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INTRODUO
Um espectrmetro de massas pode ser entendido, via de regra,
como um instrumento contendo uma fonte de ons, um separador ou
filtro de massas na realidade, massa/carga (m/z) e um detector.
Embora, existam vrias estratgias para separao e deteco, a etapa de ionizao aquela com o maior nmero de diferentes estratgias. Isso se deve grande variedade de tipos de amostras e espcies
de interesse. Amostras slidas, lquidas ou gasosas contendo espcies volteis ou no e com interesses voltados desde a anlise elementar at a composio de protenas requerem diferentes processos
de ionizao. Uma vez gerados os ons, os processos de separao e
deteco podem ser escolhidos de acordo com caractersticas mais
ou menos comuns como sensibilidade, resoluo e preciso de m/z e
custo. Neste contexto, surgiu a ionizao por electrospray como
uma alternativa para gerao de ons a partir de espcies pouco volteis presentes em fase lquida.
Um levantamento na literatura mostra que, de 1980 a 2000, o nmero aproximado de artigos publicados usando electrospray passou
de 100 para 7800, sendo que 80% destes esto relacionados com anlise de biomolculas e de compostos orgnicos, 10% so relativos
instrumentao e estudos sobre os aspectos fundamentais da formao do electrospray e 10% das publicaes esto associadas a espcies organometlicas e inorgnicas nas mais diferentes formas. Apesar
deste fato, vrios pesquisadores ainda desconhecem a potencialidade
desta tcnica, o que motivou este artigo de divulgao.
ASPECTOS FUNDAMENTAIS DA IONIZAO POR
ELECTROSPRAY
Embora seja normalmente considerada como uma fonte de
ionizao, o electrospray , na realidade, um processo de transfe*e-mail: claudemi@iq.usp.br
#
endereo atual: Embrapa Cernagen PqEB, W/5 Norte (final), 70770-900
Braslia - DF
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re ininterruptamente pela soluo, como nas clulas eletrolticas convencionais. Parte do transporte dos ons ocorre na fase gasosa. Uma
reao de oxidao normal ocorre no eletrodo positivo, isto , na
interface soluo/fio metlico. Esta reao fornece ons positivos
soluo, convertendo tomos do metal em ons metlicos positivos e
liberando eltrons (Equao 1). Outra alternativa remover ons negativos presentes na soluo atravs da oxidao (Equao 2) ou
oxidao do solvente ou outra espcie neutra (Equao 3). A reduo das espcies ocorre no contra-eletrodo (Equao 4). Estes processos so vlidos se considerarmos o electrospray como fonte de
ons positivos. Obviamente, com a reverso dos potenciais sobre os
eletrodos, os processos de oxidao e reduo seriam invertidos.
M(s) M2+(aq) + 2e (no metal)
4OH (aq) O2(g) + 2H2O + 4 e (na soluo)
H2O 2H+ +1/2 O2 + 2 e (oxidao do solvente)
A+ + e A (no contra eletrodo)
(1)
(2)
(3)
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Como nas clulas eletrolticas convencionais, predominar a reao com menor potencial de oxidao. Isto vai depender da composio do eletrodo, do material na soluo e da natureza do solvente.
Prova da ocorrncia de oxidao eletroqumica no capilar metlico
foi fornecida por Blades e colaboradores4,5. Estes usaram um capilar
de slica recoberta com um depsito de zinco como ponta do capilar.
Quando o potencial foi aplicado, ons Zn2+ foram detectados. Resultados similares foram obtidos usando capilares de cido inoxidvel,
quando ons Fe2+ foram detectados.
O processo eletroqumico poder ter uma influncia desprezvel
no espectro de massas da espcie em estudo. Por exemplo, no caso
da maior parte dos estudos conduzidos por electrospray estudos
de biomolculas como peptdeos, protenas e oligonucleotdoes ,
as alteraes eletroqumicas sobre estas espcies so desprezveis
porque normalmente outras espcies comuns no sistema como
eletrlitos, o metal do capilar e o prprio solvente sofrem muito
mais facilmente o processo redox6-8. O mesmo tambm ocorre se, ao
invs de aplicar o potencial diretamente no capilar, for utilizado um
eletrodo imerso no reservatrio da soluo. Neste caso, devido ao
grande volume de soluo comparado com a pequena extenso das
transformaes eletrdicas, h uma diluio das espcies transformadas e pequena ou nenhuma alterao no espectro de massas acaba
sendo observada.
DESSOLVATAO DAS GOTAS
Depois da liberao das gotas com alta densidade de carga do
cone de Taylor, estas passam pela regio entre a ponta do capilar e o
contra eletrodo e vo sofrendo dessolvatao. A evaporao do
solvente favorecida pela energia trmica do ambiente e pelo auxlio de um gs secante, normalmente nitrognio. Conforme a gota
perde solvente, a densidade de carga aumenta at um ponto em que
as foras de repulso vencem a tenso superficial e gotculas so
liberadas pela fisso da gota inicial.
A carga mxima Q que uma gota de raio R pode manter antes de
se fragmentar fornecida pela Equao 5.
Q = 8 . (0 . . R3)1/2
(5)
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Moraes e Lago
Figura 2. Representao esquemtica do processo de produo das microgotas por electrospray. Os valores so resultados de simulaes realizadas
por Kebarle e Tang30 e devem ser entendidos apenas como indicativos da
ordem de grandeza daqueles que realmente ocorrem. As setas em branco
indicam a evaporao; o tempo marcado sobre elas aquele necessrio
para que o dimetro seja reduzido at o ponto em que a fisso da gota
ocorre (indicado pela seta preta). Os valores numricos junto s gotas
referem-se ao nmero de cargas (ctions ou nions) em excesso. No caso
das gotculas, o nmero de cargas de cada uma est indicado ao lado do
conjunto. O resultado da fisso sempre uma gota principal e vrias outras
de pequeno tamanho. Deve-se notar que, aps uma reduo inicial do
dimetro da gota at o ponto de ocorrncia da primeira fisso, as sucessivas
fisses ocorrem em escala de tempo semelhante, gerando partculas com
dimenses sucessivamente menores. O quadro em destaque mostra que o
processo de fisso tambm ocorre com as gotas menores. No caso,
apresentado o processo de fisso gerando gotculas com dimetro da ordem
de 6 nm e duas cargas em excesso. Considerando, por exemplo, que o
dimetro de um on sulfato hidratado da ordem de 0,4 nm, nota-se que,
aps poucas fisses, as gotas j atingem o nvel molecular
Quim. Nova
mecanismo foi proposto por Dole em 1968 e foi denominado modelo da carga residual (CRM)1.
O outro mecanismo foi proposto por Thomson e Iribarne modelo da evaporao do on (IEM)11,12 e sugere que a emisso dos
ons ocorre diretamente de gotas muito pequenas e altamente carregadas. Para comear a ocorrer este processo, a gota precisa ter um
raio de 8 nm e 70 cargas aproximadamente. Nestas condies, a gota
no sofre ruptura mas pode emitir ons para a fase gasosa. Assim, a
gota no precisaria atingir tamanhos to pequenos como 1 nm e podem existir outros solutos.
O IEM foi proposto porque, em espectros de solues 1 mmol/L
de NaCl em metanol:gua, o nico on detectado foi Na+ e espcies
solvatadas. ons como Nan(NaCl)n+m, que deveriam ser formados caso
o modelo CRM ocorresse, no foram observados em seus experimentos. Somente espcies solvatadas, protonadas e ons livres foram detectados. No entanto, os experimentos de Wang e Cole mostraram a existncia de ons como Cs+ e Cs(CsCl)+ em uma soluo
50:50 gua:metanol13. ainda provvel que ambos os processos estejam ocorrendo simultaneamente.
DISSOCIAO INDUZIDA POR COLISO
Depois de formado, o on alcana a regio do capilar ou cone de
amostragem que tem um orifcio bem pequeno (da ordem de poucos
micrometros). A partir da, o sistema passa para a regio de baixa
presso. Na entrada, h um conjunto de lentes que conduzem os ons
ao analisador de massas (Figura 1). O sistema de bombas e tica
varia conforme o produtor do espectrmetro. A regio entre o capilar ou cone de amostragem, o skimmer e as lentes muito importante, pois nesta regio pode ocorrer dissociao induzida por coliso (CID).
Esta regio contm ons formados no electrospray e o gs
secante (nitrognio). Como h um campo eltrico, os ons so acelerados provocando a coliso entre estes e as molculas do gs secante.
Assim, por exemplo, se um on solvatado entrar nesta regio ele pode
kA[A ]
IA = f . p . I .
kA[A+] + kB[B +]
(6)
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dessolvatao eficiente para gerar os ons na fase gasosa. Diminuio do fluxo de amostra e aumento da condutividade so dois
parmetros que permitem obter gotas menores, aumentando a eficincia da dessolvatao.
A supresso do on devido competio entre os ligantes pelo
tomo central pode ser observada na Figura 4. Esta figura mostra o
estudo14 de supresso usando solues com concentrao constante,
100 mmol/L, de Zn(NO3)2 e diferentes concentraes de iodeto, que
variaram de 10 mol/L a 10 mmol/L. Quando o iodeto est numa
concentrao inferior a 100 mol/L, a espcie favorecida o complexo Zn(NO3)3 , com o aumento da concentrao de iodeto h um
favorecimento da espcie ZnI3.
DESCARGA CORONA
Um dos principais problemas enfrentados para se obter uma corrente constante de ons a ocorrncia de descarga corona, principalmente no modo de operao para ons negativos. O efeito de descarga corona ocorre quando eltrons livres presentes no gs so acelerados a uma velocidade suficiente para ionizar molculas de gases
presentes na cmara de ionizao, provocando a ionizao destas e
gerando ons como CH3O a partir do metanol e O2 do ar. A descarga
corona diminui a intensidade dos ons do analito e os picos correspondentes s espcies geradas pela descarga aparecem com uma intensidade muito alta. A presena de espcies que capturam eltrons,
como os gases O2, SF6 e os hidrocarbonetos policlorados, inibem a
descarga corona1. A Figura 5 ilustra este problema. O on de m/z 32
(Figura 5a) indica a ocorrncia de descarga corona. Este espectro foi
obtido de uma soluo 100 mol/L de NaNO 3 e NaCl em
metanol:gua 50:50 (v/v) e com uma tenso de 4 kV aplicada no
capilar. A Figura 5b mostra o espectro da mesma soluo obtida com
a tenso no capilar em 2 kV, onde no se observa a formao de
espcies caractersticas da descarga corona. Alm disto, pode-se observar na Figura 5a que h uma supresso do sinal do NO3 e do Cl
comparativamente ao espectro da Figura 5b.
TRANSFORMAES QUMICAS DOS ONS PRESENTES
NA GOTA CARREGADA DURANTE O PROCESSO DE
ELECTROSPRAY
primeira vista, o electrospray deveria ser a tcnica ideal para
se fazer especiao. Bastaria controlar os eletrlitos presentes na
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Quim. Nova
do metal permanea o mesmo, tais reaes podem conduzir formao de espcies diferentes daquelas encontradas na fase aquosa. Assim, difcil observar na fase gasosa ons metlicos livres com cargas +3 ou +2, a no ser que o on esteja complexado.
Alm disto, a observao de ons com mltiplas cargas depender tambm do tipo de solvente utilizado. Lantandeos com carga +3
s podem ser observados com solventes como dimetilsulfxido
(DMSO) e dimetilformamida3-5. Cu(II) tende a sofrer reduo na
presena de solues preparadas com acetonitrila como solvente.
ALGUMAS APLICAES DE ES-MS PARA ESPCIES
INORGNICAS E ORGANOMETLICAS
(7)
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trao do analito e de outros eletrlitos presentes na soluo e a influncia dos parmetros de formao do spray na intensidade do sinal
e na composio dos ons gerados. Os experimentos de Horlick e Agnes
concordam com os experimentos de Kebarle e Tang e com a teoria por
eles desenvolvida (Equao 6). Estes mostraram que a formao de
ons por electrospray s gerada dentro de um mnimo de condutividade. Isto , necessria uma quantidade mnima de eletrlito na
soluo para a formao de um electrospray estvel. No entanto,
isto pode suprimir a ionizao da espcie de interesse. Por exemplo,
entre as espcies I e Cl , a primeira apresenta uma sensibilidade muito maior. A quantificao e especiao das espcies por electrospray
esto diretamente relacionadas com a supresso do sinal e respostas
relativas das intensidades das espcies presentes na soluo. As diferentes espcies presentes na soluo, o analito, o solvente e as impurezas, podem vir a ter um comportamento completamente diferente do
esperado, durante a formao do spray, como sofrer processos de
oxi-reduo, agregao, fragmentao e supresso.
Recentemente, diferentes trabalhos vm sendo publicados onde
os autores demonstram a possibilidade de fazer especiao utilizando condies brandas no electrospray16-18,20. No entanto, tm-se
observado que h algumas dificuldades. Obter ons estveis com mltiplas cargas no electrospray no uma tarefa fcil. Mesmo ons
como [Fe(CN)6]4- e [Fe(CN)6]3- que em fase lquida permitem a estabilizao do ferro nos estados de oxidao II e III, apresentaram, em
fase gasosa, predominantemente espcies com uma carga com o ferro em diferentes estados de oxidao: I, II, III e IV32. A especiao
por electrospray favorecida no caso de complexos volumosos e
com mltiplas insaturaes, o que ajuda a acomodar cargas maiores.
A ionizao por electrospray de complexos pequenos e monoatmicos, ao contrrio dos complexos volumosos, sofre grande influncia dos processos eletroqumicos.
Raymond e colaboradores33 demonstraram a possibilidade de
utilizar o electrospray para identificao de espcies de poliselenetos em solues aquosas. Orians estudou a especiao de complexos de diferentes metais com ligantes orgnicos. Por exemplo, no
caso do complexo de cobre com a 8-hidroxiquinolina, estes mostraram que em solues metanlicas a espcie predominante o complexo com Cu(II). No entanto, quando o solvente usado foi
acetonitrila, a espcie predominante o complexo com Cu(I)20.
O processo eletroqumico poder ter uma influncia desprezvel
no espectro de massas se os ons produzidos, consumidos, ou alterados pelo processo eletroqumico no so convertidos para a fase gasosa. No entanto, como discutido por Van Berkel34, Fernandez de La
Mora6 e outros22,23, o processo eletroqumico pode ter importncia
crucial em alguns estudos. Como na especiao de solues de complexos metlicos que sofrem facilmente processos de oxi-reduo.
Van Berkel34 e Moraes e colaboradores14 observaram que, durante o processo de electrospray usando-se um capilar de ao inoxidvel, no modo ons negativos, pode haver reduo do metal no capilar metlico. Isto tem duas conseqncias negativas: (1) alterao
do estado de oxidao da espcie podendo inibir ou at impedir a
sua deteco e (2) efeito de memria. Como o metal reduzido e
depositado no capilar, ao mudar a soluo necessrio um longo
tempo passando-se o solvente, com a polaridade positiva, para a limpeza do mesmo. O uso de um simples capilar de slica fundida ao
invs do capilar de ao inoxidvel minimiza de forma significativa o
processo de reduo e o efeito de memria14,35,36 .
Alm deste fenmeno, outros processos durante o electrospray
podem provocar alteraes eletroqumicas na soluo. Dependendo
da tenso aplicada no cone de amostragem, alguns estados de oxidao so observados14.
Um exemplo onde o estado de oxidao do metal no foi alterado devido formao do electrospray pode ser ilustrado pelo estu-
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[H2Pcs2]
[H2Pcs2Na ][Dy(Pcs2)2H2]3[Dy(Pcs2)2H3]2[Dy(Pcs2)2HNa2]2-
m/z
336,1
359,1
502,3
753,5
764,4
Um exemplo contrrio o estudo realizado por Prada e colaboradores38 para a determinao da composio e especiao de complexos do agente quelante di-2-piridilcetonabenzoilidrazona
(DPKBH) com ons de Cu(II), Fe(II) e Fe(III). Estes estudos mostraram que a composio do complexo Cu(II)/DPKBH 1:2 metal/
ligante. Os ons de m/z 667 e 669 indicam a presena do complexo
com Cu(II) protonado, [Cu(DPKBH)2H]+. Alm disto, foi possvel
observar os ons de m/z 666 e 668 que indicam a formao do complexo com Cu(III), [Cu(DPKBH)2]+. A oxidao do Cu(II) a Cu(III)
pode estar ocorrendo durante a dessolvatao das gotas no processo
de ionizao. O mesmo comportamento foi observado para o espectro com Fe(II), com a formao de [Fe II (DPKBH) 2 H] + e
[FeII(DPKBH)2]+ (Figura 6). Para o complexo com Fe(III), somente
o cluster de picos respectivos a [FeIII(DPKBH)2]+ foi observado. Estas espcies indicam a labilidade do complexo, uma vez que os espectros foram obtidos a baixas tenses do cone, quando no h
favorecimento de dissociao por CID38. Apesar das estruturas destes compostos serem volumosas e apresentarem um nmero de stios
que poderiam estabilizar a carga do complexo, o metal sofreu alterao do seu estado de oxidao. Na fase aquosa, seriam esperados
somente os complexos com Cu(II).
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CONCLUSES
ES-MS uma tcnica bastante conveniente para estudos de compostos pouco volteis. Embora, em geral, os ons pr-existentes em
fase lquida sejam observados atravs dos espectros, outros podem
ser produzidos durante o electrospray. O surgimento destas novas
espcies dependente da composio da soluo solvente, pH,
presena de espcies ligantes e supressores e das condies da
fonte de electrospray tenses no capilar, contra-eletrodo e lentes
e vazes dos gases. Estes fatores devem ser cuidadosamente considerados j que estas alteraes costumam levar a uma interpretao
equivocada da composio da soluo original.
A tcnica de ionizao por electrospray apresenta uma enorme versatilidade e uma importante ferramenta nos mais variados
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