Avaliação Ultra-Sonográfica e Perfil Hormonal

Ian Martin
Avaliao ultra-sonogrfica, perfil hormonal e

imunoistoqumica de receptores de estrgeno e
progesterona durante o ciclo estral em vacas Nelore
(Bos taurus indicus)
Botucatu SP
2005
Ian Martin
Avaliao ultra-sonogrfica, perfil hormonal e

imunoistoqumica de receptores de estrgeno e progesterona
durante o ciclo estral em vacas Nelore (Bos taurus indicus)
Dissertao apresentada Faculdade de Medicina Veterinria

e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista Jlio de
Mesquita Filho, Campus de Botucatu, para obteno do ttulo
de Mestre em Medicina Veterinria, rea de Concentrao
Reproduo Animal
Orientador: Prof. Ass. Dr. Joo Carlos Pinheiro Ferreira
Botucatu SP
2005
FICHA CATALOGRFICA ELABORADA PELA SEO TCNICA DE AQUISIO E TRATAMENTO

DA INFORMAO
DIVISO TCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAO - CAMPUS DE BOTUCATU - UNESP
BIBLIOTECRIA RESPONSVEL: SELMA MARIA DE JESUS
Martin, Ian.
Avaliao ultra-sonogrfica, perfil hormonal e imunoistoqumica de
receptores de estrgeno e progesterona durante o ciclo estral em vacas Nelore
(Bos taurus indicus) / Ian Martin. 2005.
Dissertao (mestrado) Universidade Estadual Paulista, Faculdade de
Medicina Veterinria e Zootecnia, Botucatu, 2005.
Orientador: Joo Carlos Pinheiro Ferreira
Assunto CAPES: 50504002
1. Bovino - Reproduo
CDD 636.208982
Palavras-chave: Ciclo estral; Imunoistoqumica; Nelore; Receptores hormonais; Ultra-sonografia
O valor das coisas no est no tempo em que elas

duram, mas na intensidade com que acontecem. Por isso
existem momentos inesquecveis, coisas inexplicveis e
pessoas incomparveis.
(Fernando Pessoa)
DEDICATRIA
Aos meus pais Miriam e Immo que sempre

apiam e patrocinam todos os meus sonhos...
Ao meu irmo Gunnar pelo

orgulho e respeito que tem por mim.
A toda a minha famlia, avs, tios, primos e em especial

a minha av Hilda pelo imenso amor e carinho....
AGRADECIMENTOS
Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade Estadual

Paulista Campus de Botucatu, ao Departamento de Reproduo Animal e Radiologia
Veterinria e a Seo de Ps-graduao pela oportunidade concedida.
Ao Prof. Ass. Dr. Joo Carlos Pinheiro Ferreira pela orientao, amizade,
pacincia e incentivo durante estes vrios anos de convivncia, e por suportar minhas chatices
e manias....OBRIGADO!!!
Aos docentes do Departamento de Reproduo Animal e Radiologia Veterinria,

Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga, Marco Antnio Alvarenga, Cezinande de Meira e
Sony Dimas Bicudo pela agradvel convivncia e conselhos sempre to oportunos para a
realizao deste trabalho.
Ao Prof Dr Nereu Carlos Prestes, meu orientador do tempo de residente.
Profa Dra Maria Denise Lopes pelos costumeiros conselhos, pela sua
espontaneidade marcante, pela ateno sempre destinada a ns ps-graduandos.
Ao Prof Dr Frederico Ozanam Papa pelo aprendizado constante, pelas risadas,

pelas tantas viagens, pelas oportunidades nicas e pelo emprstimo do Analisador de Imagem
imprescindvel para a realizao deste trabalho.
Profa Dra Eunice Oba pela co-orientao ainda quando graduando, pelo
emprstimo do aparelho de ultra-sonografia, vital para a realizao desse trabalho, pelo uso do
Laboratrio de Endocrinologia e pelos ensinamentos passados ao longo desses anos.
Profa Dra Rene Laufer Amorim pela realizao da tcnica de

imunoistoqumica, por me receber de forma to amigvel em seu laboratrio, e pelas tantas
vezes em que suas palavras me encorajaram e serviram de estmulo. Aos seus orientados
Rafael Torres Neto e Marcela pelo auxlio na realizao dos cortes histolgicos e da tcnica
de imunoistoqumica.
rika Gulfe e ao Prof. Cludio Alvarenga de Oliveira, do Laboratrio de
Dosagens Hormonais - LDH do Departamento de Reproduo Animal da Universidade de
So Paulo USP, pelo auxlio nas dosagens de 17-estradiol.
Ao Prof. Dr. Jos Buratini Jr. e aos seus orientados Isabela Bazzo, Anthony
Castilho, Paula Baloni e Ins Giometti pela realizao da tcnica de RT-PCR (no inclusa
nesta dissertao) e pelos inmeros momentos de descontrao durante os interminveis
PCRs.
Ao Prof. Dr. Mario Binelli e a Cludia Bertan pela realizao das dosagens
plasmticas de PGFM (tambm no inclusas nesta dissertao).
Ao Prof. Ass. Dr. Francisco S. Weschler do Departamento de Produo e

Explorao Animal, pela realizao das anlises estatsticas.... por dar sentido a
complexidades dos fundos vaginais, espiralizaes uterinas e tantas outras variveis...
Ao Sr. Joo Ratti da Fazenda Experimental So Manuel, pelo emprstimo dos

animais e ao Prof. Mario De Beni Arrigoni do Departamento de Produo e Explorao
Animal, pelo alojamento dos animais no Confinamento Experimental.
Aos colegas ps-graduandos Marilu e Adriano e aos graduandos Rogrio, Thiago

e Lus Fernando, pelo imprescindvel auxlio na realizao da parte experimental deste
trabalho.
As minhas orientadas de iniciao cientfica Maria Clara Costa Mattos e

Rosira Rosria Dias Maziero pelas tantas vezes em que rimos juntos, pela contribuio
mtua em nossos trabalhos e por me atormentarem sempre... continuem assim!!!
amiga Luciana da Silva Leal pela amizade sincera e pelas horas interminveis
de conversa.
amiga Cely Marini Melo pela pacincia e carinho dedicados a mim e por
demonstrar sua amizade nos momentos em que mais preciso.
Cssia e Ana Izabel por se mostrarem novas e grandes amigas.
Aos colegas e amigos do curso de ps-graduao Letcia e Bigu, Viviane,

Fabiana, Bel, Jussara, Christianne, Fabola Carvalho, Maria Ins, Edmilson, Andr,
Claudinha, Carla Ponchirolli, Camila, Ellen, Joo, Henrique e Bi, Mrcio, Karen, Milena,
Alexandre, Gustavo e Carla Moya, Cssia, Juliana, Paola, Jorge, Z DellAqua, Karina e
Edinho, Marciane, Leandro, Daniel, Hymerson, Ana Izabel, Cristiane Rubio e Andr, pelos
momentos de descontrao.
s companheiras da poca de iniciao cientfica Christiane Rumi Irikura e

Lindsay Unno Gimenes pelas tantas descobertas realizadas conjuntamente e pela lembrana
eterna.
Aos colegas da XXXIV turma de Medicina Veterinria Unesp Botucatu por

tantos anos de convivncia, em especial aos amigos Daniel Altwegg, Marcelo Xavier, Paula
Yasumura, Juliana Chen, Mariana Hashizume, Joana Frota, Kelly Andrade, Audrey
Vaccari...entre tantos outros.
Aos funcionrios e amigos da Reproduo Animal Cristina, Walter, Edlson,

Marquinho, Miguel, Tico e Mrcio pela convivncia amigvel e ajuda sempre que necessria.
Fundao de Amparo Pesquisa - FAPESP pela bolsa e pelo auxlio financeiro

concedidos.
Fundao para Desenvolvimento da Unesp FUNDUNESP pelo auxlio

financeiro concedido.
A todos que contriburam para a realizao deste trabalho.

.
.
.
Luciana Batalha de Miranda pelo carinho, pela amizade e pelo amor dedicados
a mim; pelo brilho no olhar, pela alegria em seu sorriso; pelos momentos maravilhosos
que passamos e ainda vamos passar juntos; por ter a sorte e a felicidade de tua
companhia; por me ensinar a amar e a ter uma vida melhor; por ter me dado a coisa
mais importante da minha vida, meu filho; pela sua grandiosidade e por ser essa mulher
to maravilhosa... TE AMO. Aos nossos seis ces Nina, Chicria, Asterix, Panthro, Lyon
e Tutty Vasquez pelos uivos e latidos sempre to aguardados. Ao nosso filho Caio, por
dar uma nova razo a minha vida.
O Amor
O amor, quando se revela,
No se sabe revelar.
Sabe bem olhar p'ra ela,
Mas no lhe sabe falar.
Quem quer dizer o que sente
No sabe o que h de dizer.
Fala: parece que mente
Cala: parece esquecer
Ah, mas se ela adivinhasse,
Se pudesse ouvir o olhar,
E se um olhar lhe bastasse
Pr'a saber que a esto a amar!
Mas quem sente muito, cala;
Quem quer dizer quanto sente
Fica sem alma nem fala,
Fica s, inteiramente!
Mas se isto puder contar-lhe
O que no lhe ouso contar,
J no terei que falar-lhe
Porque lhe estou a falar... "
Fernando Pessoa
SUMRIO
Lista de Figuras
Lista de Tabelas
Resumo
Abstract
1. Introduo ..............................................................................................................
24
2. Reviso de literatura ...............................................................................................
27
2.1. Ciclo estral e crescimento folicular .....................................................................
28
2.2. Corpo lteo ..........................................................................................................
30
2.3. Palpao e ultra-sonografia transretal .................................................................
31
2.4. Endocrinologia ....................................................................................................
33
2.4.1. Estrgeno .........................................................................................................
33
2.4.2. Progesterona .....................................................................................................
36
2.5. Imunoistoqumica e receptores hormonais .........................................................
39
3. Objetivos ................................................................................................................
51
3.1. Objetivo geral ......................................................................................................
52
3.2. Objetivos especficos ..........................................................................................
52
4. Material e Mtodo ..................................................................................................
53
4.1. Animais ...............................................................................................................
54
4.2. Sincronizao dos animais ..................................................................................
54
4.3. Perodos experimentais .......................................................................................
54
4.4. Avaliaes dirias atravs de palpao e ultra-sonografia transretal ..................
55
4.5. Colheitas de sangue .............................................................................................
56
4.6. Dosagens hormonais de progesterona e estrgeno ..............................................
56
4.7. Colheitas de fragmentos uterinos ........................................................................
57
4.8. Deteco imunoistoqumica de receptores de estrgeno e progesterona ............
57
4.9. Anlise estatstica ................................................................................................
61
5. Resultados ..............................................................................................................
62
5.1. Intervalo interestro ..............................................................................................
63
5.2. Sincronizao do estro, dimetros dos folculos ovulatrios e do corpo lteo ...
64
5.3. Dosagens hormonais ...........................................................................................
65
5.4. Avaliaes por palpao transretal.......................................................................
69
5.4.1. Tnus uterino ...................................................................................................
69
5.4.2. Espessura uterina ..............................................................................................
71
5.5. Avaliaes ultra-sonogrficas .............................................................................
73
5.5.1. Coluna lquida em fundo vaginal .....................................................................
73
5.5.2. Coluna lquida nos cornos uterinos ..................................................................
75
5.5.3. Textura uterina .................................................................................................
77
5.5.4. Espiralizao uterina ........................................................................................
79
5.5.5. Dimetro dos cornos uterinos ..........................................................................
81
5.6. Imunoistoqumica ................................................................................................
87
5.6.1. Contagem dos ncleos positivos para receptor de progesterona ......................
87
5.6.2. Contagem dos ncleos positivos para receptor de estrgeno ...........................
89
5.6.3. Intensidade de marcao para os ncleos positivos para receptor de

progesterona ...............................................................................................................
92

estrgeno ....................................................................................................................
94
6. Discusso ...............................................................................................................
101
7. Concluses .............................................................................................................
111
8. Referncias .............................................................................................................
113
9. Apndice I ..............................................................................................................
132
10. Apndice II ...........................................................................................................
137
Lista de Figuras
Figura 01
Valores mdios (em dias) para o intervalos interestro nos grupos

controle, D0 e D13 .........................................................................
Figura 02
Valores mdios da concentrao plasmtica de progesterona

(ng/mL) ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13 .
Figura 03
85
Valores mdios (em cm) para o dimetro ventral dos cornos

uterinos ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13 ..
Figura 13
85
Valores mdios (em cm) para o dimetro cranial dos cornos

Figura 12
81
Valores mdios (em cm) para o dimetro dorsal dos cornos

Figura 11
79
Valores mdios do escore para a espiralizao uterina nos cornos

Figura 10
77
Valores mdios do escore para a textura uterina ao longo do

ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13 ....................................
Figura 09
75
Valores mdios do escore para a coluna lquida nos cornos

Figura 08
73
Valores mdios do escore para a coluna lquida em fundo vaginal

ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13 ................
Figura 07
71
Valores mdios do escore para a espessura uterina ao longo do

ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13 ....................................
Figura 06
68
Valores mdios do escore para o tnus uterino ao longo do ciclo

estral nos grupos controle, D0 e D13 ............................................
Figura 05
68
Valores mdios da concentrao plasmtica de 17-estradiol

(pg/mL) ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13 .
Figura 04
64
86
Valores mdios para a contagem relativa (%) dos ncleos

positivos para receptor de progesterona no epitlio glandular ao
longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13 ....................................
Figura 14
88

positivos para receptor de progesterona no estroma uterino ao
Figura 15
89
positivos para receptor de estrgeno no epitlio glandular ao

Figura 16
91

positivos para receptor de estrgeno no estroma uterino ao longo
do ciclo estral nos grupos D0 e D13 ..............................................
Figura 17
91
Valores mdios do escore para a intensidade de marcao dos

ncleos positivos para receptor de progesterona no epitlio
glandular ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13 ...............
Figura 18
93

ncleos positivos para receptor de progesterona no estroma
uterino ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13 ...................
Figura 19
94

ncleos positivos para receptor de estrgeno no epitlio
Figura 20
96

ncleos positivos para receptor de estrgeno no estroma uterino
ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13 ...............................
Figura 21
96
Marcao imunoistoqumica de receptores de progesterona no

epitlio glandular do endomtrio de vacas Nelore nos dias 0 (A),
5 (B), 9 (C), 13 (D) e 19 (E) do ciclo estral. Aumento de 1000X
Figura 22
97
Marcao imunoistoqumica de receptores de estrgeno no

epitlio glandular do endomtrio de vacas Nelore nos dias 0 (A),
5 (B), 9 (C), 13 (D) e 19 (E) do ciclo estral. Aumento de 1000X
Figura 23
98
Marcao imunoistoqumica de receptores de progesterona no

estroma uterino de vacas Nelore nos dias 0 (A), 5 (B), 9 (C), 13
(D) e 19 (E) do ciclo estral. Aumento de 1000X ..........................
Figura 24
99
Marcao imunoistoqumica de receptores de estrgeno no

estroma uterino de vacas Nelore nos dias 0 (A), 5 (B), 9 (C), 13
(D) e 19 (E) do ciclo estral. Aumento de 1000X ..........................
100
Lista de Tabelas
Tabela 01
Sistema de escore utilizado para classificar o dimetro da coluna

lquida nos cornos uterinos e fundo vaginal ..................................
55
Tabela 02
Sistema de escore utilizado para classificar a textura uterina .......
56
Tabela 03
Sistema de escore utilizado para codificar a intensidade de

imunomarcao ..............................................................................
Tabela 04
Valores mdios e desvios padro (em dias) para o intervalos

interestro nos grupos controle, D0 e D13 ......................................
Tabela 05
61
63
Valores mdios e desvios padro da concentrao plasmtica de

progesterona (ng/mL) ao longo do ciclo estral nos grupos
controle, D0 e D13 .........................................................................
Tabela 06
66
Valores mdios e desvios padro da concentrao plasmtica de

17-estradiol (pg/mL) ao longo do ciclo estral nos grupos
controle, D0 e D13 .........................................................................
Tabela 07
Valores mdios e desvios padro do escore para o tnus uterino

Tabela 08
70
Valores mdios e desvios padro do escore para a espessura

uterina ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13 ....
Tabela 09
67
72
Valores mdios e desvios padro do escore para a coluna lquida

em fundo vaginal ao longo do ciclo estral nos grupos controle,
D0 e D13 ........................................................................................
Tabela 10
74
Valores mdios e desvios padro do escore para a coluna lquida

nos cornos uterinos ao longo do ciclo estral nos grupos controle,
D0 e D13 ........................................................................................
Tabela 11
Valores mdios e desvios padro do escore para a textura uterina

Tabela 12
76
78
Valores mdios e desvios padro do escore para a espiralizao

uterina nos cornos uterinos ao longo do ciclo estral nos grupos
controle, D0 e D13 .........................................................................
Tabela 13
80
Valores mdios e desvios padro (em cm) para o dimetro dorsal

dos cornos uterinos ao longo do ciclo estral nos grupos controle,
D0 e D13 ........................................................................................
82
Tabela 14
Valores mdios e desvios padro (em cm) para o dimetro

cranial dos cornos uterinos ao longo do ciclo estral nos grupos
controle, D0 e D13 .........................................................................
Tabela 15
83
Valores mdios e desvios padro (em cm) para o dimetro

ventral dos cornos uterinos ao longo do ciclo estral nos grupos
controle, D0 e D13 .........................................................................
Tabela 16
84
Valores mdios e desvios padro para a contagem relativa (%)

dos ncleos positivos para receptor de progesterona no epitlio
Tabela 17
87

dos ncleos positivos para receptor de progesterona no estroma
Tabela 18
88

dos ncleos positivos para receptor de estrgeno no epitlio
Tabela 19
90

dos ncleos positivos para receptor de estrgeno no estroma
Tabela 20
90
Valores mdios e desvios padro do escore para a intensidade de

marcao dos ncleos positivos para receptor de progesterona no
epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13 ..
Tabela 21
92

marcao dos ncleos positivos para receptor de progesterona no
estroma uterino ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13 .....
Tabela 22
93

marcao dos ncleos positivos para receptor de estrgeno no
epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13 ..
Tabela 23
95

marcao dos ncleos positivos para receptor de estrgeno no
estroma uterino ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13 .....
95
RESUMO
Avaliao ultra-sonogrfica, perfil hormonal e imunoistoqumica de receptores de

estrgeno e progesterona durante o ciclo estral em vacas Nelore (Bos taurus indicus)
Trinta vacas Nelore foram submetidas sincronizao do estro com uma aplicao de
25 g de lecirelina, e sete dias mais tarde receberam 0,15 mg de D+Cloprostenol, ambas por via
intramuscular. As primeiras 16 que ovularam foram selecionadas e avaliadas diariamente por
palpao e ultra-sonografia transretal do aparelho reprodutor feminino e por colheitas de sangue.
Foram ainda realizadas colheitas de fragmentos endometriais nos dias 0, 5, 9, 13 e 19 do ciclo
estral para deteco de receptores de estrgeno e progesterona pela tcnica de imunoistoqumica.
Para esta anlise os animais foram divididos em 3 grupos, controle (sem colheita de bipsias,
n=8), D0 (com as colheitas se iniciando no dia da ovulao, n=4) e D13 (colheitas iniciadas no
dia 13 do ciclo estral, n=4). O intervalo interestro mdio foi de 23,80 2,70. As concentraes
plasmticas mdias de progesterona variaram de 0,06 ng/mL a 4,53 ng/mL e os valores se
modificaram ao longo do ciclo estral, apresentando-se diminudos durante o perodo
periovulatrio e elevados durante a fase luteal. As concentraes plasmticos mdias de 17estradiol variaram de 6,22 pg/mL a 14,10 pg/mL e no modificaram-se ao longo do ciclo estral.
Os resultados das avaliaes transretais demonstraram que o tnus e a espessura uterina se
modificaram ao longo do ciclo estral, apresentando-se elevados no perodo periovulatrio e
diminudos durante a fase progesternica. A ultra-sonografia transretal demonstrou que a
presena de coluna lquida no fundo vaginal e nos cornos uterinos variou durante o ciclo estral,
apresentando maior acmulo prximo ao estro e pequenas colees durante a fase progesternica,
contudo, os animais pertencentes ao grupo com colheita de fragmentos endometriais
apresentaram colees lquidas maiores durante a fase progesternica. A textura uterina variou ao
longo do ciclo estral sendo mais heterognea prximo ao momento periovulatrio e mais
homognea durante a fase progesternica. A espiralizao dos cornos uterinos modificou-se
durante o ciclo estral, e foi mxima durante a fase progesternica. As mensuraes do dimetro
dos cornos uterinos tambm se modificaram durante o ciclo estral, sendo observado um aumento
prximo fase estrognica e uma diminuio durante a fase luteal. A imunomarcao dos
receptores endometriais de progesterona e estrgeno no epitlio glandular e estroma uterino
demonstrou que as contagens de ncleos positivos para o receptor de progesterona e estrgeno
diferiram entre os grupos estudados e foram maiores no estroma. As contagens variaram ao longo
do ciclo estral para o receptor de estrgeno e no para o de progesterona. A intensidade de
marcao dos ncleos positivos para receptor de progesterona e estrgeno demonstrou variao
ao longo do ciclo estral, contudo, no variou entre os componentes tecidos estudados. Entre os
grupos, D13 apresentou maior intensidade de marcao para a progesterona, porm no houve
variao entre os grupos para a intensidade de marcao dos receptores de estrgeno. Os
resultados obtidos demonstraram que as variveis avaliadas por palpao e ultra-sonografia
transretal e a concentrao de receptores de progesterona e estrgeno variaram durante o ciclo
estral, demonstrando uma relao coordenada entre as modificaes dos hormnios esterides, a
dinmica dos receptores endometriais e as alteraes morfo-funcionais uterinas e ovarianas.
Palavras-chave: ciclo estral; imunoistoqumica; Nelore; receptores hormonais; ultra-sonografia
ABSTRACT
Ultrasound evaluation, hormone patterns and immunohistochemical detection of estrogen

and progesterone receptors throughout the estrous cycle in Nelore cows (Bos taurus indicus)
Thirty Nelore cows were submitted to estrus synchronization using a single

administration of lecirelina, at 25 g dosage and seven days later, D+ Cloprostenol at, 0.15 mg
being both administered intra-muscularly. The first 16 cows ovulating were selected and daily
evaluation was performed by rectal palpation and ultrasound of the female reproductive tract
followed by blood sampling. Endometrial samples were collected by biopsy at days 0, 5, 9, 13
and 19 of the estrous cycle to detect the presence of estrogen and progesterone receptors by
immunohistochemistry. The cows were distributed in 3 groups: control (without endometrial
sampling, n=8), D0 (sampling initiated at the day of ovulation, n=4) and D13 (sampling initiated
at day 13 of the estrous cycle, n=4). The mean inter-estrus interval was 23.80 2.70. The
progesterone plasma mean concentrations ranged from 0.06 ng/mL to 4.53 ng/mL, decreasing
throughout the cycle and reaching the lowest value close to ovulation. The pattern was
characterized by increasing values during the luteal phase.
The estradiol 17- mean
concentrations ranged from 6.22 pg/mL to 14.10 pg/mL and these values did not change
throughout the estrous cycle. The results obtained by the rectal palpation revealed that the uterine
tone and thickness were changing throughout the estrous cycle, being elevated during the period
close to ovulation, and they were decreased during the progesterone phase. The ultrasound
demonstrates that the amount of fluid content on the cranial vaginal compartment and in the
uterine horn lumen was modified throughout the cycle. The largest amount of fluid was observed
during the closest period to estrus and small fluid accumulation was observed during the
progesterone phase. However, cows that were submitted to endometrial sampling presented more
fluid during the progesterone phase. The uterine thickness varied throughout the estrous cycle,
being more heterogeneous close to ovulation and more homogeneous during the progesterone
phase. The coiled aspect of the uterine horns was variable throughout the estrous cycle, reaching
a maximum degree during the progesterone phase. The measurements from the uterine horn
diameters changed during the estrous cycle showing increased diameter close to the estrogenic
phase and a decrease during the luteal phase. The immunolocalization of the endometrial
receptors for progesterone and estrogen at the glandular epithelium and at the uterine stromal
surface showed a different number of positive nuclear counts among the studied groups. And the
stromal surface presented the highest number of positive nuclear count. The numbers observed
by the mentioned technique were variable throughout the estrous cycle for estrogen receptors but
not for progesterone receptors. The intensity of positive nuclear material for progesterone and
estrogen receptor was variable throughout the estrous cycle, but not between the tissue
components studied. The D13 group presented the highest intensity for progesterone; however
there was no variation among groups for estrogen receptors. The obtained results demonstrate
that the evaluated variables determined by rectal palpation, ultrasound, progesterone and estrogen
receptor concentrations were variable throughout the estrous cycle. In conclusion, a relationship
of changes occurring on steroid hormone concentrations, endometrial receptor dynamics,
morphological and functional modifications of uterine and ovary has been demonstrated by the
present study.
Key- words: estrous cycle; immunohistochemistry; Nelore; hormone receptors; ultrasound
1. Introduo
classicamente estabelecido que os processos reprodutivos em mamferos so
orquestrados principalmente pelos hormnios ovarianos que atuam ciclicamente sobre os
diferentes tecidos do sistema reprodutor feminino. A ao cclica destes hormnios sobre o
tero faz deste rgo um sistema biolgico extraordinariamente dinmico cuja morfologia e
funo variam ao longo do ciclo estral.
O rebanho bovino brasileiro composto por aproximadamente 152 milhes de
cabeas (ANUALPEC, 2000), sendo que 80% so Zebunos e destes, cerca de 100 milhes
so anelorados. O Zebu tem alta tolerncia ao clima tropical (adaptabilidade e rusticidade),
boa resistncia aos endo e ectoparasitas, estrutura fsica que lhe proporciona facilidade de
locomoo, alm de excelente habilidade materna. A despeito destas caractersticas, os
animais Bos taurus indicus normalmente apresentam um menor potencial para a produo de
leite e carne (Mukasa-Mugerwa, 1989) e uma fertilidade inferior ao Bos taurus taurus
(Dobson et al., 1986; Lamonthe-Zavaleta et al., 1991).
A literatura demonstra que existem importantes diferenas na fisiologia e no
comportamento reprodutivo entre Bos taurus taurus e Bos taurus indicus. A dinmica de
crescimento folicular no Bos taurus indicus caracterizada pela ocorrncia de 2 ou 3 ondas de
crescimento folicular durante o ciclo estral (Rhodes et al., 1995; Figueiredo et al., 1997), as
quais so similares s relatadas para raas europias (Savio et al., 1988; Sirois et al., 1988). A
despeito da similaridade no padro de dinmica folicular, as fmeas Bos taurus indicus e Bos
taurus taurus diferem em outros aspectos de sua fisiologia reprodutiva. O folculo dominante
e corpo lteo foram descritos como menores e a durao do estro foi mais curta em Nelore do
que em raas europias (Figueiredo et al., 1997; Pinheiro et al.,1998). Os ovrios de novilhas
Bos taurus indicus apresentam maior nmero de folculos menores que 5,0 mm em dimetro e
menos folculos maiores que 5,0 mm comparados com ovrios de novilhas Bos taurus taurus
(Segerson et al., 1984; Buratini, 1999). Em novilhas Nelore, no momento da seleo (desvio
ou divergncia) folicular, o dimetro do futuro folculo menor (5,8 mm) do que o relatado
para novilhas da raa Holandesa (8,5mm) (Sartorelli, 2003).
Ainda quanto estas subespcies algumas diferenas endocrinolgicas tambm tm
sido relatadas. Os resultados de vrios estudos sugerem que o gado Zebu apresenta menor
capacidade de secreo de LH em relao s raas europias (Griffin et al.,1978; Rhodes et
________________________________________________________________________ 25
________Introduo
al., 1978); quanto aos hormnios esterides, os nveis circulantes de estradiol e de

progesterona (em fmeas Zebu) mostram-se inferiores aos observados nas raas europias
(Randel, 1984; Segerson et al., 1984).
Outra caracterstica da fmea Zebuna a curta durao do estro (cerca de 11
horas) que, associada alta incidncia de cios noturnos, cerca de 30 a 50% segundo Barros et
al. (1995) e Pinheiro et al. (1998), dificultam a deteco do cio e prejudicam a implantao de
programas convencionais de inseminao artificial.
Os receptores de estrgeno e progesterona parecem ser importantes para a
modulao de vrios eventos no ciclo estral bovino, uma vez que as aes dos hormnios
esterides so ditadas pela concentrao de seus receptores nos diferentes rgos alvo (Jensen
et al., 1968; Mangelsdorf et al., 1995; Razandi et al., 1999; Mowa & Iwanga, 2000a,b). Como
exemplo h os mecanismos desencadeadores da lutelise, que aparentam estar relacionadas
aos esterides ovarianos e a modulao de seus receptores no endomtrio (McCracken et al.,
1984; Zollers et al., 1993; Lamming & Mann, 1995; Spencer et al., 1995; Wathes &
Lamming, 1995; Bertan, 2004).
O uso das biotecnologias em bovinos tem trazido grande avano para a produo
agropecuria nos ltimos anos. A inseminao artificial, a transferncia de embries e a
manipulao artificial da funo ovariana so utilizadas em todo o mundo para reproduzir
animais de alto valor gentico (Adams et al., 1994; Bo et al., 1995), contudo, esse avano
depende de conhecimento fisiolgico. Desta forma, estudos que visam um maior
conhecimento da fisiologia propiciam um desenvolvimento da biotecnologia reprodutiva e,
assim, favorecem a multiplicao de uma gentica superior. Pelo exposto, pretende-se estudar
a fisiologia reprodutiva de animais da raa Nelore (Bos taurus indicus), com nfase na
modulao dos receptores hormonais de progesterona e estrgeno durante o ciclo estral.
2. Reviso de Literatura
2.1. Ciclo estral e crescimento folicular

Os bovinos so animais polistricos anuais, nos quais o estro ocorre em intervalos
mdios de 20 dias para novilhas e 22 dias para vacas (McDonald, 1989). O proestro dura
cerca de dois dias, e o estro de 14 a 18 horas em vacas taurinas e ao redor de 11 horas em
zebunas (Barros et al., 1992). O metaestro tem durao de aproximadamente trs dias. O
corpo lteo se mantm funcional at por volta do dia 17 do ciclo e a ovulao ocorre de 12 a
16 horas aps o final do estro (McDonald, 1989).
O perodo compreendido entre dois episdios de estro denominado ciclo estral.
Em fmeas bovinas, a durao do ciclo estral varia de 17 a 25 dias (Sirois & Fortune, 1988;
Lamonthe-Zavaleta et al., 1991), sendo relatado um pequeno numero de ciclos com durao
superior a 25 dias (Wishart, 1972).
Nos bovinos cada ciclo estral apresenta duas ou trs ondas de crescimento
folicular, (Ireland & Roche, 1987; Pierson & Ginther, 1988; Savio et al., 1988; Sirois &
Fortune, 1988; Ginther et al., 1989a; Ginther et al., 1989d; Knopf et al., 1989) e,
esporadicamente, uma ou quatro (Savio et al., 1988; Sirois & Fortune, 1988; Murphy et al.,
1990; Burke et al., 1994; Mapletoft & Pierson, 1994; Rhodes et al., 1995b; Figueiredo et al.,
1997). Entretanto, existe uma concordncia de que o nmero de ondas durante o ciclo estral
est relacionada sua durao. Animais que apresentam uma fase lutenica maior e,
conseqentemente, maior intervalo entre as ovulaes, apresentam maior nmero de ondas de
crescimento folicular.
Uma onda folicular ocorre, aproximadamente, em intervalos de dez dias (seis a
quinze dias de variao) (Adams et al., 1992a; Adams et al., 1992b; Hamilton et al., 1992;
Suderland et al., 1994; Gong et al., 1995; Ginther et al., 1996; Wiltbank et al., 1996). A cada
onda folicular, um grupo de folculos recrutado e inicia o crescimento, sob influncia do
hormnio folculo estimulante (FSH), at que um se destaque e se torne o folculo dominante.
Estabelecido o folculo dominante, este continua o seu desenvolvimento enquanto os demais
folculos da mesma onda entram em atresia (Bao & Garverick, 1998; Reichenbach et al.,
2001).
Em vacas Nelore foi observado o predomnio de duas ondas de crescimento
folicular, ao passo que em vacas Gir e novilhas Nelore ou Brahman a ocorrncia de trs ondas
28
foi mais freqente (Barros et al., 1995; Rhodes et al., 1995a; Figueiredo et al., 1997; Gambini
et al., 1998).
Segundo Kastelic et al., (1990), o destino do folculo dominante que atinge o
tamanho mximo durante a fase lutenica do ciclo e dos folculos subordinados, a atresia.
Porm, se a lutelise ocorre durante a fase de crescimento ou estgio de plat inicial do
folculo dominante, ele sofre rpida maturao pr-ovulatria e pode ovular. Conforme
DOcchio et al. (1990), na presena de um corpo lteo, ou seja, sob altos nveis de
progesterona, o folculo dominante permanece funcional por vrios dias aps alcanar o seu
tamanho mximo, mas depois sofre atresia. A perda da funcionalidade deste folculo resulta
em um aumento transitrio do FSH plasmtico, o qual induz a emergncia de uma nova onda
folicular. Este padro de crescimento em ondas repetido at que um folculo dominante
esteja presente quando da lutelise e, portanto, com baixos nveis de progesterona, o que faz
com que se torne capaz de ovular (Lucy et al., 1992). Isto marca o incio da fase folicular, e o
crescimento do folculo dominante define a passagem para o estgio pr-ovulatrio (DOcchio
et al., 1990).
Em ciclos estrais de duas ondas, a maturao do segundo folculo dominante
coincide com a regresso do corpo lteo, o que permite sua ovulao (Savio et al., 1988;
Sirois & Fortune, 1988; Taylor & Rajamahendran, 1991). Por sua vez, em ciclos de trs
ondas, o segundo folculo dominante regride permitindo a emergncia de uma terceira onda
folicular. Quanto ao intervalo mdio entre as ovulaes, este mais curto para ciclos com
duas ondas (ao redor de 20 dias), quando comparado a ciclos de trs ondas de crescimento
folicular (cerca de 23 dias), tanto para raas europias (Ginther et al., 1989a) como para
zebunas (Figueiredo et al., 1997).
Sirois et al. (1988) e Ginther et al. (1989c) evidenciaram que vacas com duas
ondas de crescimento folicular apresentaram diferenas na taxa de crescimento entre o
primeiro e o segundo folculo dominante. O segundo cresce em maior perodo de tempo e
com menores taxas dirias. Burke et al. (1994) estudando em novilhas o efeito da elevao
prematura da concentrao de progesterona desde o primeiro dia do ciclo, observaram que ela
causou diminuio no dimetro mximo do folculo dominante da primeira onda quando
comparado com o grupo controle. Ginther et al. (1989a) tambm estudaram o crescimento
folicular e observaram diferenas quanto ao dimetro do folculo pr-ovulatrio em novilhas
holandesas, em ciclos de duas e trs ondas, sendo esses 16,5 0,4 e 13,9 0,4,
respectivamente, e tambm para o intervalo entre a emergncia folicular e ovulao (10,6
0,2 e 6,8 0,6 dias para duas e trs ondas, respectivamente).
29
Um dos mecanismos essenciais para o desvio (incio da maior diferena nas taxas
de crescimento entre os dois maiores folculos da onda) a diminuio da concentrao
plasmtica de FSH (Ginther et al., 1999). A capacidade do folculo dominante em continuar
crescendo aps o declnio da concentrao de FSH pode ser decorrente do aumento da
biodisponibilidade do IGF-1 (fator de crescimento semelhante insulina tipo I) no folculo, da
expresso do RNA mensageiro do receptor de LH (hormnio luteinizante) ou da expresso de
receptores de LH nas clulas da granulosa, que conferem maior responsividade ao LH em
relao aos folculos menores (Crowe, 1999).
Com relao ao dimetro dos folculos ovulatrios, este tem sido relatado com
valores ao redor de 11 a 13 mm em vacas Nelore (Figueiredo et al., 1997), diferindo de
medidas entre 15 e 20 mm observados em novilhas (Savio et al., 1988; Ginther et al., 1989a;
Knopf et al., 1989) e vacas (Murphy et al., 1990; Taylor & Rajamahendran, 1991) de raas
europias. Entretanto, em estudo comparativo entre vacas das raas Nelore (zebuno) e Angus
(taurino) criadas no Estado de So Paulo, Mizuta (2003) observou que o dimetro dos
folculos pr-ovulatrios destes animais no diferiram significativamente entre si.
2.2. Corpo lteo

Segundo Fields & Fields (1996) o corpo lteo formado a partir da hiperplasia e
diferenciao das clulas da granulosa e da teca do folculo ovulatrio. uma estrutura
primariamente reconhecida pela habilidade em sintetizar e secretar progesterona, hormnio
que est intimamente relacionado com a manuteno de um ambiente adequado ao
desenvolvimento embrionrio e manuteno do prprio corpo lteo durante o perodo da
ovulao implantao, quando ocorre o reconhecimento materno da gestao (Fields &
Fields, 1996). Existem evidncias de que o corpo lteo de animais Bos taurus indicus produz
menos progesterona do que o de fmeas Bos taurus taurus (Randel, 1989). Segundo Segerson
et al., (1984) fmeas zebunas apresentaram corpos lteos menores com menor concentrao
de progesterona por grama de tecido luteal. Alguns estudos corroboraram para essa afirmao
demonstrando que a deteco do corpo lteo por palpao retal mais difcil em zebunos do
que em taurinos (Plasse et al., 1968; Vale Filho et al., 1986).
A caracterizao do corpo lteo fornece informaes importantes sobre o estado
reprodutivo da fmea bovina e possibilita a adequao de procedimentos de manipulao ou
sincronizao do ciclo estral (Viana et al., 1999). Nos ovinos e bovinos a lise do corpo lteo
causada pela liberao de prostaglandina F2 (PGF2) endometrial (Horton & Poiser, 1975).
30
2.3. Palpao e ultra-sonografia transretal

A palpao retal o mtodo mais freqentemente utilizado e eficiente de exame
rotineiro do trato reprodutivo da vaca. A movimentao da mo e dos dedos suavemente, mas
de forma rpida sobre o crvix e a superfcie uterina ajudam a definir sua localizao, textura
e forma. Os ovrios nas vacas so usualmente localizados no assoalho plvico, sua palpao
importante para avaliar estruturas normais e para o diagnstico de afeces (Mortimer et al.,
1997).
A avaliao do corpo lteo por palpao retal, apesar da sua praticidade e
facilidade de execuo, apresenta limitao na avaliao devido sua baixa sensibilidade e
especificidade (Sprecher et al., 1989). Alguns trabalhos, como o realizado por Viana (1996),
demonstraram que a escolha das receptoras de embrio pela projeo do corpo lteo no
adequada.
importante que o veterinrio esteja apto a correlacionar as modificaes clnicas
do tero e ovrios durante o ciclo estral normal. Estas modificaes esto relacionadas aos
dois estgios do ciclo estral na vaca, o estrognico e o progesternico. Durante a fase
estrognica h um aumento contnuo da concentrao de estradiol e do tnus uterino, nos
ovrios pode-se sentir o folculo pr-ovulatrio, e alguns outros folculos. Esta seguida pela
fase progesternica, que se inicia aps a ovulao e termina com a lutelise. Uma depresso
ovulatria pode, algumas vezes, ser palpada por um curto perodo de tempo, mas esta
cavidade logo preenchida pelo corpo lteo em desenvolvimento. No incio desta fase o tero
est tnico ou edematoso, porm, sob a ao da progesterona, logo se tornar flcido.
(Mortimer et al., 1997). Bonafos et al. (1995) tambm avaliaram o tnus uterino e
classificaram os achados em um escore variando de 1 (flcido) a 5 (trgido), onde observaram
um efeito significativo para o dia, com o tnus maior durante o perodo periovulatrio (dias 1, 0, 1), que decresceu nos dias 3 e 4 do ciclo estral, voltou a se elevar entre os dias 4 a 10
(incio do diestro), e permaneceu neste estgio at que um novo aumento ocorreu entre os dias
15 e 21. Em um segundo experimento realizado pelos mesmos autores, foi demonstrado um
aumento entre os dias -6 a -1, um decrscimo entre os dias -1 a 3, e um novo aumento entre os
dias 5 a 12.
A ultra-sonografia pode ser uma ferramenta importante na avaliao da condio
uterina, alm de identificar corretamente a presena de estruturas ovarianas (Mortimer et al.,
1997), como o tecido luteal, possibilitando maior preciso na identificao e mensurao do
31
corpo lteo (Pierson & Ginther, 1987; Ribadu et al., 1994). Nesta avaliao o corpo lteo
visualizado como uma estrutura uniforme, circunscrita e menos ecognica que o estroma
ovariano (Viana et al., 1999).
Pierson et al. (1987) relataram o uso desta tcnica durante o ciclo estral de
bovinos. Segundo esses autores a avaliao ultra-sonogrfica do aparelho reprodutivo da vaca
foi realizada movendo-se o transdutor sobre a parede dorsal do crvix, corpo e cornos
uterinos. O exame incluiu a mensurao do dimetro do corpo uterino aproximadamente 15
mm da poro cranial do crvix. Esta avaliao demonstrou haver efeito significativo de dia,
sendo um aumento de 3 a 4 dias antes da ovulao e uma diminuio que se inicia entre um
dia antes da ovulao e o dia 3; esta diminuio se mantm e s h um aumento ao redor do
dia 17, com a espessura mxima alcanada um dia antes da ovulao.
O acmulo de fluido nos cornos e na vagina foi codificado em uma escala de 0
(sem fluido) a 3 (acmulo mximo). Nesta varivel notou-se um efeito significativo do dia,
um decrscimo significativo dois dias aps a ovulao para o fluido intrauterino e uma queda
mais gradual para o intravaginal, que s alcanou nveis baixos com 6 ou 7 dias. O primeiro
dia de aumento significativo foi o dia 17 para o fluido intrauterino e 18 para o fluido vaginal.
A forma uterina foi codificada em uma outra escala variando de 1 (menor espiralizao) a 4
(espiralizao mxima). Para a espiralizao uterina tambm houve efeito do dia. O primeiro
dia de aumento e diminuio significativos no escore foi o dia 3 e 16 do ciclo estral,
respectivamente; sendo mximo durante o perodo associado com concentraes mximas de
progesterona e mnima durante o estro com altas concentraes sricas de estradiol. A
imagem ultra-sonogrfica foi avaliada de acordo com sua textura. A imagem de diestro foi
descrita como cinza homognea, sem evidncia de edema intersticial; durante o estro houve
um proeminente desenvolvimento edematoso e uma textura heterognea. No perodo
intermedirio o edema e a textura heterognea estavam apenas moderadamente visveis. Esta
foi ento classificada como: diestro (1), intermedirio (2) e estro (3). Para esta varivel foi
tambm verificado efeito significativo de dia, com uma diminuio do escore a partir do dia 1
e uma elevao a partir do dia 17. A textura 3 foi encontrada 4 a 5 dias antes da ovulao com
o pico um dia antes ou no dia da ovulao; e um decrscimo gradual at alcanar uma
aparncia homognea caracterstica de diestro aproximadamente no dia 5 ou 6 (Pierson et al.,
1987).
Com esses resultados, os autores concluram que h um aumento de espessura, do
fluido intrauterino, textura ultra-sonogrfica e considervel desenvolvimento edematoso
32
prximo ao estro e uma imagem mais homognea e um tero mais enovelado durante o
diestro, associada com a concentrao mxima de progesterona.
Bonafos et al. (1995) tambm estudaram a ecotextua endometrial com o uso da
ultra-sonografia transretal e encontraram uma diferena significativa entre os dias do ciclo
estral, com o pico alcanado um dia antes da ovulao e um decrscimo at o dia 4 do ciclo
estral. Esta permaneceu inalterada e voltou a se elevar aps o dia 16 do ciclo estral.
2.4. Endocrinologia
A avaliao endocrinolgica das fmeas em diferentes momentos permite a
determinao do status reprodutivo dentro do ciclo reprodutivo, bem como o diagnstico de
alteraes reprodutivas e o estabelecimento de protocolos de tratamento.
Os hormnios esterides, progesterona e estradiol, provocam uma variedade de
respostas fisiolgicas nos tecidos-alvo, sntese de protenas especficas e contrao da
musculatura lisa. Estas respostas so responsveis por vrios processos reprodutivos,
incluindo comportamento sexual, receptividade sexual, preparao do tero para a
implantao do blastocisto, desenvolvimento mamrio para a produo leiteira, e regulao
das contraes uterinas durante o parto (Hafez et al., 2000).
2.4.1. Estrgeno
Os estrgenos so hormnios esterides produzidos a partir de um processo
cataltico de aromatizao de andrgenos pela enzima aromatase citocromo P450. Dentre os
estrgenos, o 17-estradiol o de maior importncia na reproduo (Hanukoglu, 1992;
Richards, 1994; Conley, 2001; Rosenfeld et al., 2001). No trato reprodutivo o estradiol
produzido pelas clulas da granulosa de folculos ovarianos principalmente durante as fases
de seleo e dominncia folicular (Dieleman & Bevers, 1987; Xu et al., 1995; Kinder et al.,
1996; Komar et al., 2001).
Os estrgenos apresentam a mais ampla extenso de funes fisiolgicas de todos
os hormnios esterides, sendo necessrios para as manifestaes do estro. Este
comportamento pode ser induzido apenas com estrgeno, mas em algumas espcies, pequena
quantidade de progesterona proveniente do corpo lteo lisado necessria para causar tais
manifestaes (Hafez et al., 2000). Estes mesmos autores relataram que o estrgeno e a
progesterona agem sinergicamente em vrias funes fisiolgicas incluindo o crescimento de
glndulas uterinas e mamrias. O perodo de estro caracterizado por elevados nveis de
estrgenos. Os estrgenos estimulam o crescimento uterino por um mecanismo que envolve a
33
interao do hormnio com receptores e o aumento de processos sintticos dentro das clulas.
Outros efeitos desse hormnio em relao reproduo incluem o desenvolvimento fsico das
caractersticas sexuais secundrias femininas, o controle da liberao de hormnios
hipofisrios, potencializao dos efeitos da ocitocina e prostaglandinas sobre as contraes
uterinas e auxlio no processo de implantao.
O estradiol produzido pelo folculo ovariano a partir da interao entre as clulas
da teca e da granulosa e das gonadotrofinas hipofisrias. O LH estimula a enzima P450scc a
transformar o colesterol em andrgenos no interior das clulas da teca interna. A enzima
aromatase citocromo P450, sob estmulo do FSH, converte parte dos andrgenos em
estrgenos nas clulas da granulosa (Austin & Short, 1984; Wiltbank et al., 1996). O IGF-1 e
IGF-2 tambm estimulam a sntese de estradiol (Spicer et al., 1995; Ginther et al., 2001); alm
disso, a adio de IGF-1 aumentou a sntese de andrgenos em cultura de clulas da teca
(Stewart et al., 1995).
Nos bovinos, os nveis de estradiol na circulao comeam a aumentar quando se
inicia o desvio (Kulick et al., 1999; Ginther et al., 2000). O estradiol proveniente do folculo
ovulatrio indicado como mediador no processo que regula a secreo de FSH (Amiridis et
al., 1999; Kulick et al., 1999; Ginther et al., 2000). Outros autores (Kastelic et al., 1990;
Turzillo et al., 1993; Ginther et al., 2001) relataram que as fraes proticas do fluido
folicular, como as inibinas, so capazes de produzir modificaes nos nveis de FSH
circulante. Em resumo, o decrscimo do FSH sistmico pode estar relacionado ao
combinada do estradiol e inibina (Kaneko et al., 1995).
A presena de um folculo pr-ovulatrio e das altas concentraes plasmticas de
estradiol, so determinantes para o desencadeamento da expresso do comportamento de
estro, do pico pr-ovulatrio de LH e da ovulao (Diaz et al., 2002). O estradiol na ausncia
de progesterona, atua como um sinal indicando a maturidade do folculo em crescimento para
o sistema hipfise-hipotlamo, e desta forma induz o pico pr-ovulatrio de LH que causa a
ovulao (Taya et al., 1996).
Em bovinos, a existncia de 2 a 3 ondas foliculares durante o ciclo estral acarreta
um perfil oscilatrio de produo de estradiol, devido ao crescimento e atresia de diversos
folculos em cada uma das ondas foliculares, at a ovulao (Ireland et al., 1979; Ginther et
al., 1989a); no entanto, o folculo dominante considerado o principal responsvel pela
produo total de estradiol (Ireland et al., 1984). Este liberado de maneira pulstil (Walters
et al., 1984) e atinge a concentrao plasmtica mxima momentos antes da ovulao
(Glencross & Pope, 1981).
34
Alm de participar na regulao da secreo do FSH, o estradiol est envolvido

em importantes funes autcrinas e parcrinas, tais como a proliferao celular (Bley et al.,
1997), aumento da atividade da enzima aromatase citocromo P450, aumento na expresso dos
receptores de LH e capacidade de promover uma maior sensibilidade do folculo dominante
aos hormnios FSH e LH (Ginther et al., 2001).
Cupp et al. (1995) observaram que durante o incio da fase lutenica, a
concentrao de progesterona baixa e a de estradiol alta, resultando em uma maior
freqncia dos pulsos de LH. Durante o tero mdio da fase lutenica, entre o 11 e 13 dias
do ciclo estral, perodo em que a concentrao de progesterona torna-se alta e a de estradiol
baixa, foi observada uma menor freqncia dos pulsos de LH em relao ao incio ou ao final
da fase lutenica. Aps a lutelise, onde os nveis de progesterona esto diminudos, foi
observada a maior mdia nas concentraes e freqncias dos pulsos de LH. Diversos estudos
demonstraram que a progesterona e o estradiol so determinantes no controle da freqncia
dos pulsos de LH (Kesner et al., 1981; Butler et al., 1983; Stumpf et al., 1993; Cupp et al.,
1995), sendo a freqncia dos pulsos de LH e a concentrao circulante de 17-estradiol
inversamente relacionados concentrao de progesterona (Bergfeld et al., 1995; Cupp et al.,
1995).
Diversos autores demonstraram o envolvimento do estradiol na lutelise e na
produo de PGF2 pelo endomtrio (Karsch et al., 1970; Ireland et al., 1984; Villa-Goddoy,
1985; Hughes et al., 1987; Zhang et al., 1991; Salfen et al., 1999). Em bovinos, injees de
estradiol entre os dias 13 e 18 do ciclo estral estimularam a produo de PGFM (Lemon,
1975; Bartol et al., 1981; Rico et al., 1981; Knickerbocker et al., 1986; Thatcher et al., 1986;
Larson et al., 1991; Castro e Paula et al., 2002). Bertan (2004) confirmou a capacidade do
estradiol em estimular o aumento das concentraes sricas de PGFM no dias 15, 17 e 19 do
ciclo estral, mas no no dia 13. Castro e Paula (2003) e Bertholazzi et al. (2003), relataram
que a resposta estimulatria sntese de PGFM no foi observada em todas as fmeas quando
tratadas com estradiol no dia 15 do ciclo estral. Thatcher et al. (1986), demonstraram que
grupos de animais tratados com estradiol entravam em lutelise mais cedo do que grupos no
tratados. De forma similar, injees de benzoato de estradiol em vacas no dia 15 ou injees
de 17-estradiol em ovelhas entre os dias 9 e 12 do ciclo estral (Hixon & Flint, 1987;
Sheldrick, 1992; Walker et al., 1997) tambm desencadeavam a lutelise.
Ainda no conhecido o mecanismo pelo qual o estradiol age estimulando a
produo de PGF2. Alguns autores (Walker et al., 1997) sugerem uma ao direta do
estradiol na cascata de produo de PGF2 iniciada pela ativao da fosfolipase C. Outros
35
(McCracken et al., 1984; Wathes & Lamming, 1995) sugerem uma ao indireta, onde o
estradiol causaria um aumento na concentrao de receptores de ocitocina ou ativao no final
da fase lutenica, e que a ocitocina, proveniente do corpo lteo ou da neurohipfise, estimula a
secreo de PGF2. Wathes et al. (1983 e 1984) e Fields et al. (1985 e 1992) corroboraram
para esta hiptese ao demonstrarem que a ocitocina de fato secretada pelo corpo lteo e
interage com receptores endometriais prprios (Fuchs et al., 1990) para estimular a secreo
de PGF2 (Gross et al., 1988; Putney et al., 1989).
No entanto, o estradiol sozinho no capaz de ativar a resposta do endomtrio a
injees de ocitocina em vacas e ovelhas ovariectomizadas (Homanics & Silva, 1988; Mann
et al., 2001). Alguns experimentos demonstram um efeito inibitrio do estradiol nos
receptores de ocitocina na ausncia de uma sensibilizao prvia pela progesterona (Vallet et
al., 1990; Zhang et al., 1992), enquanto que a sensibilizao pela progesterona que ocorre
naturalmente ao longo do ciclo estral, associado ao estradiol, causa uma grande estimulao
na produo de receptores de ocitocina e produo de PGF2 em bovinos e ovinos (Kaminski
et al., 1997; Lau et al., 1993; Walker et al., 1997).
Zelinski et al. (1982) relataram nveis de estradiol durante o proestro de 6,46
1,04 pg/mL, sendo este superior ao valor encontrado para o diestro (5,01 0,37 pg/mL). Em
ovelhas, Koligian & Stormshak (1977a), no observaram diferenas nos nveis de estradiol
durante o ciclo estral, sendo que este alcanou mdia de 5,4 1,6 pg/mL.
2.4.2. Progesterona
Assim como o estrgeno, a progesterona um hormnio esteride sintetizado a
partir do colesterol (Krisans, 1996), sendo esse transportado na forma de lipoprotenas para
todos os tecidos esteroidognicos. As lipoprotenas podem ser de alta ou baixa densidade e
constituem as fontes mais comuns de disponibilidade de colesterol para a produo dos
hormnios esterides no corpo lteo. O colesterol disponvel no citosol da clula utilizado
como substrato para a esteroidognese (Brown & Goldstein, 1986), sendo transportado para a
membrana mitocondrial por protenas especficas. Na membrana mitocondrial interna o
colesterol interage com a enzima P450scc (P450 side chain cleavage) transformando-se em
pregnenolona, que transportada para o retculo endoplasmtico liso por ao da enzima 3HSD (3-hidroxiesteridedehidrogenase) e convertida em progesterona (Arakane et al., 1997;
Niswender, 2002).
A maior fonte de progesterona o corpo lteo, porm esta tambm pode ser
isolada do crtex da adrenal e placenta (McDonald, 1989). Ao longo do ciclo estral o corpo
36
lteo aumenta em tamanho e capacidade de liberar a progesterona, o que foi associado ao

aumento nas concentraes de RNAm das protenas envolvidas na sntese de progesterona. A
concentrao destes componentes relatada como responsvel pelo perfil de liberao de
progesterona ao longo do ciclo estral (Niswender et al., 2000). Sua funo bsica preparar o
endomtrio para a implantao e manuteno da prenhez pelo aumento secretrio do
endomtrio e inibio da motilidade miometrial. Em vacas, durante a fase ltea do ciclo estral
e na gestao, a progesterona secretada pelo corpo lteo produz um mecanismo retrgrado
negativo na liberao do LH e, por este motivo, no ocorre ovulao (Glencross & Pope,
1981; Hafez et al., 2000).
O ambiente uterino devidamente sensibilizado pela progesterona fornece
condies favorveis para o desenvolvimento do concepto. Em reviso de literatura publicada
em 1998, Wathes et al. associaram a baixa concentrao de progesterona na fase luteal
decorrente do atraso na elevao ps-ovulao presena de embries menores no 16 dia
do ciclo estral. Para os autores, possvel que esses embries tenham menor capacidade de
bloquear a lutelise porque apresentam menor produo de interferon trofoblstico. O
desenvolvimento do embrio e a habilidade do concepto para secretar interferon- esto
relacionados concentrao de progesterona (Mann et al., 1999). Por outro lado, a
sensibilizao do endomtrio pela progesterona importante para que ocorra a produo de
PGF2 na ausncia de um embrio ou na falha do mesmo em sinalizar sua presena (Vallet et
al., 1990; Zhang et al., 1992).
Alguns estudos (Silvia et al., 1993; Lamming & Mann, 1995; Raw et al., 1995)
tm demonstrado que a ausncia de uma sensibilizao prvia de progesterona impede a
produo de PGF2, que baixas concentraes deste hormnio permitem produo mxima
de PGF2, e que altas concentraes diminuem a capacidade de produo. Essas observaes
demonstram que a progesterona possui um efeito inibitrio para a produo e/ou ativao dos
receptores de ocitocina e no acoplamento da ocitocina ao seu receptor, conforme foi
demonstrado em bovinos e em ratos (Grazzini et al., 1998; Zingg et al., 1998; Bogacki et al.,
2002). Lau et al. (1993) propem uma diminuio dos receptores de progesterona no final da
fase lutenica, com conseqente perda de sua ao, permitindo um aumento na concentrao
de receptores de ocitocina; porm no fica claro como ocorre a manuteno das concentraes
plasmticas de progesterona durante a gestao, j que a sua produo estimulada pela
interao do hormnio com seu receptor (Fang et al., 1997 apud Castro e Paula, 2003).
A progesterona possui um efeito supressor sobre o crescimento do folculo
dominante (Sirois et al., 1988; Ginther et al., 1989a; Ginther et al., 1989c; Sirois et al., 1990;
37
Bergfelt et al., 1991; Adams et al., 1992b; Fortune et al., 1993; Burke et al., 1994; Buratini,
2000; Rocha, 2000), isso demonstrado em animais com trs ondas de crescimento folicular
durante um ciclo estral, onde o dimetro mximo do folculo dominante da segunda onda
inferior ao da primeira onda e ao do folculo ovulatrio. Sendo que o folculo dominante da
segunda onda apresenta-se no perodo de maior concentrao de progesterona e,
conseqentemente, sob uma menor freqncia dos pulsos de LH (Adams et al., 1992a).
Alguns autores (Stock & Fortune, 1993; Anderson & Day, 1994; McDowell et al.,
1996) relataram que a administrao de progesterona foi capaz de induzir atresia de folculos
persistentes, diminuindo a concentrao de estradiol sistmico e promovendo o incio de nova
onda folicular, com o desenvolvimento de um folculo dominante. Rajamahendran &
Manikkan (1994) verificaram que a administrao de 150 mg de progesterona durante 4 dias
consecutivos ocasionou a atresia dos folculos em 100% das novilhas. Por sua vez, Anderson
& Day (1994), relataram o mesmo efeito utilizando uma nica injeo de 200 mg de
progesterona, sendo que as concentraes plasmticas deste hormnio se mantiveram acima
de 1 ng/mL durante 48 horas, com um pico de 17 ng/mL.
Em animais da raa Nelore foi relatado que a concentrao de progesterona
aumenta continuamente do segundo dia aps a ovulao at atingir seu plat por volta do
oitavo dia, o qual mantido at o dia quinze, em mdia, quando declinam para nveis basais,
sugerindo que a lutelise ocorra por volta dos dias 15 a 18 aps a ovulao (Figueiredo et al.,
1997).
A concentrao plasmtica de progesterona dependente de diversas variveis
biolgicas, dentre elas as taxas de sntese, liberao e metabolismo; estas caractersticas so
influenciadas pelo tipo predominante de clulas luteais, dia do ciclo estral e fluxo sangneo
para os ovrios e corpos lteos (Viana, 1996). Segundo Fernandes (1994) e Wiltbank et al.
(1995) existe uma correlao positiva entre a massa de tecido luteal e a produo de
progesterona.
Durante o ciclo estral, os nveis de plasmticos de progesterona refletem o
crescimento, a manuteno e a regresso luteal (Spano & Silva, 1992). Este um indicador
preciso da funo ovariana e tem sido utilizada para monitorar a prenhez, ciclos estrais e
atividade ovariana ps-parto (Peters, 1984). A concentrao de progesterona circulante
depende diretamente de sua produo, da liberao pelo tecido luteal e da taxa de clearence
(Viana et al., 1999). Fatores como o fluxo sangneo, presena de agentes luteotrficos ou
luteolticos e a disponibilidade de precursores para a sua biossntese pelas clulas basais
luteais interferem na produo deste hormnio (Wiltbank, 1994). Tais variveis interagem
38
determinando um padro de secreo circadiana para os esterides ovarianos (Spano & Silva,
1992).
Diversos estudos relataram que os nveis plasmticos de progesterona so baixos
durante o estro e os primeiros seis dias do ciclo, porm uma curva ascendente observada
(fase de crescimento do corpo lteo), atingindo ento valores altos e oscilantes (fase de
manuteno do corpo lteo). Ao redor do dia 18 do ciclo estral ocorre uma queda dramtica
dos nveis de progesterona plasmtica (regresso do corpo lteo) (Dobson et al., 1975;
Mucciolo & Barberio, 1983; Spano & Silva, 1992).
consenso entre os autores que os nveis plasmticos de progesterona so baixos
durante o estro (Dobson et al., 1975; Zelinski et al., 1982; Mucciolo & Barberio, 1983; Spano
& Silva, 1992) e que estes se elevam de forma paralela ao desenvolvimento do corpo lteo,
alcanando nveis elevados durante a fase de diestro, e se mantendo em plat at o momento
da lutelise (Dobson et al., 1975; Lemon, 1975; Mucciolo & Barberio, 1983; Walters et al.,
1984; Spano & Silva, 1992). Alguns autores (Spano & Silva, 1992) relataram um pico de
progesterona quatro dias antes do estro, contudo, outros autores no verificaram esse aumento
(Mucciolo & Barberio, 1983).
Os autores divergem ainda quanto aos valores encontrados durante a fase de
diestro, tendo sido encontrado valores entre 7,5 2,0 ng/mL (Dobson et al., 1975); 2,00 e
10,00 ng/mL (Lemon, 1975; Walters et al., 1984); 2,41 0,14 ng/mL (Zelinski et al., 1982);
1,10 e 11,00 (Mucciolo & Barberio, 1983); 2,00 e 4,56 ng/mL (Spano & Silva, 1992).
2.5. Imunoistoqumica e receptores hormonais

Uma maior compreenso da expresso de receptores hormonais ao longo do ciclo
estral pode ser obtida pela avaliao imunoistoqumica do endomtrio bovino, para tanto se
faz necessria colheita de fragmentos endometriais pela via transcervical. Nesta tcnica
podem ser utilizadas pinas do tipo Yomann, possibilitando a obteno de fragmentos
uterinos em qualquer momento do ciclo estral. Mann & Lamming (1994) com a tcnica de
bipsias transcervicais colheram fragmentos endometriais, e concluram que as colheitas
realizadas entre os dias 13 e 17 aps o estro no resultaram em um encurtamento da durao
do ciclo estral, e tambm no induziram a liberao de PGF2. Estes achados nos mostram
que esta tcnica pode ser uma ferramenta importante para o estudo das modificaes
fisiolgicas ao longo do ciclo estral.
McCarty et al. (1985) relataram que o uso de tcnicas histoqumicas para a
localizao de receptores esterides, como o estrgeno, tm levado a um aumento da
39
sensibilidade e especificidade quando comparados aos mtodos bioqumicos. O uso da tcnica

histoqumica demonstrou ter boa correlao com ensaios bioqumicos, embora a distribuio
de clulas negativas e positivas e sua intensidade s possam ser avaliadas nesta tcnica.
A tcnica de imunoistoqumica possui inmeras vantagens sobre os ensaios de
extrao. Entre essas, a pequena quantidade de material requerida e a possibilidade de
caracterizao histolgica das clulas que contm o receptor, so as mais importantes (De
Cock et al., 1997 apud Brito, 2004).
A estrutura e funes do tero so influenciadas pelos hormnios esterides
ovarianos, como o estrgeno e progesterona, os quais mediam sua ao atravs de receptores
especficos (Tsai & OMalley, 1994). As modificaes da ao do hormmio esteride no
tero aparentam ser ditadas pela concentrao de seus receptores, que variam durante o ciclo
estral (Stormshak, 1979). Todos os tecidos alvo que respondem aos hormnios esterides
contm um receptor protico no interior da clula, o qual se liga especificamente ao hormnio
ativador. Dentro da clula alvo, o hormnio esteride encontrado no citoplasma, ligado a
uma protena relativamente grande. Tal ligao resulta na transfromao ou ativao do
complexo protena-esteride, permitindo que ele se mova (translocao) para o ncleo da
clula. No stio nuclear, o complexo esteride se liga a um receptor especfico, causando uma
seqncia de respostas fisiolgicas para aquela clula (Hafez et al., 2000).
Os anticorpos monoclonais produzidos com seqncia de aminocidos idntica
quelas expressas nos receptores de estrgeno humanos, reagem com receptores estrognicos
de outras espcies, provando que este eptopo conservado em muitas espcies (Traish et al.,
1990 apud Brito, 2004). De Cock et al. (1997) apud Brito (2004) demonstraram reao dos
anticorpos anti-receptores de estrgeno humano com o receptor de estrgeno canino,
provando a possibilidade da utilizao dos anticorpos comercialmente disponveis para a
deteco dos receptores em tecidos de ces.
Os efeitos da progesterona foram demonstrados na proliferao e diferenciao
celular nos rgos alvo aps sua ligao ao receptor de progesterona (Clark & Southerland,
1990), ou seja, a atividade biolgica da progesterona mediada pela modulao da atividade
transcripcional dos dois receptores de progesterona, A e B. Ambas as isoformas foram
propostas no oviduto de galinhas e no cncer de mama humano (Kastner et al., 1990 apud
Fujimoto et al., 1997). O receptor de progesterona A e B possuem diferentes atividades de
transcrio (Vegeto et al., 1993 apud Fujimoto et al., 1997; Mulac-Jericevic & Connely,
2004), contudo ambas provm do mesmo gene (Mulac-Jericevic & Connely, 2004). A
isoforma B pode ser mais eficiente como um regulador transcripcional que a isoforma A
40
(Wen et al., 1994 apud Fujimoto et al., 1997). Portanto, a isoforma B considerada como
crtica para a proliferao celular. A isoforma A age como um repressor da funo da
isoforma B e da funo de outros receptores esterides (Vegeto et al., 1993 apud Fujimoto et
al., 1997), especialmente a atividade transcripcional do receptor de estrgeno humano (Tora et
al., 1988 apud Fujimoto et al., 1997). Os subtipos A e B so diferentemente expressos no
epitlio ou clulas do estroma, e a proporo entre eles se modifica durante o ciclo menstrual
(Wang et al., 1998 apud Classen-Linke et al., 2000).
A importncia fisiolgica da manuteno de uma correta relao ente a expresso
das isoformas do receptor de progesterona no tero indicada pela presena de propores
aberrantes das isoformas em cnceres endometriais humanos (De Vivo et al., 2002 apud
Mulac-Jericevic & Connely, 2004).
Sabe-se que a ao do estrgeno mediada por receptores intracelulares, os quais,
assim como os de progesterona, so membros de uma superfamlia de receptores
esteride/tireide. Kuiper et al. (1996) relataram um novo clone na famlia dos receptores
nucleares com alta homologia ao receptor de estrgeno, o qual recebeu a denominao de
receptor de estrgeno , para diferenci-lo do clone previamente descrito. Em bovinos,
Walther et al. (1999) clonaram uma nova protena proveniente das clulas da granulosa pela
combinao de diversos RT-PCRs; esta possua uma alta homologia a seqncia de receptor
de estrgeno de outras espcies. Dessa forma, dois tipos predominantes de receptores j
foram caracterizados, os receptores de estrgeno e (Kuiper et al., 1996; Rosenfeld et al.,
1998; Walther et al., 1999). Alguns estudos demonstram ainda que o receptor de estrgeno
o subtipo mais importante na regulao das atividades uterinas (Couse & Korach, 1999;
Muramatsu & Inoue, 2000).
Classicamente, o estradiol exerce suas funes se ligando a seus receptores, que
funcionam como fatores de transcrio (Mangelsdorf et al., 1995; Mowa & Iwanga, 2000a,b)
e, portanto, estimulam a transcrio gnica e a sntese de novas protenas (Ho & Liao, 2002).
Segundo Razandi et al. (1999) a maior ao dos hormnios esterides ocorre pela ativao
dos receptores de estrgeno nucleares que ocasionam efeitos na transcrio de genes
especficos. Os receptores de estrgeno nucleares regulam a transcrio gnica por se ligarem
a seqncias especficas do DNA e estimularem ou inibirem a expresso de um determinado
gene. De fato, Acconcia e Marino (2003), verificaram que a ao genmica do estrgeno na
clula promovida pelo complexo estrgeno-receptor que ativa fatores transcripcionais
ligados ao DNA. Os mesmo autores verificaram haver um sinergismo entre a ao molecular
genmica e no genmica do estrgeno induzindo a transcrio de genes.
41
Bertan (2004) relatarou o aumento das concentraes de PGFM cerca de 3 a 5,5

horas aps a injeo de estradiol, e sugeriu que a ao deste hormnio deveria envolver uma
via genmica, possivelmente estimulando a sntese de protenas envolvidas na cascata
geradora de PGF2.
A concentrao de receptores de estrgeno durante o ciclo estral de vacas foi
significativamente maior durante o proestro, estro e aps o estro (dias 18 a 20 e 0 a 4) do que
durante a fase luteal mdia (9 a 14). Este aumento na concentrao dos receptores de
estrgeno paralelo ao aumento da concentrao plasmtica e tecidual de estradiol, e estes,
por sua vez so inversamente relacionados ao nvel plasmtico de progesterona. Dessa forma
os autores concluram, que se o nvel plasmtico de progesterona influencia os nveis de
receptores de estrgeno, a progesterona deve fazer o tecido menos responsivo aos estrgenos
ovarianos (Henricks & Harris, 1978). Os mesmos autores relataram que em vacas
ovariectomizadas, a concentrao de receptores de estrgeno foi similar aos encontrados em
vacas cclicas nos dias 1 a 4 e 18 a 20. Nestes animais, enquanto os nveis plasmticos de
progesterona e estradiol eram baixos os nveis teciduais de estradiol eram relativamente
elevados. Os autores relataram que possivelmente um estmulo mnimo de estradiol seja
suficiente para o aparecimento dos receptores de estrgeno, e que como nestes animais os
nveis de progesterona estavam ausentes no plasma, a progesterona deva possuir uma
influncia to significativa quanto o estradiol sobre os receptores de estrgeno.
Boos et al. (1996) estudaram a distribuio de receptores de estrgeno e
progesterona no endomtrio bovino pela tcnica de imunoistoqumica e, para tanto, foram
realizadas coletas de biopsias endometriais nos dias 1, 8, 15 e 19 do ciclo estral. Para ambos
os receptores esterides foi realizada a contagem de ncleos exibindo desde nenhuma
marcao at uma marcao muito forte, esses resultados foram aplicados em uma frmula
para se estimar a imunoreatividade do tecido no momento avaliado. Estes mesmos autores
relatam que as contagens foram realizadas em vrios tipos celulares, como o epitlio de
superfcie, as aberturas glandulares, o corpo glandular, o estroma superficial e intermedirio.
De uma forma geral, os resultados encontrados para o receptor de estrgeno demonstraram
um efeito significativo para o tipo celular, mas no para o tempo, embora houvesse interao
entre essas variveis; quanto ao receptor de progesterona ambas as variveis, tipo celular e
tempo, foram significativas. No epitlio de superfcie houve um aumento significativo para o
receptor de estrgeno no dia 15, coincidindo com maiores concentraes plasmticas de
progesterona e, posteriormente, a imunomarcao tendeu a cair; para o receptor de
progesterona houve uma imunomarcao mxima no dia 8 e valores menores nos dias 1, 15 e
42
19. No epitlio glandular houve uma forte imunomarcao no dia 1 quando comparada com
os dias 15 e 19, e para a abertura glandular houve ainda diferena significativa entre os dias 8
e 15 para o receptor de estrgeno; j para o receptor de progesterona foi observada uma
imunomarcao mxima no dia 8 quando comparada aos dias 15 e 19, embora no diferissem
estatisticamente. Quanto ao estroma uterino, houve uma forte imunomarcao para o receptor
de estrgeno no dia 1, seguida de uma reatividade decrescente para os dias 8 e 15, embora s
significativamente diferente para o estroma intermedirio; j para o receptor de progesterona,
houve um comportamento quantitativo diferente, uma vez que imunomarcao
foi
semelhante ao longo dos dias, com uma queda significativa no dia 15. Ento, altas
concentraes de receptores de progesterona foram vistas no estro, e estas foram mximas
alguns dias depois. Com este estudo, Boos et al. (1996) concluram que os diferentes tipos
celulares presentes no endomtrio bovino apresentam um padro diferente de imunomarcao
para os receptores de estrgeno e progesterona ao longo do ciclo estral e que o estrgeno ir
promover a sntese de receptores esterides no tero, enquanto a progesterona deve inibir
estes receptores, embora algumas excees tenham sido notadas.
Kimmins & MacLaren (2001) relataram uma marcao moderada para o receptor
de progesterona no estroma subepitelial bovino durante proestro (dia 17 a 20 do ciclo estral),
durante o estro a expresso de receptores de progesterona foi aumentada e alcanou o estroma
frouxo. No dia 3 ocorreu forte marcao no estroma e glndulas, durante o metaestro tardio
(dia 6) houve uma diminuio da imunomarcao nas regies prximas ao epitlio luminal,
com uma moderada reatividade presente no estroma compacto e glndulas superficiais, e uma
marcao intermediria nas glndulas profundas. Durante o diestro (dias 7 a 16) a expresso
foi diminuda, com uma marcao fraca presente no estroma compacto. O receptor de
progesterona s foi identificado no epitlio luminal em dois animais nos dias 3 e 6 do ciclo
estral. A expresso do receptor de estrgeno foi maior durante os dias 1 a 3 do ciclo estral e
menor durante a fase luteal (dias 7 a 17). No dia 18, uma reatividade de moderada a alta foi
detectada no estroma compacto e glndulas superficiais, e a expresso aumentou durante o
proestro. No estro, a reatividade continuou a aumentar nas glndulas e estroma superficial.
Nos dias 1 a 3 a expresso foi mxima e caracterizada por uma alta expresso nas glndulas e
estroma. No metaestro tardio (dia 6) os nveis declinaram no estroma compacto e glndulas
superficiais, embora a expresso tenha permanecido alta nas glndulas profundas. A
expresso de receptores de estrgeno no epitlio luminal se restringiu aos dias 14 e 16 do
ciclo estral. Os mesmos autores, trabalhando com vacas ovariectomizadas, relataram que
esses animais quando suplementados com estrgeno apresentavam um aumento da expresso
43
dos receptores de estrgeno e progesterona em comparao aos animais tratados com

progesterona.
Robinson et al. (2001) estudaram a expresso de receptores de progesterona e
estrgeno e de seus RNAm atravs de imunocitoqumca e de hibridizao in situ,
respectivamente. Desta forma concluram que o RNAm para o receptor de estrgeno
apresenta-se regulado pelo tempo no epitlio glandular superior, e apresenta a tendncia de
ser regulado pelo tempo no epitlio luminal. Ambas as regies apresentaram maior expresso
durante o estro, com uma queda no dia 2 do ciclo estral e um novo aumento durante o incio
da fase luteal (aproximadamente durante os dias 4 a 10 do ciclo estral), com a menor
concentrao do meio para o fim da fase luteal (dias 12 a 16) e voltaram a aumentar aps o
dias 16 do ciclo. Quanto ao receptor, este foi regulado pelo tempo no epitlio luminal, no
epitlio glandular superficial e profundo. No epitlio luminal a mxima expresso ocorreu
durante o estro e meio da fase luteal (dias 10 a 14), com uma baixa concentrao observada
nos dias 6 e 16, sendo que aps o dia 16 houve um aumento semelhante ao observado no
estro. No epitlio glandular superficial foi observado mxima concentrao no dia 0 e 2, com
um declnio entre os dias 4 a 16 quando ocorreu um novo aumento. Para o epitlio glandular
profundo as concentraes mximas tambm foram observadas nos dias 0 e 2, posteriormente
houve um pequeno declnio, mas permaneceu elevada durante todo o ciclo. Essas evidncias
sugerem que antes do 16 dia do ciclo estral o nmero insuficiente de receptores de estrgeno
no endomtrio poderia representar um fator limitante para que o mesmo estimulasse a
sntese de PGF2. O RNAm para receptor de progesterona foi evidenciado principalmente no
estroma subepitelial e nas glndulas superficiais, e em menor concentrao no epitlio
luminal. Para o estroma subepitelial e epitlio glandular houve um efeito temporal, e em
ambos o RNAm foi expresso moderadamente no estro e esta expresso foi mantida durante a
fase luteal inicial, entre os dias 8 a 10 do ciclo estral comeou a declinar e permaneceu baixo
durante toda a fase luteal restante, aumentando apenas ao redor dos dias 15 e 16 para alcanar
um nvel semelhante ao do estro no dia 21. Quanto ao receptor de progesterona, este foi
evidenciado no ncleo das glndulas superficiais e no estroma subepitelial, em ambos
regulado pelo tempo. No epitlio luminal foi localizado apenas no dia 6 do ciclo estral em
alguns animais. No epitlio de glndulas superficiais a marcao foi baixa no estro, aumentou
durante a fase luteal inicial e alcanou um pico entre os dias 6 e 8, logo aps houve um
decrscimo gradual e no foi mais detectado entre o dia 12 e 20 do ciclo. Para o estroma
subepitelial a maior expresso foi observada do dia 0 ao 8 e a menor durante o meio para o
fim da fase luteal.
44
Robinson et al. (2001) relataram ainda que h diferenas nos padres de expresso
para o receptor de progesterona e seu RNAm no epitlio de glndulas superficiais, a
concentrao do RNAm aumentou durante a fase folicular mas o aumento do receptor s
ocorreu no estro, o que indica uma regulao ps-transcripcional tambm do receptor de
progesterona. Os autores concluram que tanto o receptor de estrgeno
como o de
progesterona e o RNAm para ambos foi geralmente maior durante o estro e baixo durante a
fase luteal.
Contudo, algumas excees devem ser notadas, como a concentrao do receptor
de estrgeno no epitlio luminal que apresentou concentraes semelhantes ao do estro no
meio da fase luteal (Robinson et al., 2001), sendo que o mesmo foi observado por Boos et al.
(1996), contrariando os achados em ovelhas (Wathes & Hamon, 1993; Spencer & Bazer,
1995). Outra exceo diz respeito ao padro diferente observado para o receptor de estrgeno
e seu RNAm no epitlio de glndulas superficiais, enquanto o RNAm aumentou durante o
incio da fase luteal, a concentrao do receptor estava declinando, o que sugere que o
receptor de estrgeno regulado aps a transcrio (Robinson et al., 2001). Mais uma
exceo verificada a alta expresso de receptores de estrgeno em glndulas profundas
durante todo o ciclo estral (Robinson et al., 2001), tambm observada em ovelhas (Wathes &
Hamon, 1993; Spencer & Bazer, 1995). Segundo Robinson et al. (2001) estes receptores
podem ser requeridos para estimular a secreo glandular ou para passar a informao
referente s concentraes plasmticas de estradiol para os outros tipos celulares.
Vrios autores, com o uso de mtodos bioqumicos, demonstram maior
quantidade de receptores de estrgeno prximo ao estro e mnimas ao redor do dia 15 do ciclo
estral (Meyer et al., 1988; Vesanen et al., 1988; Schneider, 1989; Vesanen et al., 1991).
De forma contrria maioria dos trabalhos, Kimball & Hansel (1974) relataram
ainda em bovinos um significativo aumentou na concentrao do receptor de estrgeno entre
os dias 15 a 21 do ciclo estral quando comparado aos dias 2, 5 e 10.
Por sua vez, Breeveld-Dwarkasing et al. (2002), estudando a distribuio de
receptores de progesterona e estrgeno no crvix de vacas no-gestantes, relataram que a
proporo de clulas que expressam esses receptores aumenta do epitlio para o estroma
subepitelial e deste para o estroma profundo. Observaram ainda que no houve correlao
entre os nveis sricos de progesterona, a concentrao tecidual de estrgeno e a
imunomarcao para os receptores. Adicionalmente, relataram uma forte correlao entre a
expresso do receptor de progesterona e de estrgeno no estroma subepitelial e profundo. Os
45
autores concluram, portanto, que no crvix a expresso destes receptores no controlada

simplesmente pelos esterides circulantes ou pela concentrao hormonal tecidual.
Xiao & Goff (1999) estudaram a regulao hormonal dos receptores de estrgeno
e progesterona em cultivo de clulas endometriais bovinas, e concluram que o nmero de
receptores de progesterona foi maior nas clulas do estroma que nas epiteliais, enquanto que o
nmero de receptores de estradiol foi maior nas clulas epiteliais do que no estroma. Os
mesmos autores ainda demonstraram que o estradiol aumenta a concentrao do seu prprio
receptor e do receptor de progesterona em ambos os tipos celulares in vitro, enquanto que a
progesterona possui pouco efeito, mas inibe os efeitos do estradiol sobre os receptores de
progesterona. Foi ainda relatado que a progesterona no inibiu a ao estimulatria sobre o
seu prprio receptor nas clulas epiteliais, demonstrando uma diferena na regulao do
receptor entre os tipos celulares, ou que o efeito negativo sobre o receptor de estrgeno no
epitlio luminal mediado pelas clulas do estroma.
Atravs de ensaios de ligao em endomtrio ovino, Koligian & Stormshak
(1977a) relataram que a ligao nuclear especfica do estradiol em ambos os cornos uterinos
foi maior nos dias 0 e 3 do ciclo estral, do que nos dias 6 e 10. A ligao nuclear do estradiol
foi significativamente maior no endomtrio do corno uterino ipsilateral ao ovrio contendo o
corpo lteo que no corno contralateral no dia 10. Os autores relataram que a reduo
observada nos receptores nucleares de estrgeno durante a fase luteal do ciclo estral de
ovelhas pode ter ocorrido pela exposio do tero a progesterona. Porm Wathes et al. (1996)
relataram diferenas na resposta ao tratamento com progesterona entre ovelhas
ovariectomizadas e cclicas, sendo que nos animais ovariectomizados a progesterona no
diminuiu os receptores de estrgeno como observado nas ovelhas cclicas, sugerindo que
fatores ovarianos alm da progesterona devem estar envolvidos na regulao do receptor de
estrgeno.
Em ovelhas ovariectomizadas tratadas com um nica injeo de 50 g de17estradiol ou com um regime de estradiol-progesterona-estradiol, designado para mimetizar o
ciclo estral, Ing et al. (1996) concluram que o estradiol aumentou o RNAm para o receptor de
estrgeno em 5 vezes, 24 horas aps a sua aplicao; este efeito tambm foi verificado aps
um perodo de dominncia progesternica (grupo estradiol-progesterona-estradiol). Tambm
foi demonstrado que o tratamento com estradiol aumentou o RNAm para receptor de
progesterona aps 48 horas.
Em gatas ovariectomizadas, West et al. (1976) estudaram a expresso dos
receptores de estrgeno, e concluram que no oviduto e tero o tratamento com estradiol
46
causou uma elevao nos receptores de estrgeno. J o tratamento com a progesterona, em

animais previamente tratados com estrgeno ou no, reduziu a concentrao de receptores de
estrgeno aos nveis presentes nos animais ovariectomizados. Dessa forma, o autor concluiu
que a progesterona suprimiu o receptor de estrgeno no oviduto e tero de gatas.
Re et al. (1995) estudaram a distribuio dos receptores de estrgeno e
progesterona no trato genital de guas e relataram que a concentrao destes receptores foi
menor na vagina e crvix do que no tero e particularmente, nos cornos uterinos,
similarmente ao que ocorre em vacas (Re et al., 1989; Vesanen et al., 1991) e em porcas (Re
et al., 1990). Alm disso, esses mesmos autores compararam a presena de receptores em
grupos de guas com diferentes concentraes de progesterona, e concluram que no houve
diferena significativa entre a concentrao de receptores de estrgeno nas guas em fase
folicular ou nas guas em fase luteal, mas as guas na fase folicular tinham significativamente
maior concentrao de receptor de progesterona que aquelas na fase luteal. Este
comportamento do receptor de estrgeno pode ser parcialmente atribudo ao tipo de estro na
gua domstica, que polistrica sazonal, caracterizada por um longo perodo de estro.
Em guas no houve diferena significativa entre a concentrao dos receptores
de estrgeno e progesterona nos cornos ipsilateral e contralateral (Re et al., 1995).
Com o uso da tcnica de imunoistoqumica, Sukjumlong et al. (2003)
descreveram a presena de receptores de estrgeno durante o ciclo estral em porcas, e
relataram maior imunomarcao durante o diestro para o epitlio de superfcie e glndulas
endometriais, durante o proestro e estro para o miomtrio, e durante o estro para o estroma.
Com base nestes dados concluram que no tero suno a presena de receptores de estrgeno
varia durante o estgio do ciclo estral e de acordo com o tipo celular investigado no tero. Em
contraste, Deaver & Guthrie, 1980 relataram altas concentraes de receptores de estrgeno
durante a poro mdia da fase ltea.
Vermeirsch et al. (2000) relataram a imunomarcao para receptores de
progesterona nos vrios tipos celulares do tero canino e correlacionaram estes achados s
diferentes fases do ciclo estral. Foram avaliados as clulas do epitlio de superfcie, as
glndulas endometriais, o estroma e as clulas musculares lisas do endomtrio. A
imunomarcao foi positivamente correlacionada com a razo 17-estradiol:progesterona, e
refletiu o efeito positivo do 17-estradiol e negativo da progesterona. A imunomarcao foi
maior durante o proestro e declinou durante o estro e incio do metaestro. No metaestro tardio,
a imunomarcao para o estroma e miomtrio aumentou novamente. Durante o anestro, a alta
marcao para o epitlio de superfcie foi contrastante com a marcao mnima nas glndulas
47
basais. A maior intensidade de marcao para as clulas do estroma em comparao as clulas

epiteliais pode ser explicada pelo fato das clulas do estroma mediarem alguns efeitos dos
hormnios esterides nas clulas epiteliais do trato genital.
Ainda em ces, Vermeirsch et al. (1999) relataram a imunomarcao para o
receptor de estrgeno no tero canino. Foi observada uma correlao negativa entre a
imunomarcao nos cornos uterinos e os nveis sricos de progesterona. A marcao foi maior
durante a fase de proestro, declinando durante o estro, e alcanou nveis mnimos durante o
metaestro inicial. Durante o anestro foram encontrados altos escores de marcao, indicando
sensibilidade ao estrgeno no estgio de quiescncia sexual. Maiores flutuaes nos
receptores de estrgeno foram encontrados para as clulas do estroma endometrial do que nas
clulas epiteliais dos cornos uterinos. Dessa forma os autores concluem que as clulas do
estroma podem ser mais importantes que as clulas do epitlio luminal na regulao das
modificaes cclicas. De forma semelhante, De Cock et al. (1997) relataram que a marcao
para o receptor de estrgeno variou ao longo do ciclo estral, com o maior escore encontrado
no incio da fase proliferativa e o menor no incio da fase secretria.
Utilizando um sistema de cultivo in vitro, Galabova-Kovacs et al. (2004)
relataram a influncia do estrgeno e progesterona no epitlio luminal e nas clulas do
estroma de cadelas. Foi observado que a expresso dos receptores de estrgeno e progesterona
de ambos os tecidos foi aumentada com a adio de 17-estradiol. J a progesterona causou
um significativo decrscimo na populao de ambos os receptores nas clulas do estroma, ao
passo que a reduo foi menos acentuada nas clulas epiteliais. Desta forma concluiu-se que
os fibroblastos so mais sensveis ao tratamento esteride quando comparados s clulas
epiteliais, o que poderia ser explicado pelo fato de que as clulas do estroma mediam alguns
efeitos dos hormnios esterides nas clulas epiteliais, e conseqentemente, as clulas do
estroma seriam mais importantes na regulao das modificaes endometriais cclicas.
No epitlio vaginal de mulheres, no foram demonstradas diferenas significativas
na concentrao de receptores de estrgeno entre as fases folicular e luteal, ou entre mulheres
cclicas e ps-menopausa (Perez-Lopez et al., 1993 apud Schwartz, 2000). Quanto aos
receptores de progesterona, Tseng & Zhu (1997) observaram que a progesterona ou o acetato
de medroxiprogesterona aumentaram a expresso de ambas as isoformas para o receptor de
progesterona, A e B, nas clulas do estroma, mas estas foram reduzidas nas clulas do epitlio
glandular. O progestgeno aumentou o RNAm para as isoformas A e B de duas a mais de dez
vezes nas clulas do estroma. O estudo demonstrou que o aumento do RNAm para o receptor
de progesterona requer pelo menos dois ou trs dias de incubao, sendo que os nveis so
48
crescentes at dez dias de incubao. Esses resultados demonstram que o progestgeno

aumenta o receptor de progesterona pelo aumento dos nveis de seu RNAm, especialmente
nas clulas do estroma do endomtrio humano. Os mesmos autores relatam ainda que o
estradiol aumentou o receptor de progesterona, isoformas A e B, no estroma e epitlio
glandular de uma forma dose-dependente.
Ainda em mulheres, Classen-Linke et al. (2000) relataram que o receptor de
estrgeno e progesterona estavam fortemente expressos em fibroblastos e clulas epiteliais
aps
tratamento
com
17-estradiol
em
cultivo
celular.
tratamento
com
medroxiprogesterona causou um decrscimo dos receptores de progesterona nas clulas

epiteliais, mas no nos fibroblastos, e no alterou a expresso dos receptores de estrgeno .
Esse autor sugere que a diferente resposta encontrada para o receptor de progesterona nas
clulas do epitlio e nos fibroblastos possa estar relacionada expresso varivel da isoforma
A ou B; e sugere ainda que o estrgeno induza a expresso da isoforma B, e a progesterona
reduza os nveis da mesma. Em contraste, os nveis da isoforma A so menos sensveis ao
tratamento hormonal, embora altos nveis de estrgeno resultem em alta expresso da
isoforma.
De forma geral pode ser notado que h concordnca entre os diversos autores para
a espcie bovina (Henricks & Harris, 1978; Zelinsky et al., 1982; Meyer et al., 1988; Vesanen
et al., 1991; Boss et al., 1996; Xiao & Goff, 1999; Kimmins & MacLaren, 2001; Robinson et
al., 2001;), ovina (Koligian & Stormshak et al., 1977a; Miller et al., 1977; Findlay et al.,
1982; Cherny et al., 1991; Wathes & Hamon, 1993; Spencer & Bazer, 1995), felina (West et
al., 1976) e canina (De Cock et al., 1997; Vermeirsch et al., 1999; Vermeirsch et al., 2000;
Galabova-Kovacs et al., 2004) de que frente a altas concentraes de estradiol circulantes os
receptores de estrgeno e progesterona encontram-se em concentrao aumentada; e frente a
altas concentraes circulantes de progesterona estes receptores hormonais apresentam-se
diminudos. Contudo, esses dados ainda so controversos nas espcies suna, humana e
eqina.
Esses autores concluram que o estrgeno pode levar ao aumento de receptores de
estrgeno e progesterona (West et al., 1976; Koligian & Stormshak, 1977a,b; Zelinski et al.,
1980; Katzenellenbogen, 1980; Findlay et al., 1982; Leavitt et al., 1983; Meyer et al., 1988;
Boss et al., 1996; De Cock et al., 1997; Ing & Tornesi, 1997; Cherny et al., 1991; Wathes &
Hamon, 1993; Clark et al., 1995; Spencer & Bazer, 1995; Vermeirsch et al., 1999; Xiao &
Goff, 1999; Vermeirsch et al., 2000; Kimmins & MacLaren, 2001; Robinson et al., 2001;
Galabova-Kovacs et al., 2004), e que a progesterona acarreta a diminuio desses receptores
49
(West et al., 1976; Katzenellenbogen, 1980; Leavitt et al., 1983; Clark et al., 1995; Boss et al.,
1996; Wathes et al., 1996; De Cock et al., 1997; Ing & Tornesi, 1997; Vermeirsch et al.,
1999; Vermeirsch et al., 2000; Kimmins & MacLaren, 2001; Robinson et al., 2001; GalabovaKovacs et al., 2004) ou pelo menos impede o efeito estimulatrio do estradiol (Xiao & Goff,
1999).
3. Objetivos
3.1. Objetivo Geral
Estudar a fisiologia reprodutiva de vacas da raa Nelore (Bos taurus indicus), de forma a
ampliar os conhecimentos a respeito do controle ovariano sobre a funo uterina.
3.2. Objetivos Especficos
Avaliar o perfil dos hormnios 17-estradiol e progesterona durante o ciclo estral com o
uso de radioimunoensaio;
Avaliar as modificaes uterinas durante as diferentes fases do ciclo estral com o uso de
palpao e ultra-sonografia transretal;
Investigar e quantificar a expresso de receptores endometriais de progesterona e

estrgeno durante o ciclo estral pela tcnica de imunoistoqumica;
Verificar a distribuio dos receptores hormonais nos diferentes tipos celulares do

endomtrio pela tcnica de imunoistoqumica.
4. MATERIAL E MTODO
4.1. Animais
Foram utilizadas 30 vacas Nelore P.O., adultas e com escore corporal igual ou
superior a 3 (escala de 0 a 5) (Wildman et al., 1982), provenientes do rebanho da Fazenda
Experimental So Manuel da Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia Unesp,
Campus de Botucatu, localizada no municpio de So Manuel, Estado de So Paulo. Foram
selecionadas vacas primparas e multparas, com idades entre 3 e 14 anos (6,6 3,2) (mdia
desvio padro), que apresentaram atividade ovariana cclica e perodo ps-parto superior a 60
dias. Estas foram mantidas em regime de estabulao parcial recebendo feno de alfafa, farelo
de milho, sal mineral proteinado e gua ad libitum.
4.2. Sincronizao dos animais

Aps um perodo de adaptao de 30 dias nas condies experimentais, os
animais foram submetidos a exame ginecolgico e observados diariamente para a
monitorizao da atividade cclica estral. Aqueles que apresentaram ciclos regulares foram
submetidos ao seguinte protocolo de sincronizao do estro: aplicao de 25 g de lecirelina
(Gestran Plus1, IM, dia 0) no primeiro dia do protocolo, e sete dias mais tarde, aplicao de
0,150 mg de D+Cloprostenol (Preloban2, IM, dia 7) (Barros et al., 2000). Dos 30 animais
sincronizados, foram utilizados os primeiros 16 que ovularam.
4.3. Perodos experimentais

Os 16 animais foram avaliados por palpao e ultra-sonografia transretal e
colheitas de sangue dirias por venopuno jugular. Para a colheita de biopsias endometriais
os animais foram divididos em dois grupos, um chamado grupo controle, onde as mesmas no
eram realizadas, e outro, denominado grupo biopsia, onde eram realizadas as colheitas de
fragmentos endometriais. Para se estudar o efeito da colheita na sua subseqente, o grupo
biopsia foi subdividido em dois, denominados grupo D0 e grupo D13; no primeiro as
colheitas de biopsias endometriais eram iniciadas no dia 0 do ciclo estral (dia da ovulao) e,
no segundo, iniciaram-se no dia 13.
1
Gestran Plus, Tecnopec Ltda, So Paulo, Brasil.
Preloban, Intervet International B.V., Curitiba, Brasil.
54
Afim de que todos os animais passassem pela colheita de fragmentos

endometriais, o presente experimento foi repetido em uma segunda fase, onde todas as etapas
descritas acima foram novamente realizadas. Nesta fase foram apenas invertidos os animais
referentes ao grupo controle com os animais do grupo biopsia.
4.4. Avaliaes dirias por palpao e ultra-sonografia transretal

O tero e os ovrios de todos os animais (grupo controle e grupo biopsia) foram
inspecionados diariamente por palpao retal, quando foram avaliados quanto ao tnus,
espessura e simetria uterina; e ultra-sonografia (Aloka3 SSD 500 com transdutor de 5,0 MHZ)
para a avaliao ovariana (presena de corpo lteo e folculos) e uterina (espiralizao,
acmulo de lquido e presena de edema textura uterina).
O tnus e a espessura uterina foram avaliados seguindo um escore variando de 1 a
3. Para o tnus uterino um escore 1 representava um tero flcido, um escore 2 um tnus
uterino intermedirio e um escore 3 um tero contrado. Para a espessura uterina, quanto
maior o escore, maior a espessura.
Os cornos uterinos foram ainda avaliados quanto sua simetria, de forma a se
caracterizar cornos simtricos ou assimtricos, e o lado de maior e menor espessura.
A avaliao ultra-sonogrfica seguiu o que foi descrito por Pierson et al. (1987),
sendo realizada a mensurao do dimetro dos cornos uterinos, nos aspectos dorsal, cranial e
ventral, considerando-se a curvatura uterina; a avaliao da presena de acmulo de lquido
nos cornos uterinos e no fundo vaginal em uma escala variando de 0 (sem fluido) a 3
(acmulo mximo), conforme esquematizado na tabela 01; a codificao da forma uterina de
acordo com o grau de espiralizao, 1 (mnima) e 4 (mxima); e a avaliao da textura uterina
em diestro (1), fase intermediria (2) e estro (3), como demonstrado na tabela 02.
Tabela 01 Sistema de escore utilizado para classificar o dimetro da coluna lquida nos
cornos uterinos e fundo vaginal
ESCORE
DIMETRO DA COLUNA LQUIDA
Ausente
At 0,50 cm
Entre 0,51 e 0,99 cm
Maior ou igual a 1,00 cm
Aloka Co. Ltda., Tokyo, Japan.
55
Tabela 02 Sistema de escore utilizado para classificar a textura uterina

ESCORE
TEXTURA UTERINA
Imagem cinza homognea sem evidncia de edema intersticial
Edema e textura heterognea moderados
Edema proeminente e textura heterognea
4.5. Colheitas de sangue

As amostras de sangue foram colhidas diariamente por venopuno da jugular
com agulha 21GX14 e depositadas em tubos de colheita de sangue5 a vcuo heparinizados.
O volume obtido foi mantido em caixa trmica refrigerada at o momento da
centrifugao realizada a 2500 x g por 15 minutos. O plasma obtido foi acondicionado em
tubos plsticos identificados e estes armazenados em freezer a -20oC.
4.6. Dosagens hormonais de progesterona e estrgeno

Todas as amostras plasmticas foram avaliadas quanto s suas concentraes de
progesterona e estrgeno. As dosagens plasmticas de progesterona foram realizadas
utilizado-se kits comerciais em fase slida6, com leitura por sistema de radioimunoensaio
(Packard Cobra II Auto Gamma7) seguindo-se as instrues do fabricante. Estas foram
realizadas no Laboratrio de Endocrinologia do Departamento de Reproduo Animal e
Radiologia Veterinria, FMVZ, Unesp, Campus de Botucatu. O processamento das amostras
foi realizado em 5 ensaios, sendo os coeficientes de variao intra-ensaio de 15,42%, 3,15%,
5,47%, 8,92% e 8,46%, respectivamente, para os ensaios 1, 2, 3, 4 e 5. O coeficiente de
variao inter-ensaio foi de 10,39%.
Para as dosagens plasmticas de estradiol foram tambm utilizados kits
comerciais em fase slida8, com leitura por sistema de radioimunoensaio (Packard Cobra II
Auto Gamma) seguindo-se as instrues do fabricante. Estas dosagens foram realizadas no
Laboratrio de Dosagens Hormonais do Departamento de Reproduo Animal, FMVZ, USP,
So Paulo. O processamento das amostras foi realizado em 5 ensaios, sendo os coeficientes de
4
Vacutainer BD, EUA
Vacutainer BD, EUA
Coat A Count Diagnostics Products Corporation, Los Angeles, Califrnia, USA.
GMI Inc. Minnesota - USA
3rd Generation Estradiol RIA Diagnostics Systems Laboratories, Texas, USA
56
variao intra-ensaio baixo e alto de 7,47% e 8,94%, 19,59% e 4,74%, 6,65% e 7,54%, 9,04%
e 3,80%, 9,94% e 9,22%, respectivamente, para os ensaios 1, 2, 3, 4, e 5. O coeficiente de
variao inter-ensaio baixo e alto foi de 8,63% e 5,64%, respectivamente.
4.7. Colheitas de fragmentos uterinos

As biopsias endometriais foram realizadas por via transcervical em dias prdeterminados do ciclo estral, dia zero - D0 (dia da ovulao), dia cinco 05 D5, dia nove
D9, dia treze D13 e dia 19 D19 com o auxlio de uma pina Yomann, sempre no corno
contralateral ao corpo lteo. Para se evitar qualquer interferncia da biopsia anterior os
aspectos dorsal, lateral, medial e ventral do corno uterino foram utilizados, evitando-se
colheitas repetidas no mesmo local.
Todas as pinas utilizadas no presente estudo eram lavadas diariamente em gua
corrente e sabo neutro, secas em estufa convencional e, posteriormente, mantidas
embrulhadas em um campo cirrgico. Antes da sua utilizao, a pina era mantida submersa
em lcool 70%.
No momento da colheita procedia-se uma limpeza da regio perineal e vulvar do
animal com papel toalha. A pina era introduzida pela vulva at alcanar o crvix, que era
manipulado por via transretal, a fim de permitir a intromisso da mesma no tero. Esta era
desviada para o corno contralateral ao corpo lteo e colocada junto ao endomtrio. O tero era
ento pressionado contra a mesma, por via transretal, para facilitar a obteno de um
fragmento de tamanho significativo (entre 4 e 5 mm de dimetro). O fragmento era retirado da
pina com auxlio de uma agulha, lavado em soluo fisiolgica, acondicionado em cassete
plstico para incluso, identificado com o nmero do animal, dia do ciclo estral e data da
colheita.
4.8. Deteco imunoistoqumica de receptores de estrgeno e progesterona

Os fragmentos uterinos foram fixados em formol tamponado 10% durante 24
horas e, posteriormente, mantidos em lcool 70% at o momento de incluso em parafina,
realizada no Laboratrio de Histopatologia do Servio de Patologia Veterinria do
Departamento de Clnica Veterinria FMVZ Unesp Botucatu.
Aps a incluso, cortes de 3 m foram obtidos, montados em lminas com
extremidade fosca e corados inicialmente em HE para avaliar a qualidade do material.
57
Posteriormente novos cortes de 3 m foram obtidos e colocados em lminas com extremidade

fosca, previamente tratadas com Poly-L-lysina9.
Para a desparafinizao do material emblocado, as lminas foram colocadas em
cuba de vidro com xilol, incubadas a 57oC por 30 minutos e, a seguir mantidas em uma nova
soluo de xilol temperatura ambiente por 20 minutos. As lminas foram secas em papel
filtro e transferidas para novas cubas de vidro para a hidratao em banhos de lcool, na
seguinte seqncia:
Imerso rpida em lcool 95
Imerso em lcool absoluto I por cinco minutos
Imerso em lcool absoluto II por cinco minutos
Imerso em lcool absoluto III por cinco minutos
Imerso em lcool 95% por cinco minutos
Imerso em lcool 85% por cinco minutos
Posteriormente as lminas foram mantidas 10 minutos em hidrxido de amnia a

10% a fim de se retirar o pigmento de formol, lavadas em gua corrente por 10 minutos e, a
seguir, submetidas a trs passagens em gua destilada.
A etapa seguinte consistiu na recuperao antignica, necessria para liberar os
eptopos antignicos do tecido, bloqueados anteriormente pela soluo fixadora (formol
tamponado 10%). Para a deteco de receptores de estrgeno realizou-se a recuperao
antignica em soluo de citrato de sdio 10 mM (1000 mL de gua destilada e 2,1 g de cido
ctrico monohidratado, com o pH corrigido para 6,0 com cido clordrico) com incubao em
microondas durante 15 minutos; para os receptores de progesterona utilizou-se soluo de
EDTA 10 mM (1000 mL de gua destilada e 0,3722 g de cido etilenodiaminotetra actico sal
dissdico, com o pH corrigido para 8,0 com hidrxido de sdio 5N) com incubao em banho
maria a 96oC durante 40 minutos. Aps o resfriamento da soluo, as lminas foram lavadas
em gua corrente durante dez minutos para bloquear a ao da soluo de citrato de sdio ou
EDTA e, a seguir, o material foi passado por dois banhos de gua destilada.
Posteriormente foi realizado o bloqueio da peroxidase endgena em soluo de
gua oxigenada 3% (100 mL de gua oxigenada 20 volumes e 100 mL de metanol) por um
perodo de 30 minutos, sendo que aos 15 minutos a soluo foi trocada por uma nova. O
Poly-L-lisine Sigma Chemical Co.- USA
58
material foi ento submetido lavagem em gua corrente por 10 minutos e duas passagens em
gua destilada.
A seguir as lminas passaram por duas lavagens em soluo tampo TRIS (1000
mL de gua destilada, 6,0 g Trizma Base10, 8,5 g de cloreto de sdio11 e pH corrigido para 7,4
com cido clordrico) de 5 minutos cada, e foram incubadas com BSA 5% (Albumina Srica
Bovina12 diluda em TRIS) durante 1h em temperatura ambiente, com o intuito de diminuir
possveis marcaes inespecficas (bloqueio de imunoglobulinas endgenas).
Realizou-se ento a incubao com o anticorpo primrio; para a deteco de
receptores de estrgeno tipo utilizou-se um anticorpo policlonal obtido em coelho antireceptor de estrgeno13 humano com reatividade cruzada para a espcie bovina; e para a
deteco de receptores de progesterona tipos A e B utilizou-se um anticorpo monoclonal
obtido em camundongo anti-receptor de progesterona14 humano com reatividade cruzada para
algumas espcies, e padronizada para a espcie bovina em nosso laboratrio. A padronizao
foi realizada testando-se diversas formas de recuperao antignica, de bloqueio da
peroxidase endgena e diferentes diluies do anticorpo; e confirmada pela obteno de uma
marcao nuclear evidente e pelo controle negativo sem marcao.
Ambos os anticorpos foram diludos com BSA 5% (Albumina Srica Bovina15) na
concentrao de 1:50. A soluo contendo o anticorpo foi uniformemente distribuda por toda
a superfcie do corte e as lminas foram incubadas em cmara mida, durante 18 h,
temperatura de 4oC. O material foi ento submetido a dois banhos de TRIS de 5 minutos cada,
e, posteriormente, incubado com o anticorpo secundrio e complexo ABC16, por 30 minutos
com cada reagente, ainda em cmara mida, segundo instrues do fabricante.
Realizou-se nova lavagem com soluo tampo TRIS - pH 7,4, e revelao com o
cromgeno DAB17 durante 2 minutos ao abrigo da luz. A reao foi interrompida com dois
banhos em soluo tampo TRIS pH 7,4 seguido de lavagem em gua corrente por 10
minutos e duas passagens em gua destilada.
10
Trizma Base Sigma Chemical Co. USA cd. T1503
11
Merck M 58,44
12
Sigma Chemical Co. USA cd. A7906
13
Estrogen Receptor Ab-17, rabbit polyclonal antibody - Neomarkers
14
Progesterone Receptor Ab-8 clone hPRa 2+hPRa 3, mouse monoclonal antibody Neomarkers
15
Sigma Chemical Co. USA cod A7906
16
DakoCytomation - USA
17
3,3-diaminobenzidina - Liquid DAB Cromogen DakoCytomation USA
59
As lminas foram contra-coradas com Hematoxilina de Mayer por 3 minutos, e a

colorao interrompida com nova lavagem em gua corrente pro 10 minutos e duas passagens
em gua destilada.
Procedeu-se, ento, a desidratao do material como descrito a seguir:
Imerso em lcool absoluto I por cinco minutos
Imerso em lcool absoluto II por cinco minutos
Imerso em lcool absoluto III por cinco minutos
Imerso em Xilol I por cinco minutos
Imerso em Xilol II por cinco minutos
As lminas foram montadas com lamnulas utilizando-se resina sinttica 18
Permount e avaliadas quanto imunomarcao em microscpio ptico19 em aumento de 400

e 1000 X, e com o auxlio de um analisador de imagens20, utilizando-se os programas Leica
IM 50 e Leica QWin Standard V2.5.
Para cada fragmento colhido foi montada apenas uma lmina e realizada uma
imunomarcao.
Para avaliar a imunomarcao foram utilizados dois mtodos. No primeiro foi
realizada a contagem do nmero de ncleos positivos (marrons), independente da intensidade
de marcaco, e negativos (azuis) at que a contagem total alcanasse a soma de 400 no caso
do epitlio glandular e 200 no caso do estroma uterino. A outra avaliao utilizada foi a
determinao da intensidade de marcao nuclear predominante na lmina. Esta avaliao foi
realizada com o auxlio de um sistema de escore descrito na tabela 03.
18
Fisher Scientific cd. UN1294
19
Leica Microsystems DMLB - Germany
20
Leica Q500IW
60
Tabela 03 Sistema de escore utilizado para codificar a intensidade de imunomarcao

ESCORE
NCLEOS FORTEMENTE MARCADOS
At 25%
De 25 a 50%
De 50 a 75%
Acima de 75%
* Ncleos fortemente marcados podem ser observados na figura 21, letras A e B.
Como controle negativo foram utilizadas lminas onde a incubao com o

anticorpo primrio foi substituda pela incubao com BSA 5%. Os demais procedimentos
foram realizados de forma semelhante.
4.9. Anlise estatstica

Para anlise das variveis estudadas foi utilizado o procedimento MIXED do SAS
8.202. Os efeitos de grupo (controle, D0 e D13), dia e lado dos cornos uterinos foram
considerados como fixos e os efeitos de fase, vaca e suas interaes como aleatrios. Os
efeitos de dia foram considerados como medidas repetidas no tempo; e os efeitos de lado,
quando avaliados, foram consideradas como medidas repetidas no espao.
As medidas referentes coluna lquida nos cornos uterinos e espiralizao uterina
foram transformadas em logaritmo, e as referentes dosagem de progesterona e dimetro dos
cornos uterinos foram transformadas em raiz quadrada; porm, todas foram apresentadas de
forma no transformada.
Os efeitos significativos foram desdobrados por uma regresso polinomial linear,
quadrtica ou cbica.
A comparao de mdias foi realizada atravs de anlise de varincia.
O nvel de significncia foi de 95% ( 0,05).
Mdia e desvio padro foram calculados para todos os dados aps sua
normatizao (Curi, 1997).
5. Resultados
Os resultados referentes s avaliaes de palpao e ultra-sonografia transretal e
dosagens hormonais foram normatizados de modo a representar um ciclo estral de 24 dias,
que foi a durao mdia obtida neste estudo.
Todos os dados foram expressos para os grupos controle e com colheitas de
biopsias (D0 e D13).
5.1. Intervalo interestro

O intervalo interestro teve durao mdia de 23,8 2,70 dias (mdia desvio
padro). Os resultados para cada grupo esto expressos na tabela 04 e figura 01. No houve
diferena significativa entre o grupo controle e os grupos que foram submetidos colheita de
biopsias endometriais (D0 e D13) (p = 0,4315), mas evidenciou-se a presena de diferena
significativa entre os grupos com colheita de bipsias (D0 e D13) (p = 0,0336), com uma
durao significativamente menor para o grupo D0. Os nveis de significncia (p) observados
para todas as variveis e suas interaes encontram-se no apndice I.
Tabela 04 Valores mdios e desvios padro (em dias) para o intervalos interestro nos grupos
controle, D0 e D13
GRUPOS EXPERIMENTAIS
MDIA E DESVIO PADRO (X S)
Controle
23,94 2,24a,b
D0
22,17 2,48a
D13
24,75 3,41b
- letras minsculas diferentes na mesma coluna diferena significativa (p 0,05)
63
Figura 01 Valores mdios (em dias) para o intervalos interestro nos grupos controle, D0 e
D13
Intervalo interestro (dias)
25
24,5
24
23,5
23
22,5
22
21,5
21
20,5
Controle
D0
D13
Grupos Estudados
5.2. Sincronizao do estro, dimetros dos folculos ovulatrios e do corpo lteo

O corpo lteo deixou de ser visualizado na imagem ultra-sonogrfica 3,04 1,29
dias aps aplicao da PGF2 e os animais ovularam em mdia 6,00 2,61 dias aps essa
aplicao, ocorrendo uma disperso de 5 dias entre as ovulaes. O dimetro mdio dos
folculos ovulatrios ps-sincronizao observado no dia anterior ao dia da deteco da
ovulao foi de 13,50 2,10 mm, semelhante ao dimetro mdio mensurado no ciclo estral
subseqente sincronizao, que foi de 13,00 1,30 mm. A visualizao ultra-sonogrfica
do segundo corpo lteo aps a ovulao foi possvel em mdia 3,66 1,49 dias, j o seu
desaparecimento antes da ovulao subseqente ocorreu em mdia 2,63 1,56 dias, e o
dimetro mximo do mesmo foi em mdia de 20,70 2,40 mm.
64
5.3. Dosagens hormonais

Os resultados das concentraes plasmticas de progesterona e 17-estradiol ao
longo do ciclo estral esto expressos, respectivamente, nas tabelas 05 e 06 e figuras 02 e 03.
As concentraes plasmticas de progesterona obtiveram valores mdios mnimos
e mximos de 0,06 ng/mL e 4,53 ng/mL, respectivamente. Os valores de progesterona se
modificaram ao longo do ciclo estral (p < 0,0001) e no foram observadas diferenas entre os
grupos estudados (controle, D0 ou D13) (p = 0,9239), alm de no se evidenciar interao
entre os grupos estudados e os dias do ciclo estral (p = 0,1187). O desdobramento dos efeitos
significativos demonstrou haver efeito cbico para o dia (todas as curvas de regresso
polinomial propostas encontram-se no apndice II).
As concentraes plasmticas de 17-estradiol obtiveram valores mdios mnimos
e mximos de 6,22 pg/mL e 14,10 pg/mL, respectivamente. Os valores no se modificaram ao
longo do ciclo estral (p = 0,2086), no foram observadas diferenas entre os grupos estudados
(p = 0,1331), e tambm no foi evidenciada interao entre os grupos estudados e os dias do
ciclo estral (p = 0,2560).
65
Tabela 05 Valores mdios e desvios padro da concentrao plasmtica de progesterona

(ng/mL) ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
0,12 0,12
0,12 0,08
0,07 0,08
0,16 0,11
0,21 0,06
0,08 0,07
0,63 0,31
0,57 0,25
0,42 0,25
1,07 0,67
0,96 0,52
0,91 0,38
1,69 0,65
2,18 0,43
1,23 0,55
2,29 0,81
2,79 0,74
1,66 1,07
2,81 0,58
3,23 0,89
2,20 1,05
3,37 0,95
3,91 1,20
2,56 1,55
3,77 1,14
3,92 0,98
2,73 1,84
4,15 1,46
3,02 1,23
3,51 1,65
10
4,53 1,63
3,18 1,87
3,51 1,15
11
3,84 1,93
3,59 2,47
3,14 1,57
12
4,01 2,19
2,89 1,07
3,24 1,24
13
3,12 1,23
3,88 2,35
3,84 1,54
14
3,20 1,71
3,94 1,73
3,62 1,34
15
2,84 1,06
2,87 0,82
4,21 1,65
16
2,60 1,35
1,95 1,42
4,15 1,42
17
2,38 1,43
3,22 4,11
2,98 1,18
18
1,92 1,69
2,01 2,47
1,98 1,56
19
0,85 0,88
0,39 0,41
1,28 1,96
20
0,32 0,77
0,61 0,84
0,24 0,29
21
0,08 0,08
0,11 0,07
0,08 0,08
22
0,06 0,06
0,07 0,06
0,52 1,36
23
0,12 0,12
0,12 0,08
0,07 0,08
ESTRAL
66
Tabela 06 Valores mdios e desvios padro da concentrao plasmtica de 17-estradiol

(pg/mL) ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
8,92 2,80
8,21 3,45
8,30 3,70
7,55 3,03
8,78 2,34
7,86 3,49
7,91 3,65
8,45 3,01
12,71 15,73
7,69 2,88
13,30 5,46
9,00 3,60
6,97 3,07
12,78 8,42
11,39 10,80
7,33 3,00
9,33 1,75
11,28 9,90
8,20 2,35
9,65 5,84
12,71 13,01
8,82 3,43
9,50 6,24
11,38 10,88
8,32 3,29
8,02 2,89
12,48 11,18
9,25 4,07
7,17 2,70
8,01 2,95
10
8,57 2,52
6,33 4,17
8,38 4,67
11
7,71 3,24
7,96 2,59
9,86 1,17
12
7,06 2,33
8,20 2,85
6,64 3,03
13
7,07 2,42
9,19 0,52
6,22 2,19
14
7,64 2,76
7,89 0,23
6,23 2,91
15
8,22 2,83
7,67 0,94
10,49 6,58
16
7,32 2,47
8,74 2,69
11,57 9,42
17
7,32 3,26
6,70 2,56
10,50 7,19
18
9,06 3,57
7,55 1,96
12,21 15,51
19
9,10 4,12
6,84 2,68
7,11 2,32
20
10,01 4,42
10,72 6,23
9,94 4,27
21
9,53 3,91
10,54 1,77
8,66 2,36
22
9,02 3,59
14,09 11,44
8,33 3,08
23
8,92 2,80
8,21 3,45
8,30 3,70
ESTRAL
67
Figura 02 Valores mdios da concentrao plasmtica de progesterona (ng/mL) ao longo do
Niveis Plasmticos de Progesterona

(ng/mL)
ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13
5,00
4,50
4,00
3,50
3,00
Grupo Controle
2,50
Grupo D0
2,00
Grupo D13
1,50
1,00
0,50
0,00
0
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
Dias do Ciclo Estral
Figura 03 Valores mdios da concentrao plasmtica de 17-estradiol (pg/mL) ao longo do

Nveis Plasmticos de Estradiol

(pg/mL)
16,00
14,00
12,00
10,00
Grupo Controle
Grupo D0
8,00
Grupo D13
6,00
4,00
2,00
0,00
0
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
68
5.4. Avaliaes por palpao transretal
5.4.1. Tnus uterino

Os resultados obtidos para o tnus uterino ao longo do ciclo estral esto expressos
na tabela 07 e figura 04. Para esta varivel houve diferena significativa ao longo do ciclo
estral (p < 0, 0001) com os maiores valores observados durante o perodo periovulatrio e os
menores durante a fase progesternica. No houve diferena significativa entre o grupo
controle e os grupos que foram submetidos colheita de fragmentos endometriais (D0 e D13)
(p = 0,1797), mas evidenciou-se a presena de diferena significativa entre os grupos com
colheita de bipsias (D0 e D13) (p = 0,0119), com o grupo D13 apresentando geralmente um
tnus mais elevado. Tambm foi observada interao entre os grupos estudados e os dias do
ciclo estral (p = 0,0034). O desdobramento dos efeitos significativos demonstrou haver efeito
cbico para o dia.
69
Tabela 07 Valores mdios e desvios padro do escore para o tnus uterino ao longo do ciclo
estral nos grupos controle, D0 e D13
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
2,88 0,34
3,00 0,00
3,00 0,00
2,63 0,50
2,17 0,41
2,86 0,38
2,56 0,51
2,00 0,63
2,50 0,53
2,31 0,48
2,00 0,00
2,00 0,53
2,06 0,25
1,67 0,52
2,13 0,83
1,69 0,48
1,67 0,52
1,38 0,52
1,38 0,50
1,33 0,52
1,88 0,64
1,40 0,51
1,17 0,41
1,29 0,49
1,27 0,46
1,33 0,52
1,57 0,79
1,53 0,64
1,17 0,41
1,33 0,52
10
1,40 0,51
1,17 0,41
2,00 0,82
11
1,40 0,51
1,50 0,55
2,00 0,00
12
1,27 0,46
1,50 0,55
1,50 0,71
13
1,22 0,44
2,50 0,71
1,83 0,98
14
1,36 0,50
2,00 1,41
1,33 0,82
15
1,38 0,51
1,50 1,00
1,86 0,69
16
1,40 0,51
1,50 0,58
1,86 0,90
17
1,69 0,70
2,20 0,84
2,00 0,82
18
1,81 0,66
2,17 0,98
2,29 0,76
19
2,19 0,54
2,00 0,89
2,63 0,52
20
2,50 0,63
2,50 0,84
2,63 0,52
21
2,75 0,45
2,67 0,52
2,88 0,35
22
2,88 0,34
2,83 0,41
2,88 0,35
23
2,88 0,34
3,00 0,00
3,00 0,00
ESTRAL
70
Figura 04 Valores mdios do escore para o tnus uterino ao longo do ciclo estral nos grupos
controle, D0 e D13
3,5
Tnus Uterino
3
Grupo Controle
2,5
Grupo D0
Grupo D13
2
1,5
1
0 1 2 3
4 5 6 7
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
5.4.2. Espessura uterina

Os resultados obtidos para a espessura uterina ao longo do ciclo estral esto
expressos na tabela 08 e figura 05. Para esta varivel notou-se uma modificao ao longo do
ciclo estral (p = 0,0006), com um aumento da espessura prximo ao estro e uma diminuio
durante a fase progesternica. No foi observada diferena significativa entre grupos
estudados (p = 0,3429), contudo foi observada interao entre os grupos estudados e os dias
do ciclo estral (p = 0,0088). O desdobramento dos efeitos significativos demonstrou haver
efeito quadrtico para o dia.
71
Tabela 08 Valores mdios e desvios padro do escore para a espessura uterina ao longo do
Dia do Ciclo
Grupo Controle
Grupo D0
Grupo D13
1,63 0,50
1,67 0,26
1,31 0,37
1,42 0,29
1,60 0,42
1,57 0,35
1,57 0,46
1,50 0,32
1,07 0,19
1,59 0,58
1,25 0,29
1,19 0,26
1,27 0,26
1,50 0,32
1,25 0,27
1,27 0,26
1,25 0,27
1,19 0,26
1,28 0,52
1,42 0,20
1,25 0,27
1,30 0,53
1,33 0,41
1,14 0,24
1,21 0,32
1,17 0,26
1,21 0,27
1,27 0,53
1,25 0,27
1,17 0,26
10
1,30 0,53
1,33 0,26
1,13 0,25
11
1,27 0,53
1,33 0,26
1,00 0,00
12
1,33 0,56
1,25 0,27
1,00 0,00
13
1,11 0,22
1,25 0,35
1,17 0,26
14
1,25 0,26
1,25 0,35
1,08 0,20
15
1,15 0,24
1,25 0,29
1,14 0,24
16
1,17 0,31
1,25 0,29
1,29 0,27
17
1,40 0,51
1,40 0,22
1,21 0,39
18
1,30 0,53
1,58 0,38
1,21 0,27
19
1,23 0,53
1,30 0,27
1,38 0,35
20
1,37 0,52
1,63 0,25
1,31 0,26
21
1,47 0,50
1,50 0,45
1,44 0,32
22
1,59 0,52
1,80 0,27
1,56 0,32
23
1,63 0,50
1,67 0,26
1,31 0,37
Estral
72
Figura 05 Valores mdios do escore para a espessura uterina ao longo do ciclo estral nos
grupos controle, D0 e D13
2,00
Espessura Uterina
1,80
1,60
Grupo Controle
Grupo D0
1,40
Grupo D13
1,20
1,00
0,80
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
5.5. Avaliaes ultra-sonogrficas
5.5.1. Coluna lquida em fundo vaginal

Os resultados obtidos para a coluna lquida em fundo vaginal ao longo do ciclo
estral esto expressos na tabela 09 e figura 06. Para esta varivel foram observadas diferenas
significativas durante o ciclo estral (p < 0,0001), e uma diferena entre os grupos estudados (p
= 0,0244), com os grupos D0 e D13 apresentando maiores colees lquidas (p = 0,0105),
embora semelhantes entre si (p = 0,2228). Contudo, no foi observada interao entre os
grupos estudados e os dias do ciclo estral (p = 0,0935). Portanto, pode ser observado um
aumento da coluna lquida prximo ao estro e uma coluna menor durante a fase
progesternica, embora os animais dos grupos com colheita de fragmentos endometriais
tenham apresentando maiores colees lquidas durante a fase progesternica. O
desdobramento dos efeitos significativos demonstrou haver efeito cbico para o dia.
73
Tabela 09 Valores mdios e desvios padro do escore para a coluna lquida em fundo
vaginal ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
2,19 0,66
2,50 0,55
1,50 0,76
1,00 1,21
1,33 1,03
1,43 0,98
0,88 0,89
0,83 0,75
1,25 0,46
0,81 0,83
0,67 0,82
1,13 0,64
1,07 1,03
0,60 0,55
1,00 0,76
0,69 0,70
0,50 0,84
1,00 0,76
0,81 0,91
0,33 0,52
0,75 0,71
0,73 0,46
0,67 0,82
0,57 1,13
0,80 0,94
0,83 1,17
0,29 0,49
0,67 1,05
1,00 0,89
0,67 0,52
10
0,53 0,74
1,00 0,71
0,50 0,58
11
0,67 1,05
0,67 0,82
0,00 0,00
12
0,53 0,64
0,67 1,03
0,00 0,00
13
0,56 053
1,00 0,00
0,33 0,82
14
0,45 0,52
2,00 1,41
1,17 0,75
15
0,31 0,48
1,25 1,26
0,71 0,76
16
0,53 0,64
1,50 1,29
0,57 0,53
17
0,50 0,89
1,60 1,14
1,00 0,58
18
0,63 0,62
1,50 1,22
0,88 0,99
19
0,81 0,75
2,00 0,89
0,75 0,71
20
1,69 1,01
1,83 0,75
2,38 0,74
21
1,88 0,89
2,50 0,55
2,13 0,83
22
2,13 0,72
2,33 0,82
1,88 0,99
23
2,19 0,66
2,50 0,55
1,50 0,76
ESTRAL
74
Figura 06 Valores mdios do escore para a coluna lquida em fundo vaginal ao longo do
Acmulo de Lquido no
Fundo Vaginal
3,00
2,50
2,00
Grupo Controle
Grupo D0
1,50
Grupo D13
1,00
0,50
0,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
5.5.2. Coluna lquida nos cornos uterinos

Os resultados obtidos para a presena de coluna lquida nos cornos uterinos ao
longo do ciclo estral esto expressos na tabela 10 e na figura 07, respectivamente.
Para o acmulo de lquido nos cornos uterino foi observado um comportamento
diferente ao longo do ciclo estral (p < 0,0001), com os grupos estudados apresentando um
comportamento diferente entre si (p = 0,0055), os grupos D0 e D13 apresentando-se
semelhantes entre si (p = 0,8888) e com maior coleo lquida quando comparado ao grupo
controle (p = 0,0017), alm de uma forte interao entre os grupos estudados e os dias do
ciclo estral (p < 0,0001). Dessa forma pode ser observado maior acmulo lquido nos
momentos prximos ao estro e menor acmulo na fase progesternica nos animais controle.
Nos grupos com colheita de fragmentos endometriais observou-se um acmulo
significativamente maior de lquido nos cornos uterinos, que se iniciou a partir do dia 5 para o
grupo D13 e a partir do dia 9 ou 10 para o grupo D0, com eventuais picos nos momentos
prximos s colheitas de biopsias. O desdobramento dos efeitos significativos demonstrou
haver efeito cbico para o dia.
75
Tabela 10 Valores mdios e desvios padro do escore para a coluna lquida nos cornos
uterinos ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
1,28 0,52
1,27 0,47
1,00 0,00
1,06 0,44
1,00 0,00
1,00 0,00
1,03 0,18
1,00 0,00
1,00 0,00
1,00 0,00
1,00 0,00
1,00 0,00
0,93 0,38
1,00 0,00
0,93 0,46
0,93 0,26
1,00 0,00
1,06 0,25
0,84 0,37
0,67 0,49
1,06 0,25
0,73 0,45
0,67 0,49
1,07 0,27
0,79 0,51
0,75 0,62
1,00 0,00
0,79 0,41
0,83 0,83
1,00 0,00
10
0,57 0,50
1,17 0,39
1,43 0,79
11
0,79 0,42
1,17 0,39
1,33 0,58
12
0,83 0,38
1,50 0,52
1,25 0,50
13
0,88 0,33
2,25 0,96
1,30 0,48
14
0,67 0,49
2,25 0,96
1,08 0,29
15
0,84 0,37
1,75 0,89
1,15 0,38
16
0,82 0,39
1,75 0,71
1,62 0,51
17
0,71 0,46
1,60 0,84
1,25 0,45
18
0,97 0,31
1,58 0,51
1,19 0,40
19
1,04 0,19
1,33 0,49
1,27 0,59
20
1,14 0,35
1,00 0,00
1,06 0,25
21
1,03 0,41
1,18 0,40
1,21 0,43
22
1,16 0,45
1,17 0,39
1,27 0,46
23
1,28 0,52
1,27 0,47
1,00 0,00
ESTRAL
76
Figura 07 Valores mdios do escore para a coluna lquida nos cornos uterinos ao longo do
Acmulo de Lquido nos

Cornos Uterinos
2,50
2,00
Grupo Controle
1,50
Grupo D0
Grupo D13
1,00
0,50
0,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
5.5.3. Textura uterina

Os resultados obtidos para a textura uterina ao longo do ciclo estral esto
expressos na tabela 11 e figura 08.
Para esta varivel houve uma variao significativa ao longo do ciclo estral (p <
0,0001), podendo ser observado uma textura uterina mais heterognea prximo ao estro e uma
imagem ultra-sonogrfica mais homognea durante a fase progesternica. Todos os grupos
estudados se comportaram de forma semelhante (p = 0,2846) e no foi evidenciada interao
entre os grupos estudados e os dias do ciclo estral (p = 0,6862). O desdobramento dos efeitos
significativos demonstrou haver efeito cbico para o dia.
77
Tabela 11 Valores mdios e desvios padro do escore para a textura uterina ao longo do
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
3,00 0,00
3,00 0,00
3,00 0,00
2,94 0,25
3,00 0,00
3,00 0,00
2,87 0,35
2,50 0,55
2,63 0,52
2,50 0,52
2,17 0,41
2,38 0,52
2,06 0,44
1,50 0,55
2,13 0,64
1,80 0,77
1,00 0,00
1,75 0,71
1,19 0,40
1,00 0,00
1,38 0,52
1,00 0,00
1,00 0,00
1,14 0,38
1,00 0,00
1,00 0,00
1,29 0,49
1,00 0,00
1,00 0,00
1,33 0,82
10
1,00 0,00
1,00 0,00
1,25 0,50
11
1,00 0,00
1,00 0,00
1,50 0,71
12
1,00 0,00
1,00 0,00
1,00 0,00
13
1,11 0,33
1,50 0,71
1,17 0,41
14
1,27 0,47
1,50 0,71
1,50 0,84
15
1,46 0,52
1,75 0,50
1,57 0,79
16
1,50 0,52
1,75 0,96
2,00 0,63
17
1,75 0,68
1,80 0,84
2,00 0,58
18
2,00 0,73
1,83 0,75
2,14 0,69
19
2,25 0,86
2,00 0,63
2,13 0,64
20
2,38 0,81
2,33 0,52
2,50 0,76
21
2,75 0,45
2,33 0,52
2,63 0,74
22
2,94 0,25
2,50 0,55
2,88 0,35
23
3,00 0,00
3,00 0,00
3,00 0,00
ESTRAL
78
Figura 08 Valores mdios do escore para a textura uterina ao longo do ciclo estral nos
grupos controle, D0 e D13
3,50
Textura Uterina
3,00
2,50
Grupo Controle
2,00
Grupo D0
1,50
Grupo D13
1,00
0,50
0,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
5.5.4. Espiralizao uterina

Os resultados obtidos para a espiralizao nos cornos uterinos ao longo do ciclo
estral esto expressos na tabela 12 e figura 09, respectivamente.
As observaes ultra-sonogrficas da espiralizao uterina demonstraram uma
modificao significativa durante o ciclo estral (p < 0, 0001), um comportamento semelhante
entre os grupos estudados (p = 0,2393), e a ausncia de interao entre os grupos estudados e
os dias do ciclo estral (p = 0,3780). Podendo, ento, ser observado um aumento da
espiralizao uterina durante a fase progesternica e uma diminuio durante a fase
estrognica. O desdobramento do efeito significativo de dia demonstrou haver efeito cbico.
79
Tabela 12 Valores mdios e desvios padro do escore para a espiralizao uterina nos
cornos uterinos ao longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
1,41 0,50
1,17 0,39
1,44 0,51
1,63 0,49
1,42 0,51
1,43 0,51
1,81 0,40
1,67 0,49
2,00 0,63
2,13 0,66
2,17 1,03
2,56 0,81
2,59 1,01
2,50 1,17
3,13 0,89
3,06 0,91
2,92 1,00
3,56 0,73
3,44 0,80
3,00 1,04
3,75 0,45
3,73 0,52
3,33 0,78
3,86 0,36
3,90 0,31
3,42 0,79
3,86 0,36
3,93 0,25
3,58 0,79
4,00 0,00
10
3,83 0,38
3,75 0,45
3,75 0,46
11
3,97 0,18
3,75 0,45
3,75 0,50
12
4,00 0,00
3,92 0,29
4,00 0,00
13
3,94 0,24
3,00 1,15
3,58 0,79
14
3,82 0,39
3,00 1,15
3,25 1,14
15
3,73 0,60
3,50 0,93
3,43 0,94
16
3,63 0,67
3,50 0,93
3,36 0,93
17
3,34 0,94
3,20 1,03
2,79 1,05
18
3,03 0,90
2,92 1,16
2,44 0,96
19
2,28 0,77
2,83 1,27
2,44 0,96
20
2,26 0,88
2,17 1,19
2,25 1,00
21
2,00 0,80
2,00 0,95
1,88 0,96
22
1,66 0,79
1,58 0,90
1,81 0,98
23
1,41 0,50
1,17 0,39
1,44 0,51
ESTRAL
80
Figura 09 Valores mdios do escore para a espiralizao uterina nos cornos uterinos ao
longo do ciclo estral nos grupos controle, D0 e D13
4,50
Espiralizao Uterina
4,00
3,50
3,00
Grupo Controle
2,50
Grupo D0
2,00
Grupo D13
1,50
1,00
0,50
0,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
5.5.5. Dimetro dos cornos uterinos

Os resultados obtidos para o dimetro dos cornos uterinos, nos aspectos dorsal,
cranial e ventral ao longo do ciclo estral esto expressos, em centmetros (cm), nas tabelas 13,
14 e 15 e nas figuras 10, 11 e 12, respectivamente.
O dimetro dos cornos uterinos modificou-se significativamente durante o ciclo
estral (p < 0,0001) e entre cada uma das regies avaliadas (dorsal, cranial, ventral) (p =
0,0027). Contudo, o dimetro foi semelhante entre os grupos (p = 0,8303) e no foi observada
interao entre os grupos estudados e os dias do ciclo estral (p = 0,8938). Dessa forma pode
ser observado um aumento prximo fase estrognica e uma diminuio durante a fase luteal.
O desdobramento dos efeitos significativos demonstrou haver efeito cbico para o dia.
81
Tabela 13 Valores mdios e desvios padro (em cm) para o dimetro dorsal dos cornos
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
2,18 0,18
2,27 0,35
2,07 0,21
2,14 0,21
2,06 0,26
2,06 0,12
2,05 0,19
2,06 0,23
2,00 0,14
1,98 0,11
1,92 0,11
1,93 0,12
1,85 0,11
1,84 0,21
1,93 0,13
1,77 0,22
1,81 0,16
1,85 0,17
1,74 0,22
1,73 0,15
1,86 0,15
1,74 0,16
1,69 0,14
1,81 0,13
1,74 0,16
1,67 0,12
1,79 0,14
1,71 0,20
1,70 0,11
1,74 0,06
10
1,72 0,16
1,66 0,14
1,75 0,18
11
1,73 0,17
1,67 0,14
1,79 0,07
12
1,71 0,18
1,70 0,13
1,81 0,06
13
1,69 0,11
2,10 0,71
1,72 0,12
14
1,73 0,13
2,10 0,48
1,70 0,14
15
1,69 0,10
1,87 0,37
1,77 0,12
16
1,73 0,13
1,85 0,29
1,79 0,17
17
1,80 0,19
1,94 0,21
1,82 0,19
18
1,82 0,21
1,86 0,25
1,86 0,20
19
1,94 0,20
1,93 0,21
1,89 0,21
20
1,96 0,27
2,08 0,17
1,92 0,18
21
2,05 0,22
2,16 0,32
2,01 0,19
22
2,16 0,25
2,36 0,44
2,07 0,21
23
2,18 0,18
2,27 0,35
2,07 0,21
ESTRAL
82
Tabela 14 Valores mdios e desvios padro (em cm) para o dimetro cranial dos cornos
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
2,25 0,26
2,36 0,36
2,13 0,26
2,30 0,36
2,33 0,48
2,07 0,16
2,13 0,25
2,15 0,35
2,03 0,12
2,08 0,18
1,97 0,16
2,02 0,15
1,98 0,18
1,99 0,18
1,93 0,18
1,88 0,16
1,88 0,18
1,80 0,11
1,81 0,12
1,85 0,11
1,78 0,12
1,80 0,13
1,82 0,08
1,83 0,11
1,81 0,13
1,78 0,07
1,78 0,11
1,80 0,10
1,81 0,12
1,76 0,09
10
1,78 0,12
1,80 0,11
1,81 0,09
11
1,79 0,15
1,76 0,10
1,74 0,08
12
1,75 0,16
1,74 0,07
1,85 0,06
13
1,75 0,08
2,02 0,26
1,74 0,13
14
1,77 0,19
2,19 0,61
1,81 0,13
15
1,74 0,12
1,91 0,32
1,81 0,14
16
1,79 0,12
1,97 0,24
1,81 0,17
17
1,88 0,18
1,96 0,20
1,88 0,16
18
1,93 0,24
1,95 0,17
1,94 0,15
19
1,91 0,19
2,04 0,17
1,99 0,16
20
1,97 0,21
2,30 0,18
2,00 0,15
21
2,11 0,25
2,18 0,27
1,98 0,17
22
2,12 0,19
2,30 0,36
2,14 0,24
23
2,25 0,26
2,36 0,36
2,13 0,26
ESTRAL
83
Tabela 15 Valores mdios e desvios padro (em cm) para o dimetro ventral dos cornos
DIA DO CICLO
GRUPO CONTROLE
GRUPO D0
GRUPO D13
2,24 0,29
2,21 0,27
2,06 0,17
2,20 0,27
2,04 0,25
2,05 0,16
2,14 0,26
2,11 0,22
2,06 0,21
2,02 0,17
1,96 0,17
1,95 0,13
1,96 0,16
1,89 0,25
1,88 0,19
1,85 0,19
1,87 0,15
1,84 0,12
1,83 0,19
1,84 0,14
1,86 0,17
1,80 0,17
1,73 0,14
1,81 0,12
1,78 0,16
1,68 0,14
1,81 0,11
1,78 0,17
1,75 0,11
1,82 0,10
10
1,79 0,18
1,71 0,09
1,76 0,09
11
1,77 0,15
1,73 0,10
1,77 0,11
12
1,75 0,20
1,69 0,08
1,83 0,03
13
1,74 0,11
1,99 0,43
1,78 0,15
14
1,75 0,20
2,08 0,58
1,82 0,12
15
1,73 0,15
1,88 0,37
1,79 0,19
16
1,78 0,12
1,95 0,38
1,81 0,21
17
1,84 0,16
1,96 0,27
1,86 0,20
18
1,88 0,22
1,94 0,16
1,88 0,20
19
1,96 0,19
1,98 0,22
2,01 0,17
20
2,03 0,28
2,13 0,24
1,97 0,20
21
2,12 0,21
2,11 0,29
2,05 0,20
22
2,22 0,28
2,34 0,58
2,06 0,23
23
2,24 0,29
2,21 0,27
2,06 0,17
ESTRAL
84
Figura 10 Valores mdios (em cm) para o dimetro dorsal dos cornos uterinos ao longo do
Dimetro Dorsal dos Cornos

Uterinos (cm)
2,60
2,40
2,20
2,00
Grupo Controle
1,80
Grupo D0
1,60
Grupo D13
1,40
1,20
1,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
Figura 11 Valores mdios (em cm) para o dimetro cranial dos cornos uterinos ao longo do
Dimetro Cranial dos Cornos

Uterinos (cm)
2,60
2,40
2,20
2,00
Grupo Controle
1,80
Grupo D0
1,60
Grupo D13
1,40
1,20
1,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
85
Figura 12 Valores mdios (em cm) para o dimetro ventral dos cornos uterinos ao longo do
Dimetro Ventral dos Cornos

Uterinos (cm)
2,60
2,40
2,20
2,00
Grupo Controle
1,80
Grupo D0
1,60
Grupo D13
1,40
1,20
1,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
86
5.6. Imunoistoqumica
5.6.1. Contagem dos ncleos positivos para receptor de progesterona

Os resultados das contagens de ncleos positivos para receptor de progesterona no
epitlio glandular e estroma uterino esto apresentados nas tabelas 16 e 17 e nas figuras 13 e
14, respectivamente. As figuras 21 e 23 mostram a imunomaracao de receptores de
progesterona no epitlio glandular e estroma uterino, respectivamente, em aumento de 1000X.
As contagens foram diferentes entre os tecidos avaliados (epitlio glandular e
estroma uterino) (p = 0,0152), com uma maior contagem no estroma. Contudo, as contagens
no se modificaram ao longo do ciclo estral (p = 0,8053) e os grupos estudados no diferiram
significativamente (p = 0,1255). No foi observada interao entre os grupos e os dias do
ciclo estral avaliados (p = 0,7683), entre grupos e tecidos estudados (p = 0,6557), entre os dias
do ciclo estral e tecidos avaliados (p = 0,4850) e entre grupos, dias do ciclo estral e tecidos
avaliados (p = 0,3464).
Tabela 16 Valores mdios e desvios padro para a contagem relativa (%) dos ncleos
positivos para receptor de progesterona no epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos
grupos D0 e D13
EPITLIO GLANDULAR
DIA DO CICLO ESTRAL
GRUPO D0
GRUPO D13
D0
90,13% 6,26%
89,81% 5,43%
D5
90,83% 2,72%
93,21% 2,75%
D9
90,25% 6,23%
90,89% 5,93%
D13
87,26% 9,38%
88,48% 8,35%
D19
89,91% 5,34%
95,27% 5,40%
87
positivos para receptor de progesterona no estroma uterino ao longo do ciclo estral nos grupos
D0 e D13
ESTROMA UTERINO
DIA DO CICLO ESTRAL
GRUPO D0
GRUPO D13
D0
92,02% 4,24%
95,12% 3,22%
D5
94,16% 4,02%
89,56% 5,36%
D9
92,18% 4,78%
94,66% 4,49%
D13
91,39% 5,25%
94,91% 4,14%
D19
92,72% 1,30%
93,40% 3,94%
Figura 13 Valores mdios para a contagem relativa (%) dos ncleos positivos para receptor
de progesterona no epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13
Porcentagem de Ncleos
Positivos para Receptor de
Progesterona no Epitlio
Glandular (%)
100,00%
95,00%
90,00%
85,00%
Grupo D0
Grupo D13
80,00%
75,00%
70,00%
D0
D5
D9
D13
D19
88
de progesterona no estroma uterino ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13
Progesterona no Estroma
Uterino (%)
100,00%
95,00%
90,00%
85,00%
Grupo D0
Grupo D13
80,00%
75,00%
70,00%
D0
D5
D9
D13
D19
5.6.2. Contagem dos ncleos positivos para receptor de estrgeno

Os resultados das contagens de ncleos positivos para receptor de estrgeno no
epitlio glandular e estroma uterino esto apresentados nas tabelas 18 e 19 e nas figuras 15 e
16, respectivamente. As figuras 22 e 24 mostram a imunomaracao de receptores de
estrgeno no epitlio glandular e estroma uterino, respectivamente, em aumento de 1000X.
As contagens foram diferentes entre os tecidos avaliados (epitlio glandular e
estroma uterino) (p = 0,0172), com uma maior contagem no estroma. Os valores tambm se
modificaram ao longo do ciclo estral (p = 0,0068) com os maiores sendo observados no incio
do ciclo estral. Os grupos D0 e D13 se comportaram de forma semelhante (p = 0,9976), ao
longo do ciclo estral (p = 0,5693) e com relao aos tecidos estudados (p = 0,9077). No foi
observada interao entre os dias do ciclo estral e tecidos avaliados (p = 0,5577) e entre os
grupos, dias do ciclo estral e tecidos avaliados (p = 0,0525). O desdobramento do efeito
significativo do dia demonstrou se tratar de uma regresso polinomial linear.
89
positivos para receptor de estrgeno no epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos grupos
D0 e D13
EPITLIO GLANDULAR
DIA DO CICLO ESTRAL
GRUPO D0
GRUPO D13
D0
92,28% 4,37%
91,18% 4,72%
D5
89,90% 5,77%
85,86% 7,38%
D9
86,77% 4,91%
82,61% 6,11%
D13
87,51% 7,01%
83,81% 12,54%
D19
75,81% 10,29%
90,80% 2,21%
positivos para receptor de estrgeno no estroma uterino ao longo do ciclo estral nos grupos
D0 e D13 e
ESTROMA UTERINO
DIA DO CICLO ESTRAL
GRUPO D0
GRUPO D13
D0
92,90% 2,48%
94,52% 3,47%
D5
92,83% 3,46%
93,04% 3,42%
D9
89,06% 6,16%
87,69% 3,55%
D13
85,59% 9,80%
86,16% 9,34%
D19
86,69% 5,29%
84,32% 12,79%
90
de estrgeno no epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13
Estrgeno no Epitlio
Glandular (%)
100,00%
95,00%
90,00%
85,00%
Grupo D0
Grupo D13
80,00%
75,00%
70,00%
D0
D5
D9
D13
D19
de estrgeno no estroma uterino ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13
Estrgeno no Estroma
Uterino (%)
100,00%
95,00%
90,00%
85,00%
Grupo D0
Grupo D13
80,00%
75,00%
70,00%
D0
D5
D9
D13
D19
91

progesterona
Os resultados da intensidade de marcao para os ncleos positivos para receptor
de progesterona no epitlio glandular e estroma uterino esto apresentados nas tabelas 20 e 21
e nas figuras 17 e 18, respectivamente. As figuras 21 e 23 mostram a imunomaracao de
receptores de progesterona no epitlio glandular e estroma uterino, respectivamente, em
aumento de 1000X.
A observao da intensidade de marcao demonstrou haver diferena entre os
grupos avaliados, com uma marcao mais intensa observada no grupo D13 (p = 0,0131).
Porm, no foi observada interao entre grupos e dias do ciclo estral avaliados (p = 0,1644),
entre grupos e tecidos (p = 0,5398) e entre grupos, tecidos e dias do ciclo estral (p = 0,9998).
Foi ainda verificada uma variao ao longo do ciclo estral (p < 0,0001) e entre os dias do
ciclo estral e tecidos avaliados (p = 0,0108). No foi verificada diferena significativa para os
tecidos avaliados (epitlio glandular e estroma uterino) (p = 0,2585). O desdobramento
demonstrou haver efeito cbico para o dia.
Tabela 20 Valores mdios e desvios padro do escore para a intensidade de marcao dos
ncleos positivos para receptor de progesterona no epitlio glandular ao longo do ciclo estral
nos grupos D0 e D13
EPITLIO GLANDULAR
DIA DO CICLO ESTRAL
GRUPO D0
GRUPO D13
D0
3,00 1,00
3,00 0,89
D5
3,00 1,41
4,00 0,00
D9
2,63 0,92
3,40 0,89
D13
1,17 0,41
1,33 0,82
D19
1,40 0,89
1,00 0,00
92
ncleos positivos para receptor de progesterona no estroma uterino ao longo do ciclo estral
nos grupos D0 e D13
ESTROMA UTERINO
DIA DO CICLO ESTRAL
GRUPO D0
GRUPO D13
D0
3,67 0,52
3,83 0,41
D5
2,60 0,89
3,71 0,76
D9
2,25 0,89
3,20 0,45
D13
1,00 0,00
1,29 0,49
D19
2,00 1,00
2,00 1,26
Figura 17 Valores mdios do escore para a intensidade de marcao dos ncleos positivos
para receptor de progesterona no epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e
Intensidade de Marcao para

o Receptor de Progesterona no
Epitlio Glandular
D13
4
3,5
3
2,5
2
Grupo D0
1,5
Grupo D13
1
0,5
0
D0
D5
D9
D13
D19
93
para receptor de progesterona no estroma uterino ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e

o Receptor de Progesterona no
Estroma Uterino
D13
4
3,5
3
2,5
2
Grupo D0
1,5
Grupo D13
1
0,5
0
D0
D5
D9
D13
D19

estrgeno
Os resultados da intensidade de marcao para os ncleos positivos para o
receptor de estrgeno no epitlio glandular e estroma uterino esto apresentados nas tabelas
22 e 23 e nas figuras 19 e 20, respectivamente. As figuras 22 e 24 mostram a imunomaracao
de receptores de estrgeno no epitlio glandular e estroma uterino, respectivamente, em
aumento de 1000X.
A avaliao da intensidade de marcao para o estrgeno demonstrou que esta
varivel se modificou durante o ciclo estral (p < 0,0001) e entre os dias do ciclo estral e os
tecidos avaliados (p = 0,0009), contudo, no houve diferena significativa entre os dias do
ciclo estral e os grupos avaliados (p = 0,135). Foi ainda observada a ausncia de diferena
entre os grupos (D0 e D13) (p = 0,6482) e tecidos avaliados (p = 0,1256), entre os tecidos e
grupos estudados (p = 0,8717) e entre os tecidos, grupos e dias (p = 0,9090). O
desdobramento demonstrou haver efeito cbico para o dia.
94
ncleos positivos para receptor de estrgeno no epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos
grupos D0 e D13
EPITLIO GLANDULAR
DIA DO CICLO ESTRAL
GRUPO D0
GRUPO D13
D0
3,60 0,55
3,33 0,52
D5
3,20 0,84
3,00 0,89
D9
3,50 0,93
2,75 0,96
D13
2,33 1,21
2,83 0,75
D19
1,60 0,55
2,75 0,50
ncleos positivos para receptor de estrgeno no estroma uterino ao longo do ciclo estral nos
grupos D0 e D13
ESTROMA UTERINO
DIA DO CICLO ESTRAL
GRUPO D0
GRUPO D13
D0
4,00 0,00
3,83 0,41
D5
3,60 0,55
3,67 0,52
D9
3,13 0,99
2,40 0,55
D13
2,00 0,00
2,14 0,38
D19
2,20 0,45
3,33 0,82
95
para receptor de estrgeno no epitlio glandular ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13

o Receptor de Estrgeno no
Epitlio Glandular
4
3,5
3
2,5
2
Grupo D0
1,5
Grupo D13
1
0,5
0
D0
D5
D9
D13
D19
Intensidade de Marcao para o

Receptor de Estrgeno no
Estroma Uterino
para receptor de estrgeno no estroma uterino ao longo do ciclo estral nos grupos D0 e D13
4
3,5
3
2,5
2
Grupo D0
1,5
Grupo D13
1
0,5
0
D0
D5
D9
Dias do Cilo Estral
D13
D19
96
Figura 21 Marcao imunoistoqumica de receptores de progesterona no epitlio glandular

do endomtrio de vacas Nelore nos dias 0 (A), 5 (B), 9 (C), 13 (D) e 19 (E) do ciclo estral.
Aumento de 1000X
97
Figura 22 Marcao imunoistoqumica de receptores de estrgeno no epitlio glandular do

endomtrio de vacas Nelore nos dias 0 (A), 5 (B), 9 (C), 13 (D) e 19 (E) do ciclo estral.
Aumento de 1000X
98
Figura 23 Marcao imunoistoqumica de receptores de progesterona no estroma uterino

vacas Nelore nos dias 0 (A), 5 (B), 9 (C), 13 (D) e 19 (E) do ciclo estral. Aumento de 1000X
99
Figura 24 Marcao imunoistoqumica de receptores de estrgeno no estroma uterino de

vacas Nelore nos dias 0 (A), 5 (B), 9 (C), 13 (D) e 19 (E) do ciclo estral. Aumento de 1000X
6. Discusso
Os intervalos interestro mdios encontrados em nosso estudo para os grupos

experimentais, encontravam-se dentro da variao de 17 a 25 dias relatada por Sirois & Fortune
(1988) e Lamonthe-Zavaleta et al. (1991). Contudo, foram superiores aos obtidos por McDonald
(1989), que relataram um intervalo de 22 dias para vacas, e tambm aos dados de Figueiredo et
al. (1997), que relataram um intervalo interovulatrio de 20,65 0,46 e 22,00 0,44, para
animais da raa Nelore com duas e trs ondas de crescimento folicular, respectivamente.
Contudo, alguns animais apresentaram intervalo interestro maiores, compatveis com
os descritos por Wishart (1972) que relataram intervalos superiores a 25 dias.
No foram observadas diferenas entre os grupos estudados, o que indica que a
realizao de biopsias endometriais no levou a alterao na durao do ciclo estral.
No fica claro porque os animais pertencentes ao grupo D13 apresentaram maior
intervalo interestro, em comparao aos animais do grupo D0. No grupo D13, at momento da
ovulao, haviam sido colhidas duas biopsias, enquanto que no grupo D0 j haviam sido colhidas
cinco; portanto, poderamos considerar que os animais do grupo D0 poderiam ter tido uma
liberao prematura de PGF2. Sabidamente os processos inflamatrios acarretam a liberao de
prostaglandina, sendo esta produo aumentada pela liberao de cido aracdnico dos
fosfolipdios das membranas celulares, que poderia estimular a lise do corpo lteo (Acland,
1998). Contudo, apesar de diferentes, o intervalo interestro semelhante aos dados descritos na
literatura, no caracterizando uma lutelise prematura.
Dessa forma, a estratgia de colheita de fragmentos endometriais do corno
contralateral foi eficiente em no alterar a durao do ciclo estral.
Provavelmente, as amostras obtidas foram representativas do endomtrio como um
todo, visto que, em guas no h diferena significativa entre a concentrao dos receptores de
estrgeno e progesterona nos cornos ipsilateral e contralateral ao corpo lteo (Re et al., 1995).
Para agrupar os estros optou-se pela sincronizao de cio. Contudo, foi escolhido o
protocolo descrito por Barros et al. (1999), que apesar de sincronizar a emergncia da onda e o
momento da lutelise, no possui um indutor de ovulao, no interferindo diretamente sobre o
dimetro do folculo ovulatrio. O momento mdio das ovulaes foi 6,00 2,61 (variando entre
102
3 e 13) dias aps a administrao da prostaglandina. Este momento foi tardio quando comparado
com o obtido por Barros et al. (1999), que mostraram que as ovulaes ocorreram dentro de um
intervalo de 48h, que se iniciava 72 horas aps a aplicao da prostaglandina. Contudo, nesse
estudo foi retirado um animal que ovulou no stimo dia.
Thatcher et al. (1989) relataram que 60 a 70% das vacas sincronizadas por este
protocolo foram detectadas em cio dentro de 4 dias aps a aplicao de prostaglandina. Neste
estudo no foi realizada a deteco de estro e, portanto, no pode ser feita uma comparao direta
dos resultados aqui obtidos e os obtidos por Thatcher et al. (1989). Porm, apenas no sexto dia
que foi observada uma taxa de ovulao de 75%, existindo ainda vacas que ovularam no dcimo
e dcimo terceiro dia aps a prostaglandina. Levando-se em conta que a ovulao ocorre
aproximadamente 24 horas aps o incio do estro, o momento da ovulao no presente estudo foi
posterior aos resultados obtidos por Thatcher et. al. (1989) e Barros et al. (1999).
O dimetro do folculo ovulatrio ps-sincronizao e no ciclo subseqente foram
semelhantes (13,50 2,10 e 13,00 1,30 mm, respectivamente). Contudo, foram superiores aos
relatados tambm para vacas Nelore por Figueiredo et al. (1997), que encontraram dimetros de
12,05 0,29 e 11,61 0,25, respectivamente, para ciclos com duas e trs ondas foliculares.
Em animais Bos taurus indicus, Figueiredo et al. (1997) e Rhodes et al. (1995a)
relataram dimetros mdios para os corpos lteos de 17,9 0,40 mm e 18,9 0,17 mm,
respectivamente. Contudo, Taylor & Rajamahendran (1991) e Adams et al. (1993), em animais
Bos taurus taurus, encontraram corpos lteos com dimetros entre 20 a 25 mm, sendo estes
semelhantes aos encontrados em nosso estudo (20,70 2,40 mm).
Os resultados de folculos maiores e ovulaes mais tardias sugerem um pico de LH
mais tardio, o que nos parece ser um evento fisiolgico do Nelore, uma vez que os animais
encontravam-se com oferta adequada de alimento, suplementadas com sal mineral e em escore
corporal adequado.
Quanto ao perfil hormonal, a literatura demonstra que existe um padro de elevao
do 17-estradiol relacionado ao crescimento folicular em cada onda (Ireland et al., 1979; Ginther
et al., 1989a; Ireland et al., 1984), com os nveis plasmticos de estradiol na circulao
aumentando significativamente durante a fase de desvio (Kulick et al., 1999; Ginther et al.,
2000), uma vez que o folculo dominante o principal responsvel por esta produo (Ireland et
al., 1984); e com a concentrao plasmtica mxima momentos antes da ovulao (Glencross &
103
Pope, 1981). Este padro de aumento plasmtico do 17-estradiol, acompanhando o crescimento

folicular, com concentraes elevadas durante o estro e no meio do diestro, no foram observadas
em nosso estudo, no qual no ocorreram modificaes significativas ao longo do ciclo estral. Em
ovelhas, Koligian & Stormshak (1977) tambm no observaram diferenas significativas para
este hormnio durante o ciclo estral.
Embora nesse estudo no tenha sido possvel caracterizar um pico de estradiol
prximo ao estro, foi possvel observar os efeitos classicamente atribudos a este hormnio
durante o ciclo estral, pelas alteraes detectadas por palpao e ultra-sonografia transretal, tais
como o aumento do tnus uterino, da heterogeneidade da textura uterina, da coleo lquida no
fundo vaginal e cornos uterinos e diminuio da espiralizao uterina, alm de outros achados
como a ovulao e o comportamento de cio (Pierson et al., 1987; Diaz et al., 2002).
Os baixos coeficientes de variao intra e interensaio relacionados as dosagens
hormonais sinalizam que os testes foram realizados de forma adequada e, portanto, se os
resultados no foram coerentes eles se devem a uma inadequao do kit empregado para
avaliaes de 17-estradiol em bovinos.
Para as dosagens plasmticas de progesterona foram encontrados valores entre 0,06
ng/mL e 4,53 ng/mL, observando-se uma alterao significativa ao longo do ciclo estral, com um
uma elevao ps-ovulao, um plat no meio do ciclo e um declnio prximo ao momento da
lutelise. Esses resultados so semelhantes aos observados por diversos autores na espcie bovina
(Dobson et al., 1975; Lemon, 1975; Zelinski et al., 1982; Mucciolo & Barberio, 1983; Walters et
al., 1984; Spano & Silva, 1992; Figueiredo et al., 1997), e aos relatos de Niswender et al. (2000),
que afirmam que ao longo do ciclo estral o corpo lteo aumenta em tamanho e capacidade de
liberar a progesterona.
Durante o diestro foram encontrados nveis mximos de 4,53 ng/mL, valor que se
encontra dentro dos limites encontrados pela maioria dos autores acima citados para a mesma
fase do ciclo estral.
O tnus uterino, avaliado por palpao retal, apresentou-se aumentado durante o
perodo periovulatrio, o que provavelmente reflete os nveis elevados de 17-estradiol. Esse
resultado semelhante ao descrito por Mortimer et al. (1997). Porm, Bonafos et al. (1995) alm
de relatarem um aumento periovulatrio tambm observaram uma nova elevao entre os dias 4 a
10 (incio do diestro), o que no foi observado neste estudo.
104
Os animais pertencentes aos grupos com colheita de fragmentos endometriais (D0 e

D13) apresentaram tnus semelhante ao do grupo controle, porm com elevaes episdicas
durante o diestro. Provavelmente essas elevaes estavam relacionadas colheita de fragmentos
endometriais, que podem ter desencadeado reao inflamatria local discreta e liberao de
substncias inflamatrias, suficientes para acarretarem apenas uma modificao momentnea.
Contudo, no fica claro porque os grupos com colheitas de biopsias apresentam diferena entre
si, com o grupo D13 apresentando tnus mais elevado.
Durante o ciclo estral o dimetro dos cornos uterinos, determinado por palpao e
ultra-sonografia, foi semelhante nas duas avaliaes e variou ao longo do ciclo estral. Foi
observado um dimetro superior no perodo periovulatrio e as menores medidas foram obtidas
durante a fase progesternica. Essas variaes tambm podem ser atribudas as modificaes
plasmticas das concentraes de 17-estradiol e progesterona. Resultados semelhantes foram
encontrados por Pierson et al. (1987), apesar destes terem realizados as avaliaes no corpo
uterino em novilhas Bos taurus taurus.
A ausncia de diferenas entre os grupos experimentais, para estas variveis, sugere
que as colheitas de fragmentos endometriais no influenciaram as variaes do dimetro uterino.
A mesma dinmica de acmulo de fluidos nos cornos uterinos e fundo vaginal
observada neste estudo durante o ciclo estral foi tambm verificada por Pierson et al. (1987).
Contudo, esses autores relataram uma diminuio gradual do acmulo intravaginal e mais rpida
para o intra-uterino, o que diferiu dos nossos achados, uma vez que observamos um decrscimo
mais rpido para o acmulo intravaginal e mais gradual para o acmulo nos cornos uterinos.
O maior acmulo de fluido observado durante o diestro nos grupos D0 e D13
provavelmente, demonstra que a colheita de biopsias influenciou os resultados. Durante a fase
estrognica (fase proliferativa) o crvix se encontra aberto e o tero tnico, e dessa forma a
secreo proveniente dos ovidutos, dos cornos uterino e do crvix expulsa e se acumula no
fundo vaginal (secreo ativa) at que seja expelida pela vulva; j durante a fase progesternica
(fase secretria) a secreo menor e o crvix est fechado, dessa forma no h acmulo no
fundo vaginal, como pode ser observado no grupo controle. A colheita seriada de fragmentos
endometriais, realizada durante o diestro, manteve o crvix permanentemente aberto e pode ter
levado a inflamao local com liberao de substncias inflamatrias, aumento da
105
permeabilidade vascular e, conseqentemente, maior acmulo de lquido intra-uterino e

intravaginal.
Semelhante ao observado neste estudo, Pierson et al. (1987) e Bonafos et al. (1995)
tambm observaram uma maior heterogeneidade endometrial nos momentos prximos a ovulao
e uma imagem ultra-sonogrfica mais homognea durante a fase de predomnio de progesterona.
Contudo, em nosso estudo o aumento da heterogeneidade ocorreu mais precocemente no ciclo
estral em comparao aos achados dos autores citados.
Pierson et al. (1987) tambm relataram um padro de espiralizao uterina,
semelhante ao encontrado no presente estudo, com o tero apresentando-se mais espiralado
durante a fase de predomnio progesternico. Entretanto, as modificaes observadas por estes
autores foram bruscas quando comparadas com os nossos resultados, nos quais as alteraes
foram continuais e mais graduais.
Para as variveis, textura e espiralizao uterina, no houve efeito da colheita de
fragmentos endometriais, demonstrando que esta tcnica no as alterou. Esse resultado demonstra
que a colheita de biopsias, ainda que capaz de desencadear um processo inflamatrio local, o
aumento da permeabilidade vascular com o extravasamento de lquido, e edema, no foi capaz de
modificar a textura uterina ultra-sonografia. Dessa forma, podemos supor que a inflamao
local foi discreta e insuficiente para acarretar a modificao da textura e espiralizao uterina
ultra-sonografia e o tnus uterino no exame de palpao trans-retal.
Na maioria dos cortes histolgicos estudados quanto presena de receptores
endometriais de progesterona e estrgeno, no estava visvel o epitlio luminal.
Vermeirsch et al. (1999) demonstraram que no endomtrio canino, as clulas do
estroma refletem melhor as modificaes cclicas dos hormnios esterides. No ano seguinte, em
outro estudo deste grupo (Vermeirsch et al., 2000) os autores concluram que as modificaes
observadas no epitlio luminal so coordenadas pelos efeitos dos esterides sobre as clulas do
estroma. Estes achados foram tambm observados por Galabova-Kovacs et al. (2004) em
endomtrio canino cultivado in vitro. Cooke et al. (1997) e Xiao & Goff (1999) estudando,
respectivamente, o endomtrio murino e bovino in vitro chegaram a concluses semelhantes s
encontradas por Vermeirsch et al. (2000).
Esses achados sugerem que os resultados encontrados para a expresso dos receptores
de estrgeno e progesterona no estroma uterino foram um reflexo das aes dos esterides
106
sexuais sobre este tecido. Contudo, no foi possvel relacionar a expresso dos receptores no
estroma com modificaes no epitlio luminal.
A avaliao imunoistoqumica empregada foi capaz de marcar os ncleos que
possuam receptores para os esterides sexuais femininos. Por ser uma tcnica semiquantitativa a
presena e a intensidade da marcao refletem, respectivamente, a positividade da clula e a
concentrao destes receptores. As duas variveis podem ser utilizadas, com alguns estudos
avaliando o nmero de ncleos positivos e sua intensidade (Boos et al., 1996; Dhaliwal et al.,
2002), outros apenas a intensidade (Robinson et al., 2001) ou ainda apenas a contagem
(Breeveld-Dwarkasing et al., 2002). Em nosso estudo optamos pela realizao das duas
avaliaes.
A colheita seriada de biopsias endometriais por via transcervical parece no alterar a
expresso dos receptores esterides, uma vez que trabalhos que utilizaram esta tcnica no
consideraram esta varivel para a interpretao dos resultados (Boos et al., 1996; Robinson et al.,
2001). Neste estudo no foi detectado efeito da colheita seriada sobre a expresso dos receptores
de estrgeno, contudo, a intensidade de marcao para os ncleos positivos para o receptor de
progesterona no estroma uterino e epitlio glandular foi diferente entre os grupos avaliados,
sendo superior no grupo D13. Neste, foram realizadas duas colheitas de fragmentos endometriais,
seguidas de um episdio de estro e, posteriormente, outras trs colheitas. J no grupo D0, foram
realizadas cinco colheitas consecutivas sem o episdio de estro entre elas, o que pode indicar que
a colheita de fragmentos endometriais alterou a concentrao de receptores de progesterona.
A diferente concentrao de receptores hormonais ao longo do ciclo estral entre o
epitlio glandular e estroma uterino foi tambm verificada por diversos autores (Boss et al., 1996;
Vermeirsch et al., 1999; Xiao & Goff, 1999; Classen-Linke et al., 2000; Vermeirsch et al., 2000;
Kimmins & MacLaren; 2001; Robinson et al., 2001; Breeveld-Dwarkasing et al., 2002;
Sukjumlong et al., 2003).
De forma semelhante ao demonstrado em nosso estudo, outros autores relataram uma
variao dos receptores de estrgeno e/ou progesterona ao longo do ciclo estral ou em
conseqncia aos tratamentos com estrgeno e/ou progesterona (Kimball & Hansel, 1974; West
et al., 1976; Koligian & Stormshak, 1977a; Henricks & Harris, 1978; Meyer et al., 1988; Vesanen
et al., 1988; Schneider, 1989; Vesanen et al., 1991; Boos et al., 1996; Ing et al., 1996; De Cock et
al., 1997; Tseng & Zhu, 1997; Vermeirsch et al., 1999; Xiao & Goff, 1999; Classen-Linke et al.,
107
2000; Vermeirsch et al., 2000; Kimmins & MacLaren, 2001; Robinson et al., 2001; Sukjumlong
et al., 2003; Galabova-Kovacs et al., 2004). No presente estudo, embora no tenha sido observada
uma variao para a contagem de receptores de progesterona, a intensidade de marcao variou,
demonstrando a modificao da concentrao desses receptores ao longo do ciclo estral.
Diversos estudos em bovinos (Henricks & Harris, 1978; Meyer et al., 1988; Vesanen
et al., 1988; Schneider, 1989; Vesanen et al., 1991), utilizando tcnicas onde no era possvel a
caracterizao do tecido estudado, demonstraram que os receptores de estrgeno estavam em
maiores concentraes nos momentos prximos ao estro e diminudos durante a fase luteal mdia
(entre os dias 9 e 15 do ciclo estral), semelhante ao que relatado em ovinos por Koligian &
Stormshak (1977a). Atravs de imunoistoqumica, onde possvel a caracterizao do tipo
celular estudado, foram encontrados resultados semelhantes para este receptor, com os autores
divergindo apenas para o momento em que ocorre o decrscimo na fase luteal (Boos et al., 1996;
Kimmins & MacLaren, 2001; Robinson et al., 2001). Nosso estudo tambm demonstra que os
receptores de estrgeno nos dois tecidos estudados encontram-se em maiores concentraes
durante o estro e em menores durante o diestro, principalmente entre os dias 13 e 19 do ciclo
estral.
De forma contrria, Kimball & Hansel (1974) relataram em bovinos um significativo
aumentou na concentrao do receptor de estrgeno entre os dias 15 a 21 do ciclo estral quando
comparada a obtida nos dias 2, 5 e 10.
Quanto ao receptor de progesterona, os estudos divergem em seus achados para o
epitlio glandular, uma vez que alguns autores relatam que no ocorreu uma variao da
imunomarcao ao longo do ciclo (Boos et al., 1996), outros demonstram uma imunoreatividade
maior no incio do ciclo estral, com uma queda durante toda a fase luteal (Kimmins & MacLaren,
2001) e outros ainda demonstram uma baixa expresso no estro, com um aumento na fase luteal
inicial e ausentes na fase luteal tardia (Robinson et al., 2001). De forma geral, a concentrao de
receptores encontrada em nosso estudo so semelhantes aos de Robinson et al. (2001), uma vez
que encontramos uma menor concentrao de receptores de progesterona na fase luteal tardia.
Para o estroma uterino, os autores mais uma vez divergem, Boos et al. (1996)
relataram uma imunoreatividade semelhante durante o ciclo, com uma queda no dia 15, j
Kimmins & MacLaren (2001) e Robinson et al. (2001), relataram maior imunomarcao desde o
estro at a fase luteal inicial e baixa em toda a fase luteal tardia. Nossos resultados tambm
108
demonstraram uma maior imunomarcao no estro e fase luteal inicial, com os nveis j
declinando na fase luteal mdia e mnimos na fase luteal tardia.
Alguns estudos demonstraram que o estradiol possui um efeito estimulatrio sobre os
receptores de progesterona e estrgeno (West et al., 1976; Henricks & Harris, 1978; Boos et al.,
1996; Ing et al., 1996; Xiao & Goff, 1999; Vermeirsch et al., 2000; Kimmins & MacLaren, 2001;
Galabova-Kovacs et al., 2004). Diversos autores ainda demonstraram que a progesterona possui
um efeito negativo sobre a concentrao dos receptores de progesterona e estrgeno (West et al.,
1976; Henricks & Harris, 1978; Boos et al., 1996; Vermeirsch et al., 2000; Galabova-Kovacs et
al., 2004) ou que pelo menos inibe o efeito positivo exercido pelo estrgeno tornando o tecido
menos responsivos ao estrgeno (Henricks & Harris, 1978; Xiao & Goff, 1999). Porm, alguns
trabalhos demonstraram um comportamento diferente, como Wathes et al. (1996) que relataram
em ovelhas ovariectomizadas que a progesterona no diminui os receptores de estrgeno, como
ocorreu nos animais cclicos, demonstrando que outros fatores ovarianos alm da progesterona
devem estar envolvidos; Ing et al. (1996) demonstraram tambm em ovelhas ovariectomizadas a
capacidade do estradiol em aumentar o RNAm para o receptor de estrgeno aps um perodo
progesternico. No presente estudo, os resultados parecem tambm ter demonstrado a regulao
dos receptores de estrgeno e progesterona pela progesterona, uma vez que de forma geral, os
receptores encontravam-se aumentados no incio do ciclo estral, e, posteriormente, declinavam,
alcanando concentraes menores no fim da fase luteal.
Em cadelas, Vermeirsch et al. (1999) relataram maior imunomarcao no proestro,
que declinou durante o estro e atingiu nveis mnimos no metaestro inicial para o receptor de
estrgeno. Para o receptor de progesterona, Vermeirsch et al. (2000), relataram um aumento no
proestro com um declnio durante o estro e incio do metaestro. Portanto, os achados em cadelas
parecem ser semelhantes aos encontrados na literatura para bovinos e demonstrado em nosso
estudo, uma vez que a fase de proestro caracterizada por concentraes mximas e o pico de
estradiol, o estro uma fase de declnio dos nveis de estrgeno e nveis ascendentes de
progesterona, e o metaestro uma fase de predomnio progesternico.
Em outras espcies, so relatados achados diferentes, como em guas onde os
receptores de estrgeno parecem no variar entre a fase folicular e luteal (Re et al., 1995) Esses
achados divergem dos relatados para bovinos, e podem ser reflexo de uma fisiologia reprodutiva
diferente.
109
Toda a literatura referenciada acerca da expresso de receptores de estrgeno e

progesterona, utilizaram animais Bos taurus taurus, sendo o presente estudo a primeira descrio
da expresso destes receptores em animais Bos taurus indicus. Portanto, pode-se observar que a
dinmica destes receptores parece ser semelhante entre as duas subespcies.
7. Concluses
Com base nos resultados obtidos e nas condies em que se realizou o presente estudo
podemos concluir que:
A avaliao do perfil hormonal demonstrou que os nveis plasmticos de progesterona

se elevaram durante o diestro e diminuram durante o perodo periovulatrio; j o kit
utilizado para a dosagem plasmtica de 17-estradiol no se mostrou adequado;
As variveis uterinas modificaram-se ao longo do ciclo estral. No perodo

periovulatrio foram observados os maiores valores para tnus, espessura, acmulo
lquido, textura e dimetro e um menor grau de espiralizao;
A intensidade de marcao para os ncleos positivos para o receptor de progesterona

e estrgeno e a contagem de ncleos para o receptor de estrgeno foram diferentes ao
longo do ciclo estral, contudo a contagem de ncleos para o receptor de progesterona
no variou;
Os tecidos avaliados, epitlio glandular e estroma uterino, foram diferentes quanto a

contagem de ncleos positivos para o receptor de estrgeno e progesterona, porm
semelhantes para a intensidade de marcao dos ncleos positivos para esses
receptores;
O comportamento das variveis uterinas (tnus, espessura, acmulo lquido, textura e

dimetro e espiralizao) e a expresso de receptores endometriais de estrgeno e
progesterona, ao longo do ciclo estral para os animais da raa Nelore foram
semelhantes as j descritas para os animais Bos taurus taurus.
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9. Apndice I
Nveis de significncia (p) encontrados para as variveis estudadas:
1) Intervalo interestro
a) Grupo controle vs grupos com colheita de bipsias: p = 0,4315
b) Grupo D0 vs grupo D13: p = 0,0336
2) Dosagens plasmticas de progesterona

a) Grupos estudados: p = 0,9239
b) Dia: p < 0,0001
c) Interao entre grupos estudados e dia: p = 0,1187
3) Dosagens plasmticas de 17-estradiol

b) Dia: p = 0,2086
4) Tnus uterino
i) Grupo controle vs grupos com colheita de bipsias: p = 0,1797
ii) Grupo D0 vs grupo D13: p = 0,0119
b) Dia: p < 0,0001
5) Espessura uterina
b) Dia: p = 0,0006
133
6) Coluna lquida em fundo vaginal

b) Dia: p < 0,0001
7) Coluna lquida nos cornos uterinos

b) Dia: p < 0,0001
c) Interao entre grupos estudados e dia: p < 0,0001
8) Textura uterina
b) Dia: p < 0,0001
9) Espiralizao uterina
b) Dia: p < 0,0001
10) Dimetro dos cornos uterinos

b) Regio do corno avaliada: p = 0,0027
c) Dia: p < 0,0001
d) Interao entre grupos estudados e dia: p = 0,8938
134
11) Contagem dos ncleos positivos para receptor de progesterona

b) Dia: p = 0,8053
d) Tecidos avaliados: p = 0,0152
e) Interao entre grupos estudados e tecidos avaliados: p = 0,6557
f) Interao entre dia e tecidos avaliados: p = 0,4850
g) Interao entre grupos estudados, dia e tecidos avaliados: p = 0,3464
12) Contagem dos ncleos positivos para receptor de estrgeno

b) Dia: p = 0,0068
13) Intensidade de marcao dos ncleos positivos para o receptor de progesterona

b) Dia: p < 0,0001
14) Intensidade de marcao dos ncleos positivos para o receptor de estrgeno

b) Dia: p < 0,0001
135

10. Apndice II
Curvas de regresso polinomial propostas para as variveis estudadas:
1) Dosagens plasmticas de progesterona

a) Y = 0,7511 + 0,05724 (dia) + 0,01190 (dia)2 + (-0,00070) (dia)3
2) Tnus uterino
a) Grupo controle: Ycont = 2,4129 + (-0,04177)(dia) + (-0,01313)(dia)2 + (0,000670)(dia)3
b) Grupo D0: YD0 = 2,2133 + (-0,08281)(dia) + (-0,00912)(dia)2 + (0,000848)(dia)3
c) Grupo D13: YD13 = 2,5082 + (-0,07090)(dia) + (-0,01013)(dia)2 + (0,000770)(dia)3
3) Espessura uterina
a) Grupo controle: Ycont = 1,4370 + 0,006016(dia) + (-0,00203)(dia)2
b) Grupo D0: YD0 = 1,3683 + (-0,00117)(dia) + (-0,00211)(dia)2
c) Grupo D13: YD13 = 1,3683 + (-0,00134)(dia) + (-0,00241)(dia)2
4) Coluna lquida em fundo vaginal

a) Grupo controle: Ycont = 1,3263 + (-0,05626)(dia) + (-0,01030)(dia)2 + 0,000732(dia)3
b) Grupo D0 e D13: YD0/D13 = 1,5357 + (-0,05626)(dia) + (-0,01030)(dia)2 +
0,000732(dia)3
5) Coluna lquida nos cornos uterinos

a) Grupo controle: Ycont = 0,05554 + (-0,02732)(dia) + (-0,00576)(dia)2 +
(0,000333)(dia)3
b) Grupo D0: YD0 = 0,1346 + (-0,1009)(dia) + (-0,000255)(dia)2 + (0,000805)(dia)3
c) Grupo D13: YD13 = 0,1433 + (-0,02476)(dia) + (0,000815)(dia)2 + (0,000246)(dia)3
6) Textura uterina
a) Y = 2,4364 + (-0,07065)(dia) + (-0,01477)(dia)2 + (0,000828)(dia)3
138
7) Espiralizao uterina
a) Y = 0,7188 + (0,02236)(dia) + (0,007263)(dia)2 + (-0,00032)(dia)3
8) Dimetro dos cornos uterinos

a) Grupo controle, regio dorsal, corno direito: Ycont dorsal CD = 1,4130 + (-0,00274)(dia) +
(-0,00124)(dia)2 + (0,000052)(dia)3
b) Grupo controle, regio dorsal, corno esquerdo: Ycont dorsal CE = 1,4101 + (-0,00274)(dia)
+ (-0,00124)(dia)2 + (0,000052)(dia)3
c) Grupo controle, regio cranial, corno direito: Ycont cranial CD = 1,4354 + (-0,00274)(dia)
+ (-0,00124)(dia)2 + (0,000052)(dia)3
d) Grupo controle, regio cranial, corno esquerdo: Ycont
cranial CE
= 1,4346 + (-
0,00274)(dia) + (-0,00124)(dia)2 + (0,000052)(dia)3

e) Grupo controle, regio ventral, corno direito: Ycont ventral CD = 1,4320 + (-0,00274)(dia)
+ (-0,00124)(dia)2 + (0,000052)(dia)3
f) Grupo controle, regio ventral, corno esquerdo: Ycont
ventral CE
= 1,4314 + (-
0,00274)(dia) + (-0,00124)(dia)2 + (0,000052)(dia)3

g) Grupo D0, regio dorsal, corno direito: YD0 dorsal CD = 1,4111 + (-0,00727)(dia) + (0,00121)(dia)2 + (0,000069)(dia)3
h) Grupo D0, regio dorsal, corno esquerdo: YD0 dorsal CE = 1,4171 + (-0,00727)(dia) + (0,00121)(dia)2 + (0,000069)(dia)3
i) Grupo D0, regio cranial, corno direito: YD0 cranial CD = 1,4478 + (-0,00727)(dia) + (0,00121)(dia)2 + (0,000069)(dia)3
j) Grupo D0, regio cranial, corno esquerdo: YD0 cranial CE = 1,4460 + (-0,00727)(dia) + (0,00121)(dia)2 + (0,000069)(dia)3
k) Grupo D0, regio ventral, corno direito: YD0 ventral CD = 1,4270 + (-0,00727)(dia) + (0,00121)(dia)2 + (0,000069)(dia)3
l) Grupo D0, regio ventral, corno esquerdo: YD0 ventral CE = 1,4190 + (-0,00727)(dia) + (0,00121)(dia)2 + (0,000069)(dia)3
m) Grupo D13, regio dorsal, corno direito: YD13 dorsal CD = 1,4154 + (-0,00265)(dia) + (0,00092)(dia)2 + (0,000048)(dia)3
n) Grupo D13, regio dorsal, corno esquerdo: YD13 dorsal CE = 1,4094 + (-0,00265)(dia) +
(-0,00092)(dia)2 + (0,000048)(dia)3
139
o) Grupo D13, regio cranial, corno direito: YD13 cranial CD = 1,4254 + (-0,00265)(dia) + (0,00092)(dia)2 + (0,000048)(dia)3
p) Grupo D13, regio cranial, corno esquerdo: YD13 cranial CE = 1,4231 + (-0,00265)(dia) +
(-0,00092)(dia)2 + (0,000048)(dia)3
q) Grupo D13, regio ventral, corno direito: YD13 ventral CD = 1,4301 + (-0,00265)(dia) + (0,00092)(dia)2 + (0,000048)(dia)3
r) Grupo D13, regio ventral, corno esquerdo: YD13 ventral CE = 1,4162 + (-0,00265)(dia) +
(-0,00092)(dia)2 + (0,000048)(dia)3
9) Contagem dos ncleos positivos para receptor de estrgeno

a) Epitlio glandular: YEPGLAND = 90,9679 - 0,4565 (dia)
b) Estroma: YEST = 93,5083 - 0,4565 (dia)
10) Intensidade de marcao dos ncleos positivos para o receptor de progesterona

a) Grupo D0, epitlio glandular: Y
D0 EPGLAND
= 2,7909 + 0,5082(dia) + (-0,08438)(dia)2
+ 0,002779(dia)3
b) Grupo D0, estroma: Y
D0 EST
= 3,4754 + 0,1766(dia) + (-0,05669)(dia)2 +
0,002237(dia)3
c) Grupo D13, epitlio glandular: Y
2
0,08438)(dia) + 0,002779(dia)
d) Grupo D13, estroma: Y
D13 EPGLAND
= 3,1082 + 0,5082(dia) + (-
D13 EST
= 3,9337 + 0,1766(dia) + (-0,05669)(dia)2 +
0,002237(dia)3
11) Intensidade de marcao dos ncleos positivos para o receptor de estrgeno
a) Grupo D0, epitlio glandular: Y D0 EPGLAND = 3,5306 + 0,06735(dia) + (-0,01455)(dia)2
+ 0,000291(dia)3
b) Grupo D0, estroma: Y
D0 EST
= 3,9703 + 0,1215(dia) + (-0,03936)(dia)2 +
0,001473(dia)3
c) Grupo D13, epitlio glandular: Y
D13
EPGLAND
= 3,3406 + (-0,1079)(dia) +
0,007347(dia)2 + (-0,00017)(dia)3
d) Grupo D13, estroma: Y
0,002016(dia)3
D13 EST
= 3,8594 + 0,1131(dia) + (-0,04566)(dia)2 +

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s companheiras da poca de iniciao cientfica Christiane Rumi Irikura e

Aos colegas da XXXIV turma de Medicina Veterinria Unesp Botucatu por

Aos funcionrios e amigos da Reproduo Animal Cristina, Walter, Edlson,

Fundao de Amparo Pesquisa - FAPESP pela bolsa e pelo auxlio financeiro

Fundao para Desenvolvimento da Unesp FUNDUNESP pelo auxlio

A todos que contriburam para a realizao deste trabalho.

2. Reviso de literatura ...............................................................................................

2.1. Ciclo estral e crescimento folicular .....................................................................

2.2. Corpo lteo ..........................................................................................................

2.3. Palpao e ultra-sonografia transretal .................................................................

2.4. Endocrinologia ....................................................................................................

2.4.1. Estrgeno .........................................................................................................

2.4.2. Progesterona .....................................................................................................

2.5. Imunoistoqumica e receptores hormonais .........................................................

3.1. Objetivo geral ......................................................................................................

3.2. Objetivos especficos ..........................................................................................

4. Material e Mtodo ..................................................................................................

4.1. Animais ...............................................................................................................

4.2. Sincronizao dos animais ..................................................................................

4.3. Perodos experimentais .......................................................................................

4.4. Avaliaes dirias atravs de palpao e ultra-sonografia transretal ..................

4.5. Colheitas de sangue .............................................................................................

4.6. Dosagens hormonais de progesterona e estrgeno ..............................................

4.7. Colheitas de fragmentos uterinos ........................................................................

4.8. Deteco imunoistoqumica de receptores de estrgeno e progesterona ............

4.9. Anlise estatstica ................................................................................................

5.1. Intervalo interestro ..............................................................................................

5.3. Dosagens hormonais ...........................................................................................

5.4. Avaliaes por palpao transretal.......................................................................

5.4.1. Tnus uterino ...................................................................................................

5.4.2. Espessura uterina ..............................................................................................

5.5. Avaliaes ultra-sonogrficas .............................................................................

5.5.1. Coluna lquida em fundo vaginal .....................................................................

5.5.2. Coluna lquida nos cornos uterinos ..................................................................

5.5.3. Textura uterina .................................................................................................

5.5.4. Espiralizao uterina ........................................................................................

5.5.5. Dimetro dos cornos uterinos ..........................................................................

5.6. Imunoistoqumica ................................................................................................

5.6.1. Contagem dos ncleos positivos para receptor de progesterona ......................

5.6.2. Contagem dos ncleos positivos para receptor de estrgeno ...........................

5.6.3. Intensidade de marcao para os ncleos positivos para receptor de

5.6.4. Intensidade de marcao para os ncleos positivos para receptor de