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de biologa
Manual de laboratorio
de biologa
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
Manuel Dagert
Vicerrector Administrativo
Manuel Aranguren
Secretaria
COLECCIN
Textos Universitarios
Publicaciones
del Vicerrectorado
Acadmico
Manual de laboratorio de biologa
Primera edicin, 2009
Universidad de Los Andes
Vicerrectorado Acadmico
CODEPRE
Manuel Dagert
Coordinacin editorial
Concepto de coleccin
y diseo grfico
Katali Alava
Correccin
Produccin editorial
Yelliza A. Garca A.
COLECCIN
Textos Universitarios
Comit editorial
Prohibida la reproduccin
total o parcial de esta obra
sin la autorizacin escrita
del autor y el editor
Universidad de Los Andes
Av. 3 Independencia
Edificio Central del Rectorado
Mrida, Venezuela
publicacionesva@ula.ve
http://viceacademico.ula.ve/
publicacionesva
Los trabajos publicados en la
seleccionados y arbitrados
por especialistas en las
diferentes disciplinas.
Impreso en Venezuela
Printed in Venezuela
PREFACIO
Los avances en la investigacin biolgica abren nuevos caminos a la enseanza y la comprensin de las ciencias biolgicas que representan un gran reto, con nuevos
desafos. Estos cambios y nuevos conocimientos de la biologa nos han dado la oportunidad de brindar nuestro esfuerzo por presentar una serie de trabajos de laboratorio sencillos, fciles de realizar, dinmicos y de bajo costo que se adaptan a los tiempos de hoy.
El presente Manual de laboratorio de biologa ha sido diseado para facilitar
el aprendizaje a los estudiantes que se inician en el campo del estudio del fascinante
mundo de las ciencias biolgicas. El Manual ha sido preparado teniendo en cuenta el
perfil de un investigador, utilizando el mtodo cientfico como su eje fundamental, para facilitar el aprendizaje de los conceptos ms generales de las ciencias biolgicas que
complementan la programacin terica en Biologa que recibe el estudiante. Con este
manual se pretende establecer un contacto directo con los fenmenos biolgicos y las
actividades de investigacin cientfica, de tal manera que podamos preparar profesionales calificados y con una formacin integral en el conocimiento biolgico.
En el Manual se incluyen aspectos bsicos para la realizacin de los trabajos
prcticos como el uso adecuado de un instrumental bsico, el microscopio, la balanza,
el pHmetro, el espectrofotmetro, entre otros; los fundamentos bsicos de las tcnicas
utilizadas en los procesos biolgicos as como actividades de desarrollo cientfico, normas de bioseguridad y actividades de campo.
Para que el estudiante por s mismo evale su aprendizaje, se han introducido
conceptos bsicos, literatura apropiada, ejercicios y cuestionarios de autoevaluacin en
cada una de las prcticas.
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
Objetivo
Este manual de prcticas tiene como objetivo introducir al estudiante universitario en la observacin directa de los fenmenos biolgicos, a travs del mtodo cientfico y consolidar los conocimientos de la teora de un curso introductorio de Biologa
General, de tal manera que sea capaz de aplicar conceptos y relacionarlos, adems de
facilitar la integracin del conocimiento y despertar el inters del estudiante en esta
ciencia.
Instrucciones generales
El Manual de laboratorio de biologa es un auxiliar didctico al estudio de las
Ciencias de la vida. Se ha planificado, de tal manera, que el estudiante reciba una informacin sobre la naturaleza del fenmeno vida, los organismos vivos y el mtodo cientfico, de una manera general, lo cual le permite integrar los conocimientos de
la Biologa bsica que ha adquirido en los cursos previos, as como sentar las bases de
los conocimientos que ir adquiriendo en los cursos ms avanzados.
La biologa, actualmente, tiene un amplio espectro de accin y est involucrada en una serie de actividades que de una u otra forma, inciden en el comportamiento
del individuo y en su entorno. Ya no podemos hablar de la biologa como una ciencia
que se divide en reas conexas a travs del fenmeno vida, sino que tambin involucra un cambio radical en la forma de pensar y actuar de los individuos y su relacin con
temas sociales como la sobrepoblacin, la contaminacin, la biotica, etc. Inicialmente,
y hasta cerca de la tercera parte del siglo XX, se mantuvo una divisin de la biologa en
reas como la botnica y la zoologa, la ecologa, la bioqumica y la biofsica, la evolucin, la gentica y la fisiologa. Esta divisin, aun cuando se present con fines prcticos, ha sido desbordada por el desarrollo que se ha logrado en la biologa, lo cual ha ampliado de tal manera sus fronteras que ahora incluye campos tan diversos como la
ciberntica, la ingeniera y la manipulacin gentica; la produccin de organismos artificiales a travs de manipulaciones de clulas, como en el estudio de clulas madres; su
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Objetivo e instrucciones
impacto en la medicina y en la produccin de productos medicinales y de uso industrial; en el medio ambiente y en la agricultura, en la que se estn produciendo especies
manipuladas por el hombre, como en el caso de los productos transgnicos de consumo
humano y animal que han llevado a una controversia en la sociedad que no se conoca
desde los tiempos de la presentacin de la teora evolucionista de Darwin. En este aspecto, la biologa ha pasado a constituir una herramienta del conocimiento necesaria para poder resolver algunos de los mltiples problemas sociales que aquejan a la sociedad
moderna.
En este manual presentamos un conjunto de prcticas que representan modelos de estudio en cada una de las reas clsicas de la biologa con la finalidad de que
permitan al estudiante tener una idea ms integradora de los procesos biolgicos fundamentales.
Temas
Tres pilares fundamentales constituyen los temas del Manual de laboratorio de
biologa: introduccin al mtodo cientfico, la vida como un fenmeno fisicoqumico y
los fenmenos biolgicos fundamentales.
Normas para el trabajo en el laboratorio
El laboratorio es un lugar de trabajo en el que se realizan los experimentos diseados previamente para contrastar una hiptesis por medio de resultados observables
cualitativamente o cuantitativamente. Es por ello, que debe ser un lugar agradable que
invite a pensar y a reflexionar sobre el problema por resolver o por observar, y para esto, debemos mantenerlo limpio, cuidar los instrumentos y colocar cada cosa en su lugar, as como mantener y poner en prctica las medidas de seguridad personal, tales como el uso de la bata de laboratorio.
Autoevaluacin
En cada prctica de laboratorio el estudiante tiene la oportunidad de evaluar
su dominio del tema.
Glosario
El aprendizaje se facilita por la identificacin de trminos clave y sus definiciones, por medio de ejercicios y cuestionarios.
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Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Ejercicios y autoevaluacin
Bibliografa
prctica
Introduccin
La ciencia es la actividad humana que racionaliza la comunicacin del hombre con el universo. Su avance se sustenta, paradjicamente, en la negacin del conocimiento prevaleciente y tomando como vlido un nuevo conocimiento. Este raciocinio
comprende desde la indagacin emprica y la simple lgica deductiva hasta la investigacin dirigida, utilizando equipos, tcnicas, anlisis, etc. El conocimiento cientfico se
enriquece sobre la base de la refutacin de las tesis existentes tomadas como verdades,
exponiendo sus errores, limitaciones o, simplemente, su falsedad, cuando sus conclusiones no resisten las evidencias expuestas por la estricta aplicacin del mtodo cientfico. Este consiste en el proceso de observar, cuantificar, valorar y juzgar nuestro entorno, de modo objetivo, con el propsito concreto de aprenderlo y entenderlo, mejorando
o negando afirmaciones previas.
Objetivos
Analizar el mtodo cientfico y sus alcances, analizar las tcnicas de investigacin y examinar algunos problemas en la investigacin cientfica actual. Relacionar la
investigacin con la sociedad.
Conocimientos necesarios
Los siguientes trminos: ciencia, la biologa como ciencia, reas de la biologa,
metodologa de la investigacin cientfica, perspectivas del bilogo en Venezuela.
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PRCTICA1
Experimental
A) Resolver y discutir los siguientes ejercicios
3 Hay diferentes formas mediante las cuales pueden ser clasificadas las propie-
tfico?:
a) subjetividad
b) objetividad
c) especulacin
d) formal
e) experimentacin.
dad de una vacuna. Se fue a una poblacin que estaba compuesta por 50% de nativos y
50% de no nativos. Se supona que la vacuna podra prevenir cierta enfermedad a la
cual eran susceptibles. Cul de las siguientes pruebas debi hacer el cientfico para probar el suero de una manera vlida?
a) Vacunar a los nativos, pero no a los otros habitantes y observar los
resultados.
b) Vacunar a los otros habitantes y no a los nativos y observar los
resultados.
c) Aplicar la vacuna a los nativos y una solucin de sal inocua a los otros
habitantes y observar los resultados.
d) Aplicar la vacuna a la mitad de los nativos y a la mitad de los otros
habitantes y darles a las respectivas mitades una solucin de sal
inocua.
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C
a) Disee un experimento o experimentos que ponga a prueba estas
vida se origin en otro planeta en algn punto del universo y lleg a la Tierra hace millones de aos dentro de un meteoro.
8 De las siguientes observaciones obtenidas de un experimento sobre la nutri-
cin mineral en plantas, trate de llegar a una conclusin con respecto al factor o factores necesarios para el desarrollo de clorofila en las plantas verdes.
Observacin # 1: Las plantas que crecieron en terreno que contena cloruro, pero sin magnesio y suficiente luz, se pusieron verdes.
Observacin # 2: Las plantas que crecieron en un terreno que contena cloruro, pero sin
magnesio y que fueron expuestas a la luz, permanecieron descoloridas.
Observacin # 3: Las plantas crecidas en terreno que contena cloruro y magnesio, pero
que se mantuvieron en la obscuridad, permanecieron descoloridas.
Observacin # 4: Las plantas desarrolladas en terreno que contena magnesio pero no contena cloruro y fueron expuestas a la luz, se pusieron verdes.
Observacin # 5: Las plantas desarrolladas en terreno que contena cloruro pero no magnesio, y que se mantuvieron en la oscuridad, permanecieron descoloridas.
Observacin # 6: Las plantas que crecieron en terreno que no contena ni magnesio ni cloruro pero fueron expuestas a la luz, permanecieron descoloridas.
Observacin # 7: Las plantas que crecieron en terreno que contena magnesio pero no contena cloruro y se mantuvieron en la oscuridad, permanecieron descoloridas.
Observacin # 8: Las plantas que crecieron en terreno que no contena ni cloruro ni magnesio y que permanecieron en la oscuridad, permanecieron descoloridas.
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PRCTICA1
Conclusin:
El (los) factor(es) que inciden en el desarrollo de la clorofila, como puede juzgarse de los experimentos anteriores es (son)...
9 El impacto ambiental resultante del turismo practicado en reas protegidas,
que crea situaciones cuyas consecuencias son desastrosas para la naturaleza y, por eso,
debe ser controlado, a fin de evitar un mal mayor.
Todas las alternativas presentan situaciones de este tipo excepto, por ejemplo:
a) La introduccin de animales exticos que no compiten con especies
nativas.
b) La coleccin de animales, plantas y rocas que no daan los atractivos
naturales.
c) La pesca con caa que no amenaza con la extincin de especies de
peces.
10 Cuales son los pasos del mtodo cientfico?
Roche M. Nueva tendencia de la investigacin cientfica venezolana. En: Pfaur J, Fuenmayor F, editores. Deambular por la ciencia. Mrida: Publicaciones Facultad de Ciencias. Universidad de Los Andes; 1999. p. 137-138.
Ejercicios y autoevaluacin
Los ejercicios del presente tema se encuentran en la pgina WEB el placer de
aprender ciencias del Centro SOLCYT de la Facultad de Ciencias. ULA y en http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/chataing. En esta ltima web puede encontrar un variado
nmero de enlaces que le permitirn tener acceso a muchos tpicos de la biologa.
1. Cules son las dimensiones ticas de la ciencia?
2. Cmo explicara el mtodo cientfico?
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Bibliografa
Baker JJ, Allen GE. Biologa e investigacin cientfica. Mxico: Fondo Educativo Interamericano S.A;
1970.
Polit DF, Hungler BP. Investigacin Cientfica. En: Ciencias de la Salud. Mxico: Mc Graw-Hill Interamericana; 1997.
Roche M. Nueva tendencia de la investigacin cientfica venezolana. En Pfaur J, Fuenmayor F, editores. Deambular por la ciencia. Mrida: Publicaciones Facultad de Ciencias. Universidad de Los
Andes; 1999. p. 137-138.
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Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Ejercicios y autoevaluacin
Bibliografa
prctica
Introduccin
Como todo en nuestro planeta, los seres vivos estn compuestos por tomos y
molculas. En los seres vivos estos elementos bsicos estn organizados de una manera
muy especfica formando polmeros o agregados de alto peso molecular, como son los
polisacridos, las protenas, los cidos nucleicos y los lpidos que aun cuando no forman polmeros se asocian entre s. Los tomos y las molculas tambin interactan unos
con otros, en una forma muy precisa de manera que mantienen el flujo de energa necesario para la vida. Gran parte de la biologa moderna se enfoca en la biologa molecular:
esto es, la qumica y fsica de las molculas que constituyen a los seres vivos. Para entender los procesos que rigen la vida es necesario conocer algunos principios bsicos de
la fisicoqumica.
Objetivos
Los organismos vivos realizan diferentes tipos de trabajo biolgico (mecnico,
elctrico, visual, transporte, etc.) que depende de las particularidades de cada organismo. Este trabajo biolgico se realiza en la mayora de los casos manteniendo sus molculas en un medio acuoso, formando soluciones. De hecho, para realizar los experimentos biolgicos es necesario preparar soluciones, la mayora de ellas muy especficas para
cada tipo de experimentos que se realiza. Por ejemplo, es conocido que muchas enzimas funcionan solamente en una determinada solucin, la cual debe contener, no solamente algunos de los factores esenciales para su actividad, sino que los mismos, deben
estar en cantidades definidas. Es por ello, que se requiere un conocimiento de las unidades de concentracin para preparar soluciones y de los mtodos ms simples para llevar a cabo este proceso en el laboratorio. As, el principal objetivo de esta prctica es introducir al estudiante en la preparacin de soluciones de concentraciones conocidas.
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PRCTICA2
Conocimientos necesarios
Macromolculas biolgicas.
Preparacin de soluciones.
Bioseguridad en el laboratorio.
Experimental
A) Lea el siguiente texto y disctalo con el profesor y sus compaeros:
1 NORMAS
DE TRABAJO EN EL LABORATORIO
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1.2
Bernardo Chataing
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REACTIVOS
EQUIPOS
La balanza:
Esta debe estar completamente limpia antes de pesar cualquier sustancia y una
vez utilizada debe tener cuidado de mantenerla en condiciones excelentes de limpieza.
NUNCA QUITE DE LA BALANZA LA SUSTANCIA PESADA SI ANTES LA BALANZA
NO HA SIDO APAGADA. No deje derramar lquidos o sustancias corrosivas sobre la balanza.
Las centrfugas:
- Es recomendable secar las centrfugas refrigeradas despus de una hora de haber sido utilizadas.
- Los rotores y tubos de centrfuga deben ser lavados con agua destilada despus de su uso. No utilice solventes orgnicos en los tubos de centrfuga para lavarlos
o realizar centrifugaciones si antes no ha consultado la resistencia del tipo de tubo a dicho solvente.
- Chequee la velocidad mxima permitida para el rotor que va a utilizar. As
mismo, chequee el modelo de centrfuga en el cual es posible utilizar el rotor.
El espectrmetro:
- Estos equipos son muy delicados por lo cual es conveniente leer las instrucciones de uso antes de ser utilizados.
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PRCTICA2
despus de haber sido utilizados. Lave el material de vidrio cuidadosamente y enjuguelo al menos tres veces con agua destilada.
b) Si utiliz material de vidrio con sustancias u organismos contaminantes, debe ASEGURARSE DE LAVARLO PREVIAMENTE CON CLORO o
con hipoclorito de sodio u otro producto desinfectante antes de colocarlo en el fregadero. Trate de utilizar guantes al lavar el material.
c) No utilice material de vidrio roto y cuando se rompa algn material, seprelo del resto y reprtelo.
instrumentacin cientfica
1 Repasar clculos bsicos:
a) Diluciones seriadas:
C) Preparacin de soluciones
NaCl (8,5 g)
H2O destilada (1000 ml)
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NaCl (8,00 g)
KCl (0,20 g)
Na2HPO4 (fosfato bsico de sodio) (1,15 g)
KH2PO4 (fosfato cido de potasio) (0,20 g)
H2O destilada hasta (1000 ml)
Disolver la sal en un cierto volumen de agua y llevar luego a volumen final con
el resto del agua. Ajustar el pH requerido, autoclavar.
Cada grupo preparar 100 ml.
5. Solucin de Carnoy (30 ml)
Ejercicios y autoevaluacin
1. Cules son las normas y hbitos que deben ser adoptados en un
laboratorio?
2. Qu distingue a un soluto de un solvente?
3. Cules son los cuidados y recomendaciones en el uso de la:
- cristalera,
- pHmetro,
- balanza?
4. Al pesar un reactivo, qu cuidados hay que tomar en cuenta?
Bibliografa
Nelson DL, Cox MM. Lehninger AL. Principios de bioqumica. Espaa: Ediciones Omega; 2001
webdelprofesor.ula.ve/ciencias/chataing.
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Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Autoevaluacin
Fotografas
Bibliografa
prctica
Introduccin
La complejidad real de nuestro medio ambiente no fue apreciada hasta que el
uso del microscopio revel la existencia de los microorganismos. El hombre en su intensa bsqueda del conocimiento del mundo que lo rodea, ha construido una serie de
instrumentos para ampliar su campo de observacin. El microscopio es un instrumento de gran ayuda para el bilogo, que cada da ampla su campo de accin, obviando en
cierta manera la limitacin de los sentidos.
Objetivos
El estudiante debe ser capaz de identificar las partes del microscopio ptico
y usarlo adecuadamente.
Reconocer la importancia del microscopio en el trabajo del bilogo y reconocer los diferentes tipos de microscopios.
Conocimientos necesarios
Lea el siguiente texto:
Cuidados que requiere el microscopio ptico:
Existen distintos modelos de microscopio que se adaptan a diferentes aplicaciones. Todos ellos constan de tres partes:
Sistema mecnico
Sistema ptico
Sistema de iluminacin
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PRCTICA3
Como todo instrumento, debe tratarse con cuidado para que se conserve en
buen estado. En el caso de la manipulacin del microscopio ten siempre presente las siguientes precauciones:
Debe trasladarlo agarrndolo por el asa con una mano y apoyando el pie del
microscopio sobre la palma de la otra mano. As evitar que las lentes, tubo y
espejo puedan salirse de su sitio.
2. Evite por todos los medios la cada de cualquiera de las lentes, porque esto las
inutiliza.
3. Bajo ninguna circunstancia debe sacar los objetivos del revlver.
4. Todas las partes movibles del microscopio funcionan suave y fcilmente. Si esto no ocurre comunqueselo de inmediato a su profesor.
5. Nunca debes tocar con los dedos la superficie de las lentes.
6. La limpieza de las lentes slo debe hacerse con papel especial para lentes;
cualquier otro material puede dejarle pelusas o producir rayas en los vidrios.
7. Si las lentes tienen grasa, use el papel para lentes ligeramente humedecido con
xilol e inmediatamente seque con otro papel del mismo tipo. Jams use alcohol, ni xilol en exceso, pues disuelven el cemento que pega las lentes.
8. Si involuntariamente se mojan las lentes, lmpielas inmediatamente con papel
para lentes.
9. La platina tambin debe mantenerse seca y limpia. Si por cualquier circunstancia se moja, squela de inmediato con un pao limpio y suave.
10. Retire el porta-objetos al finalizar el trabajo y guarde el microscopio en su caja
o cbrelo con su funda.
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Identifique el objetivo de menor aumento y colquelo en su sitio girando el revlver. Haciendo uso del tornillo macromtrico, baja la platina con lentitud.
Mueva el condensador hacia arriba, hasta unos pocos milmetros por debajo de
la platina, abra completamente el diafragma y mire por el ocular hasta lograr
que el campo est brillante y uniformemente iluminado.
Coloque la preparacin sobre la platina,
Mire por el ocular y con el tornillo macromtrico suba lentamente hasta que
aparezca la imagen del objeto.
Utilizando el tornillo micromtrico, focalice la imagen hasta que sta sea ntida.
Despus de haber enfocado con el objetivo de menor aumento, gire el revlver
y coloca en posicin el objetivo de mediano aumento.
Focalice la imagen hasta ser ntida, utilizando el tornillo micromtrico.
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Para utilizar el objetivo de 100X, debe girar el revlver y dejar despejada la preparacin sin objetivo, colocar una gota de aceite de inmersin, girar el revlver
de nuevo y colocar el objetivo de 100X.
9. Focalice la imagen, utilizando el tornillo micromtrico.
10. Gire el revlver, retire la preparacin.
11. Limpie el objetivo de 100X con papel especial.
12. Guarde el microscopio o colquele la funda.
8.
Experimental
A) Aspectos bsicos del microscopio
a. Siguiendo las instrucciones del profesor, y con la ayuda de los libros, estudiar
y reconocer las diferentes partes del microscopio ptico (mecnica y ptica) y sus funciones. Discutir los siguientes aspectos: cuidados y limpieza del microscopio ptico,
monocular, binocular, trionocular, lmite de resolucin (LR), enfoque, tipos de objetivos,
objetivo de inmersin, revlver, condensador, tornillo macromtrico, tornillo micromtrico, platina, aumento, abertura numrica (AN), ndice de refraccin.
b. Investigar y discutir las potencialidades del microscopio y la tecnologa innovadora: microscopios de multiobservacin, gama modular de iluminaciones, epiluminacin, filtros, sistema de microfotografa y vdeo, sistema de cmara clara, sistema para documentar y archivar imgenes, microscopio con cmara de incubacin, con
micromanipuladores, sistema de microscopio controlado por computadora para microinyeccin y microfluorometra. Tipos de microscopios: microscopio invertido (Figura 2), microscopio estereoscpico de fluorescencia (Figura 3), microscopio estereoscpico (Figura 4), microscopio con campo oscuro, con campo claro, con contraste de fases,
contraste interferencial, con polarizacin, de fluorescencia, microscopio electrnico de
transmisin, electrnico de barrido, confocal, microscopa digital y acceso a los parmetros de medicin. Aplicacin y diferencias (Figura 1).
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PRCTICA3
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a) Clulas endoteliales de la arteria pulmonar; b) clulas epiteliales Hep-2; c) clulas epiteliales Hep2;
d) hgado de rata; e) cromosomas; f) clulas proliferantes.
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croscopio:
Mirando por el ocular del microscopio, mueva cuidadosamente el condensador hacia abajo
Abra completamente el diafragma hasta que el campo est completamente iluminado.
Ajuste la abertura del diafragma hasta que el campo quede concntrico y reduzca la abertura hasta que el campo quede reducido aproximadamente a sus
3/4 partes.
Focalice hasta ser ntida la imagen, subiendo o bajando el condensador.
Abra el diafragma hasta iluminar uniformemente el campo.
Nota: en los microscopios que poseen condensador, si la abertura del diafragma no es concntrica con el campo es porque el condensador est fuera del centro. Si el
condensador no tiene movimientos laterales, colocarlo en el centro es problema que debe resolver un tcnico.
b) Siguiendo las instrucciones del profesor y el manual del manejo del microsco-
pio, observe las diferentes muestras (fresca in vivo con y sin colorantes, muestras fijadas y coloreadas), enfquelas a diferentes aumentos (10X, 40X y 100X)
y describa las diferencias.
c) Procedimientos de tincin y su aplicacin como tcnicas microscpicas. Siguiendo las instrucciones del profesor: prepare un colorante vital (azul de metileno: 1 parte del colorante por 10.000 partes de alcohol absoluto) y utilcelo
para colorear las muestras.
Lmites de resolucin
m= 10-3 mm
nm= 10-6 mm
Autoevaluacin
1. Identifique las partes de los microscopios en las Figuras 2,3 y 4.
2. Maneja apropiadamente el microscopio con pequeo y mediano aumento?
3. Cules son los cuidados que debemos tener con el microscopio ptico?
4. Qu procedimiento seguira usted para el uso del objetivo de mayor aumento?
5. Cmo ajustara la luz para obtener una buena imagen?
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PRCTICA3
croscopio?
7. Cul es la diferencia entre aumento y resolucin?
8. Cules son los datos que aparecen en un objetivo?
9. Cmo se determina el lmite de resolucin?
10. Cmo determina el lmite de resolucin para objetivo de 100X con N.A.=0,75
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Bibliografa
Salomn EP, Berg LR, Martin DW. Biologa. Mxico: McGraw-Hill Interamericana; 1999.
Soto TS, Durn FT. Parasitologa: Manual de trabajos prcticos. Venezuela: Editorial de la Universidad del Zulia; 1996.
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La clula
Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Autoevaluacin
Bibliografa
prctica
Introduccin
La idea de que las clulas son las unidades fundamentales de los organismos
vivos es parte de la teora celular. La mayor parte de las clulas son microscpicas, pero su tamao y forma varan en un rango muy amplio, lo cual se relaciona con las funciones que stas realizan.
Los organismos pueden clasificarse en dos grupos fundamentalmente diferentes, segn la estructura y complejidad de sus clulas en eucariotes y procariotes. Aunque las plantas y animales son eucariotes, las clulas vegetales difieren de las clulas
animales en varios aspectos.
Objetivos
Conocimientos necesarios
La clula. Estructura, tipos y teora celular.
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
31
PRCTICA4
La clula
a. Elodea
b. Euglena
c. Sangre
d. Eritrocitos
e. Eritrocitos y linfocitos
32
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
Experimental
A) Complejidad celular. Las clulas eucariticas y las procariticas.
dos o nariz.
b) Realice un frotis en una lmina portaobjeto limpia.
c) Deje secar, fije la muestra cubriendo la lmina con varias gotas de meta-
f)
g)
h)
i)
j)
Mtodo de Wright
El mtodo permite apreciar con bastante claridad las clulas sanguneas. Para
ello se procede de la siguiente manera:
a) Coloque una muestra de sangre en un portaobjeto y extindala utilizando otro portaobjeto.
b) Caliente la muestra sobre un mechero para fijarla
c) Coloque la lmina en solucin de Wright durante 1 minuto.
d) Agregue agua destilada a la lmina y deje en sta durante 1,5 minutos.
e) Lave la placa con abundante agua.
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
33
PRCTICA4
La clula
2 Clulas eucariticas:
a) Coloque una o dos gotas de agua estancada (acuario) en cada una de las
1 Clula vegetal:
a) Coloque una gota de agua destilada en una lmina porta objeto y monte
b)
c)
d)
e)
f)
1 Clula animal:
a) Realice la diseccin de un insecto: grillo, cucaracha, etc. o lombriz de
b)
c)
d)
e)
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Bernardo Chataing
Elsa Nieves
b)
c)
d)
e)
f)
limpia.
Cbrala con una laminilla.
Observe al microscopio con aumento de 10X y 40X.
Observe los microorganismos que presentan movimiento. Tome nota de
las diversas estructuras que utilizan para su desplazamiento. Tipos celulares, tamaos, membrana celular, cilios, flagelos, cloroplasto, vacuolas, ncleo, etc.
Prepare una muestra con colorante vital. Observe.
Trate de identificar las formas vivientes que observa con ayuda de las
ilustraciones, claves y textos de consulta.
2 Tipos sanguneos:
a) Limpie el dedo anular con algodn empapado en alcohol.
b) Voluntariamente se tomarn muestras de sangre con la ayuda de unas
c)
d)
e)
f)
Mtodo de Giemsa
a) Fije la muestra con metanol por 1 minuto.
b) Prepare el Giemsa al 10% en solucin tamponada pH 7,2.
c) Cubra el extendido fijado con el colorante por 20 minutos (2 ml por l-
mina)
d) Lave con abundante agua y deje secar.
e) Observe al microscopio con aumento menor, mediano y con inmersin.
En la siguiente figura presentamos la organizacin de los organismos vivos:
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
35
PRCTICA4
La clula
Autoevaluacin
1. Qu es un colorante vital?
2. Por qu utiliza aceite de inmersin al observar una lmina con el objetivo de
100X?
3. Cules son los aceites de inmersin comnmente utilizados?
4. Diga 6 diferencias fundamentales entre la clula eucariota y procariota?
5. Cules seran las diferencias entre una clula vegetal y una clula animal?
Bibliografa
Curtis H, Barnes NS. Biologa. 5 ed. Espaa: Editorial Mdica Panamericana; 2001
Lodish H, Berk A, Matsudaria P, Kaiser C, Krieger M, Scott M, Zipurky L, Darnell J. 5 ed. Biologa
molecular de la clula. Espaa: Editorial Panamericana; 2006.
Solomon EP, Berg LR, Martn DW. Biologa. Mxico: McGraw-Hill Internacional Editores; 2001.
36
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Ejercicios y autoevaluacin
Bibliografa
prctica
Introduccin
La primera Ley de la Termodinmica establece que si un sistema es sometido
a una transformacin cclica, el trabajo producido en el ambiente es igual al calor que
fluye desde el ambiente. Ello lleva a enunciar el trmino Energa del sistema y su diferencia como:
E = Q W, donde Q y W son respectivamente el calor y el trabajo.
El trabajo se define como una cantidad que fluye a travs de la frontera de un
sistema durante un cambio de estado y que puede utilizarse para elevar un cuerpo en el
entorno: W= m.g.h. Ya que m. g = Pop.A, donde Pop es la presin externa, A el rea de
un cilindro y A.h = V, podemos transformar W en una expresin del tipo W = Pop V,
donde V es la variacin de volumen durante un cambio de estado. El trabajo slo aparece cuando hay un cambio de estado. Debemos aclarar que un cuerpo no posee trabajo.
El calor se define como una cantidad que fluye a travs de la frontera de un sistema durante un cambio de estado, en virtud de una diferencia de temperatura entre el
sistema y el entorno, y que fluye de un punto de temperatura mayor a otro de temperatura menor. La cantidad de calor Q es igual al nmero de gramos de agua del entorno
que aumentan su temperatura en un grado partiendo de una temperatura especfica, bajo una presin especfica. Q = m c T. c es una constante para una sustancia y se denomina la capacidad calorfica y viene expresada en caloras/grado.gramo. La capacidad
calorfica molar es C=c/n, donde n es el nmero de moles de la sustancia. La capacidad
calorfica permite que la energa suministrada al sistema sea medida en trminos de la
elevacin de la temperatura resultante. Cuando C es grande, la transferencia de una cantidad dada de calor a un sistema lleva a una pequea elevacin en la temperatura, mientras que cuando la capacidad calorfica es pequea, la misma cantidad de calor provoca un mayor aumento de la temperatura. El calor es una propiedad que fluye cuando se
produce un cambio de estado. Un cuerpo no posee calor pero s temperatura.
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
37
PRCTICA5
La energa interna del sistema es una propiedad que depende del volumen y
la temperatura y puede describirse matemticamente como:
E= CvdT+
donde Cv es la capacidad calorfica determinada a volumen constante.
Para la mayora de las sustancias, E puede considerarse como un cambio de
energa en un proceso a volumen constante y E= Qv, donde este ltimo trmino es el
calor a volumen constante.
Sin embargo, para la mayora de las sustancias lquidas y slidas es conveniente medir una funcin termodinmica denominada la entalpa, representada como:
H= E + (PV)
La entalpa es el calor transferido desde el ambiente en un proceso a presin
constante. El cambio de entalpa de un sistema es, entonces,
H= Qp
La entalpa es una propiedad que depende de la temperatura y de la presin.
Ya que la mayora de los experimentos se realizan a temperatura y presin constante, es
conveniente determinar valores de entalpa en vez de valores de energa interna.
Para una reaccin, en la cual se transforman reactantes en productos, en general se produce absorcin o liberacin de calor. Este calor se denomina calor de reaccin
y es el calor tomado del ambiente en la transformacin de reactantes a T y P dadas en
productos a igual T y P. Si el sistema se encuentra ms caliente despus de la reaccin,
debe fluir calor hacia el entorno para que el sistema recupere su temperatura inicial. En
este caso se dice que la reaccin es exotrmica. Por otra parte, si el sistema se encuentra ms fro despus de la reaccin, debe fluir calor desde el ambiente para restablecer
la temperatura inicial. En este caso la reaccin es endotrmica.
Por otra parte, es til determinar en los procesos biolgicos y en los sistemas
qumicos una propiedad inherente a los mismos que refleja la energa til o aprovechable de un proceso. Esa energa til es definida como LA ENERGIA LIBRE DE GIBBS, dada por la ecuacin: G= H -TS. Esta propiedad es muy til ya que nos permite determinar el estado de equilibrio, y consecuentemente, las concentraciones en equilibrio, en
un sistema qumico. A temperatura y presin constante, el estado de equilibrio corresponde a un mnimo de energa libre. En una reaccin qumica del tipo aA + bB
cC
+ dD, el cambio de energa libre viene dado por la expresin:
G= Go + RT ln
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M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
Objetivos
Ilustrar el desprendimiento o la absorcin de calor del ambiente en las reacciones qumicas.
Observar reacciones endotrmicas y exotrmicas.
Observar reacciones en procesos de equilibrio
Observar reacciones de oxido-reduccin.
Conceptos necesarios
Procesos de transformacin de la energa. La primera Ley de la Termodinmica. Calor y temperatura. Entalpa. Reacciones exotrmicas y endotrmicas. Entropa y
energa libre. Reacciones exergnicas y endergnicas. Ejemplos comunes en el metabolismo de los seres vivos. El concepto de equilibrio. Reacciones de xido-reduccin.
Agentes oxidantes y agentes reductores.
Experimental
A) Tipos de reacciones
a. Coloque unos 50 ml de agua en un vaso de precipitado. Mida la temperatura
liente.
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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PRCTICA5
mine la temperatura cada media hora y deje en reposo. Mida nuevamente la temperatura final.
b) Coloque 100 ml de agua en un vaso de precipitado. Mida su temperatura. Caliente el agua y mida su temperatura cada 5 minutos. Deje reposar
media hora y mida nuevamente la temperatura.
C) Procesos de equilibrio qumico
los cambios.
3 Dado el equilibrio:
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Elsa Nieves
(incoloro)
Autoevaluacin
1. Cul es la diferencia entre calor y temperatura?
2. Son correctas las frases: tengo calor o temperatura?; hace calor?
3. Indique de sus observaciones en la vida diaria, cules experiencias podra pre-
4.
5.
6.
7.
Bibliografa
Lodish H, Berk A, Matsudaria P, Kaiser C, Krieger M, Scott M, Zipurky L, Darnell J. Biologa molecular de la clula. 5 ed. Espaa: Editorial Panamericana; 2006.
Solomon EP, Berg LR, Martin DW. Biologa. Mxico: McGraw-Hill Internacional Editores; 2001.
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Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Autoevaluacin
Bibliografa
prctica
Introduccin
Las enzimas son protenas que aceleran las velocidades de las reacciones dentro de la clula. Las enzimas se caracterizan por ser altamente especficas, tanto en la reaccin catalizada como en sus sustratos. Las enzimas poseen un centro activo en el cual
se introduce el sustrato. Se considera que entre las posibles propiedades de las enzimas
que le permiten su inmenso poder cataltico, se encuentra el hecho de que stas aceleran las velocidades de las reacciones, debido a la estabilizacin del estado de transicin.
La -amilasa cataliza la hidrlisis de los enlaces -1,4 del almidn, glucgeno y amilopectina, pero no los enlaces de la celulosa ni los enlaces 1,6 del glucgeno o el almidn, produciendo azcares reductores, principalmente maltosa con un poco de glucosa y maltotriosa:
Figura 1. Almidn
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
43
PRCTICA6
Figura 2. Maltosa
cido 3.5-dinitrosaliclico
cido 3-amino-5-dinitrosaliclico
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M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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Elsa Nieves
Objetivos
Realizar curvas de calibracin (en el presente caso se utilizar la curva de calibracin de la cantidad de la glucosa) para determinar la concentracin de un determinado metabolito que absorbe luz a una determinada longitud de onda, por lo cual se
puede determinar la densidad ptica o su absorbancia.
Detectar la concentracin adecuada de -amilasa para el ensayo cintico (la actividad en funcin de la concentracin de enzima, a una concentracin de sustrato y
tiempo fijos).
Detectar la reaccin de hidrlisis del almidn producida por la -amilasa presente en pastillas comerciales de Festal.
Determinar el efecto del pH y la temperatura sobre la reaccin enzimtica.
Conocimientos necesarios
Concepto de enzimas. Propiedades de las enzimas. Efectos del pH y la temperatura sobre la actividad enzimtica. Mtodos fsicos y qumicos para la deteccin del
cambio de concentracin de un metabolito. La Ley de Beer y el uso del espectrofotmetro para determinar la velocidad de una reaccin enzimtica.
Experimental
A) Preparacin de los reactivos*
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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PRCTICA6
En este mtodo se calienta el azcar en una solucin alcalina de tartrato de cobre, producindose xido cuproso, que al reaccionar con arsenomolibdato da azul de
molibdeno, con un color azul que puede medirse en el espectrofotmetro a 510 nm.
a. Solucin alcalina de tartrato de cobre: se disuelven 4 g de CuSO4, 5 H2O, 24 g
de Na2CO3 anhidro, 16 g de tartrato de sodio y potasio (sal de Rochelle) y 180 g de
Na2SO4 anhidro y se completa a 1 litro con agua destilada
b. Obtenga reactivo de arsenomolibdato comercial.
En el procedimiento se coloca en un tubo 1,5 ml de agua y 0,1 ml de muestra
conteniendo 50-100 g de azcar y se mezcla vigorosamente. Se le aade a la mezcla
0,2 ml de Ba(OH)2 y 0,2 ml de sulfato de zinc acuoso, mezcle y centrifugue. Tome 1 ml
de sobrenadante y agregue 1 ml de reactivo alcalino de cobre. Caliente en un bao hirviendo durante 15 minutos. Deje enfriar y agregue 1 ml de reactivo arsenomolibdato. Diluya el color azul con agua hasta 10 ml y mida la absorbancia a 510 nm.
C) Procedimientos experimentales
guientes cantidades: 0,0; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 y 1.0 ml.
Complete a un volumen de 2,5 ml con buffer fosfato. Incube 5 minutos
y agregue a cada tubo 1 ml de DNS. Ebulla las muestras durante 5 minutos. Deje enfriar y mida la absorbancia a 546 nm.
b) Grafique Absorbancia versus mg de glucosa.
2 Determinacin de la concentracin ptima de enzima:
Al igual que en el experimento anterior prepare diferentes tubos con las siguientes cantidades de reactivos:
a) 1 ml de almidn (0,1%).
b) Cantidades variables de enzima (desde 0; 0,025; 0,050; 0,075; 0,075;
0,1; 0,15 y 0,2 ml). Complete la cantidad de enzima hasta 2,5 ml agre-
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M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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Elsa Nieves
enzima determinada en el ensayo anterior y el volumen de buffer fosfato necesario para completar (enzima+ buffer) la cantidad de 1.5 ml. Incube las muestras a tiempos variables de 15, 30, 45, 60 segundos y 1,5;
2, 3, 4 y 5 minutos. Pare la reaccin a cada perodo de tiempo agregando 1 ml de DNS. Ebulla 5 minutos. Complete el volumen con 2 ml de
agua destilada (volumen total 5 ml) y mida la absorbancia a 546 nm.
Grafique absorbancia versus tiempo y determine la pendiente inicial
(velocidad inicial) de la reaccin.
Nota: el blanco de las reacciones y ensayos es el sistema completo con almidn sin enzima.
cuada (determinada en el experimento b); la misma cantidad de almidn y DNS y la misma cantidad de buffer, excepto que este ltimo se
prepara a diferentes pH (4,5; 5; 6,9; 7 y 8).
5 Determinacin de la energa de activacin de Arrhenius:
La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima aumenta con la temperatura hasta llegar a ciertas temperaturas en las cuales la enzima se desnaturaliza y
por consiguiente, pierde su actividad. Existe una temperatura ptima a la cual la enzima presenta su mxima actividad.
La ecuacin de Arrhenius: ln k = Ea/RT permite determinar la energa de activacin Ea, si se realizan ensayos cinticos a diferentes temperaturas. Para ello se procede de la manera siguiente:
a) Prepare tubos de ensayo conteniendo almidn (1 ml ) y el buffer fosfato
a pH 6,9 (al igual que en el experimento anterior). Incube a la temperatura deseada en un bao de Mara (hielo, temperatura ambiente, 30, 40
y 50 oC).
b) Agregue la enzima (volumen ptimo determinado en la parte b) y complete el volumen de enzima con buffer fosfato a pH 6,9 de tal manera
que el volumen de enzima ms buffer sea de 1 ml. Incube 5 minutos y
agregue 1 ml de DNS. Ebulla 5 minutos, agregue 2 ml de agua destilada
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47
PRCTICA6
y mida la absorbancia a 546 nm. Determine la velocidad inicial y grafique la constante de velocidad versus el inverso de la temperatura (oK).
La pendiente del grfico es Ea/R.
Nota: Las mismas experiencias pueden realizarse en forma cualitativa (o cuantitativa) utilizando reactivo de Lugol en vez del cido dinitrosaliclico y se detiene la reaccin incubando los tubos 5 minutos en agua hirviendo.
VOLUMEN (ML)
Almidn (5 g/l)
2,5
1,0
0,5
Autoevaluacin
1. Qu es un azcar reductor?
2. Cul es la reaccin que cataliza la -amilasa?, y la -amilasa?
3. Cul es la estructura del almidn? Cul es la estructura de la maltosa?
4. Qu es un enlace glicosdico ? y un enlace glicosdico ?
5. Cules son las caractersticas esenciales de una enzima?
6. Por qu la actividad enzimtica vara con el pH?
7. Qu se entiende por desnaturalizacin de una protena?
8. Para qu realiza una curva de calibracin con glucosa?
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Bernardo Chataing
Elsa Nieves
Bibliografa
Philip N. Fsica biolgica, energa, informacin y vida. Espaa: Editorial Reverte; 2005.
Solomon EP, Berg LR, Martin DW. Biologa. Mxico: McGraw-Hill Internacional Editores; 2001.
Plummer DT. Introduccin a la bioqumica prctica. 2 ed. Colombia: McGraw Hill Latinoamericana
S.A.; 1981.
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La fotosntesis
Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Ejercicios y autoevaluacin
Bibliografa
prctica
Introduccin
En este tema consideraremos cmo la energa luminosa, el origen primordial
de toda la energa bioqumica, es absorbida por las clulas fotosintticas para convertirla en energa qumica, la cual a su vez es utilizada para reducir el dixido de carbono y
formar la glucosa.
El trmino fotosntesis usualmente se refiere al proceso total mediante el cual
la glucosa es formada a partir de CO2 y H2O, a expensas de la energa solar. Sin embargo, la luz es directamente requerida nicamente en las primeras etapas de la fotosntesis, en las cuales la energa luminosa capturada es convertida en energa qumica. Esas
primeras reacciones se denominan las reacciones luminosas. Las reacciones remanentes, en las que se forma la glucosa a partir de CO2, en presencia de energa qumica, pueden proceder en la oscuridad o la ausencia de luz y se denominan las reacciones en la
oscuridad (el ciclo de Calvin).
Las reacciones luminosas son nicas en las clulas fotosintticas, mientras que
la mayora de las reacciones en la oscuridad tambin ocurren en clulas heterotrficas.
Los organismos fototrficos atrapan la energa luminosa y la convierten en su
equivalente qumico, mediante un proceso denominado la fotosntesis. En este proceso
ocurren reacciones que requieren de la presencia de la luz, en las cuales se forma ATP
(fotofosforilacin) y NADPH (fotorreduccin). Tanto el ATP y el NADPH producido se
utilizan para la biosntesis de glucosa, a partir de CO2 y H2O, mediante ciclo de Calvin.
Las molculas de pigmentos del aparato especializado en atrapar la energa luminosa se ensamblan en arreglos que absorben la energa en centros fotosintticos denominados fotosistemas. En clulas fototrficas eucariticas, el aparato que atrapa la luz
es localizado en la membrana interna de los sacos tilacoides.
1. El mecanismo de la fotosntesis es complejo y requiere de muchas macromol-
culas y pequeas molculas, tales como protenas transportadoras de electrones, ATPasas y pigmentos fotosintticos. La energa luminosa es atrapada, co-
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51
PRCTICA7
La fotosntesis
los fotones. Entre estos pigmentos se encuentran las clorofilas. Al igual que el
ojo, la clorofila es selectiva en cuanto a la longitud de onda de la luz que absorbe (Figura 2).
1 x 104
1x107
RADIO
ROJO
1x108
TV
RADAR
103m
1010m
ANARANJADO
1x109
1x1012
4x1014
8x1014
MICRO
INFRA
VISIBLE
ULTRA
ONDAS
ROJO
1m
1 cm
AMARILLO
10-3cm
VERDE
1x1019
RAYOS
RAYOS
VIOLETA
5x102nm
102nm
10-1nm
AZUL
VIOLETA
UV
760nm
600nm 500nm
380nm
E= 41 kcal/mo
48 kcal/mol 57 kcal/mol
72 kcal/mol
52
1x1016
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1x1024
10-5 nm
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
minados cloroplastos.
5. Los pigmentos fotosensitivos (clorofilas, carotenoides y otros) se organizan en
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
53
PRCTICA7
La fotosntesis
protena rica en hierro. La ferredoxina parece ser el transportador de electrones ms electronegativo que se conoce en relacin con las reacciones de xido-reduccin.
Las clulas fototrficas eucariticas contienen 2 fotosistemas.
El oxgeno liberado en la fotosntesis proviene del agua.
La glucosa es el producto primario de la fotosntesis. El ATP y el NADPH generados en el transporte de los electrones se utiliza para la biosntesis de la glucosa, a partir de CO2 y H2O.
El balance de masa o la ecuacin para el proceso de transporte de electrones
es:
7.
8.
9.
10.
4 h (energa luminosa) + H2O + 2ADP + 2Pi + NADP+ > 2 ATP + NADPH + 1/2O2 + 2H+
Las clulas fotosintticas tambin pueden contener otros pigmentos como los
carotenoides y las pficobilinas, que sirven como receptores suplementarios de luz para
aquellas porciones del espectro visible que no son cubiertas por las clorofilas. Cada molcula diferente de clorofila absorbe en una regin determinada del espectro (Figura 1).
La clorofila a absorbe alrededor de 663 nm, pero dentro del cloroplasto absorbe a 678
nm, mientras que la clorofila b absorbe alrededor de 635 nm.
Objetivos
Conocimientos necesarios
Fotosntesis, pigmentos fotosensitivos, ciclo de Calvin, reacciones luminosas,
energa luminosa, espectro electromagntico.
Experimental
A) Aislamiento de molculas de clorofila y pigmentos fotosensitivos
54
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
a. Lave con agua las hojas de espinaca o elodea, djelas escurrir y pese unos 5 g
de hojas.
b. Corte las hojas en pequeos trozos y agregue 5 ml de metanol. Triture las hojas en un mortero para extraer el jugo. Filtre, usando papel Whatman N 1, y recoja la
solucin obtenida en un vaso de precipitado. Agrguele a las hojas 5 ml de una solucin
de acetona en agua 80% v/v. Enjuague la solucin con 5 ml de solucin acuosa de acetona y mida la absorbancia de la muestra en un espectrofotmetro, desde 340 a 700 nm
con intervalos de 10 nm. Utilice la solucin acuosa de acetona como blanco.
B) Aislamiento de clorofilas a y b
a. Tome hojas de espinaca o elodea y cubra la mitad de cada una con papel alu-
minio. Exponga la hoja (con la mitad descubierta y la otra mitad tapada) a un bombillo
de 100 w por 1 hora.
b. Corte la hoja en pequeos pedazos y una porcin de hojas en la oscuridad y
otra en hojas iluminadas con el bombillo colquelas en cpsulas de Petri que contienen
yodo o reactivo de Lugol. Compare la forma en la cual se han coloreado las hojas.
c. Otra porcin de las hojas, tanto las que estuvieron en la oscuridad como las que
fueron irradiadas por un bombillo, colquelas en un beaker con alcohol caliente sobre
una plancha de calentamiento. Lave nuevamente con alcohol y saque las hojas. Coloque
las hojas en una cpsula de Petri con yodo y observe los cambios.
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
55
PRCTICA7
La fotosntesis
Autoevaluacin
1. Todos los organismos fototrficos poseen cloroplastos?
2. Describa las caractersticas estructurales y funcionales de los cloroplastos.
3. Las flores poseen los mismos pigmentos y en las mismas cantidades que las
4.
5.
6.
7.
hojas?
De dnde proviene el oxgeno generado en la fotosntesis?
Las plantas respiran? Si es as, es un proceso simultneo con el de la fotosntesis o separado temporalmente?
De donde proviene el azcar producido durante la fotosntesis?
Por qu colorean las hojas con yodo?
Bibliografa
Plummer DT. Introduccin a la bioqumica prctica. Bogot: McGraw Hill Interamericana S.A.; 1981.
Chataing B. Introduccin a la bioqumica celular. Vol. II. Mrida: Consejo de Publicaciones ULA;
1998.
Solomon EP, Berg LR, Martn DW. Biologa. Mxico: McGraw-Hill Internacional Editores; 2001.
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prctica
Fermentacin y respiracin
Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Autoevaluacin
Bibliografa
Introduccin
A) Organismos anaerbicos, aerbicos y facultativos
Existe un grupo de organismos eucariticos y procariticos que son estrictamente aerbicos, los cuales pueden metabolizar y crecer nicamente en la presencia del
oxgeno atmosfrico.
Un segundo grupo de organismos son los estrictamente anaerbicos, que metabolizan y crecen en la ausencia de oxgeno libre. Adems, tales organismos requieren
de la exclusin de oxgeno, que de otra forma puede ser letal.
Un tercer tipo de organismos lo forman los facultativos, que son capaces de
transformar su maquinaria metablica de un modo aerbico (respiratorio) a un modo
anaerbico (fermentativo), dependiendo del ambiente en el cual ellos se encuentran.
Entre los organismos estrictamente aerbicos se encuentran los organismos
procariticos streptomycetos y la mayora de los hongos filamentosos eucariticos (asociados con la produccin de quesos y alimentos fermentados).
Entre los organismos estrictamente anaerbicos, tenemos los miembros del gnero bacterial Clostridium, de los cuales, C. botulinum, el productor de la toxina del botulismo, es un ejemplo notorio. Otro ejemplo, lo constituye la bacteria del suelo, Perfringens welchii.
Por otra parte, la levadura, que puede tanto respirar como fermentar ciertos
sustratos, representa un tipo de organismo facultativo. Las clulas del tejido muscular,
dependiendo de la cantidad accesible de oxgeno, representan otro ejemplo de una clula facultativa. Algunos ejemplos de organismos aerbicos, anaerbicos y facultativos
son presentados en la Tabla 1.
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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PRCTICA8
Fermentacin y respiracin
ORGANISMOS
ANAERBICOS OBLIGADOS
ORGANISMOS
AERBICOS OBLIGADOS
Streptomycetos
Hongos filamentosos
Bacilos que forman esporas
Bacilo de la tuberculosis
ORGANISMOS FACULTATIVOS
Levaduras
Enterobacteria
(Tripanosomas)
FERMENTACIN
ALCOHLICA
FERMENTACIN
HOMOLCTICA
Lactobacillus casei
Streptococcus cremoris
Streptococci patgenos
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M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
Bernardo Chataing
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As, la levadura fermenta una hexosa, como la glucosa o fructosa, dando origen a dos molculas de etanol y dos molculas de CO2 (fermentacin alcohlica); el
msculo en presencia de bajas concentraciones de oxgeno puede transformar el piruvato en lactato (fermentacin lctica).
La bacteria Clostridium acetobutylicum produce butanol y acetona. Una lista
de productos industriales obtenidos de microorganismos y de clulas cultivadas de mamferos es mostrada en la Tabla 3.
Tabla 3: Productos producidos por diferentes microorganismos
ORGANISMO
TIPO
PRODUCTO
Saccharomyces cerevisiae
levadura
Saccharomyces carisbergensis
levadura
cerveza
Saccharomyces rouxii
levadura
salsa de soya
Streptococcus thermophils
bacteria
yogurt
Propionibacterium shermanii
bacteria
queso suizo
Gluconobacteria suboxidans
bacteria
vinagre
Penicillium camembertii
moho
Saccharomyces cerevisiae
levadura
Clostridium acetobutylicum
bacteria
acetona y butanol
Aspergillus niger
moho
cido ctrico
Xanthomonas campestrys
bacteria
polisacridos
Corynebacterium glutamicum
bacteria
L-lisina, cido 5
Guanlico, cido 5
inosnico.
Saccaromycopsis lipolytica
levadura
protena microbial de
Eremothecium ashbyi
levadura
Riboflavina
Pseudomonas denitrificans
bacteria
vitamina B12
Propionibacterium
bacteria
vitamina B12
Leuconostoc mesenteroides
bacteria
dextranos
Penicillum chrysogenum
moho
penicilinas
Bacillus brevis
bacteria
gramicidin S
Blakeslea trispora
moho
beta-caroteno
Bacillus popiliae
bacteria
bioinsecticidas
Hibridomas
inmunoglobulinas y anticuerpos
monoclonales
interfern
Dentro de condiciones aerbicas, el piruvato obtenido en el proceso de gluclisis es transformado completamente a dixido de carbono y agua, como lo indicamos
anteriormente, y la energa liberada en el proceso es utilizada para formar ATP a partir
de ADP y Pi, va el ciclo del cido ctrico, la cadena de transporte de electrones y la oxidacin fosforilativa. El centro de este proceso es la repetida reduccin de cofactores
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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PRCTICA8
Fermentacin y respiracin
TIPO
DE RESPIRACIN
ACEPTOR
DE ELECTRONES
PRODUCTO
REDUCIDO
Respiracin de azufre
Azufre (S)
Sulfuro (S=)
Respiracin de sulfato
Sulfato (SO4-2)
Sulfuro
Respiracin de carbonato
CO2
Acetato(CH3COO-)
(bacteria acetognica)
Respiracin de carbonato*
Metano (CH4)
Nitrito (NO -)
Respiracin de hierro
Nitrato(NO3-)
Frrico (Fe+3)
Ferroso (Fe+2)
Compuestos orgnicos
Fumarato, glicina
Succinato, acetato
Respiracin de nitrato
* En bacteria metanognica
Adaptado de Smith C, Wood EJ. Energy in biological systems Hong Kong: Chapman & Hall; 1991.
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Bernardo Chataing
Elsa Nieves
C) Indicadores cido-base
Existen colorantes cuyo color depende de la concentracin de H3O+. Esos indicadores por s mismos son cidos o bases dbiles cuyo par conjugado presenta un color diferente.
Por ejemplo, rojo de fenol se ioniza como:
HIn + H2O
si
[In-]
= 0,1
[HIn]
[In-]
= 1,0
[HIn]
[In-]
= 10
[HIn]
H3O+ + In-
KI =
[H3O+][HIn]
[HIn]
Solucin roja
Solucin anaranjada
Solucin amarilla
P H ( INTERVALO )
CAMBIO
Timol azul
1,2 - 2,8
Rojo - Amarillo
Anaranjado de metilo
2,1 - 4,4
Anaranjado - Amarillo
Rojo de metilo
4,2 - 6,3
Rojo - Amarillo
Azul de bromotimol
6,0 - 7,6
Amarillo - Azul
Rojo de cresol
7,2 - 8,8
Incoloro - Rojo
Fenolftalena
8,3 - 10,0
Incoloro - Rojo
Amarillo de alizarina
10,1 - 12,0
Amarillo - Rojo
DE COLOR
Objetivos
Conocimientos necesarios
Respiracin aerbica y anaerbica, fermentacin, gluclisis, ciclo de Krebs, cadena de la oxidacin fosforilativa, ATPasas, gradiente de protones.
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PRCTICA8
Fermentacin y respiracin
Experimental
A) Deteccin de CO2 durante la fermentacin alcohlica de la levadura.
La levadura Saccharomyces cereviceae en presencia de glucosa transforma este sustrato en etanol y CO2 de acuerdo con la reaccin:
Glucosa + O2
CO2 + CH3CH2OH
Ejercicio:
Escriba la ecuacin qumica mediante la cual se puede determinar
CO2 con el rojo de fenol.
Procedimiento
1 En 4 generadores de gases, sellados con papel parafilm, como los ilustrados
neradores de gases y coloque la punta de los mismos en tubos de ensayo que contienen
agua con el rojo de fenol (coloque una pequea cantidad de colorante de aproximadamente 2 ml) y observe lo que sucede Por qu cambia de color el colorante? Escriba la
ecuacin del proceso que Ud. cree est ocurriendo.
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Bernardo Chataing
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PRCTICA8
Fermentacin y respiracin
Autoevaluacin
1. Qu son organismos aerbicos, anaerbicos y facultativos? D ejemplos de ca-
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da uno de ellos.
Qu es una fermentacin? Qu es la respiracin?
Puede haber respiracin anaerbica? Si la hay, en qu se diferencia de la fermentacin?
En cules etapas del proceso respiratorio se genera CO2?
En cules etapas del proceso fermentativo se genera CO2?
Por qu en la determinacin de acetaldehdo agrega sulfito de sodio a uno de
los tubos?
La ecuacin general del proceso de la respiracin es la siguiente:
C6H12O6 + 6O2
6CO2 + 6 H2O.
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M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
Bibliografa
Philip N. Fsica biolgica, energa, informacin y vida. Espaa: Editorial Reverte; 2005.
Smith C, Wood EJ. Energy in biological systems Hong Kong: Chapman & Hall; 1991.
Plummer DT. Introduccin a la bioqumica prctica. 2 ed. Colombia: Mc Graw Hill Interamericana
S.A.; 1981.
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Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Ejercicios y autoevaluacin
Bibliografa
prctica
Introduccin
A) La reproduccin celular
La idea de que los hijos se parecen a los padres es tan antigua como la propia
humanidad. La herencia biolgica ha sido quizs el factor ms relevante en moldear la
evolucin social de la humanidad. Qu entendemos realmente por herencia? Cul es
la fuente de este gran poder? Qu es lo que se transfiere de generacin en generacin?
La manera como la vida se perpeta de generacin en generacin, y cmo el macho y la
hembra contribuyen en las caractersticas de su descendencia, son preguntas fundamentales de las ciencias biolgicas. Nuestra historia empieza con algo, al parecer simple, la
reproduccin de una clula. Las clulas se reproducen mediante un proceso de duplicacin de sus contenidos, conocido como divisin celular. Este ciclo de divisin celular es fundamental para que todos los seres vivos sean reproducibles. En organismos
unicelulares, tales como bacterias, levaduras, protozoarios, cada divisin celular produce un organismo adicional. En especies pluricelulares, son necesarios diversos ciclos de
divisin celular. La divisin celular es necesaria, inclusive en el individuo adulto para
sustituir las clulas que son daadas.
La duracin del ciclo celular vara grandemente de un tipo de clula a otra.
As, los embriones de la mosca tienen los ciclos celulares ms cortos, cada uno de 8 minutos, mientras que la clula heptica de mamferos puede tener ciclos celulares superiores a los 12 meses. El ciclo celular es tradicionalmente dividido en fases distintas
(profase, metafase, anafase, telofase). Los procesos fcilmente visibles de divisin nuclear (mitosis), que son llamados de fase M, tpicamente ocupan una pequea fraccin del
ciclo celular. La otra parte ms larga del ciclo es llamada de interfase. Una clula crece
tomando materiales de su ambiente y utiliza estos materiales en la sntesis de nuevas
molculas estructurales y funcionales. Las nuevas clulas hijas son estructuralmente y
funcionalmente casi idnticas entre s como lo son de su clula progenitora.
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PRCTICA9
Ciclo celular
Mitosis
Meiosis
Cromosoma
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Meiosis
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
La distribucin de la informacin hereditaria en las clulas procariotas es relativamente sencilla. El material hereditario (ADN) se duplica antes de la divisin celular, la membrana plasmtica se invagina y la clula se segmenta en dos, separando los
dos citoplasmas y las rplicas exactas de la clula inicial.
En los organismos unicelulares, la mitosis es un proceso clave para la reproduccin. La mitosis tambin juega un papel importante en la reproduccin de ciertos
organismos pluricelulares, que pueden formar nuevos individuos que se separan y se
vuelven independientes. Este tipo de reproduccin mediante la mitosis recibe el nombre de reproduccin asexual. Por otra parte, la inmensa mayora de los organismos eucariotas se reproducen sexualmente. La reproduccin sexual generalmente obliga a que
haya dos progenitores y siempre implica acciones de fecundacin y de meiosis. Todos
los individuos con reproduccin sexual, forman gametos y estos al fusionarse dan origen a un huevo con igual carga cromosmica que los progenitores. La meiosis es un tipo especial de divisin nuclear y celular que se cree, evolucion de la mitosis, y utiliza
bsicamente los mismos mecanismos celulares.
B) La regulacin trmica
Una de las ventajas de los seres pluricelulares es su mayor capacidad homeosttica: el mantenimiento de unas constantes fisiolgicas internas en unos niveles poco
variables, en los que las clulas pueden vivir y funcionar con normalidad. En los animales hay un gran nmero de actividades que contribuyen a la homestasis. Entre algunos ejemplos especficos tenemos la regulacin de la composicin qumica de los lquidos internos, los niveles de azcar en la sangre, la captacin y distribucin del oxgeno
entre las clulas y la eliminacin del dixido de carbono en el cuerpo. En esta prctica
examinaremos una de las funciones homeostticas ms notable, como es la regulacin
de la temperatura corporal.
Objetivos
Observar el proceso de divisin celular.
Diferenciar clulas que estn en divisin de las que no lo estn.
Analizar la importancia de la meiosis para los organismos que tienen reproduccin sexual.
Explicar el mecanismo de termorregulacin del cuerpo humano.
Relacionar organismos homeotermos con organismos poiquilotermos frente a
variaciones de la temperatura del ambiente.
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PRCTICA9
Conocimientos necesarios
Teora celular, meiosis, mitosis y mecanismos homeostticos.
Experimental
A) La divisin celular
Material:
Levadura en polvo
Glucosa o melaza
Fiolas de 300 ml
H2O tibia
Procedimiento:
1. Prepare dos fiolas. Disuelva en cada una 1 gr. de melaza en 100 ml. de agua
tibia. Aada 1 gr. de la levadura en polvo en cada una, agite y tape el recipiente.
2. Coloque un cultivo a 37 oC por 48 horas, y el otro cultivo durante 1 hora de
incubacin.
3. Al cabo de ese tiempo saque una pequea muestra (gota) del cultivo y colquela sobre una lmina portaobjetos, extienda bien el lquido, de manera que forme una
pelcula fina.
4. Coloque encima un cubre objeto y observe al microscopio con bajo y mediano aumento.
5. Repita la operacin con el otro cultivo, observe, compare y discuta.
Observacin:
Ver unas clulas, que son levaduras, muchas de las cuales presentan una especie de gemas que salen de ellas y que crecern mientras dura su observacin. Las
levaduras son hongos que estn formados por una sola clula, cuando encuentran suficiente alimento crecen, entonces nuevas levaduras se formarn brotando como unas
gemas de las clulas ya desarrolladas, permaneciendo unidas en muchos casos a las
clulas madres (gemacin).
B) Fases de la mitosis
Material:
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M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
Bernardo Chataing
Elsa Nieves
Solucin de Carnoy (6 partes de alcohol absoluto, 1 parte de cido actico glacial y 3 partes de cloroformo)
Solucin de acetocarmn, saturada, filtrada y madurada con 2 gotas de cloruro frrico al 29% por cada 100 ml de solucin al momento de utilizar (hervir 0,5 g de
Carmn en 100 ml de 45% cido actico durante 3 minutos, deje enfriar y filtre. Para teir cromosomas se diluye una parte de la solucin con 2 partes de cido actico al 45%
y se aaden 2 gotas de cloruro frrico al 29%).
Procedimiento:
1. Con un bistur haga cortes transversales finos de las races seleccionadas a
diferentes tiempos (48, 4 y 1 hora). Cuide que el corte quede lo ms fino posible.
2. Coloque el corte en el portaobjeto y aada una gota de solucin de cido actico al 45% por 10 min (permite fijar la muestra: la estructura celular con todo sus elementos dispuestos en la forma que estaban en condiciones naturales).
3. Retire el lquido y aada una gota de HCl 1 N por 1 1/2 min (ayuda a disolver sustancias ppticas de la laminilla media). Maceracin.
4. Retire el lquido y lvelas con una gota de agua destilada.
5. Coloca una gota de Carnoy por 3 min.
6. Retire el lquido y aada una gota de colorante acetocarmn por 5 min.
7. Retire el lquido y coloque un cubre objeto, presione con suavidad y seque
el exceso de colorante con papel absorbente.
8. Presione nuevamente con cuidado.
9. Observe la preparaciones al microscopio, primero con pequeo aumento y
luego con aumento mediano. Observe los diferentes aspectos de las clulas (ncleo con
aspecto granular o con los cromosomas teidos, que pueden verse con nitidez) y trate
de identificar las diferentes fases de la mitosis.
10. Para preservar las preparaciones, seque los bordes del cubreobjeto y con un
pincel fino coloque parafina, esperma o esmalte de uas. Tambin puede sellar con otro
sellador disponible.
C) Divisin celular por meiosis
Material:
Hojas de helechos:
1. Observe las hojas de los helechos por su parte interior, envs, observe los pe-
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PRCTICA9
Flores de jardn:
1. Observe las partes de la flor y estudie con ayuda del libro los rganos que se
encuentran.
2. Identifique los estambres que en su extremo llevan una parte engrosada, denominada antena.
3. Corte el extremo de los estambres que contienen la antena, realice otro corte
a nivel de la antena, en cuyo interior existen unos granulillos que constituyen el polen.
4. Coloque los granos de polen en un porta objeto con una gota de glicerina.
Observe los granos de polen de la flor que est estudiando.
5. Discuta la importancia de la meiosis en el proceso de formacin del polen.
D) Regulacin trmica
1. Termostato natural
Material:
Procedimiento:
1. Un estudiante voluntario debe permanecer en reposo, sentado. Un compaero le tomar la temperatura del cuerpo con un termmetro oral y colocar un termmetro en cada mano. A los 3 min, registre la temperatura.
2. El compaero empapa un trozo de algodn en agua helada y frota la parte interna de la mueca izquierda. El estudiante voluntario describe lo que siente, mientras
el agua se va evaporando.
3. El compaero registra la temperatura ambiente, la del cuerpo y las manos.
4. Inmediatamente despus, empapa otro algodn con alcohol y moja la parte
interna de la mueca derecha.
5. Toma la temperatura ambiente, la del cuerpo y manos.
6. Observa y vers que el alcohol se ha secado mucho ms rpido que el agua.
Tu mueca izquierda se enfra mientras el agua se evapora, pero sentirs mas fra la mueca derecha.
7. Explique lo sucedido.
8. Tome agua bien fra, describa lo que siente e inmediatamente el compaero
registrar la temperatura ambiente as como tambin la temperatura de su cuerpo.
9. Compare y discuta los resultados con sus compaeros y saque conclusiones
pertinentes.
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Bernardo Chataing
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E) Control de temperatura
Material:
Autoevaluacin
1. Distinga entre los siguientes trminos: haploide, diploide, meiosis, mitosis,
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Bibliografa
Lodish H, Berk A, Matsudaria P, Kaiser C, Krieger M, Scott M, Zipurky L, Darnell J. Biologa molecular de la clula. 5 ed. Espaa: Editorial Panamericana; 2006.
Salomn EP, Berg LR, Martn DW. Biologa. Espaa: McGraw-Hill Interamericana; 1999.
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Ecosistemas
Introduccin
Objetivos
Conocimientos necesarios
Experimental
Autoevaluacin
Bibliografa
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prctica
Introduccin
El conjunto de los componentes biticos (vivos) y abiticos (no vivos), a travs
de los cuales fluye la energa y ciclan los materiales, forma lo que se llama un sistema
ecolgico o ecosistema. Dentro del ecosistema, las distintas poblaciones interaccionan
con la porcin abitica del entorno. Tales interacciones tienen dos consecuencias: un
fluir unidireccional de energa que va desde los auttrofos (generalmente organismos fotosintetizadores) a los hetertrofos, que son los que consumen, bien sea a auttrofos o a
otros hetertrofos, y una circulacin o ciclo de materiales que se mueven desde el entorno abitico, pasan por los cuerpos de organismos vivos y retornan otra vez al entorno abitico. Este ciclado de los materiales depende de la existencia de descomponedores, organismos que descomponen los materiales orgnicos en molculas ms simples
que pueden ser usadas por los auttrofos. La prctica consiste en el estudio de una comunidad en su medio natural.
Objetivos
Estudiar algunas relaciones que se producen entre los organismos y entre stos
y el ambiente.
Determinar el flujo de energa como factor importante en la organizacin de los
ecosistemas.
Observar los diferentes niveles trficos.
Explicar por qu, en ambientes diferentes, se desarrollan comunidades distintas.
Conocimientos necesarios
Organismos autotrficos y heterotrficos, ecosistemas y cadenas trficas.
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P R C T I C A 10
Ecosistemas
Experimental
A) Visita a bosque nublado de monte Zerpa o a cualquier otro lugar
1. Determine el tipo de paisaje (sabana, pramos, selvas, bosques, manglares,
desierto).
2. Observe la diversidad de flora y fauna en un rea de 10 m.
3. Determine el flujo de energa del ecosistema.
4. Determine los diferentes niveles trficos.
B) Pequeos ecosistemas:
1. Trate de establecer pequeos ecosistemas:
Temperatura
Luz
Humedad
Tipo de suelo
b. Plantas presentes: (trate de clasificarlas dentro de grandes grupos)
Algas
Hongos
Lquenes
Helechos
Hierbas
Arbustos
rboles
Orqudeas
Otros grupos
c. Animales presentes: (trate de clasificarlos dentro de grandes grupos)
Invertebrados:
Anlidos
Platelmintos
Nematelmintos
Moluscos
Artrpodos
Otros grupos
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Vertebrados:
Peces
Anfibios
Reptiles
Aves
Mamferos
b. Trate de encontrar: las relaciones existentes entre los diferentes miembros de
Considere cada uno de los organismos indicados a continuacin y haga una lista de los efectos de cada uno en sus ecosistemas respectivos, considere, para cada organismo, cmo recibe su energa y nutrientes, a dnde va lo que produce o excreta (residuos metablicos, descendientes, cadveres) y sus efectos sobre otros organismos.
Lombriz de tierra.
Planta herbcea.
Grillo.
Pjaro.
D) Impacto ecolgico
a. Formule una hiptesis que explique lo que sucedera en la comunidad estu-
diada si cambiara un determinado factor ambiental abitico: luz, temperatura, humedad, viento.
b. Imagine un medio ambiente diferente al que estudi: Lagunillas, El Valle, y
formule la hiptesis de lo que le sucedera a alguno de los integrantes de la comunidad
estudiada.
c. Discuta un proyecto de posible explotacin racional de los recursos.
d. La vegetacin contribuye a evitar la erosin.
Autoevaluacin
1. Defina los siguientes trminos: ecosistema, comunidad, bitico, abitico, cade-
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P R C T I C A 10
Ecosistemas
Bibliografa
Salomon EP, Berg LR, Martn DW. Biologa. Mxico: McGraw-Hill Interamericana; 1999.
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Cristalera:
Equipos:
30 pipetas
PHmetro
Balanza
Agitadores magnticos
30 erlenmeyer 250 ml
Destilador
10 frascos 500 ml
Autoclave
Campana extractora
Reactivos:
Material:
10 propipetas
10 guantes
Formol
10 tapa bocas
Alcohol
Cloruro de potasio (KCl)
Fosfato bsico de sodio (Na2HPO4)
Fosfato cido de potasio (KH2PO4)
cido actico glacial
Prctica 3
Cloroformo
Microscopio
Reactivos:
Material
biolgico:
Azul de metileno
Alcohol absoluto
Cristalera:
10 frascos mbar 30 ml
Equipos:
Balanza
10 cilindros 50 ml
20 microscopios
10 microscopios estereoscpicos
Material:
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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Prctica 4 La clula
Material:
Material biolgico:
Hisopo estril
Porta objeto
Cubre objetos
nismo unicelular
Bistur
bazo
Hojas de bistur
Agua estancada
Lancetas desechables
Reactivos:
Metanol
prcticas)
Solucin tamponada pH 7,2 (ya prepara-
Equipos:
20 microscopios
Aceite de inmersin
Azul de metileno
Giemsa
Violeta de genciana
Alcohol
Lugol
Prctica 5 Las reacciones qumicas en biologa
Materiales
y equipos:
Reactivos esenciales:
H2SO4 concentrado
litro de capacidad
NaOH 2 N
Termmetros
Poliacrilamida
Baos de Mara
K2Cr2O7
Goteros
NaCl
NH4Cl
Tubos de ensayo
FeCl3
Hielo
KSCN
AgNO3
Pinzas de madera
K2Cr2O4
CoCl2.6H2O
Na2CoCl4
80
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Materiales y equipos:
Reactivos esenciales:
capacidad
Hidrxido de sodio
NaCl
Termmetro
Na2HPO4.2H2O
Bao de Mara
KH2PO4
Glucosa
Espectrofotmetro visible
Maltosa
Agitador
Almidn hidrosoluble
Vortex
Festal
Plancha de calentamiento
Tartrato de cobre
Tubos de ensayo
Pinzas de madera
Hidrxido de Bario
PH metro
Sulfato de zinc
Prctica 7 La fotosntesis
Materiales y equipos:
Plancha de calentamiento
Papel de aluminio
Bombillo de 100 w
Tijeras
Cpsulas de Petri
Mortero
Vasos de precipitado
Filtros
Embudos de filtracin y soportes
Reactivos esenciales
Metanol
Espectrofotmetro
Acetona
Tubos de ensayo
ter de petrleo
Embudos de separacin
Yodo
Materiales y equipos:
Marcadores
Tirro
Papel parafilm
Vasos de precipitado
Tubos de vidrio
Mecheros y soportes
Tubos de ensayo
Pinzas
PH metro
Bao de agua
Centrfuga de mesa
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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Reactivos:
Levaduras
HCl
Glucosa
Sulfato de amonio
Rojo de fenol
Nitroprusiato de sodio
Na2HPO4
NaOH
Sulfito de sodio
KH2PO4
Piperidina
cas anteriores)
Cloruro frrico
cido actico
Levadura en polvo
lcohol
Glucosa o melaza
Sapo, tortuga, hmster, ratn
Material:
Hielo
Mechero
Trpode con gradilla
Cristalera:
Papel de filtro
10 fiolas de 300 ml
Termmetro clnico
10 mecheros
Algodn
10 embudos
Balanza
Agua fra
Chocolate
Lminas
Bistur
Cubre objetos
Pincel
Esmalte de uas
Reactivos:
Solucin de HCl 1 N
Equipos:
Microscopios
de cloroformo
Microscopios estereoscpicos
Prctica 10 Ecosistemas
Actividad:
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Glosario
cido. Sustancia capaz de ceder protones a una sustancia aceptora de los mismos.
4 ) ramificaciones (1
6)
Anafase. Fase de la mitosis durante la cual las cromtidas hermanas se separan y mi-
Auttrofo. Organismo que sintetiza compuestos orgnicos complejos a partir de materias primas inorgnicas simples. Tambin llamado productor o productor primario.
C
Calor. Cantidad total de energa cintica en una muestra de una sustancia. Es la energa transmitida por una diferencia de temperatura entre un sistema y sus alrededores. El calor es una forma de incrementar la energa interna porque estimula el movimiento molecular.
Clulas eucariotas. Clulas que presentan una envoltura nuclear, organelas citoplasmticos y un citoesqueleto.
Clulas procariotas. Clulas que carecen de envoltura nuclear, de organelas citoplasmticos y de citoesqueleto.
Celulosa. Principal componente estructural de la pared celular vegetal, polmero lineal de glucosa unido mediante enlaces glicosdicos (1>4).
Cloroplasto. Organela limitada por una doble membrana, en el cual ocurre la fotosntesis en los organismos eucariotas
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
83
Glosario
Enlaces de alta energa. Enlaces qumicos que liberan una gran cantidad de energa
libre cuando se rompen.
Envoltura nuclear. Barrera que separa el ncleo del citoplasma, compuesta de una
membrana interna y otra externa, una lmina nuclear, y complejos de poros nucleares.
Fermentacin. Proceso anaerobio por medio de cual se produce ATP en una serie de
reacciones redox en las que compuestos orgnicos actan como donadores y aceptores de electrones.
Fotosntesis. Proceso mediante el cual las clulas aprovechan la energa de la luz solar y sintetizan glucosa a partir de CO2 y agua.
G
Hbitat. Lugar en el que pueden encontrase habitualmente los individuos de una especie determinada.
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Longitud de onda. Distancia de una cresta de onda a la siguiente, la energa de la radiacin electromagntica es inversamente proporcional a su longitud de onda.
M
Mtodo deductivo. Enfoque que pone de relieve el uso del razonamiento deductivo
para probar hiptesis
Mtodo inductivo. Enfoque que pone de relieve el uso del razonamiento inductivo
para descubrir nuevos principios generales.
Microscopa de fluorescencia. Tipo de microscopa en donde las molculas son detectadas con base en la emisin de luz fluorescente.
Microscopio electrnico. Microscopio capaz de producir imgenes de alta resolucin y muy ampliadas mediante un haz de electrones. Los microscopios electrnicos de transmisin producen imgenes de cortes delgados; los microscopios electrnicos de barrido producen imgenes de superficies.
Mitosis. Proceso de divisin nuclear que da origen a clulas hijas con igual carga
cromosmica.
Neurona. Clula nerviosa, clula conductora del sistema nervioso que tpicamente
consta de cuerpo celular, dendritas y un axn.
Nivel trfico. Cada organismo en un ecosistema se asigna a un nivel trfico con base en su fuente primaria de nutricin.
Oxidacin. Proceso mediante el cual una sustancia cede electrones a otra sustancia
aceptora de los mismos.
P
Pared celular. Estructura producida por la clula que rodea la membrana celular de
las plantas, algas, hongos y procariotas.
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Glosario
Reaccin qumica. Interaccin entre tomos, iones o molculas que da por resultado la formacin de nuevas combinaciones de tomos o molculas. Una reaccin qumica representa un rearreglo de tomos.
Respiracin celular. Es el proceso por el cual las clulas generan ATP a travs de
una serie de reacciones redox en las que el aceptor final de electrones es un compuesto inorgnico. En la respiracin celular aerbica el aceptor final de electrones es
oxgeno molecular, mientras que en la respiracin celular anaerobia, el aceptor final
es una molcula inorgnica distinta al oxgeno.
S
Soluto. Sustancia disuelta que se encuentra formando una solucin en menor concentracin.
Sustrato. Sustancia especfica sobre la cual acta una enzima. Representa el reactivo en una reaccin catalizada por una enzima.
T
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Temperatura. Energa cintica promedio de las partculas en una muestra de una sustancia. El concepto de temperatura se introdujo inicialmente como un resultado de la observacin de que todos los cuerpos tienden gradualmente a un estado de equilibrio trmico.
Vacuola. Organela limitada por una membrana llena de lquido, situada en el citoplasma
de una clula.
Virus. Partcula compuesta de cido nucleico y cubierta proteica, capaz de infectar clulas
vivas.
M A N U A L D E L A B O R AT O R I O D E B I O L O G A
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ndice
7 Prefacio
9 Objetivo
9 Instrucciones generales
1 prctica
11 Introduccin al mtodo cientfico
2 prctica
17 Macromolculas y preparacin de soluciones
3 prctica
23 El microscopio y sus caractersticas
4 prctica
31 La clula
5 prctica
37 Las reacciones qumicas en biologa y los
procesos de transferencia de energa
6 prctica
43 Las enzimas: propiedades de -amilasa
7 prctica
51 La fotosntesis
8 prctica
57 Fermentacin y respiracin
9 prctica
67 Divisin celular y regulacin trmica
10 prctica
75 Ecosistemas
79 Materiales necesarios para las prcticas
83 Glosario
88 Bibliografa general
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