em diversas zonas que foram categorizadas:
- zona perineal (n=40; 93%), considerada tpica, que inclui um ou vrios ndulos na
superfcie ventral da cauda, nus, vulva e/ou perneo;
- outras localizaes (n=12; 27,9%), consideradas atpicas, que incluem um ou vrios
ndulos numa das seguintes regies: garupa, olho, glndula salivar, glndula submandibular,
espdua, pescoo, crineira, comissura labial, costado e/ou face interna da coxa;
- padro difuso (n=2; 4,7%), considerado uma distribuio exagerada de ndulos (em
nmero superior a 4 em localizaes distintas entre si) um pouco por toda a regio corporal. De
ressalvar que 10 dos animais apresentavam concomitantemente leses nas localizaes
tpicas e atpicas (n=10; 23,3%).
Estes resultados vo, de forma geral, de encontro maioria dos estudos realizados at
data. Os tumores em causa, quer sejam solitrios ou mltiplos, podem desenvolver-se em
qualquer local embora haja uma predileco para a superfcie ventral da cauda, reas perineal,
perianal e genital (Cotchin, 1965; Knottenbelt e Pascoe, 1994; Rodrguez et al., 1997;
Goldschmidt e Hendrick, 2002; MacGillivray et al., 2002; Smith et al., 2002; Seltenhammer et
al., 2003; Rees, 2004; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a; Farcu et al., 2007;
Buechner-Maxwell, 2009; Hewes e Sullins, 2009; Laus et al., 2010; Scott e Miller, 2011). Fleury
et al. (2000a) concorda relativamente superfcie ventral da cauda e regio perianal mas
discorda quanto ao envolvimento da genitlia externa. Existem tambm numerosos relatos
concordantes com as outras localizaes menos comuns encontradas nos animais do estudo
como glndula salivar, comissuras labiais, olho (Knottenbelt e Pascoe, 1994; Fleury et al.,
2000a; Smith et al., 2002; Buechner-Maxwell, 2009; Scott e Miller, 2011), embora outros
autores as incluam nas mais comuns (Seltenhammer et al., 2004; Farcu et al., 2007). Porm,
outras fontes referem as extremidades distais como uma localizao de excelncia para
48
Discusso
ocorrncia destas leses (Roels et al., 2000; Pamela et al., 2007), no entanto, no foi
encontrado nenhum caso nos animais deste estudo.
No trabalho de Valentine (1995) foi estabelecida uma classificao com tnues variaes
relativamente ao presente estudo. Foram considerados locais tpicos: superfcie ventral da
cauda, regio perianal, perneo, prepcio, vulva, glndula mamria, bere, lbios, zona
periorbital e parotdea, todas as restantes foram consideradas localizaes atpicas. A
frequncia de ocorrncia para classificao foi avaliada individualmente para as 4 sndromes
clnicas referidas anteriormente enquanto que no nosso trabalho foram avaliadas relativamente
ao total da populao estudada pelo que se torna difcil uma comparao vlida. Ainda assim,
se considerarmos que num total de 34 animais diagnosticados com melanoma drmico,
melanomatose drmica e melanoma maligno anaplsico 70,6% (n=24) apresentava leses nos
locais tpicos, 17,6% (n=6) em locais atpicos, 14,7% (n=5) em ambos e 2,9% (n=1) no se
apresentava disponvel, verificamos uma menor frequncia relativamente aos resultados do
presente trabalho. Focando apenas a melanomatose drmica, no estudo de Valentine (1995),
todos os animais apresentavam os tumores nas localizaes de predileco assim como
ocorreu no presente trabalho, em que todos os animais com esta sndrome (n= 35) exibiam
tumores nos locais referidos.
Em humanos est uma estabelecida uma relao clara entre os raios UV e a formao
destes tumores, no entanto, em equinos parece ser um factor de risco pouco provvel tendo
em considerao as zonas predisponentes, ou seja, reas na sua maioria protegidas da luz
solar (Fleury et al., 2000b; Foy et al., 2002; Paek et al., 2008).
A importncia da localizao das leses prende-se, semelhana de caractersticas
anteriores, com a escolha do tratamento e subsequente prognstico pois a proximidade com
estruturas vasculares importantes, por exemplo, pode ser decisiva na opo do tipo de
resoluo da doena (Knottenbelt, 2008a; Knottenbelt, 2008b; Hewes e Sullins, 2009).
Uma vez que estas leses, como podemos concluir, ocorrem na sua maioria em zonas de
pele glabra ser de interesse continuar a investigar uma vez que apesar de se supor uma
eventual influncia da frico na tumorignese destas leses, a explicao para o facto
continua pouco clara (Fleury et al., 2000b). de notar tambm que na investigao de Sutton e
Coleman (1997), a acumulao de pigmento melnico em volta dos folculos pilosos ocorreu
apenas na superfcie ventral da cauda, facto que poder estar relacionado com a activao de
uma populao de clulas percursoras dos melancitos e, caso ocorra como consequncia do
processo de diluio da cor da pelagem, pode justificar a proximidade entre o aparecimento
das leses e o processo de diluio da cor da pelagem. Em contraposio a esta teoria e de
Valentine (1995), Fleury et al. (2000a) defende as glndulas apcrinas e a sua localizao
como origem da melanomatose drmica na zona perineal e portanto o no envolvimento dos
49
Discusso
melancitos dos folculos pilosos neste processo. Os padres de distribuio destas glndulas
podero explicar a prevalncia destes tumores em regies corporais especficas (Fleury et al.,
2000b). Assim, ser interessante levar a cabo um estudo neste sentido, tentando fundamentar
a localizao destes tumores tendo por base a patogenia e biologia dos melancitos.
Durao
Aquando do inqurito foi tambm questionado o tempo estimado do aparecimento das
leses pelo que se obteve valores entre 6 meses e 20 anos de acordo com as respostas dos
proprietrios ou responsveis pelos cavalos. Estes dados so pouco precisos j que, tendo em
conta o mercado actual de equinos e a sua elevada movimentao entre proprietrios, torna-se
muitas vezes difcil o seguimento dos animais por parte dos clnicos. Por outro lado, estas
leses comeando por apresentaes benignas e por vezes demasiado pequenas, levam
relativizao da situao por parte da equipa que trabalha com os cavalos passando bastantes
vezes, e em alguns casos durante um perodo de tempo considervel, despercebidas.
50
Discusso
abundantes. Quanto ao melanoma maligno, como definem alguns autores, podem envolver a
epiderme e derme ou derme apenas, semelhana do que ocorreu nos resultados deste
estudo, embora sejam mais comuns na derme (n=28; 65,1%). Os resultados desta varivel
esto em concordncia com os estudos realizados em equinos (Sutton e Coleman, 1997;
Seltenhammer et al., 2004; Chapman et al., 2009). A quantidade de pigmento varivel e o
estroma reduzido a moderado. Nestes casos a ulcerao e necrose so caractersticas
comuns, assim como a marcada actividade juncional, os tipos celulares presentes variam
bastante e podem apresentar-se como fusiformes, redondas, dendrticas, balonizantes. A
actividade mittica, dado o carcter maligno do tumor , habitualmente 3 ou superior por 10
campos de grande ampliao (40x). O tipo celular, pelo menos no co, parece no ter
significado prognstico (Goldschmidt e Hendrick, 2002; Gross et al., 2005). Alguns critrios que
se podem ter em conta na previso do comportamento dos tumores melanocticos em ces e
gatos so: simetria na arquitectura do tecido, definio das margens, uniformidade dos ncleos
e das clulas, ndice mittico e ploidia do ADN (Stokking, 2004). No entanto, em equinos no
estudo de Roels et al. (2000), concluram no haver diferenas notadas entre tumores
benignos e malignos com alteraes do ADN.
De acordo com Smith et al. (2002), parece no haver uma relao evidente entre as
caractersticas histolgicas, incluindo o ndice mittico e pigmentao, e a taxa de
sobrevivncia. A morfologia celular, tendo em conta o tamanho e forma, podem ser teis na
avaliao da malignidade. O risco de ocorrncia de metstases parece ser maior em tumores
com tipos celulares mistos e fusiformes, no entanto, na nossa populao todos os tumores com
caractersticas de malignidade apresentavam clulas redondas, sem um pleomorfismo
evidente. De qualquer forma a caracterstica mais importante , sem dvida, a invaso linftica
e/ou vascular (Roels et al., 2000; Smith et al., 2002).
De assinalar que nos resultados aqui obtidos todos os tumores avaliados como
melanomas malignos anaplsicos (n=4; 9,3%) apresentavam esta caracterstica que serviu de
base para esta mesma classificao. Por norma esto associados a caractersticas celulares
pleomrficas, um baixo grau de pigmentao, ulcerao, mitoses numerosas e invaso
vascular, pelo que aparentam ter caractersticas semelhantes ao melanoma cutneo humano
(Garma-Avia et al., 1981; Seltenhammer et al., 2004; Valentine, 2006a). Quanto nossa
populao todos os tumores com caractersticas de malignidade apresentavam clulas
redondas, sem um pleomorfismo evidente, ao contrrio do que seria de esperar. Apenas 1
destes apresentava uma quantidade abundante de pigmento (grau 3) e os restantes (n=3) um
grau reduzido de pigmento (grau 1). Ocorreu de forma semelhante com a ulcerao, em 3 dos
4 tumores estava presente.
51
Discusso
52
Discusso
comportamento tumoral. Assim, o uso de inibidores da RTK, por exemplo, poder ter
implicaes importantes no tratamento da doena pelo que devero continuar os estudos neste
mbito (Potti et al., 2003; Rivera et al., 2008).
Observou-se ainda a marcao nas glndulas apcrinas da derme e na epiderme, o que
constituiu o controlo positivo interno. Nota a ter em conta uma vez que, como j mencionado
anteriormente, h autores que sugerem as glndulas apcrinas ou proximidades como a
possvel origem destes tumores melanocticos em equinos (Fleury et al., 2000a).
A imunomarcao foi observada em 62,8% (n=27) dos tumores e estava ausente em
37,2% (n=16). Importante ressalvar que todos os tumores com caractersticas de malignidade
evidente, isto , os tumores classificados como melanomas malignos anaplsicos (n=4; 9,3%),
apresentavam marcao de c-Kit positiva. Assim, ser pertinente estudar estes resultados
aumentando o nmero da amostra em causa ou mesmo avaliando vrios ndulos do mesmo
animal.
Tem sido especulado que o conhecimento relativamente a possveis factores que
atrasam ou inibem o desenvolvimento de metstases no melanoma de equinos ruos possa ser
usado para estabelecer estratgias teraputicas inovadoras para o melanoma maligno
humano. O facto de estas leses partilharem algumas caractersticas em ambas as espcies
faz dos equinos um modelo animal interessante para o estudo da doena em humanos, como
j referido anteriormente (Seltenhammer et al., 2004).
Ainda h todo um sem fim de perguntas sem resposta concreta para compreender os
mecanismos que esto na base desta condio em equinos. Ser interessante prosseguir com
trabalhos nesta rea, por exemplo de seguimento clnico, tendo em conta que alguns
investigadores sugerem a perda da expresso de c-Kit durante a progresso do melanoma
(Bar-Eli, 1997; Potti et al., 2003; Alexeev e Kyonggeun, 2006) o que nos poder levar a outros
sectores como o prognstico e a teraputica.
53
Concluses
6. CONCLUSES
54
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59
Referncias bibliogrficas
60
Anexos
8. ANEXOS
Anexo 1
N entrada:
Nome Proprietrio:
Local:
Nome Cavalo:
Gnero:
Idade:
Pelagem:
Raa:
Aptido:
Quantidade/ Tamanho:
Localizao:
Durao:
Observaes:
Data recolha:
61